蛋白結(jié)晶技術(shù)

1、整理課件1 蛋白質(zhì)結(jié)晶技術(shù)蛋白質(zhì)結(jié)晶技術(shù) 整理課件2Background 蛋白質(zhì)的功能是基于蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)，應(yīng)用X-ray蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)需要得到高質(zhì)量的蛋白質(zhì)晶體。 得到高質(zhì)量的蛋白質(zhì)晶體是蛋白質(zhì)功能研究的瓶頸，嚴(yán)重制約著蛋白質(zhì)工程、理性藥物設(shè)計、合成疫苗設(shè)計等新型生物技術(shù)的發(fā)展。整理課件3蛋白結(jié)晶流程圖蛋白結(jié)晶流程圖（電荷均一，大小均一）（電荷均一，大小均一）整理課件4蛋白質(zhì)結(jié)晶過程 蛋白質(zhì)結(jié)晶過程是一個有序化的過程，即溶液中無規(guī)律的分子轉(zhuǎn)變成有規(guī)則排列狀態(tài)的固體。整理課件5整理課件6 影響蛋白質(zhì)溶解性的因素： 離子強度 PH和相反離子 溫度 有機溶劑 改變?nèi)芤褐幸陨弦蛩乜梢允沟鞍踪|(zhì)在溶液中

2、達到過飽和狀態(tài)，從而形成晶核，晶核進一步生長成具有一定空間結(jié)構(gòu)的晶體。整理課件7 微量蒸汽擴散法（濃度增加） 平衡透析法（PH或離子強度） 一批結(jié)晶法（沉淀劑） 溫度梯度結(jié)晶法（溫度） 重復(fù)結(jié)晶法整理課件8 結(jié)晶常用方法懸滴法懸滴法整理課件9坐滴法整理課件10Crystal Screen Kit整理課件11產(chǎn)品名稱 貨號 用途備注 Index KitHR2-144用于生物大分子結(jié)晶 Crystal Screen KitHR2-110用于蛋白質(zhì)，核酸水溶性小分子結(jié)晶 Crystal Screen 2 KitHR2-112 wizard Pegrx 1HR2-082用于生物大分子結(jié)晶 Pegrx

3、2HR2-084用于生物大分子結(jié)晶 Peg/Ion Screen KitHR2-126用于生物大分子結(jié)晶 Peg/Ion 2 ScreenHR2-098用于生物大分子結(jié)晶 Saltrx KitHR2-108用于生物大分子結(jié)晶 Membfac KitHR2-114用于膜蛋白和溶解度有限的樣品結(jié)晶 Crystal Screen LiteHR2-128用于蛋白質(zhì)，縮氨酸，核酸的結(jié)晶整理課件12Natrix KitHR2-116用于核酸和蛋白核酸復(fù)合物的結(jié)晶Crystal Screen Cyro KitHR2-122用于蛋白質(zhì)，可溶性縮氨酸，核酸和水溶性小分子的初次低溫結(jié)晶Nucleic Acid M

4、ini Screen KitHR2-118用于核酸片段的結(jié)晶Low Ionic Strength ScreenHR2-120用于完整單抗，單抗片段以及在低離子濃度下溶解度較低的樣品結(jié)晶Silver Bullet & Silver Bullet BioHR2-078用于生物大分子的初次和二次結(jié)晶HR2-080Peg/Tacsimate Ph5.8 Crystallization ReagentHR2-090Peg/Tacsimate Ph 6.8 Crystallization ReagentHR2-092Peg/Tacsimate Ph 7.8 Crystallization Reag

5、entHR2-094Additive ScreenHR2-428利用樣品間和樣品溶劑間相互作用來優(yōu)化晶體生長和改變樣品溶解度整理課件13整理課件14膜蛋白結(jié)晶技術(shù) 膜蛋白可根據(jù)膜上的位置和分離的難易分為周邊和本體兩類。 膜蛋白有疏水和親水兩個部分，其非極性區(qū)域傾向于形成無序化聚合物，需要采用特殊的條件才能使膜蛋白形成晶體。 去垢劑（detergent）本身也像膜脂分子一樣的兩親性結(jié)構(gòu)，可以替代膜脂。整理課件15 從膜蛋白的水溶液中形成膜蛋白晶體有兩種可能的類型。整理課件16第一種類型的晶體一般很小，不能用于高分辨衍射的研究。第二類晶體，從圖中可以看出，蛋白質(zhì)分子不能太小，否則極性區(qū)域接觸不夠。蛋白質(zhì)分子的大小無法改變，選擇合適的去垢劑分子成為關(guān)鍵整理課件17整理課件18主要參考書目 盧光瑩.生物大分子晶體學(xué)基礎(chǔ) 第二版.