細胞培養(yǎng)2PPT學習教案

1、會計學119071907年年 Ross Harrison Ross Harrison （美國）（美國）將蛙胚神經管區(qū)的一片組織移植到蛙的淋巴液凝塊中，將蛙胚神經管區(qū)的一片組織移植到蛙的淋巴液凝塊中，這些組織在體外不但存活若干周，而且居然從細胞這些組織在體外不但存活若干周，而且居然從細胞中長出了軸突（神經細胞）。中長出了軸突（神經細胞）。意義：公認的組織培養(yǎng)開始標志；意義：公認的組織培養(yǎng)開始標志；解決了軸突發(fā)生的爭論；解決了軸突發(fā)生的爭論；培養(yǎng)方法將培養(yǎng)物放在蓋玻片上并培養(yǎng)方法將培養(yǎng)物放在蓋玻片上并倒置于凹玻片腔中培養(yǎng)。倒置于凹玻片腔中培養(yǎng)。第1頁/共45頁 1923 Alexis Carrel

2、 (surgeon)Aseptic techniquesCarrel Flask1912-1946Culture Chicken Embryo FibroblastPlasma+tissue homogenate在沒有抗生素的條件下，使雞胚心臟細胞維持生存在沒有抗生素的條件下，使雞胚心臟細胞維持生存34年，先后傳代年，先后傳代3400次。次。第2頁/共45頁19341934年年 荷蘭溫特荷蘭溫特 發(fā)現生長素，并證實了對植物細胞發(fā)現生長素，并證實了對植物細胞 培養(yǎng)的作用培養(yǎng)的作用19371937年年 高特里特高特里特, ,諾比考特諾比考特( (法法) ) 幾乎同時離體培養(yǎng)幾乎同時離體培養(yǎng) 了胡蘿

3、卜組織，并使細胞增殖了胡蘿卜組織，并使細胞增殖19401940年年 Earle Earle 建立了可無限傳代的建立了可無限傳代的C3HC3H小鼠的結締組小鼠的結締組 織細胞系織細胞系L L系（曾在體外經甲基膽蒽系（曾在體外經甲基膽蒽 轉化）。轉化）。19511951年年 Gay Gay 建立了人第一個細胞系人體宮頸癌建立了人第一個細胞系人體宮頸癌 HelaHela細胞系（原報道為鱗癌，細胞系（原報道為鱗癌，19711971年更年更 正為腺癌）。正為腺癌）。第3頁/共45頁5第4頁/共45頁6無機分子：水（結合水，游離水）無機分子：水（結合水，游離水） 無機離子（無機離子（NaNa+ +,K,K

4、+ +,Ca,Ca2+2+,Mg,Mg2+2+) )第5頁/共45頁7第6頁/共45頁8微絲微絲(microfilament,MF)中等纖維中等纖維(intermediate filament,IF)微管微管(microtubule,MT)第7頁/共45頁9第8頁/共45頁培養(yǎng)細胞的生物學特征培養(yǎng)細胞的生物學特征1.貼壁型細胞貼壁型細胞2.懸浮型細胞懸浮型細胞上皮細胞型上皮細胞型成纖維細胞型成纖維細胞型游走細胞型游走細胞型多形性細胞多形性細胞第9頁/共45頁112.接觸抑制接觸抑制3.密度抑制密度抑制第10頁/共45頁12第11頁/共45頁13第12頁/共45頁14三個生長階段：三個生長階段：

5、 原代培養(yǎng)期原代培養(yǎng)期從體內取出組織接種培養(yǎng)到第一次傳代的從體內取出組織接種培養(yǎng)到第一次傳代的 階段，一般維持階段，一般維持14周。周。 傳代期傳代期 衰退期衰退期第13頁/共45頁15第14頁/共45頁16第15頁/共45頁17第16頁/共45頁18 正常細胞會因為細胞接觸而發(fā)生相正常細胞會因為細胞接觸而發(fā)生相互抑制分裂和限制運動的現象。互抑制分裂和限制運動的現象。對數生長期對數生長期最具活力時期（細胞分裂旺盛，分最具活力時期（細胞分裂旺盛，分 裂相增多。）裂相增多。） 細胞分裂指數細胞分裂指數(mitotic index(mitotic index，MI)MI) MI MI( (分裂相個數

6、分裂相個數10001000個細胞個細胞) )100100 第17頁/共45頁19 新分裂細胞數新分裂細胞數= =死亡細胞數死亡細胞數 （穩(wěn)定期）（穩(wěn)定期）注：細胞代謝活動仍在進行中注：細胞代謝活動仍在進行中第18頁/共45頁20第19頁/共45頁21第20頁/共45頁22第21頁/共45頁23第22頁/共45頁24v成分：成分： 無機鹽無機鹽 葡萄糖葡萄糖 v作用：作用： 維持滲透壓，調節(jié)維持滲透壓，調節(jié)pHpH， 供給能量和無機離子供給能量和無機離子第23頁/共45頁25第24頁/共45頁26第25頁/共45頁27第26頁/共45頁28終濃度：終濃度：0.1% 0.5% 常以常以DMEM/F

7、12培養(yǎng)液配制培養(yǎng)液配制過濾除菌過濾除菌-20 保存保存第27頁/共45頁29第28頁/共45頁30第29頁/共45頁31第30頁/共45頁32促生長因子及激素促生長因子及激素 pH滲透壓滲透壓第31頁/共45頁33第32頁/共45頁34第33頁/共45頁35第34頁/共45頁36第35頁/共45頁37v 取材過程有可能帶入支原體、病毒，對培養(yǎng)的細胞取材過程有可能帶入支原體、病毒，對培養(yǎng)的細胞 產生潛在影響，可能導致實驗失敗或實驗產生潛在影響，可能導致實驗失敗或實驗 結果的不結果的不 可靠性可靠性v 每批血清之間都有差別，其成分不能保持一致每批血清之間都有差別，其成分不能保持一致v 血清中含有一些物質對細胞會產生毒性作用血清中含有一些物質對細胞會產生毒性作用第36頁/共45頁38第37頁/共45頁39第38頁/共45頁40v19511951年年,EarleEarle,EarleEarle基礎合成培養(yǎng)基基礎合成培養(yǎng)基MEMMEM (minimum essential media) (minimum essential media)第39頁/共45頁41第40頁/共45頁42第41頁/共45頁43HamF12 1