CyclinDRb蛋白及E2F1在多發(fā)性骨髓瘤骨骼組織中的表達及臨床意義

1、CyclinD1、Rb蛋白及E2F1在多發(fā)性骨髓瘤骨骼組織中的表達及臨床意義 河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師或指導(dǎo)小組的指導(dǎo)下,由本人獨立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果,其知識產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對本學(xué)位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文,第一署名單位為河北醫(yī)科大學(xué),試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否那么,承當(dāng)相應(yīng)的法律責(zé)任。一:。:、。.,餓/鑫.研究生簽名:習(xí)【洳師簽章:蜘父二級學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)攀耋/年馮墩務(wù)÷河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)?進行的研究

2、工作及取得的研究成果,除了文中特別加以標(biāo)注等內(nèi)容外,文中不包含其他人已發(fā)表或撰寫的研究成果,指導(dǎo)教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫,文責(zé)自負。研究生簽名:寫小匕剔幣簽章:姒.砂夠年哆月硒日目 錄中文摘要?.英文摘要?.達及臨床意義前言?. 丹舌?.材料與方法?結(jié)果?.附圖?.附表?.討論?.結(jié)論?.參考文獻?.綜述細胞周期失調(diào)與惡性腫瘤發(fā)生關(guān)系的研究進展?.致謝.個人簡歷?中文摘要 、蛋白及.在多發(fā)性骨髓瘤骨髓組織中的 表達及臨床意義 摘要背景:多發(fā)性骨髓瘤 屬于血液系統(tǒng)腫瘤, 是漿細胞惡性增殖性疾病,此病約占造血液系統(tǒng)惡性腫瘤的%,其發(fā)病 機理為骨髓中漿細胞異?？寺⌒栽錾?分泌單克隆免

3、疫球蛋白和/或其片 段,進而導(dǎo)致相關(guān)器官或組織損傷。其主要的臨床表現(xiàn)有骨骼疼痛、腎功 能不全、貧血和感染等。近年來,隨著診斷技術(shù)的開展及人口老齡化的加 劇,其發(fā)病率有不斷增加的趨勢。針對該病的治療方法主要以化療為主, 蛋白酶體抑制劑等新藥的上市明顯提高了的緩解率及延長了患者的 生存期,但該病目前仍無法治愈。因此,研究該病的發(fā)生、開展機理具有 重要意義。 細胞周期的演進與腫瘤發(fā)生有密切關(guān)系。細胞周期失調(diào)致使細胞無限 制自主分裂和增殖,使腫瘤產(chǎn)生。細胞周期進行的過程是由一系列調(diào)控因 子調(diào)節(jié)的,其中既有正性調(diào)節(jié)因子又有負性調(diào)節(jié)因子。通過影響這些調(diào)節(jié) 因子,可以調(diào)節(jié)細胞周期的進程,進而可抑制腫瘤細胞的

4、無限制自主分裂 和增殖。深入研究細胞周期失調(diào)的原因及各細胞周期調(diào)控因子的作用途徑 和機制,可以為腫瘤診斷及治療提供新的監(jiān)測指標(biāo)和治療靶點。 目的:通過研究,蛋白及.蛋白在骨髓活檢組 織中的表達情況及相關(guān)性,探討它們對發(fā)生、開展及轉(zhuǎn)歸的影響及 作用機制。 方法:本實驗采用免疫組織化學(xué)方法,檢測例患者和例 營養(yǎng)不良性貧血患者骨髓組織中,及.三種蛋白的表達 情況。根據(jù)臨床分期標(biāo)準(zhǔn),將例骨髓活檢組織標(biāo)本分為期 組例、期組例和期組例,觀察并分析不同分期組 標(biāo)本三種蛋白的表達情況及與疾病的關(guān)系。根據(jù)免疫球蛋白檢測類型不同 將組分為型例、型例、輕鏈型例和其它 型例,觀察并分析各不同分型組標(biāo)本中三種蛋白的表達

5、情況及 與疾病的關(guān)系。根據(jù)治療后的緩解情況將組標(biāo)本分為完全緩解組中文摘要 組例和未緩解組組 例,觀察治療前后骨髓活檢標(biāo)本中三 種蛋白表達情況并分析它們與預(yù)后的關(guān)系。 結(jié)果: 表達情況:例患者骨髓活檢標(biāo)本中有例陽性, 陽性率為.%,而在例對照組中病例中有例表達陽性,陽性率為 .%,兩組陽性率比擬存在明顯差異尸.,對照組表達強度明顯 低于組氏.;在組不同分期中,隨著病理分期的增加 的陽性表達率及表達強度均有增加趨勢氏.;在不同 分型組中,的表達無明顯差異胗.;在治療前, 組與組的陽性率及表達強度無明顯差異胗.;而治療 后,組的陽性率及表達強度明顯低于組尸.。 蛋白表達情況:例標(biāo)本中表達陽性的有例,

6、陽性率 為.%,在對照組例標(biāo)本中有例呈陽性表達,陽性率為.%, 兩組比擬存在明顯差異氏.,對照組表達強度明顯高于組 .;組中從期到期,蛋白陽性率及表達強度有逐漸減 低趨勢尸.;不同分型組間的蛋白陽性率及表達強度無明 顯差異胗.;在治療前組陽性率及表達強度明顯高于組 氏.;治療后組的陽性率及表達強度明顯高于組.。 .蛋白表達情況:例骨髓活檢標(biāo)本中有例表達陽性, 陽性率為.%,例對照組標(biāo)本中有例,陽性率為.%,兩組比 較存在明顯差異,組陽性率及表達強度均明顯高于對照組.; 不同病理分期間及不同分型間比擬陽性率和表達強度均無明顯差異 胗.;在治療前組與組的陽性率及表達強度無明顯差異 胗.;在治療后組

7、陽性率及表達強度明顯低于組氏.; 相關(guān)性分析:與蛋白在骨髓活檢中呈負相關(guān),與 .無顯著相關(guān)性;蛋白與.呈負相關(guān)。 結(jié)論: 在中呈高表達,隨多發(fā)性骨髓瘤的疾病分期增加其 表達強度及陽性率有逐漸增加的趨勢,能反映出的進展程度。 蛋白在組呈低表達,隨的疾病分期增加有逐漸降低 趨勢,并且在組治療前后均高于組,說明具有抑制發(fā)生中文摘要 開展的作用,其低表達及缺失與的發(fā)生有密切關(guān)系,可作為的 預(yù)后判斷指標(biāo)。 .在多發(fā)性骨髓瘤中呈高表達,與病理分期及分型無關(guān), 在的發(fā)生中起一定作用,可作為一新的診斷指標(biāo)。 在中與蛋白呈負關(guān)性,與.無顯 著相關(guān)性,蛋白與.呈負相關(guān),即蛋白的缺失或低表達導(dǎo)致 .的高表達。 關(guān)鍵

8、詞:多發(fā)性骨髓瘤;蛋白;一;骨髓活檢;免 疫組化英文摘要 ?:, ,% , .,. , .,., .,. , ., .,.: , 一,英文摘要 ?: , 一., , ,., , ,., , 赫 , , . : :, , .%, , ,.%, ., .; .; .; .; , . 英文摘要 ?一一 :/ , ,.%, ,.%, .,協(xié) .; .; 胗.; 吐.; 尸. : ,.%, , ,也 .%, ,.; . .: .; . :啪 .;一.:, 、,.?一 ?墨塑 ,慨 鰣謝 嘲 , ,證 嘲 , . 鏟, 啦 .,蝴 姍, .,鯽 ., 叩 ,舉 蛐 。: 。; 如;.; ;?一 研究論文

9、、蛋白及.在多發(fā)性骨髓瘤骨髓組織中的表 達及臨床意義 上.¨。近年來,隨著診斷 技術(shù)的開展及人口老齡化的加劇,其發(fā)病率有不斷增加的趨勢。因此,探 討多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)生、開展及轉(zhuǎn)歸機理對于的診斷、治療及預(yù)后 評估具有重要意義。 目前腫瘤的發(fā)生與細胞周期的失調(diào)有密切關(guān)系。細胞周期是細胞 生命活動的根本過程,主要分為期:期合成前期、期 合成期、期合成后期和期有絲分裂期?，F(xiàn)已證實細 胞周期的調(diào)控是通過細胞周期蛋白.細胞周期蛋白依賴蛋白激酶 .細胞周期蛋白依賴抑制蛋白進行網(wǎng)絡(luò)調(diào)控來實現(xiàn)的【】。 其中,周期性積累與分解對細胞周期進程起著關(guān)鍵作用,而 通過在細胞周期適當(dāng)時間點上抑制的活性從而在細胞

10、周期進程中起 著重要作用】。屬于細胞周期的正性調(diào)控因子,主要在期發(fā) 揮作用,它通過激活的激酶活性,啟動與期進行有關(guān)的一系列基 因,促使細胞不斷進入自主分裂程序,其表達規(guī)律的改變是導(dǎo)致細胞周期 失調(diào)的主要原因之一。其中,對 的研究最為深入。通 過結(jié)合并激活時期特有的周期蛋白依賴性激酶,期周期抑制 蛋白被磷酸化,磷酸化的蛋白從其所結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子上解 離,轉(zhuǎn)錄因子參與轉(zhuǎn)錄激活細胞周期的基因,從而推動細胞周期由 時期進入到時期【】?；蚣易逄幱诩毎芷谡{(diào)控的中心環(huán)節(jié),在 細胞生長和分化的調(diào)控中發(fā)揮重要作用?；蚣易宓耐蛔兓蛉笔c人 類多種腫瘤的發(fā)生關(guān)系密切,是一類重要的抑癌基因。已在視網(wǎng)膜母細胞 瘤、

11、食管癌、胃癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、肺癌等多種腫瘤中發(fā)現(xiàn) 基因的突變及表達缺失,說明基因與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。. 作為重要的細胞周期調(diào)控因子,與一起參與調(diào)控細胞由/期向 期的過渡。在大多數(shù)類型腫瘤中均發(fā)現(xiàn).的異常表達【。如在頭頸部研究論文 腫瘤中發(fā)現(xiàn).的致瘤作用】 】等報道在.缺失的轉(zhuǎn)基因小 鼠中易有廣泛的腫瘤形成,如生殖道肉瘤、肺癌和淋巴瘤等。另外有報道 稱,在結(jié)腸癌和前列腺癌腫.的表達較正常組織明顯降低,表現(xiàn)為抑 癌作用【】。.即有促瘤作用又有抑瘤作用,具體機制尚不十分清楚, 可能與和腫瘤抑制途徑有關(guān),同時與細胞中其它蛋白的水平、活 性及細胞所處的環(huán)境、器官特異性及實驗條件有關(guān)。綜上所

12、述,、 蛋白及.蛋白與腫瘤的發(fā)生、開展有密切關(guān)系,了解它們在 中的表達情況對于探討的發(fā)病機制及其診斷、治療和預(yù)后判斷具有 重要意義。 本研究采用了免疫組織化學(xué)方法檢測組治療前后和對照組中 、蛋白及.蛋白的表達情況,比擬三種蛋白在不同分組 中的陽性率及表達強度,分析他們在發(fā)生、開展中的作用。在 組中檢測不同分泌類型和不同分期的,蛋白及.蛋白的 表達陽性率及強度,觀察他們的表達與腫瘤的分泌類型及惡性程度的關(guān) 系。探討、蛋白及.蛋白在骨髓活檢中的表達情況 及其相互間的關(guān)系,以進一步了解三者對的發(fā)生、開展、及轉(zhuǎn)歸影 響,為診斷及預(yù)后評估提供新的指標(biāo),也為探索新的基因治療 靶點奠定理論根底。 材料與方法

13、 材料 .取材 收集河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院血液科年月.年月確診的 患者骨髓活檢標(biāo)本共例,診斷標(biāo)準(zhǔn)參閱?中國多發(fā)性骨髓瘤 診治指南修訂版?。根據(jù)多發(fā)性骨髓瘤臨床分期標(biāo)準(zhǔn),將 例骨髓活檢標(biāo)本分為:期例,期例,期例。根據(jù)患 者的異常免疫球蛋白分泌情況,將例骨髓活檢標(biāo)本分為四種類型: 型例,型例,輕鏈型例,其它型例其中包括, 不分泌型,型及型,由于病例數(shù)均偏少未做具體分析討論。患 者中男例,女例,中位年齡歲.歲。研究論文 例患者均經(jīng)方案長春新堿./,靜點.;阿霉 素/,靜點.;地塞米松/,靜點.、.、.化療 個療程后,其中有例患者到達完全緩解;例患者未達完全緩解緩 解標(biāo)準(zhǔn)參照?中國多發(fā)性骨髓瘤診治指南修

14、訂版?【。 收集同時期營養(yǎng)不良性貧血患者骨髓活檢組織標(biāo)本例作為對照 組,其中男例,女例,中位年齡歲。 組與對照組間年齡分布及性別比例無明顯區(qū)別尸.。 兩組標(biāo)本均經(jīng)過%多聚甲醛固定,使用石蠟包埋,作厚切片。 .試劑: 兔抗人單克隆抗體 北京中杉金橋生物技術(shù) 兔抗人單克隆抗體 美國 公司 兔抗人.單克隆抗體 武漢博士德生物技術(shù) 顯色劑 北京中杉金橋生物技術(shù) 試劑盒 北京中杉金橋生物技術(shù) 液北京中杉金橋生物技術(shù) 二甲苯 天津永大化學(xué)試劑 無水乙醇 天津永大化學(xué)試劑 %中性多聚甲醛 天津大茂化學(xué)試劑廠 液北京中杉金橋生物技術(shù) 膠上海標(biāo)本模型廠 .儀器 骨穿活檢包 佛山特種醫(yī)用導(dǎo)管有限責(zé)任公司 自動組織

15、脫水機 德國公司 石蠟切片機 德國公司 .切片漂烘溫控儀 安徽電子科學(xué)研究所 電熱恒溫水浴箱 北京西城區(qū)醫(yī)療器械廠 電熱恒溫培養(yǎng)箱 山東濰坊精鷹醫(yī)療器械 電磁爐 廣東格蘭仕集團 光學(xué)顯微鏡 日本公司 方法 .應(yīng)用骨髓活檢針在患者髂前或髂后上嵴進行抽吸活檢取材。研究論文 .活檢組織應(yīng)用%甲醛液固定以上。 .使用%鹽酸液脫鈣.。 .投入%酒精中脫鹽酸以上。 .將標(biāo)本放入脫水機,進行固定、脫水、透明、石蠟包埋。 .將干凈玻片放入%鹽酸浸泡過夜,取出后用自來水沖洗干凈,再放 入酒精中浸泡以上,于無塵處進行枯燥,將多聚賴氨酸用液按: 比例稀釋掛膠.次,玻片備用。 .取石蠟包塊標(biāo)本,連續(xù)行厚切片,置于備用

16、玻片上,放入電熱恒 溫培養(yǎng)箱中枯燥,取出后備用。 .將石蠟切片常規(guī)脫蠟至水化:二甲苯/次×次,無水酒精, %酒精,自來水沖洗。 .抗原修復(fù):把切片放入抗原修復(fù)盒中,于微波爐中行抗原熱修復(fù) ,滅火后取出抗原修復(fù)盒,晾至室溫。 .取出切片后入蒸餾水次×次。 .%的過氧化氫孵育,以消除內(nèi)源性過氧化物酶。取出后 用蒸餾水洗遍,置于. .中浸泡。 .擦干切片組織周圍水跡,滴加一抗,放入濕盒中,冰箱中過夜。 稀釋比例如下: 兔抗人單克隆抗體: 兔抗人單克隆抗體: 兔抗人?單克隆抗體: .取出濕盒后將切片入蒸餾水沖洗次×次。 .擦干切片后,滴加胰蛋白酶.,于室溫下放置。. 液洗

17、滌/次×次。 .擦干切片后,滴加二抗工作液,放入濕盒中,于孵育,取 出切片后用. 洗滌/次×次。 .顯色:配制新鮮顯色液,參加一滴后,于光鏡下顯 色,當(dāng)出現(xiàn)陽性染色后即終止顯色,用自來水沖洗。 .蘇木素輕度復(fù)染,分化,返藍。 .脫水%酒精,無水酒精,二甲苯次×次,中性 樹膠封片。研究論文 .光學(xué)顯微鏡下觀察,截取典型圖片。 使用. 液代替一抗作為為空白對照,營養(yǎng)不良性貧血患者 骨髓組織為非對照,肺癌切片為陽性對照。 結(jié)果判斷 .細胞核或細胞漿中出現(xiàn)棕黃色染色即為陽性。結(jié)果判斷采用雙評分半 定量法。 .隨機觀察個高倍鏡下視野,每個視野計數(shù)個細胞,共 計個,根據(jù)陽性細

18、胞數(shù)和染色強度進行評分:陽性細胞數(shù)%為 分,%.%為分,%.%為分,%為分;顯色度按細胞顯 色有無及深淺計分:細胞無顯色為分,淡黃色為分,棕黃色為分, 棕褐色為分。陽性分級:將兩項相加,分為陰性表達.,.分為 低表達,分為中度表達十,分為高表達卅。 統(tǒng)計學(xué)處理:應(yīng)用.統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)。 .采用. 檢驗檢測各指標(biāo)在組與對照組及在組中 不同分期、不同分型和不同預(yù)后分組中陽性表達率的差異。 .不同分組間陽性積分的比擬均采用非參數(shù)檢驗法分析,三組以上應(yīng)用 。法,兩兩分組間的比擬采用 檢驗。 .采用相關(guān)性檢驗分析三種指標(biāo)間的相關(guān)性。 以.或.為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 碴 里 日在骨髓組織中的表達情況 在組和

19、對照組骨髓活檢標(biāo)本中均有表達,陽性細胞散 在分布,染色深淺不一,陽性反響位于細胞核.。 .在組與對照組陽性率經(jīng)? 檢驗,結(jié)果顯示: 值為.,.;經(jīng) 檢驗,兩組陽性積分: .。提示兩組之間的陽性率及表達強度存在顯著性差異 。.根據(jù)臨床分期標(biāo)準(zhǔn),將例骨髓活檢標(biāo)本分為期組、期和 期三組。在三組中陽性率的. 檢驗結(jié)果顯示:研究論文 值為.,.,期與期比擬:.,., 期組與期比擬:.,.,期與期比擬:., .;三組陽性積分經(jīng). 檢驗:值為., .;經(jīng) 檢驗,期與期比擬:. ,期與期比擬:.,期與期比擬:.。提示三 組之間的陽性率及表達強度存在顯著性差異 。.根據(jù)免疫球蛋白類型不同將例骨髓組織標(biāo)本分為四組

20、,即 組、組、輕鏈組和其它組。在各組中陽性率的. 檢驗結(jié)果顯示:值為.,.;四組陽性積分的 .檢驗結(jié)果示:值為.,.。提示四組之間的陽 性率及表達強度無顯著性差異 。.根據(jù)治療情況將組標(biāo)本分為緩解組組和未緩解組 組:治后預(yù)后療前,在各組中陽性率的. 檢驗結(jié) 果顯示:值為.,.;兩組陽性積分的 檢驗結(jié)果示:.。說明兩組之間的陽性率及表達強度無顯著 性差異 。治療后,在兩組中陽性率的. 檢驗結(jié)果顯示:值為.,.;陽性積分. 檢驗結(jié)果示:.。提示兩組之間的陽性率及表達強度存在顯著 性差異 。 蛋白在骨髓活檢中的表達情況 蛋白在組標(biāo)本與對照組標(biāo)本中均有陽性表達,在對照組標(biāo)本 中蛋白的表達強度明顯高于組

21、,陽性反響位于細胞核,陽性細胞 散在分布,染色深淺不一.。 .蛋白在骨髓活檢與對照組骨髓活檢中的陽性率經(jīng)值為 .,. .;經(jīng) 檢驗,兩組陽性積分: .。提示兩組之間的陽性率及表達強度存在顯著性差異 。.在不同分期組中例骨髓活檢標(biāo)本蛋白的陽性率經(jīng) .檢驗結(jié)果顯示:值為.,.,期與 期比擬:.,., 期組與期比擬:., .,期與期比擬:.,.;三組陽性積研究論文 分經(jīng). 檢驗:值為.,.;. 檢驗示:期與期比擬.,期與期比擬., 期與期比擬.。提示三組之間的陽性率及表達強度均存在 顯著性差異 。.在不同分型組中例骨髓組織標(biāo)本蛋白陽性率的. 檢驗結(jié)果示:值為.,.;四組間陽性積分的 .檢驗結(jié)果示:值

22、為.,.。提示四組之間的陽 性率及表達強度無顯著性差異 。.在治療前,蛋白在組和組中的陽性率經(jīng). 檢驗示:值為.,.;兩組間陽性積分的. 檢驗結(jié)果示:.。說明兩組之間的陽性率及表達強度存在顯著 性差異 。治療后,兩組間陽性率的. 檢驗結(jié)果示: 值為.,.;陽性積分. 檢驗結(jié)果示: .。提示兩組之間的陽性率及表達強度存在顯著性差異 。 。在骨髓活檢中的表達情況 ?陽性反響也在細胞核,組和對照組骨髓活檢標(biāo)本中均有陽 性表達,組的表達強度明顯高于對照組,染色深淺不一,散在分布 .。 .組同對照組比擬,.的陽性表達率經(jīng). 檢驗結(jié)果 示:值為.,.;陽性積分 檢驗結(jié)果示: .。說明兩組之間。的陽性率及表

23、達強度存在明顯差異 他。.在不同分期組中例骨髓標(biāo)本.陽性表達率經(jīng). 檢驗結(jié)果示:值為.,腳.;陽性積分. 檢驗結(jié)果示:值為.,.。說明三組之間一的陽性 率及表達強度無顯著差異 。.在四組分型組中.陽性率經(jīng). 檢驗結(jié)果示:值為 .,.;四組陽性積分的? 檢驗結(jié)果示: 值為.,.。提示四組間.的陽性率及表達強度不存 在顯著差異 。研究論文 .在治療前,.在組和組中的陽性率經(jīng). 檢驗 示:值為.,.;兩組間陽性積分的 檢驗結(jié)果示:.。說明兩組之間的陽性率及表達強度無顯著性差 異。治療后,兩組間陽性率的. 檢驗結(jié)果示: 值為.,.;陽性積分. 檢驗結(jié)果示:盧. .。提示兩組之間的陽性率及表達強度存在顯

24、著性差異 。 、蛋白及.在中的關(guān)系 、蛋白及.三者在骨髓活檢標(biāo)本中均有表達, 經(jīng)相關(guān)性檢驗,與蛋白呈負相關(guān)嚴(yán).,., 與.無顯著相關(guān)性,蛋白與.呈負相關(guān)., .】。研究論文 附 圖 .× .× 研究論文 .× .× 研究論文 .一× .× 研究論文 附表旦壘皇 地盟 . ,口: . : . 全: . 研究論文 ,. . .研究論文 ?一一一 ?。?。?一一一 斗% . : 畔. , .? 研究論文 . 畔. 儼. 卅 呦 .研究論文 ?一一一 上 卅 呦 ?. 一, ,.。.。.? 廿一. 一訂胗.研究論文 一釁. , 研究論文 討論

25、多發(fā)性骨髓瘤是漿細胞惡性增值性疾病,骨髓中克隆性漿細胞異常增 生分泌單克隆免疫球蛋白或其片段蛋白,并導(dǎo)致相關(guān)器官或組織損 傷。該病以中老年人多見,預(yù)后差,目前尚無徹底治愈的方法。目前 腫瘤的發(fā)生與細胞周期的失調(diào)密切相關(guān)。在肺癌、食道癌、乳腺癌及局部 淋巴瘤中均發(fā)現(xiàn)、及.的異常表達。作為細胞 周期重要的正性調(diào)控因子,在腫瘤的發(fā)生開展中起重要作用【】。是一 類重要的抑癌基因,處于細胞周期調(diào)控的中心環(huán)節(jié),在細胞生長和分化的 調(diào)控中發(fā)揮重要作用?；虻耐蛔兓虮磉_缺失可導(dǎo)致多種腫瘤的發(fā)生。 核轉(zhuǎn)錄因子.主要調(diào)控細胞周期.期,當(dāng)游離的.增多時, 能加快細胞從期進入到期,以致細胞過度增殖和惡性轉(zhuǎn)化,腫瘤形

26、成。另有報道,具有抑制局部腫瘤的作用【。三者均是細胞周期調(diào)控 中的重要調(diào)節(jié)因子,一/.作為調(diào)節(jié)細胞周期的調(diào)控 途徑之一,對于研究細胞周期失調(diào)與惡性腫瘤發(fā)生關(guān)系具有一定的代表性 有利于進一步研究腫瘤的發(fā)生、開展及轉(zhuǎn)歸機制,同時為腫瘤的診斷和預(yù) 后判斷提供新的指標(biāo),亦能為腫瘤的治療開拓新的思路。目前,關(guān)于三者 共同在多發(fā)性骨髓瘤中的表達情況及相互作用尚無研究。 在骨髓組織中的表達 首先由等【】在研究甲狀旁腺癌時別離,主要包括 ,和 個亞型。作為調(diào)節(jié)細胞周期的重要調(diào)節(jié)因 子,主要調(diào)節(jié).期的過渡【。它的表達異常將使細胞異常的增生,導(dǎo) 致腫瘤的發(fā)生。】等證實了 基因有致癌作用, 蛋白在多種腫瘤組織中均有

27、過表達。有研究說明, 的表達與腫 瘤組織學(xué)類型、分化程度及腫瘤患者的預(yù)后關(guān)系密切,可作為判斷病情及 預(yù)后的指標(biāo)【蛤。另有研究發(fā)現(xiàn),. 抑制劑可抑制 合成而引起期阻滯,抑制細胞增殖,從而起到抗腫瘤作用。因此,研 究在多發(fā)性骨髓瘤中的表達情況,能更深入地了解的發(fā)生、 開展過程,對于的診斷、治療及預(yù)后判斷可能具有重要意義。 本實驗發(fā)現(xiàn),在組骨髓活檢標(biāo)本中的陽性率為.%, 而對照組為.%,組的陽性率明顯高于對照組,由此說明研究論文 的過度表達與的發(fā)生關(guān)系密切。在不同分期組中,的 陽性表達率存在明顯差異,期組陽性率明顯高于期組。三期的表達強 度差異有統(tǒng)計學(xué)意義,期組表達強度明顯高于期組和期組。由此可 知

28、,的陽性表達率及其表達強度有隨著惡性程度增高而升 高的趨勢,這說明與的病程進展及其惡性程度有一定關(guān)系。 可能是的過度表達推動細胞快速進入期,從而導(dǎo)致細胞過度 增殖,正常骨髓細胞向腫瘤細胞的轉(zhuǎn)化,從而在的發(fā)生、開展中發(fā) 揮推動作用,其具體機制還需進一步探究。在不同分型組中, 的表達陽性率及其表達強度均無明顯差異。說明,的表達與不 同分型的關(guān)系可能不明顯。在本實驗中,在治療前組中的陽 性表達率及其表達強度與組比擬均無明顯差異;而在治療后,組 中的陽性表達率及其表達強度明顯低于組,說明,可作為判 斷預(yù)后的一個指標(biāo),對治療的療效評估具有一定的指導(dǎo)意義。 在骨髓活檢中的表達 基因成視網(wǎng)膜細胞瘤基因,是第

29、一個被克隆并完成全序列測定 的抑癌基因。己在多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)基因的突變及表達缺失,說明 基因與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)【】。蛋白是基因的表達產(chǎn)物,是一種重 要的細胞周期蛋白,通過對細胞周期負性調(diào)控而發(fā)揮腫瘤抑制功能【。 蛋白主要作用點在/調(diào)控點,是該調(diào)控點的中心,它調(diào)控的上游組 分包括一系列復(fù)合物、活化激酶 ,和。蛋白調(diào)節(jié)細胞生長分化的主要形式是通過其磷 酸化/去磷酸化而調(diào)節(jié)的。在細胞內(nèi)去磷酸化狀態(tài)下的與/結(jié) 合在一起,從而抑制轉(zhuǎn)錄因子進入細胞核啟動相關(guān)基因表達,從而 控制細胞由?期的過程,當(dāng)被?復(fù)合物磷酸化后, 便釋放出來發(fā)揮作用,細胞增殖那么可進行。研究說明,的表達水平與 腫瘤的分化程度、臨床分期

30、呈現(xiàn)負相關(guān)關(guān)系【。等研究說明, 在結(jié)腸癌中.促進.活性從而壓制蛋白的表達。作為重 要的抑癌基因,探討蛋白在多發(fā)性骨髓瘤中的表達情況,對于進一步 研究的發(fā)病機理及臨床治療具有重要意義。 在本實驗中,蛋白在組中的陽性表達率為.%,對照組骨 髓活檢中的陽性表達率為.%,對照組陽性表達率明顯高于組,研究論文 兩組表達強度比擬也具有統(tǒng)計學(xué)意義。說明,蛋白的缺失或表達減低 與的發(fā)生有一定關(guān)系。在組中,三個不同的病理分期間陽性率的 比擬有統(tǒng)計學(xué)意義,期組陽性率明顯高于期組;三期的表達強度存在 明顯差異,期組陽性表達強度明顯高于期組?？芍年栃员磉_率 及其表達水平有隨的臨床分期的增加而減低的趨勢。這說明蛋白

31、的表達情況與的臨床分期有密切關(guān)系?？赡苁堑鞍椎娜笔Щ虻捅?達導(dǎo)致出現(xiàn)大量游離的.促使細胞增殖的原因。在四種不同分型組 中,蛋白的陽性表達率及表達強度無明顯差異,說明蛋白與 的分型無明顯關(guān)系。在本實驗中,組治療前組的陽性表達率及表 達強度均高于組,而治療后組的陽性率及表達強度仍明顯高于 組,說明蛋白影響的預(yù)后,可以作為判斷治療預(yù)后的一 個指標(biāo),蛋白陽性的病例治療效果好于蛋白陰性病例,這與 夏炳森等的研究結(jié)論一致。 在骨髓活檢中的表達 家族是最早在研究腺病毒時發(fā)現(xiàn)的【】,其家族包括 .共個成員。.作為重要的細胞周期調(diào)控因子,與 一起參與調(diào)控細胞由/期向期的過渡。當(dāng).過表達時,沒有 足夠的蛋白與之結(jié)

32、合,游離的.增多,加快了細胞從期進入 到期,以致細胞過度增殖和惡性轉(zhuǎn)化,腫瘤形成。在人類許多腫瘤中已 發(fā)現(xiàn).調(diào)控的失靈【。研究說明,一與腫瘤的發(fā)生、開展及預(yù)后 密切相關(guān)陶。也有一些研究認(rèn)為在某些腫瘤中.能誘導(dǎo)細胞凋亡可能 起抑癌的作用【】。其具體機制尚不十清楚確,有待于進一步研究,但針 對.在某些腫瘤中的抑癌作用,.作為人類腫瘤基因治療的一個 新的靶點正日益受到關(guān)注。研究.在中的表達情況及臨床意義, 有助于深入探討的發(fā)生機制,也有助于為治療開拓新的思路。 在本實驗中,組的陽性表達率為.%,對照組中的陽 性表達率為.%,兩組比擬有統(tǒng)計學(xué)意義;兩組陽性積分的比擬也有 統(tǒng)計學(xué)意義;組的陽性表達率及表

33、達強度均明顯高于對照組,說明 一可能在中起致瘤作用,.的高表達導(dǎo)致細胞過度增殖產(chǎn)生 腫瘤。在本實驗中,組不同分期及不同分型中的.陽性率及表達 強度均無明顯差異,說明.可能與的分期及分型關(guān)系不明顯。研究論文 在治療前,組與組的陽性表達率及表達強度無明顯差異,而在治 療后組的.陽性表達率及表達強度明顯低于組,說明. 可作為評估治療后效果的指標(biāo)。 、蛋白及.在骨髓活檢中表達的相關(guān)性 細胞周期調(diào)控是一個十分復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò),細胞周期調(diào)控因子是細胞周期 調(diào)控的關(guān)鍵因素,在這些細胞周期調(diào)控因子中既有對細胞周期起正性調(diào)節(jié) 作用的推動細胞周期進行的因子,亦有組織細胞周期進行的負性調(diào)節(jié)因 子,任意一個調(diào)控因子表達異常

34、,都能影響細胞周期的進程,進而導(dǎo)致細 胞周期失調(diào)甚至產(chǎn)生腫瘤。./.是細胞周期的調(diào)控 途徑之一。 的主要功能是促進細胞增殖。通過結(jié)合并 激活時期特有的周期蛋白依賴性激酶,期周期抑制蛋白 被磷酸化,磷酸化的蛋白從其所結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子上解離,轉(zhuǎn) 錄因子起始轉(zhuǎn)錄激活細胞周期的基因,從而推動細胞周期由時期進入 到時期【。在本實驗中,與蛋白呈負相關(guān)關(guān)系,即當(dāng) 高表達時蛋白低表達,這與促使蛋白磷酸化有 關(guān)。蛋白與.呈負相關(guān)關(guān)系,蛋白與一結(jié)合,此時的. 不具有轉(zhuǎn)錄活性,當(dāng)磷酸化后便從.上脫落下來,游離的. 進入細胞核轉(zhuǎn)錄開始。與.無明顯相關(guān)性,這可能與細胞 周期調(diào)控的復(fù)雜性,.的表達還受其它調(diào)控因子的影響有關(guān)

35、。 綜上所述,在中、蛋白及.均有表達,的 發(fā)生可能與、一的過度表達及蛋白的缺失或低表達有關(guān)。 三者的異常表達加快了瘤細胞從期進入期進程,促進了細胞惡性增 殖。隨著病情的開展的表達有逐漸增加的趨勢,蛋白那么 有逐漸下降的趨勢,而.的表達無明顯趨勢,與蛋白可 作為評估病情的重要指標(biāo)。 結(jié)論 在中呈高表達,隨多發(fā)性骨髓瘤的疾病分期增加其 表達強度及陽性率有逐漸增加的趨勢,能反映出的進展程度。 蛋白在組呈低表達,隨著疾病分期的增加有逐漸降低研究論文 趨勢,并且在組治療前后均高于組,說明具有抑制發(fā)生 開展的作用,其異常表達及缺失與的發(fā)生有密切關(guān)系,可作為 的預(yù)后判斷指標(biāo)。 .在多發(fā)性骨髓瘤中呈高表達,與

36、病理分期及分型無關(guān), 在的發(fā)生中起一定作用,可作為一新的診斷指標(biāo)。 在中與蛋白呈負關(guān)性,與.無顯 著相關(guān)性,蛋白與.呈負相關(guān),即蛋白的缺失或其低表達導(dǎo)致 .的高表達。研究論文 參考文獻 陸再英,鐘南山主編.內(nèi)科學(xué).第七版,北京:人民衛(wèi)生出版社,: . ., . ,. .,: . , .: .: .,:? . ,: 韓葦.的研究進展.國外醫(yī)學(xué),分子生物學(xué)分冊,:. ,.:.,: , ,.,:? , . .,: , .一.,: 侯鍵,黃曉軍等主編.中國多發(fā)性骨髓瘤診治指南修訂版.中華內(nèi)科 雜志, , ,. ? . ,:? .一陰.,: 研究論文. ,. ,.,: .,. .,:?, ,. . ,

37、., ,?.,:,. : ? ? ., ,:., , . .,:.,. .,:. , , ., . ,: ., , ,: /.,:醫(yī)學(xué)院學(xué)報,:. .叨. ,:研究論文.,. ,.: . , , , .,:?. , , ?. ,:, ?. . .,:.,:綜 述綜述細胞周期失調(diào)與惡性腫瘤發(fā)生關(guān)系的研究進展細胞周期主要分為期:期蛆合成前期、期合成期、期合成后期和期有絲分裂期,它是細胞生命活動的根本過程。在正常的細胞周期期能得到復(fù)制,在此產(chǎn)生兩套完全相同的染色體,被平均分配到兩個子代細胞中。對細胞周期的研究近年來取得了眾多新的進展,在真核生物細胞周期調(diào)控中細胞周期蛋白,和細、細胞周期蛋白依賴激酶胞

38、周期蛋白依賴性激酶抑制因子 的重要地位已被肯定。其中,對細胞周期進程起著關(guān)鍵作用的是細胞周期蛋白的周期性積累與分解,而那么通過在在細胞周期進程中適當(dāng)時間點上抑制的活性從而對細胞周期調(diào)控起重要作用【】。細胞周期調(diào)控.細胞周期中的“限制點細胞內(nèi)從一次有絲分裂完成開始的一系列有順序的變化到下一次有絲分裂完成時結(jié)束,期間的這一過程稱為細胞周期,即位于親代細胞與子代細胞有絲分裂完成之間的時期。該過程使細胞生長和分裂增殖得到了實現(xiàn)。在真核細胞中,細胞周期共分為四個時期,分別為期即合成前期、期即合成期、期即合成后期和期即有絲分裂期,細胞靜止期稱為期,該理論是由于年首先提出的。在細胞增殖周期中主要位于/、/和

39、紡錘體裝配處,存在許多監(jiān)控系統(tǒng),這些監(jiān)控系統(tǒng)叫做“檢查點即“限制點,它們能在基因組或紡錘體出現(xiàn)損傷時阻斷細胞周期進程。它們決定了細胞增殖狀態(tài),其主要功能是保證細胞周期中各個事件的有序進行,使細胞在完成一個細胞周期事件后再開始進行下一個事件,能在細胞出現(xiàn)某種應(yīng)急或破壞時及時控制細胞周期進展,以使細胞有時間來進行修復(fù)。因此,細胞周期的限制點是確保細胞基因組穩(wěn)定的重要手段。每個“檢查點的作用都是通過一些列調(diào)控因子調(diào)節(jié)實現(xiàn)的,當(dāng)這些調(diào)控因綜 述子出現(xiàn)問題時,該“檢查點便失去作用或作用減小,導(dǎo)致細胞周期失調(diào),進而導(dǎo)致細胞增殖失常,甚至導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。.細胞周期調(diào)控蛋白調(diào)控因子即細胞周期調(diào)控蛋白是指一組功能

40、各異相互聯(lián)系、相互制約的核蛋白。細胞周期調(diào)控蛋白存在的種類很多,可根據(jù)其對細胞周期的作用特點分為正性調(diào)控蛋白和負性調(diào)控蛋白兩大類,細胞周期的演進過程就是通過它們的相互作用進行調(diào)控的,這一過程中涉及到細胞內(nèi)信號及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。細胞周期通過細胞周期蛋白一細胞周期蛋白依賴蛋白激酶一細胞周期蛋白依賴抑制蛋白這一網(wǎng)絡(luò)對進行調(diào)控的理論已經(jīng)被證實【】,與相應(yīng)的結(jié)合并激活,磷酸化之后的處于活化狀態(tài),而抑制蛋白能抑制具有活性的。在真核細胞中細胞周期的正常運作是由和等共同維持,這些調(diào)節(jié)因子處于動態(tài)平衡的狀態(tài)。三者構(gòu)成了細胞周期運行的驅(qū)動裝置。.與蛋白.,細胞周期蛋白依賴性激酶,是一.種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,它表

41、現(xiàn)其蛋白激酶的活性只有與結(jié)合后才能實現(xiàn)。在酵母細胞內(nèi)僅發(fā)現(xiàn)一種,在細胞周期的不同時期可與不同的結(jié)合來調(diào)節(jié)細胞周期的進程。而在脊椎動物中存在四種不同的,包括、和。與.形成.復(fù)合物,與/?和形成/.復(fù)物。不同的復(fù)合物在細胞周期不同時段發(fā)揮不同作用,.負責(zé)協(xié)助細胞在期末順利通過起始點或限制點,/?是為細胞進行復(fù)制作好準(zhǔn)備,主要啟動復(fù)制,而那么是促使細胞進行分裂【】。在人體細胞內(nèi),控制期的主要是,和,它們能使腫瘤抑制蛋白視網(wǎng)膜母細胞瘤蛋白磷酸化,使蛋白對的抑制作用解除,從蛋白上釋放出來并活化,以調(diào)節(jié)與合成相關(guān)聯(lián)的蛋白表達,促使細胞從期進入期。是影響細胞周期轉(zhuǎn)化的重要介質(zhì)之一。.即依賴細胞周期蛋白依賴性

42、激酶抑制因子。綜述目前的分為兩大類:一類為 .能特異性抑制. 、. 的磷酸化激酶活性;另一 類為 ,抑制現(xiàn)己知的大多數(shù).的 磷酸化激酶活性。 . 己知的家族包括、和。它們在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功 能上均具有高度相似性。在該類蛋白質(zhì)的氨基末端均具有與的 周期素盒同源的編碼區(qū)域和由個鉤回狀重疊組成的二級結(jié)構(gòu)?；诖? 家族能與競爭性結(jié)合/,從而使其對蛋白的 磷酸化作用受到抑制,未磷酸化的蛋白是與.結(jié)合在一起的,而結(jié) 合狀態(tài)下的.不具有活性,依賴于.轉(zhuǎn)錄的基因不能轉(zhuǎn)錄, 合成及其它生化反響被間接地抑制。家族就是通過該途徑而到達抑制 細胞周期進展的。因此,家族成員的失活或表達異常能導(dǎo)致細胞周期 調(diào)控紊亂。目前

43、,已在多種腫瘤如非小細胞肺癌、胰腺癌、急性白血病等 中發(fā)現(xiàn)有的缺失【。另有報道認(rèn)為與腫瘤細胞分化及預(yù)后有關(guān)【】。 . 現(xiàn)的包括、及三種細胞周期抑制蛋白。它們的 氨基末端都含有一個含個氨基酸的保守序列,在結(jié)構(gòu)及功能上具有高度 相似性,與的功能相似,對一、一、 一及.等復(fù)合物的蛋白激酶活性能產(chǎn)生特異性 抑制【】。家族成員的羧基末端區(qū)域都具有核定位信號功能,另外還具 有各不相同的功能區(qū),如的.末端有一個磷酸化位點,它能抑 制組蛋白磷酸化、細胞周期素復(fù)合物磷酸化及前活性狀態(tài)的激酶【】; 而在,其.末端的氨基酸殘基肽能與聚合酶演進因子 結(jié)合并覆蓋它的某些功能區(qū),通過 阻止與聚合酶形成復(fù)合物或阻止全酶復(fù)合物在 單鏈上滑動,進而影響的復(fù)制【】。和都是以量的方式調(diào)節(jié) 細胞周期和細胞分化,二者在絕大多數(shù)哺乳動物細胞中均有表達。而 只在局部組織和細胞中表達,尤其是在末端分化細胞中呈高表達,能使細 胞停滯于期【。具有誘導(dǎo)細胞分化,促進細胞凋亡,參與細胞分 化增殖以及防御炎性損傷等多種功能,是一個典型的抑癌基因。的抗綜述增殖和細胞周期阻滯作用使其成為增殖相關(guān)疾病如腫瘤、血管損傷后再狹 窄等基因治療的重