細(xì)胞培養(yǎng)2PPT學(xué)習(xí)教案

1、會計學(xué)119071907年年 Ross Harrison Ross Harrison （美國）（美國）將蛙胚神經(jīng)管區(qū)的一片組織移植到蛙的淋巴液凝塊中，將蛙胚神經(jīng)管區(qū)的一片組織移植到蛙的淋巴液凝塊中，這些組織在體外不但存活若干周，而且居然從細(xì)胞這些組織在體外不但存活若干周，而且居然從細(xì)胞中長出了軸突（神經(jīng)細(xì)胞）。中長出了軸突（神經(jīng)細(xì)胞）。意義：公認(rèn)的組織培養(yǎng)開始標(biāo)志；意義：公認(rèn)的組織培養(yǎng)開始標(biāo)志；解決了軸突發(fā)生的爭論；解決了軸突發(fā)生的爭論；培養(yǎng)方法將培養(yǎng)物放在蓋玻片上并培養(yǎng)方法將培養(yǎng)物放在蓋玻片上并倒置于凹玻片腔中培養(yǎng)。倒置于凹玻片腔中培養(yǎng)。第1頁/共45頁 1923 Alexis Carrel

2、 (surgeon)Aseptic techniquesCarrel Flask1912-1946Culture Chicken Embryo FibroblastPlasma+tissue homogenate在沒有抗生素的條件下，使雞胚心臟細(xì)胞維持生存在沒有抗生素的條件下，使雞胚心臟細(xì)胞維持生存34年，先后傳代年，先后傳代3400次。次。第2頁/共45頁19341934年年 荷蘭溫特荷蘭溫特 發(fā)現(xiàn)生長素，并證實了對植物細(xì)胞發(fā)現(xiàn)生長素，并證實了對植物細(xì)胞 培養(yǎng)的作用培養(yǎng)的作用19371937年年 高特里特高特里特, ,諾比考特諾比考特( (法法) ) 幾乎同時離體培養(yǎng)幾乎同時離體培養(yǎng) 了胡蘿

3、卜組織，并使細(xì)胞增殖了胡蘿卜組織，并使細(xì)胞增殖19401940年年 Earle Earle 建立了可無限傳代的建立了可無限傳代的C3HC3H小鼠的結(jié)締組小鼠的結(jié)締組 織細(xì)胞系織細(xì)胞系L L系（曾在體外經(jīng)甲基膽蒽系（曾在體外經(jīng)甲基膽蒽 轉(zhuǎn)化）。轉(zhuǎn)化）。19511951年年 Gay Gay 建立了人第一個細(xì)胞系人體宮頸癌建立了人第一個細(xì)胞系人體宮頸癌 HelaHela細(xì)胞系（原報道為鱗癌，細(xì)胞系（原報道為鱗癌，19711971年更年更 正為腺癌）。正為腺癌）。第3頁/共45頁5第4頁/共45頁6無機分子：水（結(jié)合水，游離水）無機分子：水（結(jié)合水，游離水） 無機離子（無機離子（NaNa+ +,K,K

4、+ +,Ca,Ca2+2+,Mg,Mg2+2+) )第5頁/共45頁7第6頁/共45頁8微絲微絲(microfilament,MF)中等纖維中等纖維(intermediate filament,IF)微管微管(microtubule,MT)第7頁/共45頁9第8頁/共45頁培養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)特征培養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)特征1.貼壁型細(xì)胞貼壁型細(xì)胞2.懸浮型細(xì)胞懸浮型細(xì)胞上皮細(xì)胞型上皮細(xì)胞型成纖維細(xì)胞型成纖維細(xì)胞型游走細(xì)胞型游走細(xì)胞型多形性細(xì)胞多形性細(xì)胞第9頁/共45頁112.接觸抑制接觸抑制3.密度抑制密度抑制第10頁/共45頁12第11頁/共45頁13第12頁/共45頁14三個生長階段：三個生長階段：

5、 原代培養(yǎng)期原代培養(yǎng)期從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到第一次傳代的從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到第一次傳代的 階段，一般維持階段，一般維持14周。周。 傳代期傳代期 衰退期衰退期第13頁/共45頁15第14頁/共45頁16第15頁/共45頁17第16頁/共45頁18 正常細(xì)胞會因為細(xì)胞接觸而發(fā)生相正常細(xì)胞會因為細(xì)胞接觸而發(fā)生相互抑制分裂和限制運動的現(xiàn)象?；ヒ种品至押拖拗七\動的現(xiàn)象。對數(shù)生長期對數(shù)生長期最具活力時期（細(xì)胞分裂旺盛，分最具活力時期（細(xì)胞分裂旺盛，分 裂相增多。）裂相增多。） 細(xì)胞分裂指數(shù)細(xì)胞分裂指數(shù)(mitotic index(mitotic index，MI)MI) MI MI( (分裂相個數(shù)

6、分裂相個數(shù)10001000個細(xì)胞個細(xì)胞) )100100 第17頁/共45頁19 新分裂細(xì)胞數(shù)新分裂細(xì)胞數(shù)= =死亡細(xì)胞數(shù)死亡細(xì)胞數(shù) （穩(wěn)定期）（穩(wěn)定期）注：細(xì)胞代謝活動仍在進(jìn)行中注：細(xì)胞代謝活動仍在進(jìn)行中第18頁/共45頁20第19頁/共45頁21第20頁/共45頁22第21頁/共45頁23第22頁/共45頁24v成分：成分： 無機鹽無機鹽 葡萄糖葡萄糖 v作用：作用： 維持滲透壓，調(diào)節(jié)維持滲透壓，調(diào)節(jié)pHpH， 供給能量和無機離子供給能量和無機離子第23頁/共45頁25第24頁/共45頁26第25頁/共45頁27第26頁/共45頁28終濃度：終濃度：0.1% 0.5% 常以常以DMEM/F

7、12培養(yǎng)液配制培養(yǎng)液配制過濾除菌過濾除菌-20 保存保存第27頁/共45頁29第28頁/共45頁30第29頁/共45頁31第30頁/共45頁32促生長因子及激素促生長因子及激素 pH滲透壓滲透壓第31頁/共45頁33第32頁/共45頁34第33頁/共45頁35第34頁/共45頁36第35頁/共45頁37v 取材過程有可能帶入支原體、病毒，對培養(yǎng)的細(xì)胞取材過程有可能帶入支原體、病毒，對培養(yǎng)的細(xì)胞 產(chǎn)生潛在影響，可能導(dǎo)致實驗失敗或?qū)嶒灝a(chǎn)生潛在影響，可能導(dǎo)致實驗失敗或?qū)嶒?結(jié)果的不結(jié)果的不 可靠性可靠性v 每批血清之間都有差別，其成分不能保持一致每批血清之間都有差別，其成分不能保持一致v 血清中含有一些物質(zhì)對細(xì)胞會產(chǎn)生毒性作用血清中含有一些物質(zhì)對細(xì)胞會產(chǎn)生毒性作用第36頁/共45頁38第37頁/共45頁39第38頁/共45頁40v19511951年年,EarleEarle,EarleEarle基礎(chǔ)合成培養(yǎng)基基礎(chǔ)合成培養(yǎng)基MEMMEM (minimum essential media) (minimum essential media)第39頁/共45頁41第40頁/共45頁42第41頁/共45頁43HamF12 1