環(huán)境微生物基礎(chǔ)實驗講義

1、天津工業(yè)大學環(huán)境與化學工程學院環(huán)境微生物基礎(chǔ)實驗講義目 錄實驗一、光學顯微鏡對及各類微生物的形態(tài)觀察實驗二、細菌染色方法及鑒定實驗三、培養(yǎng)基的制備和滅菌及細菌接種技術(shù)實驗四、土壤中微生物的分離、純化及培養(yǎng)技術(shù)實驗五、細菌菌落總數(shù)（CFU）的測定實驗六、葉綠素a法進行富營養(yǎng)化湖中藻類的測定實驗一、光學顯微鏡對及各類微生物的形態(tài)觀察一、 實驗目的（1） 掌握光學顯微鏡的結(jié)構(gòu)、原理，學習顯微鏡的操作方法和保養(yǎng)。（2） 觀察大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、青霉、曲霉、根霉、霉菌、鏈球菌、酵母菌、白假絲酵母的個體形態(tài)，并繪制生物圖。二、 儀器與材料（1） 顯微鏡、載玻片、蓋玻片、接種針、鑷子。（

2、2） 蒸餾水、二甲苯、香柏油、擦鏡紙。（3） 結(jié)晶紫染液、藩紅染液、碘液，乙醇（95）、石炭酸液。（4） 菌種：枯草桿菌、大腸桿菌、微生物示范片及新鮮斜面菌種三、 實驗內(nèi)容及步驟一 顯微鏡的結(jié)構(gòu)、光學原理及操作方法1.機械裝置（1）鏡筒：鏡筒上端裝目鏡。下端裝轉(zhuǎn)換器。鏡筒有單筒和雙筒兩種。單筒有直立式和后斜式。（2）轉(zhuǎn)換器：轉(zhuǎn)換器裝在鏡筒的下方，其上有孔，不同規(guī)格的物鏡分別安裝在各孔上。（3）載物臺：載物臺為方形和圓形的平臺，中央有一光孔，孔的兩側(cè)各裝1個夾片，載物臺上還有移動器，可縱向和橫向移動，移動器的作用是夾住和移動標本用的。（4）鏡臂：鏡臂支撐鏡筒、載物臺、聚光器和調(diào)節(jié)器，有固定式和調(diào)

3、節(jié)式兩種。（5）鏡座：鏡座為馬蹄形，支撐整臺顯微鏡，其上有反光鏡。（6）調(diào)節(jié)器：包括粗、細螺旋調(diào)節(jié)器各一個?？烧{(diào)節(jié)物鏡和所需觀察的物體之間的距離。2.光學系統(tǒng)和光學原理（1）目鏡：每臺顯微鏡備有3個不同規(guī)格的目鏡（2）物鏡：物鏡裝在轉(zhuǎn)換器的孔上，物鏡有低倍、高倍及油鏡。物鏡的性能由數(shù)值孔徑?jīng)Q定。數(shù)值孔徑指光線投射到物鏡上的最大角度（鏡口角，）的一半正弦與介質(zhì)折射率（n）的乘積。當鏡與裝片之間的介質(zhì)為空氣時，由于空氣（n=1.52）的折射率不同，光線會發(fā)生折射，不僅使進入物鏡的光線減少，降低了視野的照明度，而且會減少鏡口角。當以香柏油（n=1.515）為介質(zhì)時，由于它的折射率與玻璃相近，光線經(jīng)過

4、載玻片后可直接通過香柏油進入物鏡而不發(fā)生折射，不僅增加了視野的照明度，更重要的是通過增加數(shù)值孔徑達到提高分辨率的目的?？梢姽獾牟ㄩL平均為0.55m。當使用數(shù)值孔徑（N.A）為0.65的高倍鏡時，它能辨別兩點之間的距離為0.42m；而使用數(shù)值孔徑（N.A）為1.25的油鏡時，能辨別兩點之間的距離則為0.22m。顯微鏡性能的優(yōu)劣不單是看它的總放大倍數(shù)，更重要的是看它分辯率的大小。分辨率是指顯微鏡能分辨出物體兩點間最小距離的能力。值愈小表明分辨率愈高。值與光線的波長（）成正比，與物鏡的數(shù)值孔徑（N.A）成反比。（3）聚光器: 聚光器安裝在載物臺的下面，反光鏡反射來的光線通過聚光器被聚集成光錐照射到樣

5、本上，可增強照明度，提高物鏡的分辨率。聚光器可上下調(diào)節(jié)，中間裝有光圈，可調(diào)節(jié)光度。（4）反光鏡：反光鏡裝在鏡座上，有平、凹兩面，光源為自然光時用平面鏡，光源為燈光時用凹面鏡。它可自由轉(zhuǎn)動方向。（5）濾光片：自然光由各種波長的光組成，如只需某些波長的光線，可選用合適的濾光片，以提高分辨率，增加反差和分辨率。二 顯微鏡的操作方法1.低倍鏡的操作（1）置顯微鏡于固定桌上。（2）旋動轉(zhuǎn)換器，將低倍鏡移到鏡筒正下方，和鏡筒對直。（3）轉(zhuǎn)動反光鏡向著光源處，同時用眼對準目鏡，仔細觀察。（4）將標本片放在載物臺上，使觀察的目的物置于圓孔正中央。（5）將粗調(diào)節(jié)器向下旋轉(zhuǎn)，眼睛注視物鏡，以防物鏡和載玻片相碰。（

6、6）左眼向目鏡里觀察，將粗調(diào)節(jié)器向上旋轉(zhuǎn)。如果粗調(diào)節(jié)器旋的太快，使超過焦點，必須從第五步重調(diào)。（7）觀察時兩眼同時睜開。2. 高倍鏡的操作（1）使用高倍鏡前，先用低倍鏡觀察，發(fā)現(xiàn)目的物后將它移至視野正中央。（2）旋動轉(zhuǎn)換器換高倍鏡，如果高倍鏡觸及載玻片立即停止旋動，說明原來低倍鏡就沒有調(diào)準焦距，目的物并沒有找到，要用低倍鏡重調(diào)，如果調(diào)對了，換高倍鏡時基本可以看到目的物。3. 油鏡的操作（1）如果高倍鏡的目的物沒有看清，用油鏡。先用低倍鏡和高倍鏡檢查標本，將目的物移到視野正中。（2）提起鏡筒約2cm，將油鏡轉(zhuǎn)至正下方。在玻片標本的鏡檢部位(鏡頭的正下方)滴一滴香柏油。（3）從側(cè)面注視，小心慢慢降

7、下鏡筒，使油鏡浸在油中至油圈不擴大為止，鏡頭幾乎與裝片接觸，但不可壓及裝片，以免壓碎玻片，損壞鏡頭。（4）將光線調(diào)亮，左眼從目鏡觀察，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒徐徐上升(切忌反方向旋轉(zhuǎn))，當視野中有物像出現(xiàn)時，再用細調(diào)節(jié)器校正焦距。如因鏡頭下降未到位或鏡頭上升太快末找到物像，必須再從側(cè)面觀察，將油鏡降下，重復操作直至物像看清為止。仔細觀察并繪圖。（5）再次觀察，提起鏡筒，依次用低倍鏡、高倍鏡和油鏡觀察，繪圖。重復觀察時可比第一次少加香柏油。三 鏡檢完畢后的工作1移開物鏡鏡頭。2取出裝片。3清潔油鏡，油鏡使用完畢后，須用擦鏡紙擦去鏡頭上的香柏油，再用擦鏡紙沾少許二甲苯擦掉殘留的香柏油，最后再用干凈的擦鏡紙

8、擦干殘留的二甲苯。4擦凈顯微鏡，將各部分還原。將接物鏡呈“八”字形降下，不可使其正對聚光器，同時降下聚光器，轉(zhuǎn)動反光鏡使其鏡面垂直于鏡座。最后套上鏡罩，對號放入鏡箱中，置陰涼干燥處存放。注意事項：1使用油鏡必須按先用低倍鏡和高倍鏡觀察，再用油鏡觀察2下降鏡頭時，一定要從側(cè)面注視，切忌用眼睛對著目鏡，邊觀察邊下降鏡頭的錯誤操作，以免壓碎玻片而損壞鏡頭。3使用二甲苯擦鏡頭時，注意二甲苯不能過多，以防溶解固定透鏡的樹脂。4注意保持顯微鏡的潔凈，對金屬部分要用軟布擦拭，擦鏡頭必須用擦鏡紙，切勿用手或用普通布、紙等，以免損壞鏡頭。四 菌體形態(tài)觀察按照光學顯微鏡操作方法，依低倍、高倍及油鏡的次序逐個觀察桿

9、菌、球菌、芽孢桿菌、酵母、霉菌等微生物示范片，用鉛筆在實驗報告中繪出微生物形態(tài)圖。思考題：1. 繪制微生物的形態(tài)圖。2. 為什么要用油鏡觀察細菌的形態(tài)？15實驗二、細菌染色方法及鑒定一、 實驗目的(1) 學習微生物的染色的原理，染色的基本操作技術(shù)。(2) 學習細菌簡單染色步驟及革蘭氏染色的方法。以大腸桿菌和枯草芽孢桿菌為菌種，進行菌體染色；通過革蘭氏染色的方法鑒別革蘭氏陽性菌和陰性菌。二、 儀器與材料(1) 顯微鏡、載玻片、蓋玻片、接種針、鑷子、酒精燈。(2) 蒸餾水、二甲苯、香柏油、擦鏡紙。(3) 結(jié)晶紫染液、藩紅染液、碘液，乙醇（95）、石炭酸液。(4) 菌種：枯草桿菌、大腸桿菌新鮮斜面菌

10、種四、 實驗內(nèi)容及步驟一 簡單染色（1）涂片：在潔凈的載玻片中央滴一小滴蒸餾水，用接種針以無菌操作從菌種斜面上取少量大腸桿菌或枯草桿菌菌體與水混合，涂成均勻的薄層。（2）固定：將涂片放在離火焰較遠處，以微熱烘干，溫度以不燙手為宜，烘干后再在火焰中快速通過34次，使菌體完全固定在載玻片上。（3）染色：用結(jié)晶紫濃染液染一分鐘。（4）沖洗：傾去染液，斜置載玻片，用水沖去多余染液，流出的水無色為止。要注意不能將水直接沖在涂菌的位置（5）干燥：用微熱烘干或自然晾干或在微笑火焰上方烘干。（6）鏡檢：先用低倍鏡找到部位，再用高倍鏡、油鏡觀察。二 革蘭氏染色（1）涂片、固定：同上，菌種用大腸桿菌和枯草桿菌。（

11、2）染色：將經(jīng)固定后的涂片用結(jié)晶紫染液染1分鐘，水洗，干燥。（3）媒染：用碘液媒染1分鐘，水洗，干燥。（4）脫色：連續(xù)滴加95乙醇使其脫色，直至滴下的乙醇無色為止（約0.5到1分鐘），水洗，干燥。（5）復染：用番紅復染1分鐘，水洗，干燥。（6）鏡檢：用高倍鏡及油鏡觀察染色情況，革蘭氏陽性（G+）呈紫色；革蘭氏陰性（G-）呈紅色。思考題：1. 革蘭氏染色法的原理是什么？2. 大腸桿菌和枯草芽孢桿菌各是什么性質(zhì)的細菌？實驗三、培養(yǎng)基的制備和滅菌及細菌接種技術(shù)一、 實驗目的（1） 熟悉微生物實驗用各類玻璃器皿的洗滌、包裝，棉塞制作和滅菌前的準備工作；（2） 學習各種培養(yǎng)基的配置方法，掌握肉膏蛋白胨瓊

12、脂培養(yǎng)基的制備方法；（3） 學習高壓蒸汽滅菌的方法及蒸汽滅菌鍋的操作方法；學習干熱滅菌的方法并對培養(yǎng)皿、移液管等玻璃器皿進行干熱滅菌。（4） 掌握斜面接種技術(shù)。二、 儀器與材料（1） 無菌培養(yǎng)皿，90×，10套、無菌移液管1ml，10支，10ml 1支，試管15mm×150mm，10支，三角瓶150ml，250ml各兩個。（2） 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基1瓶，精密試紙6.48.4，10%HCl，10%NaOH。（3） 接種針，酒精燈，托盤，恒溫培養(yǎng)箱，高壓蒸汽滅菌鍋，烘箱。（4） 棉花，脫脂棉，紗布，線繩，牛皮紙，電爐，燒杯，量杯。三、 實驗內(nèi)容及步驟一 玻璃器皿的洗滌和包裝（1）

13、洗滌。對實驗所用的玻璃儀器進行洗滌，烘干。（2） 包裝。包裝玻璃儀器是為了在滅菌的過程中對其進行保護。實驗中學習對移液管進行包裝，單根移液管包裝后，待滅菌。移液管的包裝：洗凈烘干后的移液管，在口吸的一端用尖頭攝子或針塞入少許脫脂棉花，以防止菌體誤吸口中，及口中的微生物吸入管而進入培養(yǎng)物中造成污染。塞入棉花的量要適宜，棉花不宜露在吸管口的外面，多余的棉花可用酒精燈的火焰把它燒掉。每支吸管用一條寬約45厘米，以45°左右的角度螺旋形卷起來，吸管的尖端在頭部，吸管的另一端用剩余紙條打結(jié)，不使散開，標上容量。若干支吸管扎成一束，滅菌后，同樣要在使用時才從吸管中間擰斷紙條抽去吸管。試管和三角瓶

14、的包裝：試管和三角瓶都要作合適的棉花塞。棉花塞的作用是起過濾作用，避免空氣中的微生物進入試管或三角瓶。棉花塞的制作要求使棉花塞緊貼玻璃壁，沒有皺紋和縫隙，不能過松，過緊易擠破管口和不易塞入，過松易掉落和污染。棉花塞的長度不少于管口直徑的二倍，約2/3塞進管口。若干支管用繩子扎在一起，在棉花塞部分外包，油紙或牛皮紙再在紙外用繩扎緊。三角瓶每個單獨用油紙包扎棉花塞。（3） 棉塞的制作。棉塞用于試管、三角瓶的包裝。棉塞制作后塞在試管或三角瓶瓶口，最后用牛皮紙包好后用細繩扎好，待滅菌。二 培養(yǎng)基制備和滅菌（1） 斜面的制備。實驗可以用營養(yǎng)瓊脂配置培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基可用于大多數(shù)細菌的培養(yǎng)。也可以按照待培

15、養(yǎng)菌種的特性，配置特定培養(yǎng)基。培養(yǎng)基溶液配置后，需調(diào)節(jié)pH，進行過濾和分裝。對于制備斜面培養(yǎng)基，要將培養(yǎng)基溶液分裝到試管里。分裝的方法為，試管里培養(yǎng)基長度為試管長度的1/31/2之間，賽好棉塞后，十支試管為一捆用牛皮紙包好，用細繩捆扎，待滅菌。（2） 滅菌。加熱滅菌的方法一般有干熱滅菌法和濕熱滅菌法。高壓蒸汽滅菌法比干熱滅菌優(yōu)越，一般用于液體培養(yǎng)基的滅菌。干熱滅菌法：用烘箱進行，溫度160維持2h，滅菌的物品為培養(yǎng)皿、試管、移液管等玻璃器皿。濕熱滅菌法：高壓蒸汽滅菌法，需應(yīng)用高壓蒸汽滅菌器進行，用于微生物實驗所需的一切器皿、器具、培養(yǎng)基（不耐高溫除外）。高壓蒸汽滅菌器有各種形式及規(guī)格。下面以常

16、用的高壓蒸汽滅菌鍋為例進行介紹。高壓蒸汽滅菌鍋是一個密閉的耐高溫和耐高壓的雙層金屬圓筒，兩層之間盛水。外鍋：供裝水產(chǎn)生蒸汽之用。堅厚，其上方或前方有金屬厚蓋，蓋有螺栓，借以緊閉蓋門，使蒸汽不能外溢。加熱后，滅菌器內(nèi)蒸汽壓力升高，溫度也隨之升高，壓力越大，溫度越高。外鍋壁上還裝有排氣閥、溫度計、壓力表及安全閥。排氣閥用于排出空氣；壓力表：以表示鍋內(nèi)壓力及溫度（公制壓力單位為公斤/cm2、英制壓力單位磅/英寸2、溫度單位）；安全閥又稱保險閥，利用可調(diào)彈簧控制活塞，超過定額壓力即自行放汽減壓，以保證在滅菌工作中的安全。內(nèi)鍋：為放置滅菌物的空間。高壓蒸汽滅菌鍋的使用方法：3. 使用前的準備：滅菌器內(nèi)清

17、洗干凈，檢查進氣閥及排氣閥是否靈活有效，并加入適量水。4. 裝放滅菌物：將待滅菌的物品放入滅菌器內(nèi)，注意不要放得太擠，以免影響蒸汽的流通和滅菌效果。然后加蓋旋緊螺旋，密封。5. 預熱及排氣：加熱升溫使水沸騰，并由小至大打開排氣管（排氣閥），排除冷空氣，繼續(xù)加熱升溫，再關(guān)閉排氣管。6. 升壓保溫：讓溫度隨蒸汽壓力增高而上升待壓力逐漸上升，待蒸汽壓力升至所需壓力(一般為103.43kPa，溫度則相當于121.3)時，控制熱源，維持所需時間，持續(xù)1520min即可達到滅菌目的。7. 降壓開蓋取物：保壓到規(guī)定時間之后，就停止加熱，緩緩排氣，待其壓力下降至零時，方可開蓋取物。8. 注意事項：此法滅菌是否

18、徹底的一個關(guān)鍵是壓力上升之前，必須先把蒸汽鍋內(nèi)的冷空氣完全驅(qū)盡，否則，即使壓力表已指到103.43kPa，而鍋內(nèi)溫度則只有100，這樣芽孢則不能被殺死，造成滅菌不徹底，所以必須進行排氣。降壓一般通過自行冷卻。如果時間來不及，可以稍開排氣閥降壓，但排氣閥不能開得太大，排氣不能過急，否則滅菌器內(nèi)驟然降壓，滅菌物內(nèi)的液體會突然沸騰，將棉塞沖濕，甚至外流。另外，降壓時壓力表上讀數(shù)雖已降至“0”時，滅菌物內(nèi)溫度有時還會在100以上，如果開鍋太快還有沸騰的可能，所以最好在降壓后再稍停一會，滅菌物溫度下降后再出鍋較妥當。滅菌物滅菌后仍處于高溫時，容器內(nèi)呈真空狀，降溫過程中外部空氣要重新進入容器。一般叫“回氣

19、”，降溫過快，回氣就急，如棉塞不嚴密，空氣中雜菌就會重新進入滅菌物使其污染，這往往造成高壓蒸汽滅菌的失敗。因而降壓開蓋取物不宜過急。三 細菌的接種技術(shù)實驗的目的和所研究的微生物種類、所用的培養(yǎng)基及容器不同，接種的方法有很多。主要有斜面接種技術(shù)、液體培養(yǎng)基中菌種的接入技術(shù)、液體接種、穿刺接種、稀釋平板涂布法。本實驗中主要學習斜面接種技術(shù)。斜面接種的方法：這是將長在斜面培養(yǎng)基（或平板培養(yǎng)基）上的微生物接種到另一支培養(yǎng)基上的方法。操作方法：接種前桌面擦凈，并用酒精擦拭消毒。待接種試管貼好標簽，注明菌種名，接種日期，接種人，組別，姓名等。點燃煤氣燈，將一支斜面菌種和一支待接斜面培養(yǎng)基放在左手上，拇指壓

20、住兩支試管，中指位于兩支試管之間，斜面向上，管口齊平。右手先將棉塞擰松動，以便接種時拔出。右手拿接種環(huán)，在火焰上將環(huán)燒紅，伸入試管中部分均應(yīng)灼燒以達滅菌目的?；鹧媾?，用右手小指、無名指和手掌夾住棉塞后拔出，試管口在火上微燒，將燒過的接種環(huán)伸入試管內(nèi)，先觸及沒長菌的培養(yǎng)基使環(huán)冷卻，然后輕輕挑取少許菌種，將接種環(huán)抽出管外迅速伸入另一試管底部，在斜面上由底部向上劃出曲線。抽出接種環(huán)，將試管塞上棉塞并插入試管架上，最后再次燒紅接種環(huán)，接種完畢。思考題：1. 無菌操作的注意事項？2. 高壓蒸汽滅菌法的原理？實驗四、土壤中微生物的分離、純化及培養(yǎng)技術(shù)一、 實驗目的（1） 掌握從環(huán)境(土壤、水體、活性污泥等

21、)中分離培養(yǎng)細菌的方法；（2） 掌握平板劃線法并對細菌進行分離操作。二、 儀器和材料（1） 無菌培養(yǎng)皿，90×，10套、無菌移液管1ml，2支，10ml 1支，三角瓶150ml，250ml各兩個。（2） 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基1瓶，精密試紙6.48.4，10%HCl，10%NaOH。（3） 接種針，酒精燈，托盤，恒溫培養(yǎng)箱，高壓蒸汽滅菌鍋，烘箱。（4） 棉花，脫脂棉，紗布，線繩，牛皮紙，電爐，燒杯，量杯。三、 實驗步驟一 土壤稀釋液的制備1. 取適量土壤，將其分散到滅菌后蒸餾水中，制備土壤稀釋液。二 微生物分離純化：稀釋涂平板法，平皿劃線分離法細菌純種分離的方法有兩種：稀釋平板法和平板劃線法

22、。實驗中學習平板劃線法對菌種進行分離。菌種選用活性污泥或土壤懸液等。先學習制作平板。平板制作：將融化并冷卻至50的培養(yǎng)液倒入無菌培養(yǎng)皿中，使凝固成平板。接種：用接種環(huán)挑取一環(huán)活性污泥，左手拿培養(yǎng)皿，中指，無名指和小指托住皿底，拇指和食指夾住皿蓋，將培養(yǎng)皿傾斜，左手拇指和食指將皿蓋掀半開，右手將接種環(huán)伸入培養(yǎng)皿內(nèi)，在平板上輕輕劃線，劃線方式可取斜線、直線等。劃線后蓋好皿蓋，倒置，30培養(yǎng)2448h后觀察結(jié)果。思考題： 1. 平板劃線法操作注意事項是什么？實驗五、細菌菌落總數(shù)（CFU）的測定一、 實驗目的實驗中掌握倒平板技術(shù)及水樣稀釋方法，熟練無菌操作技術(shù)。學習細菌的平板計數(shù)的方法，根據(jù)待培養(yǎng)菌體

23、進行培養(yǎng)基的設(shè)計及制備。根據(jù)計數(shù)結(jié)果正確書寫菌落總數(shù)報告。二、 目的和原理水中細菌總數(shù)往往同水體受有機物污染的程度呈正相關(guān)，它是評價水質(zhì)污染程度的一個重要指標之一。本實驗采用標準平皿法對水樣中細菌作計數(shù)，這是一種測定水中好氧的和兼性厭氧的異養(yǎng)細菌密度的方法，由于細菌在水體中能以單獨個體、成對、鏈狀，成簇或成團的形式存在，此外沒有單獨的一種培養(yǎng)基或某一環(huán)境條件能滿足一個水樣中所有細菌的生理要求，所以由此法所得的菌落數(shù)實際上要低于被測水樣中真正存在的活細菌的數(shù)目。細菌總數(shù)是指1毫升水樣在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，37、24小時培養(yǎng)后所生長的菌落數(shù)。一般規(guī)定，1毫升自來水中總菌數(shù)不得超過100個。三、 材料

24、和器皿（1） 培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（2） 無菌采樣瓶、滅菌移液管、滅菌培養(yǎng)皿，盛有90ml及9mL滅菌蒸餾水的錐形瓶和試管。四、 方法和步驟（1）采集水樣。（2）吸取10 ml水樣（河水、污水、游泳池水或港灣水等），注入盛有90ml無菌水三角瓶中，混勻成10-1稀釋液，在吸水樣前，水樣應(yīng)徹底攪動均勻。（3）按10倍稀釋法將水樣稀釋成10-2、10-3、10-4。（4）根據(jù)水樣的潔凈程度，污染嚴重者選取10-2、10-3、10-4稀釋度；中等的選取10-1、10-2、10-3稀釋度，每個稀釋液分別注入兩個培養(yǎng)皿，每皿1ml。稀釋度的選擇是測定精確度的關(guān)鍵，選擇適宜者，平皿上菌落總數(shù)介于3030

25、0個之間。（5）注入徹底融化，然后冷卻到45的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15ml，立即旋搖培養(yǎng)血，充分混勻，水平放置至固化。取同一稀釋度的平板培養(yǎng)物，依菌落計算原則進行計算。（1）菌落計算原則平皿菌落的計算，可用肉眼觀察，必要時用放大鏡檢查，防止遺漏，也可借助于菌落計數(shù)器計數(shù)。記錄同一濃度的三個平板的菌落總數(shù)，計算平均值，再乘以 稀釋倍數(shù)即1ml水樣中的細菌菌落總數(shù)。（2）計算方法首先選擇平均菌落數(shù)在30300者進行計算。當只有一個稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時，即可用它作為平均值乘其稀釋倍數(shù)。若有兩個稀釋度的平均菌落數(shù)都在30300之間，則應(yīng)按兩者的比值來決定。若其比例小于2，應(yīng)報告兩者的平均數(shù)；若大

26、于2，則報告其中較小的數(shù)字如果所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。如果全部稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30300之間，則以最接近300或30的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。菌落計數(shù)的報告，菌落在100以內(nèi)時，按實有數(shù)報告；大于100時，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計算，為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)也可用10的指數(shù)來表示。思考題：1. 測定水樣中的細菌菌落總數(shù)的意義？2. 將水樣的測定結(jié)果報告，并給出結(jié)論？實驗六、葉綠素a法進行富營養(yǎng)化湖中藻類的測定一、 實驗目的（1） 正確進行待測樣品的取樣，配置測定用各種試劑及藥品；掌握水樣的過濾及提取方法