微生物實驗報告

1、食品微生物學(xué)實驗 實驗一     生物顯微鏡的構(gòu)造和使用一、目的與要求 （1）學(xué)習(xí)普通光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)、各部分功能及使用方法。（2）觀察并學(xué)會拍下現(xiàn)成的標(biāo)本玻片在顯微鏡下顯現(xiàn)的圖像。 二、原理 普通光學(xué)顯微鐿由機(jī)械裝置和光學(xué)系統(tǒng)2大部分構(gòu)成。在光學(xué)系統(tǒng)中，物鐿的性能最為關(guān)鍵，它直接影響著顯微鏡的分辨率。而在普通光學(xué)顯微鏡中配置的幾種物鐿以油鐿的放大倍數(shù)最大，與其它物鏡相比，使用較特殊，需在載玻片與鏡頭之間加滴鏡油，以增加照明亮度和提高分辨率。 三、材料與儀器 （1）材料 現(xiàn)成的標(biāo)本玻片（2）儀器

2、 UB102i型生物顯微鏡（重慶奧浦光電技術(shù)有限公司），擦鏡紙 四、操作步驟 （1） 顯微鏡的安置   置顯微鏡于平整的實驗臺上，鏡座距實驗臺邊緣34cm，鐿檢時姿勢要端正。 （2） 調(diào)節(jié)光源   安裝在鏡座內(nèi)的光源燈可通過調(diào)節(jié)電壓以獲得適當(dāng)?shù)恼彰髁炼龋褂梅垂忤O采集自然光或燈光作為照明光源時，應(yīng)根據(jù)光源的強(qiáng)度及所用物鏡的放大倍數(shù)選用凹面或平面反光鏡度調(diào)節(jié)其角度，使視野內(nèi)的光線均勻，亮度適宜。 （3） 低倍鏡觀察  將標(biāo)本玻片置于載物臺上，用標(biāo)本夾住，移動推進(jìn)器使觀察對象處

3、在物鏡的正下方，下降10×物鏡，使其接過標(biāo)本，用粗調(diào)節(jié)器（粗調(diào)螺旋）慢慢升起鏡筒，出現(xiàn)圖像后再用細(xì)調(diào)節(jié)器（細(xì)調(diào)螺旋）調(diào)節(jié)圖像至清晰。通過標(biāo)本夾推進(jìn)器慢慢移動玻片，認(rèn)真觀察標(biāo)本各部位，找到合適目的物，仔細(xì)觀察。 （4） 高倍鏡觀察  在低倍鏡下找到合適的觀察目標(biāo)并將其移至視野中心后轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將高倍鏡移至工作位置，以聚光鏡器光圈及視野進(jìn)行適當(dāng)調(diào)節(jié)后微調(diào)細(xì)調(diào)節(jié)器使物象清晰，利用推進(jìn)器移動標(biāo)本仔細(xì)觀察并記錄。 （5）顯微鏡用后處理 1、上升鏡筒，取下載片。 2、用擦鏡紙擦去鏡頭上的殘留物3、用擦鏡紙清潔其他物鏡和目鏡，用綢布清潔

4、顯微鏡的金屬部件。4、將各部分還原，反光鏡垂直于鏡座，將物鏡轉(zhuǎn)成“八字形”再向下旋，同時把聚光鏡降下，以免物鏡與聚光鏡發(fā)生碰撞危險。五、實驗結(jié)果 低倍鏡下觀察到的植物細(xì)胞組織 實驗二   細(xì)菌培養(yǎng)基的配制一、實驗?zāi)康?了解并掌握培養(yǎng)基的配制、分裝方法；2掌握各種實驗室滅菌方法及技術(shù)。二、實驗原理 培養(yǎng)基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。由于微生物具有不同的營養(yǎng)類型，對營養(yǎng)物質(zhì)的要求也各不相同，加之實驗和研究的目的不同，所以培養(yǎng)基 的種類很多，使用的原料也各有差異，但從營養(yǎng)角度分析，培養(yǎng)基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長素以及水分等。另外，培養(yǎng)基

5、還應(yīng)具有適宜 的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。瓊脂是從石花菜等海藻中提取的膠體物質(zhì)，是應(yīng)用最廣的凝固劑。加瓊脂制成的培養(yǎng)基在98100下融化，于45以下凝固。但多次反復(fù)融化，其凝固性降低。任何一種培養(yǎng)基一經(jīng)制成就應(yīng)及時徹底滅菌，以備純培養(yǎng)用。一般培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌。三、實驗材料 1、實驗儀器電子稱、稱量紙、量筒、錐形瓶8個、培養(yǎng)皿及培養(yǎng)皿盒44個、試管30根、玻璃棒、燒杯、剪刀、酒精燈、棉花、線繩、報紙、接種環(huán)。B-260型恒溫水浴鍋（上海亞榮生化器械廠）YM型立式壓力蒸汽滅菌鍋（上海三申醫(yī)療器械有限公司）UB102i型生物顯微鏡（重慶奧浦光電技術(shù)有限公司

6、）BSP-100生化培養(yǎng)箱（細(xì)菌用）（上海博訊實業(yè)有限公司）2、藥品試劑平板計數(shù)瓊脂 (廣東環(huán)凱生物科技有限公司）營養(yǎng)瓊脂 (廣東環(huán)凱生物科技有限公司）無水乙醇（華東醫(yī)藥有限公司）營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（杭州微生物試劑有限公司）四、實驗步驟 1 培養(yǎng)基的制備1.1 稱量稱取已經(jīng)配好的營養(yǎng)肉湯粉、蛋白胨、NaCl放入燒杯中。1.2 溶化在上述燒杯中可先加入少于所需要的水量（沸水），用玻棒攪勻，然后，待藥品完全溶解后，補(bǔ)充水分到所需的總體積。因為是配制固體培養(yǎng)基，所以先將稱好的瓊脂放入已溶化的藥品中，再加熱溶化，在瓊脂溶化的過程中，不斷攪拌，以防瓊脂糊底使燒杯破裂。最后補(bǔ)足所失的水分。1.3 過濾分裝用濾

7、紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養(yǎng)基過濾。用紗布過濾時，最好折疊成六層，用濾紙過濾時，可將濾紙折疊成瓦棱形，鋪在漏斗上過濾。過濾完后的培養(yǎng)基進(jìn)行分裝。因為要制作平板培養(yǎng)基，則須將培養(yǎng)基分裝于錐形瓶內(nèi)。  分裝時，一手捏松彈簧夾，使培養(yǎng)基流出，另一只手握住幾支試管或錐形瓶，依次接取培養(yǎng)基。分裝時，注意不要使培養(yǎng)基粘附管口或瓶口，以免浸濕棉塞引起雜菌污染。   裝入試管的培養(yǎng)基量，視試管和錐形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培養(yǎng)基時，每只15×150毫米的試管，約裝34毫升（1/41/3試管高度），如制作深層培養(yǎng)基，每只20×22

8、0毫米的試管約裝1215毫升。每只錐形瓶裝入的培養(yǎng)基，一般以其容積的一半為宜。1.4 包扎分裝完畢后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是過濾空氣，避免污染。棉塞應(yīng)采用普通新鮮、干燥的棉花制作，不要用脫脂棉，以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用。制作棉塞時，要根據(jù)棉塞大小將棉花鋪展成適當(dāng)厚度，揪取手掌心大小一塊，鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中，用右手食指插入棉花中部，同時左手食指與姆指稍稍緊握，就會形成1個長棒形的棉塞。棉塞作成后，應(yīng)迅速塞入管口或瓶口中，棉塞應(yīng)緊貼內(nèi)壁不留縫隙，以防空氣中微生物沿皺折侵入。棉塞不要過緊過松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落為合適。棉塞的2/3應(yīng)在管內(nèi)或瓶內(nèi)，

9、上端露出少許棉花便于拔取。塞好棉塞的試管和錐形瓶應(yīng)蓋上厚紙用繩捆札，準(zhǔn)備滅菌。試管十個一捆。1.5 濕熱滅菌（采用高壓蒸汽滅菌法）將上述培養(yǎng)基以1210C,20min,0.103MPa高壓蒸汽滅菌。高壓蒸汽滅菌用途廣，效率高，是微生物學(xué) 實驗中最常用的滅菌方法。這種滅菌方法是基于水的沸點隨著蒸汽壓力的升高而升高的原理設(shè)計的。當(dāng)蒸汽壓力達(dá)到1.05kg/cm2時，水蒸氣的溫度升高到 121，經(jīng)1530min，可全部殺死鍋內(nèi)物品上的各種微生物和它們的孢子或芽孢。一般培養(yǎng)基、玻璃器皿以及傳染性標(biāo)本和工作服等都可應(yīng)用此法滅菌。1.6 制作平板培養(yǎng)基將剛剛滅過菌的盛有培養(yǎng)基的錐形瓶和培養(yǎng)皿放在實驗臺上，

10、點燃酒精燈，右手托起錐形瓶瓶底，左手拔下棉塞，將瓶口在酒精燈上稍加灼燒，左手打開培養(yǎng)皿蓋，右手迅速將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，每皿約倒入10毫升，以鋪滿皿底為度。鋪放培養(yǎng)基后放置15分鐘左右，待培養(yǎng)基凝固后，再5個培養(yǎng)皿一疊，倒置過來，平放在恒溫箱里，理論上24小時后檢查，如培養(yǎng)基末長雜菌，即可用來培養(yǎng)微生物。  實驗三   細(xì)菌的簡單染色和革蘭氏染色 一、目的與要求 （1）掌握染色的原理和操作過程 （2）掌握簡單染色和革蘭氏染色法（3）熟練顯微鏡的使用技術(shù) 二、原理 由于菌體極小，折光率低，在顯微鏡下不容易看

11、清，如將其染色，使菌體和背景之間反差增大，折光率增強(qiáng)，就容易看清，簡單染色法只用一種染料著色。革蘭氏染色法是細(xì)菌染色中一種重要的鑒別染色法。通過此法染色，可將細(xì)菌鑒別為革蘭氏陽性菌和陰性菌兩大類。其過程是：草酸銨結(jié)晶紫初染路哥爾氏碘液媒染95%乙醇脫色蕃紅花紅復(fù)染。若細(xì)胞能保持結(jié)晶紫與碘所形成的復(fù)合物而不被乙醇脫色，則細(xì)菌呈紫色，稱革蘭氏陽性菌；若被乙醇脫色而被蕃紅復(fù)染成紅色，則稱革蘭氏陰性菌。三、實驗儀器與藥品 （1）實驗儀器載玻片、蓋玻片、酒精燈、廢液缸、洗瓶、接種環(huán)、顯微鏡、鑷子 （2） 實驗藥品革蘭氏染色液（草酸銨結(jié)晶紫液路哥爾氏碘液95%乙醇蕃紅花紅）、蒸餾水、菌

12、落培養(yǎng)物（培養(yǎng)1824小時）、二甲苯、香柏油 四、操作程序 （1）簡單染色法 1 涂片  取潔凈載玻片，在中央滴一滴生理鹽水（或無菌水），用接種環(huán)以無菌操作挑取欲觀察菌體，和水充分混勻，涂成極薄的菌膜。2 干燥   室溫自然干燥或略微加熱干燥。 3 固定   涂面朝上，快速通過火焰23次（勿使涂片燙手）。4 染色  滴染料，5 水洗 用自來水沖洗，直到涂片上流下的水無色為止。6 干燥   自然干燥或吸水紙吸干（2）革蘭氏染色法 

13、;涂片干燥固定草酸銨結(jié)晶紫初染水洗碘液媒染95%酒精脫色2030秒水洗蕃紅花紅液復(fù)染水洗干燥鏡檢 1) 涂片：先滴一小滴蒸餾水于載玻片中央，然后用接種環(huán)取少量菌體輕輕混入水中，涂成一薄層并使細(xì)胞均勻分散。 2) 干燥：在空氣中令其自然干燥或在酒精燈火焰上端高處微微加溫但勿靠近火焰。 3) 固定：把涂有細(xì)菌的面朝上，在酒精燈火焰上通過三次，目的是殺死菌體細(xì)胞以及改變對染色劑的通透性，同時使涂片的菌體緊貼載玻片而不易被水沖洗脫落。 4) 初染：用草酸銨結(jié)晶紫液初染1min，水洗、吸干。 5) 媒染：加一滴路哥爾氏碘液媒染1min、水洗。（此時結(jié)晶紫與碘液成復(fù)合物） 6) 脫色：斜置載玻片，用95%酒精沖洗約2030s，立即水洗，吸干。7) 復(fù)染：用蕃紅花紅液復(fù)染12min，水洗晾干或用吸水紙吸干。 8) 鏡檢：在顯微鏡油浸鏡下檢查革蘭氏陽性菌和陰性菌染色的差異，并觀察菌體形態(tài)。 （三）革蘭氏染色成敗的控制點 1 涂片厚度：涂片過厚，細(xì)胞重疊，無法較好地觀察單個細(xì)菌細(xì)胞