兩種方式提取杏鮑菇菌絲胞外酶的比較分析

1、.兩種方式提取杏鮑菇菌絲胞外酶的比較分析-農(nóng)學(xué)論文兩種方式提取杏鮑菇菌絲胞外酶的比較分析 羅 衛(wèi)，謝純良，嚴(yán) 理，朱作華，李智敏，胡鎮(zhèn)修，彭源德（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院麻類研究所，長(zhǎng)沙 ）摘要：為了尋找有效提取杏鮑菇（ ）菌絲胞外酶的方法，為杏鮑菇等食用菌胞外酶的活性研究和生長(zhǎng)規(guī)律提供試驗(yàn)依據(jù)，研究通過 的檸檬酸緩沖液、去離子水種處理方式提取杏鮑菇菌絲胞外酶，并通過測(cè)定種胞外酶酶活來對(duì)這種方式進(jìn)行比較分析。結(jié)果表明，種提取方式對(duì)杏鮑菇菌絲胞外酶的酶活有差異，其中，酸性纖維素酶和果膠酶經(jīng)酸處理酶活是水處理的倍多；木聚糖酶和木質(zhì)素降解相關(guān)酶類經(jīng)酸處理的酶活也高于水處理，但淀粉酶和蛋白酶經(jīng)酸處理酶活低于水處

2、理。關(guān)鍵詞：杏鮑菇（ ）；胞外酶；酸處理；水處理；比較分析中圖分類號(hào)： 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： 文章編號(hào)：（）4274：43研究食用菌胞外酶的活性，對(duì)了解不同食用菌的胞外酶分泌特點(diǎn)、活性大小及動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)、推測(cè)不同食用菌在不同生長(zhǎng)發(fā)育階段對(duì)培養(yǎng)基中木質(zhì)纖維素、淀粉等大分子營(yíng)養(yǎng)成分的降解動(dòng)態(tài)、提高栽培技術(shù)有重要的意義。在研究胞外酶活性時(shí)，能夠有效提取菌絲胞外酶是測(cè)定酶活性的前提。因此，選擇一種有效的提取菌絲胞外酶的方法對(duì)研究胞外酶的活性具有重要意義。目前，食用菌胞外酶的提取方法主要有種：一是用水處理的方式提?。欢怯盟崽幚淼姆绞教崛?。到目前為止，尚未見有人用同一種酶對(duì)這兩種提取方式進(jìn)行比較分析。由于儀器和

3、試驗(yàn)操作等方面的誤差，使得酸性纖維素酶、果膠酶，木聚糖酶、淀粉酶等胞外酶的提取尚無可以參考的標(biāo)準(zhǔn)。從研究的需要出發(fā)，本研究以杏鮑菇（ ）菌絲為研究對(duì)象，通過酸、水種不同的處理方式提取杏鮑菇菌絲胞外酶，并通過測(cè)定酶的活性對(duì)這種方式進(jìn)行分析比較，以期找到一種有效的提取胞外酶的方法，為今后杏鮑菇等食用菌胞外酶的提取提供理論參考。 材料與方法 供試菌株杏鮑菇“杏”，由湖南省食用菌研究所提供，杏鮑菇栽培采用棉子殼培養(yǎng)基：棉子殼、麥麩、玉米粉、白糖、碳酸鈣，自然，含水量。采用常規(guī)方式拌料、裝袋， 滅菌 ，冷卻后接杏鮑菇栽培種，每一菌袋接栽培種約 ，置入 、濕度、濃度在 mg/kg的條件下培養(yǎng)，大概 長(zhǎng)滿菌

4、絲。 試劑羧甲基纖維素鈉、木聚糖、果膠和半乳糖醛酸為公司產(chǎn)品，檸檬酸、無水葡萄糖、木糖、乙酸鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、鄰聯(lián)甲苯胺、纖維二糖、丙二酸，丙二酸鈉、黎蘆醇、果膠、硫酸錳、牛血清蛋白、緩沖液、考馬斯亮藍(lán)染液、酒石酸、雙氧水、酒石酸甲鈉、，二硝基水楊酸、可溶性淀粉為國(guó)產(chǎn)分析純。 試驗(yàn)方法 粗酶液制備 菌絲長(zhǎng)滿菌袋后， 在袋中取長(zhǎng)滿菌絲的培養(yǎng)料充分混勻，然后取 均勻分成份，一份加去離子水（以下簡(jiǎn)稱水） ，一份加 檸檬酸緩沖液（以下簡(jiǎn)稱酸） ， 振蕩浸提 ，過濾后， 離心 ，上清液即為粗酶液。 木質(zhì)素降解相關(guān)酶類酶活測(cè)定）漆酶酶活的測(cè)定。相關(guān)試劑配置和酶活計(jì)算公式參照等的方法，其酶活單位定

5、義為 催化 底物的酶量。準(zhǔn)確移取 丙二酸丙二酸鈉緩沖液、 溶液各 。混合搖勻， 水浴。取上述混合試劑 于 的比色皿中， 處調(diào)零。準(zhǔn)確加入待測(cè)酶液 （0），立即記錄吸光度。每隔 記錄次，共次。取平均值，折算成每分鐘的吸光度變化（變化）。）錳過氧化物酶酶活的測(cè)定。相關(guān)試劑配置和酶活計(jì)算公式參照等的方法，其酶活單位定義為 氧化 的酶量。準(zhǔn)確移取 丙二酸丙二酸鈉緩沖液 于 的比色皿中，加入 溶液 ，準(zhǔn)確加入待測(cè)酶液 （），加入去離子水（） ， 水浴，加入濃度為 溶液 啟動(dòng)反應(yīng)，迅速測(cè)定 處的吸光度， 后再測(cè)定次，計(jì)算二者之差，即為每分鐘的吸光度變化（變化）。）木質(zhì)素過氧化物酶酶活的測(cè)定。相關(guān)試劑配置和

6、酶活計(jì)算公式參照等的方法，其酶活單位定義為 氧化 黎蘆醇的酶量。準(zhǔn)確移取 酒石酸緩沖液 于 的比色皿中，加入 黎蘆醇 。準(zhǔn)確加入待測(cè)酶液 （），加入去離子水（） ， 水浴，加入濃度為 溶液1 啟動(dòng)反應(yīng)，迅速測(cè)定 處的吸光度， 后再測(cè)定次，計(jì)算二者之差，即為每分鐘的吸光度變化（變化）。 酸性纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶酶活的測(cè)定）酸性纖維素酶酶活的測(cè)定。相關(guān)溶液和試劑的配置參照等的方法，取支試管各加入 酸性底物，與待測(cè)酶液一起在 水浴中預(yù)熱 。在第一、二支試管中各加入 待測(cè)酶液， 水浴中反應(yīng) 。在支試管中各加入 的試劑，然后在第三支試管中加入 的待測(cè)酶液。搖勻支試管后，在沸水浴中煮 。水浴冷卻至室

7、溫后，以第三支試管為對(duì)照在 下測(cè)第一、二支試管的吸光度。酶活（）（葡萄糖等量值）×稀釋倍數(shù)。）果膠酶酶活的測(cè)定。相關(guān)溶液和試劑的配置參照王玉萬等的方法，取支試管各加入 聚半乳糖醛酸溶液，與待測(cè)酶液一起在 水浴中預(yù)熱 。在第一、二支試管中各加入 待測(cè)酶液， 水浴中反應(yīng) 。在支試管中各加入 的試劑，然后在第三支試管中加入 的待測(cè)酶液。搖勻支試管后，在沸水浴中煮 。水浴冷卻至室溫后，將空白液置 離心機(jī)中離心 后取上清液作為空白對(duì)照。以第三支試管為對(duì)照在 下測(cè)第一、二支試管的吸光度。酶活（）（葡萄糖等量值）×稀釋倍數(shù)。 ）木聚糖酶酶活的測(cè)定。相關(guān)溶液和試劑的配置參照等的方法。采用法

8、，取支試管各加入 中性木聚糖底物，與待測(cè)酶液一起在 水浴中預(yù)熱 。在第一、二支試管中各加入 待測(cè)酶液， 水浴中反應(yīng) 。在三支試管中各加入 的試劑，然后在第三支試管中加入 的待測(cè)酶液。搖勻支試管后，在沸水浴中煮 。水浴冷卻至室溫后，將顯色液（包括空白）以 離心 。取上清液以第三支試管為對(duì)照在 下測(cè)第一、二支試管的吸光度。酶活（）（葡萄糖等量值）×稀釋倍數(shù)。 淀粉酶、蛋白酶酶活的測(cè)定 ）淀粉酶酶活的測(cè)定。相關(guān)溶液和試劑配置參照管道平的方法，在支試管中加入1可溶性淀粉溶液1 ，加入 、 mol/L檸檬酸緩沖溶液 ，去離子水1 ，在第一、第二支試管中加入酶液 ， 水浴中保溫 。在支試管中各加

9、入 的，然后在第三支試管加入 的酶液。搖勻支試管在沸水浴中煮 。水浴冷卻至室溫后，以第三支試管為對(duì)照在 下測(cè)第一、二支試管的吸光度。酶活單位定義為每小時(shí)酶促生成 葡萄糖的酶量。）蛋白酶酶活的測(cè)定。相關(guān)溶液和試劑的配置參照的方法，將適當(dāng)體積的樣品加入到試管中，并用補(bǔ)足到 ，向各試管中加入 的考馬斯亮藍(lán)染液，混勻，溫室放置 ，用分光光度計(jì)測(cè)定 處的吸光度，并記錄讀數(shù)，以不含的樣品作為空白對(duì)照，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品中的蛋白濃度。 結(jié)果與分析 木質(zhì)素降解相關(guān)酶類酶活測(cè)定結(jié)果木質(zhì)素降解相關(guān)酶類經(jīng)酸、水處理后所測(cè)得的酶活如表和圖所示。由圖可知，木質(zhì)素相關(guān)酶類酶活酸處理與水處理相比有差異，酸處理酶活均高于

10、水處理酶活。 酸性纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶酶活測(cè)定結(jié)果酸性纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶經(jīng)酸、水處理后所測(cè)得的酶活如表和圖所示。由圖可知，杏鮑菇菌絲經(jīng)酸處理酶活與水處理相比有顯著差異，其中酸性纖維素酶酸處理酶活是水處理的2倍多；果膠酶酸處理酶活是水處理的2倍多，木聚糖酸處理酶活是水處理的倍多。 淀粉酶、可溶性蛋白酶酶活測(cè)定結(jié)果淀粉酶、可溶性蛋白酶經(jīng)酸、水處理后所測(cè)得的酶活如表和圖所示。由圖可知，杏鮑菇菌絲酸處理酶活與水處理相比有差異，酸處理酶活低于水處理。 小結(jié)與討論本研究采用種不同的處理方式提取杏鮑菇菌絲胞外酶，并對(duì)種處理方式的結(jié)果進(jìn)行比較分析。試驗(yàn)結(jié)果表明，酸性纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶、漆

11、酶、錳過氧化物酶和木質(zhì)素過氧化物酶經(jīng)酸處理后測(cè)定的酶活與水處理相比有差異，其中酸性纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶酸處理酶活與水處理相比有顯著的差異。但淀粉酶和蛋白酶的酸處理酶活不及水處理效果，初步分析，可能是淀粉酶和蛋白酶的最適接近中性，而 的檸檬酸緩沖液偏酸性，抑制了部分淀粉酶和蛋白酶的活性，從而導(dǎo)致所測(cè)得酶活低，但是具體的反應(yīng)機(jī)理還需進(jìn)一步研究。參考文獻(xiàn)： 趙 麗樺褐孔菌代料栽培期間胞外酶活性變化規(guī)律研究吉林延邊：延邊大學(xué)， 倪新江，李 潔，初 洋，等菌絲生長(zhǎng)速度與呼吸消耗及胞外酶活性的關(guān)系中國(guó)食用菌，（）： 程 功生物磁效應(yīng)對(duì)杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)及胞外酶的作用哈爾濱：東北林業(yè)大學(xué)， 初 洋兩個(gè)側(cè)耳屬食用菌解剖學(xué)性狀及胞外酶活性變化比較濟(jì)南：山東師范大學(xué)， 管道平環(huán)境脅迫下部分食用菌菌絲酶活性變