血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶測定

1、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測定 比色分析法比色分析法實 驗 提 綱 實驗實驗目的1 酶活性測測定原理與與方法2 比色分析法原理與與公式計計算3 722分光光度計計操作方法與與注意事項項4 思考題題51實驗目的實驗目的1234掌握血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測定的原理熟悉血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測定的方法熟悉比色分析法了解722分光光度計的使用方法2酶活性測定原理與方法酶活性測定原理與方法酶活性測定原理酶活性測定原理 2,42,4二硝基苯肼二硝基苯肼 ( (黃色黃色) )丙酮酸二硝基苯腙丙酮酸二硝基苯腙(紅棕色紅棕色)NaOHNaOHOC(CH2)2COOHCOOH+OC(CH2)2COOHCOO

2、H+SCH3CH2CHNH2COOHCH2SCH3CH2CHNH2COOHCH2SCH3CH2CHNH2COOHCH2SCH3CH2CHNH2COOHCH2NH2CH(CH2)2COOHCOOHNH2CH(CH2)2COOHCOOH-酮戊二酸酮戊二酸丙氨酸丙氨酸谷氨酸谷氨酸丙酮酸丙酮酸GPTGPT丙酮酸丙酮酸酶活性測定方法酶活性測定方法2酶活性測定原理與方法酶活性測定原理與方法1 1試管號試管號標準管標準管標準標準空白管空白管測定管測定管測定測定空白管空白管丙酮酸標準液（丙酮酸標準液（mlml）(1ml=100g)(1ml=100g)0.10.1新鮮血清（新鮮血清（mlml）0.10.10.1

3、0.1底物液（底物液（3737）（）（mlml）0.50.50.50.50.50.50.1mol/L0.1mol/L磷酸鹽緩沖液（磷酸鹽緩沖液（mlml）(pH=7.4)(pH=7.4)0.10.1 此前三管置于此前三管置于3737保溫保溫3030分鐘分鐘2 2，4-4-二硝基苯肼二硝基苯肼(ml(ml）0.50.50.50.50.50.50.50.5底物液（底物液（mlml）0.50.5充分混合，置于充分混合，置于3737保溫保溫2020分鐘分鐘0.4mol/L NaOH0.4mol/L NaOH（mlml）5 55 55 55 52 23 3酶活性測定方法酶活性測定方法2酶活性測定原理與方

4、法酶活性測定原理與方法標準管標準管標準空白管標準空白管測定管測定管測定空白管測定空白管顏色深淺不一顏色深淺不一酶活性測定方法酶活性測定方法2酶活性測定原理與方法酶活性測定原理與方法試管號試管號標準管標準管標準標準空白管空白管測定管測定管測定測定空白管空白管丙酮酸標準液（丙酮酸標準液（mlml）(1ml=100g)(1ml=100g)0.10.1新鮮血清（新鮮血清（mlml）0.10.10.10.1底物液（底物液（3737）（）（mlml）0.50.50.50.50.50.50.1mol/L0.1mol/L磷酸鹽緩沖液（磷酸鹽緩沖液（mlml）(pH=7.4)(pH=7.4)0.10.1 此前三

5、管置于此前三管置于3737保溫保溫3030分鐘分鐘2 2，4-4-二硝基苯肼二硝基苯肼(ml(ml）0.50.50.50.50.50.50.50.5底物液（底物液（mlml）0.50.5充分混合，置于充分混合，置于3737保溫保溫2020分鐘分鐘0.4mol/L NaOH0.4mol/L NaOH（mlml）5 55 55 55 5酶活性測定方法酶活性測定方法2酶活性測定原理與方法酶活性測定原理與方法標準管標準管標準空白管標準空白管測定管測定管測定空白管測定空白管如何排除干擾如何排除干擾? ?真正丙酮酸定量真正丙酮酸定量? ?顏色深淺不一顏色深淺不一: :還有其他酮酸的影響還有其他酮酸的影響3

6、比色分析法原理與公式計算比色分析法原理與公式計算比色分析法原理比色分析法原理定義定義通過比較有色物質(zhì)溶液顏色的深淺，測知該通過比較有色物質(zhì)溶液顏色的深淺，測知該物質(zhì)濃度的方法。物質(zhì)濃度的方法。12原理原理LambertLambertBeerBeer定律定律3比色分析法原理與公式計算比色分析法原理與公式計算比色分析法公式推導比色分析法公式推導2A A標標/A/A測測= C= C標標/C/C測測數(shù)學表達式數(shù)學表達式A = K A = K C C L L溶液吸光度溶液吸光度溶液吸光系數(shù)溶液吸光系數(shù)溶液濃度溶液濃度液層厚度液層厚度1公式推導公式推導本實驗公式計算本實驗公式計算3比色分析法原理與公式計算

7、比色分析法原理與公式計算A A標準標準A A標準空白標準空白0.1ml0.1ml血清所產(chǎn)生的丙酮酸血清所產(chǎn)生的丙酮酸gg數(shù)數(shù)A A測定測定A A測定空白測定空白C C標準標準谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性單位的定義：谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性單位的定義：1ml1ml血清于血清于3737與底物作用與底物作用3030分鐘，產(chǎn)生分鐘，產(chǎn)生2.5g2.5g丙酮酸丙酮酸為為1 1個個GPTGPT活性單位?；钚詥挝??；盍挝换盍挝?ml/ml0.1ml0.1ml血清所產(chǎn)生的丙酮酸血清所產(chǎn)生的丙酮酸gg數(shù)數(shù)10102.52.512上述各管靜置上述各管靜置1010分鐘后，使用分鐘后，使用722722分光光度計，在分光光度計，在520n

8、m520nm處，處，以蒸餾水校正零點，測定各管相應吸光度值。以蒸餾水校正零點，測定各管相應吸光度值。標準管標準管標準空白管標準空白管測定管測定管測定空白管測定空白管酶活性測定方法酶活性測定方法2酶活性測定原理與方法酶活性測定原理與方法4722722分光光度計使用方法及注意事項分光光度計使用方法及注意事項使用方法接通電源前，檢查儀器部件是否完好，工作電壓是否正常。將比色杯內(nèi)放好空白液（蒸餾水）、標準液、標準空白液、測定液、測定空白液，置于比色池中（由下向上的順序放置）。（見圖）1234蓋上暗箱蓋，選擇 儀器自動校正空白液“A”=0，并由下向上的順序讀取各管“A”（即A標準、A標空、 A測定、 A

9、測空）。（見圖）start接通電源打開暗箱蓋，進入光度測量界面。選擇 測定的波長（520nm）。（見圖）GOTO 4722722分光光度計使用方法及注意事項分光光度計使用方法及注意事項使用方法4722722分光光度計使用方法及注意事項分光光度計使用方法及注意事項使用方法4722722分光光度計使用方法及注意事項分光光度計使用方法及注意事項使用方法注意事項4722722分光光度計使用方法及注意事項分光光度計使用方法及注意事項手持比色杯磨砂面，比色杯光面對準光路。手持比色杯磨砂面，比色杯光面對準光路。比色杯內(nèi)液體體積占總體積比色杯內(nèi)液體體積占總體積2/32/3，比色杯外壁不可有液體，比色杯外壁不可有液體，則需擦鏡紙沾去。則需擦鏡紙沾去。與比色杯由下向上所放位置對應，儀器所報數(shù)據(jù)順序則由與比色杯由下向上所放位置對應，儀器所報數(shù)據(jù)順序則由1-51-5。1235思考題思考題123實驗操作中第一次實驗操作中第一次37 保溫保溫30分鐘和第二次分鐘和第二次37 保保溫溫20分鐘，各有什么意義？分鐘，各