丹參酮IIa磺酸鈉微量雜質的分離及結構鑒定

1、目 錄論文任務書2論文開題報告11答辯資格審查表14論文原創(chuàng)申報書15論文16宜春學院成人教育畢業(yè)論文任務書題 目：丹參酮IIa磺酸鈉微量雜質的分離及結構鑒定學 院： 宜春學院繼續(xù)教育學院 專 業(yè)： 藥學 班 級： 2010級 學 號： 姓 名： 起訖日期： 2012.7.5-11.10 指導教師： 職稱： 教研室主任： 審核日期： 2012.11.2 說 明1. 畢業(yè)論文任務書由指導教師填寫，并經教研室審定，下達 到學生。2. 進度表分前、中、后三期由學生填寫，每期填寫后交指導教師簽署審查意見，并作為畢業(yè)論文工作檢查的主要依據。3. 學生根據指導教師下達的任務書獨立完成開題報告，3周內 提交

2、給指導教師批閱。4. 本任務書在畢業(yè)設計完成后，與論文一起交指導教師，作為論文評閱和畢業(yè)論文答辯的主要檔案資料，是學士學位論文成績的主要內容之一。一、畢業(yè)論文的要求和內容1. 論文選題要具體、明確，應該與所學專業(yè)相關。2. 收集資料應豐富、翔實；引文資料應注明出處，嚴禁抄襲。3. 研究方法合理，材料或數據來源可靠，處理嚴密，能很好的說明研究課題。4. 論文的目的、意義闡述清楚，論點明確，論據充足，邏輯性強。文字簡煉，條理清楚，思路清晰，內容具體而充實，表述準確。5. 結論正確，能夠全面總結，歸納研究的最終結果，結論完整，準確鮮明。6. 論文內容要能正確反映社會和時代特征，具有理論價值或時間意義

3、，有新穎性。7. 字數在4000個字以上。8. 論文格式應規(guī)范，按時完成論文。二、研究方案、目標1、研究方案： 在指導教師指導下，確定論文題；查閱有關參考資料；經驗累積、分析篩選、歸納、總結；制訂方案，撰寫論文； 2、目標：本文建立了高效液相色譜法測定原料藥丹參酮A磺酸鈉微量成份含量的方法，可用來對原料藥和制劑進行質量控制。三、閱讀書目清單 1 、張均田丹參現(xiàn)代研究概況與進展(續(xù)一)醫(yī)藥導報，2004，23(6)：3553602 、杜冠華，張均田丹參現(xiàn)代研究概況與進展醫(yī)藥導報，2004,23(7)：4354403 、梁勇,羊裔明,袁淑蘭丹參酮藥理作用及臨床應用研究進展中草藥,2000,31(4

4、)：3043054 、吳杲，何招兵，吳漢斌。丹參酮的藥理作用研究進展?，F(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志2005,14(10)：138213855 、錢名堃,楊保津,顧文華,等丹參有效成分的研究丹參酮A磺酸鈉和次甲丹參醌的化學結構化學學報,1978,36(3)：1992056 、Delectis Florae Reipublicae Popularis Sinicia,Agendae Academiae SinicaeEditaMFlora Reipublicae Popularis Sinicae(中國植物志)Beijing:SciencePress,Vol66:146Beijing:Science Pub

5、lishers,1990,127The Flora of China Editorial CommitteeMFlora of ChinaVol17,1753Beijing:Science Publishing Company20058 、瀧浦潔丹參的成分研究(第二報)Kryptotanshinone藥學雜志,1941,61：4829、瀧浦潔丹參的成分研究(第三報)Tanshinone藥學雜志,1943,63(1)：4010 、王首鈺. 不同廠家復方丹參片中丹參酮IIa 含量的比較J . 藥品檢測雜志, 2000,11 、王劍江 ,袁匯寧 ,錢曉園 ,劉小玲 丹參酮IIa的主要藥理作用及臨床應

6、用研究現(xiàn)狀.杭州師范學院學報(醫(yī)學版) 2007, 27(6)12 、張驊張民徐鵬蘇仁意丹參酮IIa磺酸鈉臨床應用進展.臨床肺科雜志2008年8月13(8):23525013、張玉方，趙春景:丹參酮IIa及其鈉鹽的藥理研究進展. 藥學專論,2008 17 (1) 14、丁小軍：丹參酮IIa磺酸鈉對照品的制備和有關物質研究. 四、畢業(yè)論文進度計劃序號各階段工作內容起訖日期備 注1論文選題6月10日至7月4日2搜集相關資料7月5日至7月30日3撰寫開題報告和論文初稿8月1日至10月2日4修改論文、論文定稿10月3日至11月8日5678910五、主要參考資料 1 、張均田丹參現(xiàn)代研究概況與進展(續(xù)一

7、)醫(yī)藥導報，2004，23(6)：3553602 、杜冠華，張均田丹參現(xiàn)代研究概況與進展醫(yī)藥導報，2004,23(7)：4354403 、梁勇,羊裔明,袁淑蘭丹參酮藥理作用及臨床應用研究進展中草藥,2000,31(4)：3043054 、吳杲，何招兵，吳漢斌。丹參酮的藥理作用研究進展?，F(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志2005,14(10)：138213855 、錢名堃,楊保津,顧文華,等丹參有效成分的研究丹參酮A磺酸鈉和次甲丹參醌的化學結構化學學報,1978,36(3)：1992056 、Delectis Florae Reipublicae Popularis Sinicia,Agendae Academ

8、iae SinicaeEditaMFlora Reipublicae Popularis Sinicae(中國植物志)Beijing:SciencePress,Vol66:146Beijing:Science Publishers,1990,127The Flora of China Editorial CommitteeMFlora of ChinaVol17,1753Beijing:Science Publishing Company20058 、瀧浦潔丹參的成分研究(第二報)Kryptotanshinone藥學雜志,1941,61：4829、瀧浦潔丹參的成分研究(第三報)Tanshino

9、ne藥學雜志,1943,63(1)：4010 、王首鈺. 不同廠家復方丹參片中丹參酮IIa 含量的比較J . 藥品檢測雜志, 2000,11 、王劍江 ,袁匯寧 ,錢曉園 ,劉小玲 丹參酮IIa的主要藥理作用及臨床應用研究現(xiàn)狀.杭州師范學院學報(醫(yī)學版) 2007, 27(6)12 、張驊張民徐鵬蘇仁意丹參酮IIa磺酸鈉臨床應用進展.臨床肺科雜志2008年8月13(8):23525013、張玉方，趙春景:丹參酮IIa及其鈉鹽的藥理研究進展. 藥學專論,2008 17 (1) 14、丁小軍：丹參酮IIa磺酸鈉對照品的制備和有關物質研究. 六、畢業(yè)設計進度表（本表由學生填寫，每期分別交指導教師簽署

10、審查意見）前 期（7月5日至 8月15日）學生主要工作： 1、搜集閱讀有關資料。2、整理、分析所搜集到的資料，并進行歸納和分類。3、撰寫開題報告和論文寫作提綱。 指導教師審查意見：開題報告和論文提綱已閱，可按論文提綱著手撰寫論文。 2012年8月 15 日中 期（8月16日至9月30日）學生主要工作：1、修改開題報告；2、進一步搜集相關資料；2、撰寫論文初稿。論文的主要內容：1、文獻綜述2、原料藥中微量成分的分離及結構鑒定指導教師審查意見：論文初稿已閱，第二部分的內容還需要充實。論文的格式不符合規(guī)范要求。2012年 10 月 2 日后 期（10月1日至 11月8日）學生主要工作：1、遵照指導老

11、師意見對論文進行修改。2、按照學校下發(fā)的論文格式要求，對論文格式進行修改。3、打印論文紙質稿，準備電子文檔。指導教師審查意見：論文基本上可以定稿。請打印論文一式三份，并填好論文答辯資格審查表。準備答辯。2012年 11 月 2 日七、其他（學生提交）1開題報告1份 2論文1份（理科4000字以上，文科6000字以上） 指 導 教 師： 教研室負責人： 學生開始執(zhí)行 任務書日期： 2012.7.5 學生姓名： 送交畢業(yè)設計日期： 2012.11.5 宜春學院成人教育畢業(yè)設計(論文)開題報告題 目： 丹參酮IIa磺酸鈉微量雜質的分離及結構鑒定 學 院： 宜春學院繼續(xù)教育學院 專 業(yè)： 藥學 班 級

12、： 學 號： 姓 名： 指導教師： 審核日期： 2012.7.30 一、選題的依據及意義 通過本研究，作者認為本文建立了高效液相色譜法測定原料藥丹參酮A磺酸鈉微量成份含量的方法，可用來對原料藥和制劑進行質量控制。二、國內外研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢（含文獻綜述）目前從丹參中提取丹參酮IIa的方法和藥理活性研究較多，但對于丹參酮IIa磺酸鈉雜質的研究很少，原料中的微量雜質成分的研究還是空白。在對丹參酮IIa磺酸鈉的藥理作用，在藥物代謝動力學和相關文獻報導的制備工藝等進行綜合考察的基礎上本課題采用色譜及波譜方法對丹參酮IIa磺酸鈉進行微量雜質的分離及結構鑒定。三、本課題研究內容研究：丹參酮IIa磺酸鈉微量

13、雜質的分離及結構鑒定四、本課題研究方法本文建立了高效液相色譜法測定原料藥丹參酮A磺酸鈉微量成份含量的方法，可用來對原料藥和制劑進行質量控制。五、 研究目標、主要特色及工作進度1、 研究目標：丹參酮IIa磺酸鈉微量雜質的分離及結構鑒定 2、主要特色： 3、工作進度： （1）7月5日至7月30日 確定論文題目，收集相關資料，整理所收集到的資料，分析、提練觀點。（2）8月1日至9月30日 ，撰寫開題報告和論文初稿。（3）10月1日至11月8日 論文修改，定稿，做好論文答辯前的準備。六、參考文獻 1 、張均田丹參現(xiàn)代研究概況與進展(續(xù)一)醫(yī)藥導報，2004，23(6)：3553602 、杜冠華，張均田

14、丹參現(xiàn)代研究概況與進展醫(yī)藥導報，2004,23(7)：4354403 、梁勇,羊裔明,袁淑蘭丹參酮藥理作用及臨床應用研究進展中草藥,2000,31(4)：3043054 、吳杲，何招兵，吳漢斌。丹參酮的藥理作用研究進展?，F(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志2005,14(10)：138213855 、錢名堃,楊保津,顧文華,等丹參有效成分的研究丹參酮A磺酸鈉和次甲丹參醌的化學結構化學學報,1978,36(3)：1992056 、Delectis Florae Reipublicae Popularis Sinicia,Agendae Academiae SinicaeEditaMFlora Reipublica

15、e Popularis Sinicae(中國植物志)Beijing:SciencePress,Vol66:146Beijing:Science Publishers,1990,127The Flora of China Editorial CommitteeMFlora of ChinaVol17,1753Beijing:Science Publishing Company20058 、瀧浦潔丹參的成分研究(第二報)Kryptotanshinone藥學雜志,1941,61：4829、瀧浦潔丹參的成分研究(第三報)Tanshinone藥學雜志,1943,63(1)：4010 、王首鈺. 不同廠家

16、復方丹參片中丹參酮IIa 含量的比較J . 藥品檢測雜志, 2000,11 、王劍江 ,袁匯寧 ,錢曉園 ,劉小玲 丹參酮IIa的主要藥理作用及臨床應用研究現(xiàn)狀.杭州師范學院學報(醫(yī)學版) 2007, 27(6)12 、張驊張民徐鵬蘇仁意丹參酮IIa磺酸鈉臨床應用進展.臨床肺科雜志2008年8月13(8):23525013、張玉方，趙春景:丹參酮IIa及其鈉鹽的藥理研究進展. 藥學專論,2008 17 (1) 14、丁小軍：丹參酮IIa磺酸鈉對照品的制備和有關物質研究. 宜 春 學 院 成 人 高 等 教 育 2012 屆畢業(yè)設計（論文）答辯資格審查表題 目丹參酮IIa磺酸鈉微量雜質的分離及結

17、構鑒定 學生姓名專業(yè)藥學班級2010學號檢查內容論文完成情況完成未完成/論文字數7700開題報告有無/外文資料翻譯有/無/字數/中、英文摘要有無/軟硬件驗收完成未完成/論文期間考勤情況有無曠課無 曠課累計數 0 學生自查說明1、完成任務書中布置的各項任務；2、按有關程序進行工作；3、論文撰寫過程中通過指導老師指導后，經多次修改，最后成文； 學生簽名： 2012 年 11 月5 日指導教師意見（說明是否可進行答辯及評定成績）論文觀點正確，結構合理，內容較充實，語句通順，符合畢業(yè)論文的規(guī)范格式要求。同意答辯。 成績；良好 指導教師簽名： 2012年 11月10日宜 春 學 院畢業(yè)設計（論文）原創(chuàng)性

18、申明本人鄭重申明：所呈交的論文是本人在導師的指導下獨立進行研究所取得的研究成果。除了文中特別加以標注引用的內容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫的成果。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式表明。本人完全意識到本申明的法律責任，其后果由本人承擔。作者簽名：日期：2012年11月5日17丹參酮IIa磺酸鈉微量雜質的分離及結構鑒定摘要：丹參酮IIa磺酸鈉，是從藥材丹參中提取的主要脂溶性有效成分丹參酮IIa經磺化反應后形成的一種水溶性鈉鹽，由于磺酸基的引入，提高了丹參酮IIa的水溶性，在治療冠心病、心絞痛、心肌梗塞等疾病方面顯示出與丹參酮IIa所無法比擬的優(yōu)越性，成

19、為主要的心血管類中藥。目前從丹參中提取丹參酮IIa的方法和藥理活性研究較多，但對于丹參酮IIa磺酸鈉雜質的研究很少，原料中的微量雜質成分的研究還是空白。在對丹參酮IIa磺酸鈉的藥理作用，在藥物代謝動力學和相關文獻報導的制備工藝等進行綜合考察的基礎上本課題采用色譜及波譜方法對丹參酮IIa磺酸鈉進行微量雜質的分離及結構鑒定。同時，本文建立了高效液相色譜法測定原料藥丹參酮A磺酸鈉微量成份含量的方法，可用來對原料藥和制劑進行質量控制。關鍵詞：羥基丹參酮IIa磺酸鈉；丹參酮IIa磺酸鈉；丹參酮IIa；分離；結構鑒定 前言丹參是活血化淤的傳統(tǒng)中藥，具有良好的抗冠心病等作用。其制劑及復方制劑品種繁多，僅注射

20、劑的年使用量就達20億支以上，但多數產品有效成分不明確，質量控制指標不嚴格，由此導致臨床療效不穩(wěn)定，不良反應時常出現(xiàn)，因此不能適應中藥生產現(xiàn)代化和向國際市場挺進的要求。丹參酮IIa磺酸鈉，是從藥材丹參中提取的主要脂溶性有效成分丹參酮IIa經磺化反應后形成的一種水溶性鈉鹽，由于磺酸基的引入，提高了丹參酮IIa的水溶性，在治療冠心病、心絞痛、心肌梗塞等疾病方面顯示出與丹參酮IIa所無法比擬的優(yōu)越性，成為主要的心血管類中藥11。由于我國心血管疾病患者在人群中比例居高不下，該藥品市場需求量呈逐年增加趨勢，但是因為其雜質不明確，安全問題一直是制藥企業(yè)關心的問題。目前從丹參中提取丹參酮IIa 的方法和藥理

21、活性研究較多，但對于丹參酮IIa磺酸鈉雜質的研究很少，原料中的微量雜質成分的研究還是空白，且對雜質分離也沒有一個統(tǒng)一較好的方法。由于丹參酮IIa磺酸鈉是丹參提取物經過化進一步磺化制得，因此其可能的雜質主要有兩個來源，一是作為磺化原料的參酮IIa中沒有純化干凈的其他丹參酮類化合物，一是磺化過程中丹參酮IIa其他殘留丹參酮磺化產物及其副產物，在對丹參酮IIa磺酸鈉的藥理作用，藥物代謝動力學和相關文獻報導的制備工藝等進行綜合考察的基礎上本課題采用色譜及波譜方法對丹參酮IIa磺酸鈉進行微量雜質的分離及結構鑒定1,2。 第一章文獻綜述1.1 丹參形態(tài)丹參是唇形科鼠尾草屬植物丹參(Salvia milti

22、orrhiza Bge)的干燥根及根莖。該屬植物約900-1100種，主要分布于熱帶或溫帶。我國有約84種，分布于全國各地，尤以西南為多。除了丹參外，三葉鼠尾草，云南鼠尾草的根也可以作為丹參入藥。其植物學性狀和產地如下6,7（見圖1）：圖1 多年生直立草本；根肥厚，肉質，外面朱紅色，內面白色，長5-15厘米，直徑4-14毫米，疏生支根。莖直立，高40-80厘米，四棱形，具槽，密被長柔毛，多分枝。葉常為奇數羽狀復葉，葉柄長1.3-7.5厘米，密被向下長柔毛，小葉3-5，長1.5-8厘米，寬1-4厘米，卵圓形成橢圓狀卵圓形或寬披針形，先端銳尖或漸尖，基部圓形成偏斜，邊緣具圓齒，草質，兩面被疏柔毛，

23、下面較密，小葉柄長2-14毫米，與葉軸密被長柔毛。輪傘花序6花或多花，下部者疏離，上部者密集，組成長4.5-17厘米縣長梗的頂生或腋生總狀花序；苞片技針形，先端漸尖，基部楔形，全緣，上面無毛，下面略被疏柔毛，比花梗長或短；花梗長34毫米，花序軸密被長柔毛或具腺長柔毛?；ㄝ噻娦?，帶紫色，長約1.1厘米，花后稍增大。外面被疏長柔毛及具腺長柔毛，具緣毛，內面中部密被白色長硬毛，具11脈，二唇形，上唇全緣，三角形，長約4毫米寬約8毫米，先端具3個小尖頭，側脈外緣具狹翅，下辱與上唇近等長，深裂成2齒，齒三角形，先端漸尖?；ü谧纤{色，長2-2.7厘米，外被具腺短柔毛，尤以上唇為密，內面離冠筒基部約2-3毫

24、米有斜生不完全小疏柔毛毛環(huán)，冠筒外伸，比冠檐短，基部寬2毫米，向上漸寬，至喉部寬達8毫米，冠檐二唇形，上唇長12-15毫米，鐮刀伏，向上豎立，先端微缺，下唇短于上唇，3裂，中裂片長5毫米，寬達10毫米，先端二裂，裂片頂端具不整齊的尖齒，側裂片短，頂端圓形，寬約3毫米。能育雄蕊2，伸至上唇片，花絲長3.5-4毫米，藥隔長1720毫米，中部關節(jié)處略被小疏柔毛，上臂十分伸長，長14-17毫米，下臂短而增粗，藥室不育，頂端聯(lián)合。退化雄蕊線形，長約4毫米?；ㄖh外伸，長達40毫米，先端不相等2裂，后裂片極短，前裂片線形?；ūP前方稍膨大。小堅果黑色，橢圓形，長約3.2厘米，直徑1.5毫米?；ㄆ?-8月，花

25、后見果。產河北，山西，陜西，山東，河南，江蘇，浙江，安徽，江西及湖南；生于山坡、林下草叢或溪谷旁，海拔120-1300米。日本也有6,7。1.2丹參的化學成分及其藥理作用丹參為唇形科植物丹參(Salviae miltiorrhizaeBge.)的干燥根及根莖。性微寒, 味苦, 是臨床最常用中藥之一。具有祛瘀止疼、活血調經、清心除煩的功效、是活血化瘀的常用中藥。丹參的主要有效成分為脂溶性的二帖類化合物和水溶性酚酸類化合物。其中的丹參酮I、II，異丹參酮I、II，異丹參酮、丹參酸甲醋、丹參新酮、丹參酚、原兒茶醛、原兒茶酸等都具有藥學活性。由于丹參的上述各種療效均與丹參酮IIa直接相關，且丹參酮II

26、a標準品較易得到，其色譜行為與其它成分差距較大，以及丹參酮IIa具有廣泛藥理作用，因此作為脂溶性成分的代表，并被中華人民共和國藥典用作為丹參藥材的質量控制指標1。丹參廣泛用于治療心血管疾病的中藥復中，以丹參為主要的中藥制劑開發(fā)也相當活躍14【丹參酮】（tanshinone）具有多種生物活性，如抗腫瘤、抗血栓形成和抗炎等，常在中醫(yī)中被用來治療炎性疾病。丹參酮IIa（tanshinone IIa）在丹參中含量最多，丹參酮IIa磺酸鈉（sodium tanshinone IIa sulphonate, STS）是丹參酮IIa的衍生物。【丹參酮IIa】( TanshinoneIIa)是從傳統(tǒng)的活血化淤

27、類中藥丹參( Salvia miltiorrhiza Bge)中提取的脂溶性有效成分,易溶于乙醇、丙酮、乙醚等有機溶劑, 微溶于水, 分子式為C H O , 分子量294.33,室溫下外觀性狀為紅褐色粉末或紅色結晶。丹參酮幾乎不溶于水，口服吸收差,生物利用度低,一般應通過注射給藥。在空氣中丹參酮A迅速降解,而pH和復方成分則對該成分降解影響不大。丹參有效成分可分為脂溶性的丹參酮類(主要成分為1)及水溶性的丹參酸類(包括丹參素、原兒茶醛等) 35。有效成分具有抗心肌缺血、抗菌、抗雄性激素作用,水溶性成分具有抗心肌缺血和增加冠狀動脈血流量等生物活性4。故中國藥典2000年版中將丹參的提取工藝定為醇

28、提和水提結合的工藝路線。不少生產廠家雖按藥典工藝生產,但產品檢測結果往往仍不合格。為此,本文從原料、提取工藝以等方面對丹參酮IIa磺酸鈉質量問題進行研究9。上世紀60年代Kakisswa確定了丹參酮IIa的結構式；隨后，Baidlie等人合成了丹參酮IIa。由于丹參酮IIa腸道吸收差， 臨床起效慢，故植物化學家錢明坤等人半合成了丹參酮IIa磺酸鈉，并由上海制藥一廠、中藥三廠等制備成注射液制劑，用于心腦血管疾病的治療和預防。注射液推向市場其確切的療效得到廣大醫(yī)患的歡迎?！镜⑼狪Ia磺酸鈉】( Sodium tanshinone IIa sulfonate , STS)是從丹參中分離出二萜醌類化

29、合物丹參酮后經磺化得到的水溶性物質?；瘜W成份主要有隱丹參酮,丹參酮a( tanshinone IIa) ,羥基丹參酮IIa,丹參酮甲脂,異隱丹參酮以及丹參新酮等。適用于冠心病、腦中風等心腦血管疾病。8 ,91.3丹參酮IIa磺酸鈉藥理作用的研究現(xiàn)狀:1.3.1 丹參酮IIa 磺酸鈉對心血管系統(tǒng)的影響對心肌的影響藥理實驗表明，對麻醉狗一次靜脈推注STS 20 mg/kg后，血壓升高，心輸出量和左心室做功量稍有增加，心率和外周血管阻力的變化不顯著。王志敏等進一步報道STS增加在位大鼠心臟的收縮幅度與上面的結果一致，并對STS對心肌和溶血的作用進行了觀察，發(fā)現(xiàn)離體豚鼠心臟灌流中，STS 0.5 -

30、20g/ mL灌流20 min，隨濃度而加重抑制心臟收縮幅度。麻醉大白鼠靜脈注射40 mg/kg能輕度增加在位心臟收縮幅度，0.1 mg/ mL對離體兔左心室乳頭肌在缺氧條件下，電刺激收縮幅度下降一半所需要的時間延長。0.02 或0.1 mg/ mL使兔紅細胞在低滲條件下的破裂減小，又減少牛血清白蛋白凝固。25 - 75g/ mL對離體豚鼠左心室乳頭肌膜電位和動作電位的振幅和時程無明顯影響。并進一步推測藥物對離體心臟和在體心臟的影響不同，可能由于：在離體心臟灌流中，STS抑制心肌收縮是藥物直接長時間作用于心肌，而體內給藥中，藥物在給藥瞬間血濃度很高，但很快趨向下降；藥物在體內受到代謝轉化；神經

31、系統(tǒng)的影響；豚鼠與大白鼠的種鼠差異。STS能輕度增加大鼠在位心臟收縮力。增加收縮力的藥物可能會增加心肌耗氧量。但這類藥物也可能通過降低左心室舒張末期壓和心容積，即降低室壁張力和心臟體積而降低心肌耗氧量。又從STS對乳頭肌在缺氧條件下收縮力下降50所需要的時間延長，表明藥物似乎可以減少心肌對氧的需求，有助于心絞痛緩解。接著，我國學者從分子水平進一步對STS對心肌的作用機制進行了探討。通過豚鼠離體心臟Langendorff灌流法，造成心肌鈣反常模型，給予不同濃度的STS作為心肌保護劑，觀察STS對心肌鈣反常的保護作用，并與已知的鈣拮劑異搏定比較，探討STS的鈣拮抗作用。實驗結果表明，STS對心肌鈣

32、反常損傷具有明顯的保護作用，抑制鈣內流，減輕鈣反常過程中心肌組織鈣沉積和心肌損傷所致的蛋白酶釋放 （P < 0.01），且該作用在一定范圍內具有劑量依賴關系，且作用效果優(yōu)于異搏定。同時作者用電鏡進行了超微結構觀察，比較了正常對照組，鈣反常組，鈣反常加異搏定組，鈣反常加STS組。結果表明與正常對照組相比，鈣反常組出現(xiàn)典型損傷，肌原纖維極度收縮，I、A帶融合，Z線扭曲、排列紊亂，形成許多同心收縮帶，線粒體明顯腫脹、基質疏松。部分線粒體內外膜及嵴斷裂；肌膜破裂，間盤嚴重分離。鈣反常組加STS 10mg/L、20mg/L的兩組心肌形態(tài)學改善不佳，加30 mg/L、40 mg/L的兩組心肌形態(tài)學明

33、顯改善，尤以30mg/L組為佳，除線粒體輕度腫脹、糖原略減少外，心肌細胞結構基本正常。2 mg/L異搏定組心肌形態(tài)學亦有改善，但不如STS 30mg/L、 40 mg/L兩組。進一步證實STS系通過其鈣拮抗作用保護心肌免受鈣反常損傷。新制備的家兔心肌細胞線粒體，在體外條件研究了STS對家兔正常的和異丙基腎上腺素(ISP)興奮的心肌線粒體攝取鈣活力的響。結果表明STS對線粒體的主動攝取鈣的影響也是具有鈣通道阻滯劑樣的作用。并能減少或抑制ISP所引起的心肌線粒體鈣超載，從而起到保護心肌線粒體和心肌細胞免遭上述病理原因引起的高鈣沖擊和細胞壞死的后果。這可能即是T治療冠心病心絞痛和胸悶及改善缺血性心電

34、圖；抗心肌缺血和縮小梗塞范圍；降低缺血后的乳酸增加等藥理作用的共同生化基礎。通過分離的成年豚鼠心室肌單細胞在高鉀(25 mmol/L)溶液中部分除極化使鈉通道失活，用細胞內刺激誘發(fā)慢反應動作電位。20 mol/L的STS對這種慢反應動作電位有明顯的抑制作用。在1-20mol/L濃度范圍內，STS對0.28 mol/L的異丙腎上腺素強化的慢反應動作電位有濃度依賴性抑制作用。而且，隨異丙腎上腺素濃度的增加(69-0.55 mol/L)抑制作用更加明顯，進一步說明STS可能是一種鈣拮抗劑。通過甲狀腺粉在誘導大鼠甲亢過程中心肌微粒體Na+，K+-ATPase，Ca2+-ATPaseMg2+-ATPas

35、e活性變化，曾林等探討高甲狀腺激素水平作用下STS對大鼠心肌微粒體ATPase活性的保護作用及機制。實驗證實STS不干擾甲狀腺粉誘脈流量，供給了心肌充足的氧，保護ATPase活性，以糾正心肌細胞內異常的鈣代謝，減少細胞內Ca2+超載，對心肌起到保護作用。應用膜片鉗技術，研究STS對豬冠脈平滑肌KATP和KCa的作用，從分子水平闡明其擴冠機制。實驗結果表明，在內面向外式膜片方式下，5 20mol/ L 的STS可明顯激活KATP，表現(xiàn)為通道開放概率、膜片通道開放數目增加，而且STS也可明顯增加KCa通道開放概率，表現(xiàn)出明顯激活作用，因此，STS對原代培養(yǎng)豬冠脈平滑肌上KATP和KCa均有直接激活

36、作用，STS對這兩種通道是否有間接作用尚需進一步證實。實驗結果進一步從分子水平證實STS 對原代培養(yǎng)豬冠脈平滑肌上KATP和KCa均有直接激活作用，這可能也是它們舒張冠脈的重要機制之一，而且由此可推測，STS通過對KATP、KCa的鉀通道開放和鈣通道阻滯的協(xié)同或聯(lián)合作用，可明顯減少血管平滑肌上的自發(fā)電活動，引起血管舒張，在心血管疾病的治療中具有重要的應用價值。利用在體家兔缺血預適應（ischemia preconditioning，IPC）模型，隨機將家兔24 只分為心肌缺血組（IR）、缺血預適應組（IPC）和STS聯(lián)合缺血預適應組（DS-201+IPC），應用心外膜單相動作電位（MAP）探針

37、記錄技術檢測缺血-再灌注過程中心肌復極50時（MAPD50）及心律失常發(fā)生率和持續(xù)時間；TTC染色測定梗死面積；HE染色病理組織學觀察，研究STS對家兔缺血預適應心肌電生理參數的影響及保護作用。結果表明，與IR組相比，IPC組缺血5 min時的MAPD50：迅速縮短（P < 0.05），缺血20 min時的MAPD50縮短明顯減?。≒ < 0.05），復灌30 min后MAPD50的過度延長程度明顯減小（P < 0.05）。同時，缺血再灌注中室性心律失常發(fā)生率明顯降低（P < 0.05）。在DS - 201+IPC組，缺血5 min時未見MAPD50迅速縮短（P <

38、; 0.05），缺血20 min及復灌30 min后MAPD50及缺血再灌注中室性心律失常發(fā)生率與IPC組無差異（P < 0.05）。病理學檢測顯示，IPC組心肌梗死面積及組織損傷程度均明顯小于IR組3,4。DS-201+IPC組心肌梗死面積及組織損傷程度均小于IPC組。實驗結果顯示，DS-201 聯(lián)合IPC取消了缺血早期IPC顯著縮短MAPD50的效應。但對IPC抗缺血再灌注心律失常作用無顯著影響；STS能增強IPC縮小心肌梗死面積和減輕組織損傷的作用。其機制可能是IPC能抑制心肌細胞線粒體ATP酶，減少ATP的水解，有效保存心肌細胞的能量儲備。STS能降低IR后線粒體脂質過氧化物的含

39、量，改善線粒體膜的流動性。用培養(yǎng)的新生大鼠心肌細胞STS對血管緊張素誘導的心肌細胞肥大及p-JNK，絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶表達的影響，發(fā)現(xiàn)STS能顯著降低血管緊張素誘導的心肌細胞蛋白含量、蛋白合成速率的增加，對p-JNK表達具有劑量依賴性的抑制作用；同時上調絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶表達。據此推測，STS抗心肌肥厚機制與上調絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶，抑制p-JNK表達相關。下一步研究應著重于STS對ERK以及p35 信號通路的上下游分子的影響，進一步闡明STS抗心肌肥厚的機制，為其在臨床用于心肌肥厚的防治提供實驗依據11,13對心血管系統(tǒng)的影響、對腦血管和細胞的影響、對腫瘤細胞的作用、對神經系

40、統(tǒng)的影響、抗菌作用目前對丹參酮IIa 及其鈉鹽的藥理作用研究取得了一定成果，但很少有人報道其在心血管受體的藥理學方面和在體內與其他藥物的相互作用方面的研究5。但是其雜質一直很少有研究，丹參酮IIa磺酸鈉原料及丹參酮IIA磺酸鈉注射液上市后，發(fā)現(xiàn)無論是原料還是水針劑在生產和銷售過程中都會由于儲存而出現(xiàn)酸性增強，含量降低的現(xiàn)象因為原有質量標準沒有對丹參酮IIa磺酸鈉原料及丹參酮IIa磺酸鈉制劑有關物質進行有效監(jiān)控。經HPLC檢查，丹參酮IIa磺酸鈉原料及制劑中均存在一未知雜質成分高達7%-15%。目前，丹參酮IIa磺酸鈉研究主要還是集中在其藥理活性的探討上，原料中的微量雜質成分的研究還是空白。由于

41、丹參酮IIa磺酸鈉是丹參提取物經過化進一步磺化制得，因此其可能的雜質主要有兩個來源，一是作為磺化原料的參酮IIa中沒有純化干凈的其他丹參酮類化合物，一是磺化過程中丹參酮IIa其他殘留丹參酮磺化產物及其副產物，基于此方面的考慮，本課題采用色譜及波譜方法對丹參酮IIa磺酸鈉的微量雜質的分離及結構鑒定。采用硅膠、大孔樹脂等柱層析方法對丹參酮IIa磺酸鈉的微量雜質進行制備分離，運用1H,13C，NMR等波譜技術鑒定化合物的結構。我們準備在這方面進行初步的研究。進一步制備大量高純度樣品作為雜質含量測定和結構鑒別及質量控制的方法，并比較了不同條件下的分離效果，建立了一個簡單的含量測定方法可以用來作為原料藥

42、的和注射劑的質量控制。 第二章原料藥中微量成分的分離及結構鑒定2.1實驗方法2.1.1實驗儀器Agilent 1100 系列高效液相色譜儀Shim-pack CLC-ODS-C18(150mn*6.0mn 5m)色譜柱VWD型紫外檢測器HP Chemstation 色譜工作站（美國惠普公司）JZH柱溫箱（天津金洲科學儀器有限公司）旋蒸蒸發(fā)儀2.1.2 實驗試劑甲醇（色譜純，江蘇漢邦科技有限公司）乙酸（分析純，南京化學試劑有限公司）氯仿（分析純，上海凌峰化學試劑有限公司）丙酮（分析純，南京化學試劑有限公司 ）95%乙醇 硅膠H（200-300目）大孔樹脂2.1.3 原料藥中微量成分的分離準確稱取

43、原料藥粗品2g，置于100ml圓底燒瓶中加水約25ml，超聲使其充分溶解。然后置于回流裝置上溫度90回流四個小時，將樣品轉移到500ml楔形瓶內置旋蒸儀上蒸干，樣品用40乙醇溶解，抽濾。冷卻后上樣。(原料藥高效液相色譜見圖1)圖1 原料藥粗品高效液相色譜圖原料藥上大孔樹脂吸附兩個小時后用40乙醇洗脫。用試管接餾分，流速不能過快。大孔樹脂收集所得餾分反相板檢識（展開劑50%甲醇），對照品用95%乙醇溶解。點板后合并相同餾分，置于100ml楔形瓶內于旋蒸儀上蒸干，然后用95%乙醇少量溶解，旋蒸蒸干（如果殘留物成大片狀且色澤不均勻可用95%乙醇再次溶解，然后蒸干）。取出殘留物轉入試劑瓶內，得DST-

44、1粗品.待上硅膠柱。取DST-1粗品100mg。取硅膠20g，硅膠柱采用濕法裝柱,干法上樣。以氯仿：丙酮=1：1洗脫，氣泵加壓。用10ml試管收集餾分，TLC檢識 展開劑為氯仿：甲醇=8：2。合并餾分后，高效液相檢測，流動相：甲醇：2%醋酸水=60%：40%；柱溫35；流速：1ml/min； 檢測波長：272nm；檢測含量達到97%以上( 見圖2-1，2-2)。圖2-1 DST-1粗品高效液相色譜圖圖2-2 DST-1粗品高效液相色譜圖2. 2目標化合物的結構鑒定及結果討論：羥基丹參酮IIa磺酸鈉的結構鑒定：對DST-1粗品上硅膠柱分離得到的樣品DST-1，進行氫譜共振檢測，測定結果見圖。圖3-1DST-1樣品氫譜掃描圖圖3-2樣品氫譜掃描圖)2.2.1丹參酮IIa磺酸鈉的結構鑒定1HNMR數據（500MHz，TMS，DMSO-d6，(ppm)）7.85(1H,d,J=8.4 Hz)，7.56(1H,d,J=8.1 Hz)說明為芳環(huán)上的氫，2.33(3H，s)為甲基峰，且與雙鍵相連，1.29(6H，s)為兩個甲基峰，3.08(2H,t,J=6.1Hz)，1.72(2H,m)，1.62(2H,m)