羊肚菌院創(chuàng)新基金項目申報書上傳

1、院創(chuàng)新基金項目申報書項 目 名 稱 羊肚菌野生資源采集、分離純化和出菇試驗 項 目 類 別 院創(chuàng)新基金 起 止 年 限 2016-2018 部 門 負 責(zé) 人 （簽字）項目負責(zé)人 （簽字）填 報 日期： 2016 年 5 月 8 日 一、 項 目 的 立 題 依 據(jù)（1000字以內(nèi)）說明項目研究、應(yīng)用的目的、意義以及國內(nèi)外研究應(yīng)用概況，產(chǎn)業(yè)化需求分析和發(fā)展趨勢：項目研究、應(yīng)用的目的、意義： 羊肚菌 ，俗稱羊肚子、羊肚菜、陽雀菌、包谷菌，屬于子囊菌亞門、盤菌綱、 盤 菌 目 、羊 肚 菌 科、羊肚菌屬 ，因其菌蓋有不規(guī)則的凹陷且多有褶皺，外形似羊肚而得名。羊肚菌肉質(zhì)鮮美脆嫩，營養(yǎng)和藥用價值極高。

2、在保健、制藥方面具有廣闊的應(yīng)用前景。作為一種子囊菌，羊肚菌尚未真正實現(xiàn)大面積的人工栽培，其中還有許多科學(xué)問題有待解決，如完善準確的遺傳多樣性，詳細明晰的生活史周期，野生采集到仿生栽培到人工栽培的產(chǎn)量穩(wěn)定問題等，這些都有待進一步探究。本研究對羊肚菌野生資源采集、分離、發(fā)菌和出菇試驗進行系統(tǒng)實驗，奠定生物中心食用菌研究基礎(chǔ)，適應(yīng)目前市場對食用菌發(fā)展的需要，為我院食用菌服務(wù)于產(chǎn)業(yè)化打下基礎(chǔ)。國內(nèi)外研究應(yīng)用概況： 人類認識羊肚菌已有上百年的歷史，對于羊肚菌的人工栽培也做了大量研究工作，其中不乏成功的實驗，但是重復(fù)性普遍不高，產(chǎn)量不穩(wěn)定。時至今日，仍然沒有大規(guī)模人工栽培出現(xiàn)。羊肚菌廣泛的自然分布、多樣的

3、種類，使得其生長環(huán)境有較大的差異，加之生物學(xué)特性易受不定因素的影響，這都使羊肚菌的人工栽培困難重重。另一個影響栽培的重要原因是人們對于羊肚菌生活史周期尚未完全明了，這使栽培過程許多人工處理缺乏科學(xué)依據(jù)。人們對于羊肚菌生長狀況已經(jīng)進行了大量的觀察研究，為羊肚菌栽培提供了一定數(shù)據(jù)支持?？偨Y(jié)得出羊肚菌對生長地域并沒有嚴格的要求，除冷熱差異較大的地區(qū)外一般都能正常生長。羊肚菌仿生栽培已經(jīng)取得一定的成果。通過設(shè)置仿生條件，以消除一些不易考慮到因素的影響，從而為羊肚菌栽培提供便利。一些學(xué)者進行了林下羊肚菌栽培技術(shù)探索，實驗采用改良的土豆培養(yǎng)基制作母種，選擇以楊樹或樺樹為主的針闊葉林作為播種場地，種植羊肚菌

4、獲得成功。仿生栽培的優(yōu)點顯而易見，同時，也有不少因素制約著這項技術(shù)的推廣，通過仿生消除了很多未知的影響因素，但一旦操作出現(xiàn)問題，往往不能及時發(fā)現(xiàn)，將給生產(chǎn)帶來毀滅性影響，而人們對于仿生栽培研究的最終目的，是要實現(xiàn)羊肚菌的完全人工栽培。美國學(xué)者 Ower于 1986 年成功進行了羊肚菌的人工栽培，2004 年，Miller等申請了羊肚菌人工種植的專利 ，其栽培方法的顯著特點就是在羊肚菌菌絲生長階段必須與植物相互作用，才能形成羊肚菌子實體。我國自上世紀 80 年代至今不時有羊肚菌栽培成功的報道。產(chǎn)業(yè)化需求分析和發(fā)展趨勢：羊肚菌是一種食用菌種，其營養(yǎng)價值非常高，深受群眾的喜愛，但因為受各種因素的制約

5、，穩(wěn)產(chǎn)情況不容樂觀等，一直制約著羊肚菌行業(yè)發(fā)展，沒有發(fā)揮其應(yīng)有的市場價值。羊肚菌能作為林區(qū)的一個特色產(chǎn)業(yè)加以開發(fā)。第一， 有國家林業(yè)政策的支持，出臺了一系列非常優(yōu)惠的政策， 大力支持積極發(fā)展后續(xù)產(chǎn)業(yè)， 這為我們大力發(fā)展食用菌種植提供了一個千載難逢的機會。第二、有得天獨厚的自然條件。四川林區(qū)資源遼闊， 自然條件得天獨厚， 非常適宜羊肚菌的生長。第三， 有廣闊的市場。羊肚菌在四川、貴州、云南均有生長， 而人工培育開發(fā)的還很少，如今羊肚子蘑菇的市場價格是干品每公斤 1000 元。如果我們對羊肚菌進行開發(fā)利用， 用科技手段和人工培育使其走下山來， 走進普通人家的餐桌上， 快速搶占市場， 讓工薪階層都能

6、吃到味美、口感好、營養(yǎng)高的菌類， 這樣，既發(fā)展了林業(yè)企業(yè)的多種經(jīng)營， 又為后續(xù)產(chǎn)業(yè)增加了新項目， 提高了經(jīng)濟效益。國家、集體、個人均受益， 經(jīng)濟效益非常可觀， 后續(xù)產(chǎn)業(yè)前景非常樂觀。第五， 有一定的社會效益，減少對森林植被的破壞。羊肚菌的完全人工栽培尚未完全成熟，其中很多影響因素都不確定，還有很多問題需要解決，隨著研究的深入，相信完全的人工栽培會取得進展，巨大的生態(tài)效益和經(jīng)濟效益也會隨之而來。二、項目的技術(shù)路線、技術(shù)關(guān)鍵及解決措施（800字以內(nèi)）項目的技術(shù)路線：在北川、平武等山區(qū)采集野生羊肚菌子實體，室內(nèi)無菌操作切取部分組織接種于馬鈴薯培養(yǎng)基中得到羊肚菌菌絲，經(jīng)過提純得到母種，經(jīng)過原種擴繁后接

7、入栽培種培養(yǎng)基，待羊肚菌菌絲長滿栽培袋后，接入大棚土壤中做出菇試驗。栽培種出菇試驗原種菌絲提純分離羊肚菌菌絲采集野生羊肚菌栽培方法比較菌絲培養(yǎng)基優(yōu)化原料配方優(yōu)化栽培料配方優(yōu)化技術(shù)關(guān)鍵及解決措施：接種與培養(yǎng)： 將滅過菌的平板培養(yǎng)基和酒精燈 、尖嘴鑷子、打火機一起放入接種箱內(nèi)，用消毒盒對接種箱內(nèi)空氣進行消毒。 40 min 后，先點燃酒精燈，把尖嘴鑷子的尖端部放在酒精燈火焰上燒紅，置放一邊，冷卻待用。將采集的野生食用菌標本用75%的酒精棉球輕擦子實體表面后，用無菌解剖刀縱切菌柄，接著把平板培養(yǎng)基倒置，并倒置著揭開平板培養(yǎng)基，用尖嘴鑷子夾一塊羊肚菌子實體組織置于培養(yǎng)皿蓋的中央，然后倒置著蓋上平板培養(yǎng)

8、基， 在接種箱內(nèi)如此重復(fù)多次， 完成多個平板培養(yǎng)基的接種工作。 把接種后的培養(yǎng)皿倒置放入 10的冰箱內(nèi)培養(yǎng)。連續(xù)觀察記錄。防止感染，獲得無雜菌的羊肚菌菌絲。母種培養(yǎng)： 將羊肚菌試管種轉(zhuǎn)接于F1平板中，25培養(yǎng)4 d制成平板菌種，取直徑為3 mm的菌塊分別接到直徑為9 cm的M1、M2和M3平板中央，25培養(yǎng)，每隔12 h觀察1次，觀測菌絲生長速度，長勢，菌核形成時間及大小。每處理5個重復(fù)。三、現(xiàn)有工作基礎(chǔ)和條件（600字以內(nèi)） 說明現(xiàn)有的研究開發(fā)工作基礎(chǔ)、設(shè)施及裝備狀況、技術(shù)力量：生物中心組織培養(yǎng)室有20余年的組培歷史，有成熟的組織培養(yǎng)技術(shù)。現(xiàn)有超凈工作臺10個，可滿足14人同時操作，光培養(yǎng)室

9、300多平方米，擺放光培養(yǎng)架100個，分析天平、滅菌鍋、人工氣候箱、光照培養(yǎng)箱、純水儀等設(shè)備配備齊全。生物中心現(xiàn)有組織培養(yǎng)技術(shù)人員3人，均有著豐富的組織培養(yǎng)、生物技術(shù)方面經(jīng)驗，完全能保證項目的順利完成。四、試驗內(nèi)容、規(guī)模及分年度進展（800字以內(nèi)） 試驗內(nèi)容及規(guī)模：收集野生羊肚菌資源2個，室內(nèi)野生菌絲分離，提純，研制不同的分離，提純培養(yǎng)基，接種于母種培養(yǎng)基，母種培養(yǎng)基用麥粒培養(yǎng)基，分別制出原種和栽培種，制出不同的栽培種培養(yǎng)基，比較效果，并作大棚出菇試驗。菌種的分離： 采用組織分離法中的子實體分離法對菌株進行組織分離培養(yǎng):將采集的野生食用菌標本用75%的酒精棉球輕擦子實體表面后，用無菌解剖刀縱切

10、菌柄，用接種針將菌肉小塊接入試管斜面PDA培養(yǎng)基上，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)基：分離培養(yǎng)基： 每升用楊樹枝、楊樹根浸出液200 mL，枝條70 g，滇楊根30 g，水500 mL ，煮沸5 min ，冷卻過濾)，葡萄糖10 g，蔗糖5 g，麥芽糖1 g，牛肉膏1 g，酵母膏1 g，KH2PO40.1 g，(NH4)3PO40.5 g，MgSO40.05 g，煙酸2Lg，瓊脂20g。母種培養(yǎng)基：M1(/L):麥粒200g，葡萄糖10g，維生素B1 0.1g，瓊脂15g。M2(/L):馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g。M3(/L):葡萄糖10g，蔗糖5g，麥芽糖1g，牛肉膏4g，酵母膏4g，

11、KH2PO41g，(NH4)3PO40.5g，MgSO40.5g，維生素B1 0.1g，煙酸2Lg，瓊脂15g。原種培養(yǎng)基：Y1:麥粒100% ，含水量55%。Y2:棉子殼70%，木屑25%，麥麩4%，Ca(OH)21%，含水量60%。Y3:木屑70%，秸稈粉25%，麥麩4% ，Ca(OH)21%，含水量60%。Y4:草糠70%，秸稈粉25%，麥麩4%，Ca(OH)21%，含水量60%。栽培料處理：按比例取稻草粉、干大糞、米糠、千雞糞、麥秸粉、高粱粉、米糠、木屑粉、紅薯葉粉、花生餅粉全部組合到一起，倒入粉碎機中粉碎成140目左右的顆粒，取出后按比例加入過磷酸鈣、多菌靈、維生素、白糖，然后全部倒

12、入攪拌機中攪拌100分鐘取出，按比例加入1:1.5的水拌勻，全部放入發(fā)酵池中堆成堆，用塑料布蓋緊，壓實，發(fā)酵72小時即成合格配養(yǎng)料。出菇實驗：菌袋定期劃線觀測菌絲長速，長勢、顏色、自溶情況、氣生菌絲狀況、菌絲滿袋和菌核形成時間和菌核大小、數(shù)量。腐殖土在0. 10 MPa下滅菌10 min和30 min，冷卻后分別覆蓋于已長滿菌絲的菌袋表面(5 cm厚)，以不覆土的菌袋為對照，做不同的溫度、濕度、光照處理，觀察菌絲生長情況、菌核形成及變化，最終統(tǒng)計出菇情況。分年度進展：第1階段 從2016-03-01到2016-12-31預(yù)期目標：在北川、平武海拔1500米以上的半陰半陽的潮濕地方尋找到2種以上

13、不同類型的健壯羊肚菌。作為供室內(nèi)菌絲分離提純材料。第2階段 從2017-01-01到2017-05-31 預(yù)期目標：研制出適宜的羊肚菌菌絲培養(yǎng)基配方，得到活力強、生長健壯的羊肚菌菌絲。第3階段 從2017-06-01到2017-12月 預(yù)期目標：研制出適宜的母種培養(yǎng)基配方，找到適宜的栽培種培養(yǎng)基配方。第4階段 2018-01-01到2018-12-30預(yù)期目標：出菇試驗，完成相關(guān)論文，完成項目驗收報告及總結(jié)。五、經(jīng)濟、技術(shù)指標（400字以內(nèi)）要達到的主要技術(shù)經(jīng)濟指標：1、找到比較理想氮羊肚菌菌絲培養(yǎng)基。2、獲得純種羊肚菌菌絲。觀察到的現(xiàn)象為：初期為淺灰色、淡黃色或白色，后隨菌齡的增加而逐漸加深

14、，經(jīng)乳黃色、深黃色變化，最后為黃褐色或褐色。幼嫩菌絲有光澤，細直，壁薄質(zhì)少，分枝少，具橫隔，尖端分泌有針尖大的無色露珠。3、篩選出一種低成本的原種培養(yǎng)料配方。4、配制的羊肚菌配養(yǎng)料污染率低、發(fā)菌快、發(fā)育出的菌棒質(zhì)量好，菌絲生長濃密，生長力強，接收光度高，防病性能好。5、選出一種培養(yǎng)料費用低廉，材料易取，配方及制備方法簡單的栽培料配方。6、出菇實驗?zāi)茼樌L出羊肚菌子實體，生產(chǎn)出的羊肚菌個頭大，重量足，生長速度快。7、發(fā)表相關(guān)論文1-2篇。 六、經(jīng)費預(yù)算 金額單位：萬元序號科目名稱預(yù)算金額預(yù)算依據(jù)說明1設(shè)備費1購一臺秸稈粉碎機、一臺攪拌機2材料費1購買試驗試劑及栽培料添加物3測試化驗加工費4燃料動力費5差旅費0.5尋找野生資源、同行業(yè)交流