裸鼠荷瘤方法及注意事項(xiàng)

1、關(guān)于腫瘤細(xì)胞株的選擇，確實(shí)是一個(gè)很麻煩的問(wèn)題，各類文獻(xiàn)中提到過(guò)的細(xì)胞株有很多，但是一般而言，我覺(jué)得，對(duì)于 我們做裸鼠腫瘤模型，細(xì)胞株的選擇應(yīng)該考慮一下幾個(gè)方面：1 .國(guó)際公認(rèn)度，雖然SFDA的指導(dǎo)原則上表示只要是建株細(xì)胞株均可以，但是一般來(lái)說(shuō)，還是應(yīng)該盡量考慮國(guó)際上比 較公認(rèn)的細(xì)胞株。2 .體內(nèi)生長(zhǎng)情況，很多細(xì)胞株，在文獻(xiàn)中有很高的出鏡率，但是實(shí)際上，基本都是從體外開(kāi)始有名，所以很多人就硬生 生的往體內(nèi)套，結(jié)果就是吃力不討好，比如樓主提到的A549,還有MCF-7 ,都是很有名氣的細(xì)胞株，但是在體內(nèi)卻不是一個(gè)好的試驗(yàn)對(duì)象，成瘤率低，生長(zhǎng)慢，均一度差?，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)的很多研發(fā)單位，特別是一些公司的領(lǐng)導(dǎo)

2、們，缺乏這方 面的認(rèn)識(shí)，動(dòng)不動(dòng)就把這些著名的細(xì)胞株掛在嘴邊，硬壓著一線的研究人員去花功夫做這些細(xì)胞株，作的不好，就懷疑 大家的水平如何如何的，奶奶的，對(duì)此非常生氣！3 .藥物的敏感性，這一點(diǎn)常常被大家忽視，大部分的裸鼠腫瘤模型都是為抗腫瘤藥物的篩選以及研究服務(wù)的，但是常常大家只考慮了這個(gè)細(xì)胞株是不是好做，但是沒(méi)有考慮到細(xì)胞株本身對(duì)于藥物的敏感性，比如Lovo細(xì)胞，國(guó)際公認(rèn)度也還可以，體內(nèi)生長(zhǎng)情況也很棒，但是對(duì)于藥物的敏感性不佳，大部分的常規(guī)化療藥物到了它這里，抑瘤率都會(huì)下降，顯 而易見(jiàn)，對(duì)于抗腫瘤藥物的篩選來(lái)說(shuō)，它不是一個(gè)好的選擇。另外說(shuō)一點(diǎn)，體內(nèi)與體外的關(guān)系，現(xiàn)在做體內(nèi)的人，常常被體外的人牽

3、著鼻子走，體外做出來(lái)什么什么細(xì)胞株敏感，體 內(nèi)的人就得吭哧吭哧的去做這個(gè)，但是卻死活做不好，其實(shí)，現(xiàn)在我和一些老前輩們的觀點(diǎn)是，體內(nèi)和體外應(yīng)該協(xié)調(diào)好 細(xì)胞株的選擇問(wèn)題，體外的人手上有大把的細(xì)胞株可以選擇，如果，體內(nèi)的人不去和他們協(xié)調(diào)，那么將永遠(yuǎn)被牽著鼻子 走，受累還不討好，應(yīng)該大家坐下來(lái)，一起選擇 2030種細(xì)胞株作為常規(guī)的篩選細(xì)胞株，這就足夠了，細(xì)胞株選擇的時(shí) 候考慮好方向（胃癌、肝癌、肺癌什么的）、靶點(diǎn)（EGF、vEGF等等），不能漫無(wú)邊際的抓著哪個(gè)體內(nèi)就的做哪個(gè)，誰(shuí) 也沒(méi)有這個(gè)本事啊。以下給出一些細(xì)胞株供大家參考：頭頸部腫瘤沒(méi)有特別好的細(xì)胞株，Hep2 （喉癌）、CNE （鼻咽癌）湊活，

4、比較慢，但是可以接受。肺癌不要和我提什么A549,不好伺候，NCI-H460 （大細(xì)胞肺癌）還不錯(cuò)，生長(zhǎng)速度快，成瘤率好，但是技術(shù)不好的話，均 一度會(huì)差一些，水平過(guò)關(guān)的話，開(kāi)始試驗(yàn)的時(shí)候 SD應(yīng)該為平均值的1/3,對(duì)藥物很敏感，特別是紫杉醇，非常敏感。 SPC-A-1 （肺腺癌），馬馬虎虎過(guò)得去，速度不是很快，但是也還能接受。胃癌MNK-45,日本細(xì)胞株，公認(rèn)度也可以，比較好。BGC-823 ,很好的公認(rèn)度，生長(zhǎng)有些慢。食道癌Eca-109 ,我們找不到其他的東西，只能用它，一般般，有點(diǎn)不好伺候。前列腺癌PC-3、DU-145,都是不錯(cuò)的細(xì)胞株，用它們沒(méi)錯(cuò)的。結(jié)腸癌HT-29吧，生長(zhǎng)還可以，L

5、ovo對(duì)藥物的敏感性差了點(diǎn)。肝癌這個(gè)是比較頭痛的一個(gè)領(lǐng)域，Bel-7402 , SMMC7721只能說(shuō)湊活，還有國(guó)內(nèi)自己建株的 QGY生長(zhǎng)特性不錯(cuò)，但是公認(rèn) 度差了點(diǎn)。白血病我自己都沒(méi)有做出來(lái)過(guò)，嘿嘿，K562和HL60都不好整。表皮癌A431 ,這家伙，棒極了，在我手上，每次試驗(yàn)只需要淘汰一兩只，剩下的 SD小于平均值的1/4,我很喜歡它，主要是 EGFR高表達(dá)，做這方面的藥物，少不了它！乳腺癌不要用 MCF-7,MDA-MB-435、MDA-MB-468、Bcap-37 都不錯(cuò)，其中 Bcap-37 也是 EGFR 高表達(dá)。卵巢癌SK-ov-3不錯(cuò)的。宮頸癌比較麻煩，Hela細(xì)胞株自身的生

6、長(zhǎng)特性就不佳，另外安全性方面也很不好，女生勿近，我們以前做過(guò)一個(gè)C33A,還可以，對(duì)藥物很敏感，生長(zhǎng)比較慢，成瘤率也偏差，用的人也不多，但是沒(méi)有辦法阿。想起來(lái)的就這些，剩下的大家補(bǔ)充吧。1 .裸鼠的狀態(tài)裸鼠的年齡，比如5-7 w比9 w容易成瘤，因?yàn)檫@時(shí)免疫系統(tǒng)不夠強(qiáng)；或者如果裸鼠由于試驗(yàn)系統(tǒng)染菌而長(zhǎng)毛或感染， 則成瘤率可能會(huì)受影響2 .細(xì)胞接種量動(dòng)物腫瘤一般接種2600萬(wàn)/只就100%成瘤，而人癌則需要1000萬(wàn)以上才能較高的成瘤3 .細(xì)胞狀態(tài)腫瘤細(xì)胞的活力，生長(zhǎng)狀態(tài)，是否對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，有無(wú)污染也對(duì)成瘤影響很大三、接種量要查文獻(xiàn)來(lái)確定接種量，在找不到任何相關(guān)資料的情況下，最高就用到1*107/

7、0.2ml/site,再高也沒(méi)有意義了。如果你的細(xì)胞很小，1*107/0.1ml也可以操作，不至于很粘稠，那么最好是 1*107/0.1ml/site 。查文獻(xiàn)看他們的構(gòu)建條件是什么樣 的，比如培養(yǎng)條件，接種量，接種位置什么的，是不是一定要用雌性鼠等等。有的瘤株也有可能很容易成瘤，而且生長(zhǎng)速度很快。建議用幾只動(dòng)物試試不同的接種濃度，萬(wàn)一能夠長(zhǎng)出來(lái)，而且還 長(zhǎng)得很快，那你就要根據(jù)情況選擇一個(gè)合適的濃度了?；旧弦话阏J(rèn)為比較合適的接種濃度有這么幾個(gè)特征：1.接種后10到15天左右可以開(kāi)始試驗(yàn)。2.開(kāi)始試驗(yàn)時(shí)可以用于試驗(yàn)的動(dòng)物數(shù)不少于 6070% ,而且SD不大于平均值的1/3左 右。3.開(kāi)始試驗(yàn)三

8、、四周后腫瘤重量大于1g,并且沒(méi)有潰爛。當(dāng)然，這些條件都是錦上添花的東西，如果以 1*107/site 都勉勉強(qiáng)強(qiáng)長(zhǎng)出腫瘤，那么就不必過(guò)多的去考慮它了。接種部位接種部位:腋窩中部外側(cè)皮下為好。皮下腫瘤模型中，想要成瘤率高就接種在腋下。接種時(shí)由裸鼠體側(cè)腰部稍靠上的部位 進(jìn)針，要保證與接種點(diǎn)的距離小于針頭的長(zhǎng)度，向頭部方穿行，絕對(duì)不能刺破皮膚或者刺破肌肉層，當(dāng)針頭到達(dá)接種位 點(diǎn)時(shí)注射，退出針頭，這樣操作的目的并不完全是避免漏液，其實(shí)熟練后，不需要皮下穿行也不會(huì)漏液，主要是避免污染，進(jìn)針點(diǎn)還有少量污染的可能性的， 針頭在皮下穿行一段后，接種點(diǎn)離進(jìn)針點(diǎn)較遠(yuǎn)，最大限度減少污染的可能 。如果是用于正式實(shí)驗(yàn)

9、，那么一只老鼠就只能接種一個(gè)位點(diǎn)，不可以接種多個(gè)位點(diǎn)用于保證可用的模型數(shù)。因?yàn)樵谟行┣闆r下，一個(gè)老鼠身上有多于一個(gè)腫瘤的情況下，會(huì)有相互影響的可能，無(wú)論這幾個(gè)腫瘤相距有多遠(yuǎn)。 要是想多打幾個(gè)部位做做預(yù)試驗(yàn)，倒也不是不可以，但是我覺(jué)得，基本上沒(méi)有什么必要。皮膚不用繃得太緊，平展就可以了，另外接種的時(shí)候進(jìn)針點(diǎn)很靠下，針頭在皮下走一段再注射，速度不要太快。注射前針頭稍微動(dòng)一動(dòng)，能動(dòng)就說(shuō)明在皮下，否則可能在皮內(nèi)或者肌肉 內(nèi)。一般來(lái)說(shuō)都是有鼓包的但是要是你接種位置太深入腋窩，你是看不到鼓包的。主要靠針頭稍微動(dòng)一動(dòng)來(lái)判斷。是否應(yīng)用免疫抑制劑裸鼠皮下種瘤后，可以通過(guò)應(yīng)用免疫抑制劑，比如環(huán)磷酰胺（2mg每只，

10、打兩天）來(lái)加速瘤體的生長(zhǎng)，當(dāng)然我知道裸鼠是 T免疫缺陷動(dòng)物，但是人家說(shuō)的CTX可以進(jìn)一步抑制裸鼠的體 液免疫和NK細(xì)胞殺傷的保護(hù)作用，可以加快瘤子的生長(zhǎng)，這樣造模的周期很短，也可以進(jìn) 行人為的控制，不知道這個(gè)觀點(diǎn)是不是有道理，實(shí)踐中是不是真有人這么做呢？ 樓上說(shuō)的文獻(xiàn)中也有報(bào)道，而且還有預(yù)先用放射照射抑制動(dòng)物免疫功能再接種的方法，但是一般常規(guī)應(yīng)用中大多數(shù)時(shí)候不推薦這么做。另外還有一個(gè)問(wèn)題應(yīng)該被考慮到，大家現(xiàn)在都在琢磨著怎么讓腫瘤出瘤的更快，造模周期更短，但是如果人為的把腫瘤生長(zhǎng)加速，其實(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)并不好。因?yàn)樵炷Ｖ芷诙?，很可能生長(zhǎng)速度也會(huì)被加快，腫瘤可能很快就潰爛了，這樣就 不得不被迫中止實(shí)驗(yàn)，

11、而用藥卻沒(méi)有用到足夠的時(shí)間，藥效還沒(méi)有發(fā)揮出來(lái)就結(jié)束了，這樣是很不利的。所以一般情況下，應(yīng)該盡量的復(fù)合這個(gè)瘤株本身的生長(zhǎng)特性，不應(yīng)該過(guò)多地去加以人為的干擾。是否用手術(shù)標(biāo)本荷瘤如果是藥效試驗(yàn)，不建議用手術(shù)標(biāo)本，因?yàn)镾FDA的臨床前研究指導(dǎo)原則上明確指出要用建株的腫瘤株進(jìn)行試驗(yàn)，因?yàn)橛檬中g(shù)標(biāo)本的試驗(yàn)可重復(fù)性太差，你這個(gè)標(biāo)本萬(wàn)一沒(méi)有保存好， 斷掉了，你自己都很難重復(fù)出上次的試驗(yàn)結(jié)果。國(guó)外的文獻(xiàn)上看到的卻很少有人用手術(shù)標(biāo)本構(gòu)建模型進(jìn)行試驗(yàn)。取材的部位：腫瘤生長(zhǎng)活躍，狀態(tài)良好，結(jié)締組織比較少的地方。運(yùn)送 途徑：無(wú)菌、冰浴保溫，無(wú)菌培養(yǎng)液浸泡，時(shí)間不能超過(guò)1個(gè)小時(shí)。最好一個(gè)小時(shí)內(nèi)就能夠接種到動(dòng)物體內(nèi)。接種

12、部位：腋下。另外，手術(shù)標(biāo)本還有一個(gè)風(fēng)險(xiǎn)：你不能保證取得的標(biāo)本 一定能夠順利地成瘤并且用于試驗(yàn)。注意事項(xiàng)A裸鼠的周齡，B腫瘤細(xì)胞：何種腫瘤，接種細(xì)胞的數(shù)量（用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的，活力高的）記數(shù)要準(zhǔn) 確,C接種方式：注意不要漏液，否則會(huì)損失細(xì)胞數(shù)量 D飼養(yǎng)環(huán)境：要求是SPF條件 具體操作 1.能不能成瘤，首先要考慮你的腫瘤細(xì)胞系能否成瘤，其次關(guān)鍵是你的腫瘤細(xì)胞數(shù)，一般腫 瘤細(xì)胞存活力還是蠻高的，所以你重點(diǎn)要考慮細(xì)胞數(shù)的問(wèn)題，但最高不要超過(guò)1*107。2 .接種時(shí)間，最好在1小時(shí)之內(nèi)完成。但在我實(shí)際操作過(guò)程中，裸鼠的數(shù)量又多，1小時(shí)之內(nèi)根本做不完的，所以你可以預(yù)先將細(xì)胞放在冰盒里暫為保存。效果還是不錯(cuò)的。

13、3 .成瘤時(shí)間，每個(gè)腫瘤細(xì)胞不太一樣，細(xì)胞數(shù)合適，一般一周左右應(yīng)該能出來(lái)了；另外，如 果你是打皮下，你要考慮是否有打到深層組織，比如肌肉，那即使成瘤了，也不大好摸出來(lái)。腹腔注射1、腹腔注射進(jìn)針的位置在腹中線與小鼠兩后肢上沿連交叉以下的位置。2、腹腔注射很少會(huì)打到腸管，因?yàn)槟c子在碰到硬物時(shí)會(huì)縮起來(lái)，當(dāng)然前提是你的進(jìn)針不是 特別深，如果你的整個(gè)針頭都扎入了腹腔，那么腸子是無(wú)處可躲了。3、腹腔注射進(jìn)針后，你可以將針頭左右擺動(dòng)一下，如果是正確的，這時(shí)會(huì)有一種很自由無(wú)障礙的感覺(jué)，進(jìn)針角度撐握在小于45度，針頭進(jìn)入長(zhǎng)度不超過(guò) 3厘米左右。用大、小白鼠做實(shí)驗(yàn)時(shí)，以左手抓住動(dòng)物，使腹部向上，右手將注射針頭于左

14、（或右）下腹部刺入皮下，使針頭向前推0.51.0cm,再以45度角穿過(guò)腹肌，固定針頭，緩緩注入藥液（圖2-5）,為避免傷及內(nèi)臟，可使動(dòng)物處于頭低位，使內(nèi)臟移向上腹。若實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為家兔，進(jìn)針部位為下腹部的腹白線離開(kāi)1cm處腫瘤倍增時(shí)間腫瘤動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ湍[瘤的倍增時(shí)間（ doubling time）,應(yīng)該是在瘤體積100 800之間計(jì)算， 但是一組動(dòng)物有10只，每周測(cè)量2次瘤體積，如果我想計(jì)算從 200倍增到400的時(shí)間的話, 10只動(dòng)物不會(huì)在我測(cè)量體積的時(shí)候正好到 200或400,那么，在計(jì)算的時(shí)候，具體應(yīng)該怎么 做？Geddes等29將結(jié)節(jié)倍增時(shí)間的計(jì)算公式表示為：DT = （ln 2A t） /

15、ln （V2/V1）, V1、V2分別是前后兩次測(cè)量的體積，t是兩次測(cè)量的時(shí)間間隔你的問(wèn)題有歧義，我覺(jué)得可以有幾下幾種理解：1 .測(cè)量的時(shí)候，對(duì)于某個(gè)老鼠來(lái)說(shuō)，第一次可能測(cè)出來(lái)的體積是189.26 （不是正好200）,第二次是415.31 （不是正好400）,對(duì)于其他的動(dòng)物都有這樣的問(wèn)題，2 .對(duì)于十只老鼠來(lái)說(shuō)，測(cè)量的時(shí)候，可能1號(hào)老鼠是189.26,2號(hào)是312.57,3號(hào)是110.89, 這也是一種理解，我的意見(jiàn)是：測(cè)量一段比較長(zhǎng)的時(shí)間，每只老鼠可以獨(dú)立計(jì)算倍增時(shí)間， 然后計(jì)算平均值，SD等，用統(tǒng)計(jì)學(xué)處理的手段。個(gè)體差異同一批種幾十只老鼠，有的就長(zhǎng)不出來(lái)，有的長(zhǎng)得很大，使評(píng)價(jià)藥效很困難。排

16、除接種懸液未搖勻的可能后，還有什么原因可能造成這一點(diǎn)？可能是是個(gè)體差異了。其中，老鼠年齡是一個(gè)很大的因素。本人就遇到過(guò)2個(gè)月的老鼠接種腫瘤以后，有的長(zhǎng)有的不長(zhǎng)的情況。如果控制好試驗(yàn)條件，動(dòng)物也比較均一的話，一般腫瘤生長(zhǎng)都會(huì)很好的控制在一定范圍的腫瘤模型新藥申報(bào)zym145286做的腫瘤模型實(shí)驗(yàn)是用于新藥申報(bào)用，現(xiàn)在有一些問(wèn)題還不能校準(zhǔn)，我做的是人癌 模型，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為裸鼠.1.新藥報(bào)批中，有明確的要求說(shuō)腫瘤來(lái)源必須是體內(nèi)傳代 3次以上嗎？3 .實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)于取出腫瘤塊的質(zhì)量有沒(méi)有明確的規(guī)定呢？還是跟其他種鼠一樣，要求平均瘤重不小于1g或者不大于20%的瘤快質(zhì)量不小于 400mg,4 .實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)

17、指標(biāo)相對(duì)腫瘤增殖率T/C（%）指的是瘤體積比還是瘤質(zhì)量比？5 .實(shí)驗(yàn)申報(bào)材料是否需要附屬實(shí)驗(yàn)動(dòng)物裸鼠的照片？若需要附屬的話，照片沒(méi)有沒(méi)有什么要求怎么照的，是鼠活的時(shí)候的照片還是實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死鼠后在擺好位置照？6 .申報(bào)材料中附圖要求是腫瘤的生長(zhǎng)曲線還是不同時(shí)間測(cè)量的T/C值對(duì)時(shí)間所做的曲線？還是兩個(gè)都要有呢？7 .實(shí)驗(yàn)分組分 5組，空白溶劑對(duì)照組，藥物高中低三個(gè)劑量組，陽(yáng)性藥物有效濃度對(duì)照組.這樣 可以嗎？要是不可以，還需要怎么分呢？8 .實(shí)驗(yàn)材料中是否需要包含該實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血液相關(guān)指標(biāo)的數(shù)值呢？比如：白細(xì)胞數(shù)量，骨髓的影響等等9 . 一次實(shí)驗(yàn)有效后，是不是也需要重復(fù)實(shí)驗(yàn)三次？那三次的數(shù)據(jù)都需要包

18、含在數(shù)據(jù)中嗎？ swordzjsh具體問(wèn)題回答如下：1 .沒(méi)有問(wèn)題，新老原則均明確要求體內(nèi)三代以上，并且不能超過(guò)1520代（人腫瘤）。2 .新原則已經(jīng)沒(méi)有瘤重的指標(biāo)，只考察瘤體積，也沒(méi)有對(duì)試驗(yàn)結(jié)束后的腫瘤大小有明確要求，但是老的指導(dǎo)原則有這方面的要求。3 .新的原則是指瘤體積，老的指瘤重，實(shí)際上在數(shù)據(jù)處理的時(shí)候一般瘤體積和瘤重的數(shù)據(jù)都會(huì)加入，分別計(jì)算相應(yīng)的 T/C。4 . 需要，常見(jiàn)的有兩種：一種是 處死后擺放并拍攝整鼠照片， 還有一種是剝?nèi)∧[瘤后拍攝腫瘤的照片，還是那句話，最好都有，至少資料中放一個(gè)，另外一份備好，答辯的時(shí)候可以隨時(shí)展示。另外，以前不允許數(shù)碼拍攝，要求光學(xué)照相機(jī)，以防電腦編輯

19、，不知道現(xiàn)在還有沒(méi)有類似的要求。5 .有的人要看腫瘤生長(zhǎng)曲線，有的人要看T/C的曲線，不過(guò)一般放生長(zhǎng)曲線的多一些，記住，生長(zhǎng)曲線現(xiàn)在要求RTV,相對(duì)腫瘤體積。以前報(bào)批的時(shí)候就可以放RTV曲線了，現(xiàn)在更是RTV 的天下。6.一般來(lái)說(shuō)，正式試驗(yàn)基本上就是這么設(shè)計(jì)了，但是你最好有這些劑量、療程、給藥途徑等的設(shè)計(jì)依據(jù)，比如權(quán)威文獻(xiàn)、你們的預(yù)試驗(yàn)等材料備問(wèn)。當(dāng)然，如果你的藥物有些特別的地方，那么要根據(jù)他的具體特點(diǎn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)。7. 這個(gè)是錦上添花的指標(biāo)，對(duì)于藥效試驗(yàn)來(lái)說(shuō)，沒(méi)有明確要求，但是一定要有體重和死亡的數(shù)據(jù)。8. 老原則要求重復(fù)兩次，一共三次試驗(yàn)，新原則前幾稿要求重復(fù)一次，一共三次試驗(yàn)，但是最新一稿我

20、沒(méi)有看到對(duì)于重復(fù)試驗(yàn)的要求，但是作為藥理研究的基本常識(shí)，重復(fù)試驗(yàn)是一定需要的， 作為正式試驗(yàn)的重復(fù)試驗(yàn)應(yīng)該把數(shù)據(jù)和結(jié)果分析都列入報(bào)告中，重復(fù)試驗(yàn)之間是同等重要的。zym145286:針對(duì)您的回答,我仍有幾點(diǎn)不解1. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后瘤的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)問(wèn)題, 您說(shuō)新原則沒(méi)有指標(biāo), 那么老原則（就是現(xiàn)在還遵循的原則）具體是多少呢, 能不能說(shuō)明一下啊? 2. T/C 標(biāo)準(zhǔn)按照體積計(jì)算的時(shí)候,按照的是哪個(gè)時(shí)間點(diǎn)的體積呢,還是說(shuō)整個(gè)測(cè)量過(guò)程的體積都要算?3.還有一個(gè)比較基本的問(wèn)題，不要笑話我了，呵呵，那個(gè)RTV是怎樣算出來(lái)的？是用藥組數(shù)據(jù)減去空白組數(shù)據(jù)嗎?還是其他算法? 4.正式實(shí)驗(yàn)中,每組的動(dòng)物數(shù)量是多少?6只

21、,還是10-12只 ? 5.對(duì)給藥時(shí)間有沒(méi)有什么具體要求呢,就是說(shuō)有沒(méi)有上限,比如不可以超過(guò)一個(gè)月啊什么的 ？ swordzjsh1. 老原則的標(biāo)準(zhǔn)就是你寫出來(lái)的那個(gè)。2. 整個(gè)測(cè)量過(guò)程的體積都要算，可以用T/C 對(duì)時(shí)間點(diǎn)作圖的那種。實(shí)際上，不知道你有沒(méi)有老的指導(dǎo)原則，上面有一個(gè)表，那個(gè)表里面匯總了一些試驗(yàn)的基本信息，那個(gè)表里面要填增殖率，一般是選效果最好的那一天的數(shù)據(jù)填上去。3. RTV = Vt / V0o其中V0為分籠給藥時(shí)（即d0）測(cè)量所得腫瘤體積，Vt為每一次測(cè)量時(shí)的腫瘤 體積。RTV是針對(duì)每一只小鼠計(jì)算的。4. 對(duì)于裸鼠來(lái)說(shuō)，5到10只，要根據(jù)你的藥物的性質(zhì)來(lái)定，如果SD較大，建議

22、多設(shè)幾只，容易做出統(tǒng)計(jì)差異。如果SD較小，不少于6只，因?yàn)橐笤囼?yàn)過(guò)程中動(dòng)物死亡率不超過(guò)20%,6 只動(dòng)物死了一只還可以接受，要是5 只動(dòng)物死了一只就是20%了。5. 沒(méi)有具體的要求，一般在 3 到 5 周，常見(jiàn)為三周，并且保證腫瘤長(zhǎng)到足夠的大小。如果有特別的原因可以變化試驗(yàn)周期，但是一般都是加長(zhǎng)而不會(huì)縮短。實(shí)驗(yàn)分組與標(biāo)記baobaogao197759: 我的實(shí)驗(yàn)是觀察藥物對(duì)lewis 肺癌的生長(zhǎng)的影響。1 、實(shí)驗(yàn)分為五組（模型組、陽(yáng)性對(duì)照組（CTXO藥物大、中、小劑量組）。我不清楚需不需要設(shè)置陰性對(duì)照組（就是不造模組，） 2、 C57 小鼠怎樣標(biāo)記，有剪趾、穿耳孔的方法。但是具體的操作沒(méi)有說(shuō)

23、明，能否介紹一下。swordzjsh1. 不需要設(shè)normal 組，因?yàn)槟[瘤的生長(zhǎng)和評(píng)價(jià)非常明顯，不會(huì)有干擾的可能。2. 我一般是剪耳號(hào) ， 一只小鼠兩只耳朵，每只耳朵可以剪上側(cè)和下側(cè)兩個(gè)位點(diǎn)，你可以自己指定組合，比如我們是這樣的：左上為一號(hào)，左下為二號(hào)，右上為三號(hào)，右下為四號(hào)，左側(cè)上下為五號(hào)，右側(cè)上下為六號(hào)，左上右上為七號(hào)，左下右下為八號(hào).細(xì)胞懸浮液體roger150 ,在做腫瘤模型用細(xì)胞接種時(shí)，細(xì)胞懸浮在什么液體里面有沒(méi)用matrigel同細(xì)胞混勻 后再接種的？Swordzjsh:一般來(lái)說(shuō)，可以懸浮在相應(yīng)的 無(wú)血清培養(yǎng)基、PBS saline中，接種效果以上三種 次第降低。用matrige

24、l是一種促進(jìn)腫瘤形成生長(zhǎng)的手段，如果本身腫瘤生長(zhǎng)不是特別困難不建議用它，但是一些比如 A549之類的細(xì)胞株，接種后五六十天還只有 600700mm3的腫瘤， 就可以考慮使用 matrigel。使用matrigel的時(shí)候要注意低溫操作，因?yàn)槭覝叵耺areigel就有可能固化。一般是在冰浴中操作。白血病腫瘤，皮下注射or靜脈注射？ abaiabai我的理解是，靜脈注射反應(yīng)的是疾病全身播散的作用，皮下注射便于觀察瘤塊大小，衡量用藥效果，應(yīng)該結(jié)合自己試驗(yàn)的目的選擇注射方法我最近剛剛實(shí)驗(yàn)比較了一下靜脈注射和皮下接種白血病細(xì)胞株，從理論上說(shuō)靜脈接種似乎皮下接種更接近白血病的生物行為特點(diǎn)，但是根據(jù)我的實(shí)驗(yàn)和

25、以前的文獻(xiàn)，靜脈接種小鼠的平均生存期很短，我的不超過(guò)10天，我還試驗(yàn)性的進(jìn)行了化療，結(jié)果幾乎全死了，而皮下接種者結(jié)果穩(wěn)定。所以選皮下還是靜脈， 應(yīng)該根據(jù)自己的試驗(yàn)?zāi)康膩?lái)定，長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)好像不太適合用靜脈注射的方法。swordzjsh皮下或者靜脈注射都可以，看你的細(xì)胞株了，也有用腹腔注射的。小鼠的捉拿從籠盒內(nèi)將小鼠尾部捉住并提起，放在籠蓋（或表面粗糙的物體）上，輕輕向后拉鼠尾，在小鼠向前掙脫時(shí)，用左手拇指和食指抓住兩耳和頸部皮膚，無(wú)名指、小指和手掌心夾住背部皮膚和尾部，并調(diào)整好動(dòng)物在手中的姿勢(shì)。這類捉拿方法多用于灌胃以及肌肉、腹腔和皮下注射等。如若進(jìn)行心臟采血、解剖、外科手術(shù)等實(shí)驗(yàn)時(shí)，就必須要固定

26、小鼠。使小鼠呈仰臥 位（必要時(shí)先進(jìn)行麻醉），用橡皮筋將小鼠固定在小鼠實(shí)驗(yàn)板上。如若不麻醉，則將小鼠放 人保定架里，固定好保定架的封口。小鼠性情較溫順，一般不會(huì)咬人，比較容易抓取固定。 通常用右手提起小鼠尾巴將其放在鼠 籠蓋或其它粗糙表面上，在小鼠向前掙扎爬行時(shí)，用左手拇指和食指捏住其雙耳及頸部皮膚， 將小鼠置于左手掌心、無(wú)名指和小指夾其背部皮膚和尾部，即可將小鼠完全固定。在一些特殊的實(shí)驗(yàn)中，如進(jìn)行尾靜脈注射時(shí)，可使用特殊的固定裝置進(jìn)行固定，如尾靜脈注射架或粗的玻璃試管。如要進(jìn)行手術(shù)或心臟采血應(yīng)先行麻醉再操作，如進(jìn)行解剖實(shí)驗(yàn)則必須先行無(wú)痛處死后再進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的編號(hào)編號(hào)的方法很多，根據(jù)動(dòng)物的種類

27、數(shù)量和觀察時(shí)間長(zhǎng)短等因素來(lái)選擇合適的標(biāo)記方法。（一）掛牌法：將號(hào)碼烙壓在圓形或方形金屬牌上（最好用鋁或不銹鋼的，它可長(zhǎng)期使用不生銹）,或?qū)⑻?hào)碼按實(shí)驗(yàn)分組編號(hào)烙在栓動(dòng)物頸部的皮帶上，將此頸圈固定在動(dòng)物頸部。該法適 用于狗等大型動(dòng)物。（二）（二）打號(hào)法：用刺數(shù)鉗（又稱耳號(hào)鉗）將號(hào)碼打在動(dòng)物耳朵上。打號(hào)前用蘸有酒精的棉球 擦凈耳朵，用耳號(hào)鉗刺上號(hào)碼，然后在烙印部位用棉球蘸上溶在食醋里的黑墨水擦抹。 該法適用于耳朵比較大的兔、狗等動(dòng)物。（三）針刺法：用七號(hào)或八號(hào)針頭蘸取少量碳素墨水，在耳部、前后肢以及尾部等處刺入皮下，在受刺部位留有一黑色標(biāo)記。該法適用于大小鼠、豚鼠等。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量少的情況下，也可用

28、于兔、狗等動(dòng)物。（四）化學(xué)藥品涂染動(dòng)物被毛法：經(jīng)常應(yīng)用的涂染化學(xué)藥品有涂染紅色：0.5%中性紅或品紅溶液。涂染黃色：3-5%苦味酸溶液。涂染黑色：煤焦油的酒精溶液。 根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組編號(hào)的需要，可用一種化學(xué)藥品涂染實(shí)驗(yàn)動(dòng)物動(dòng)物背部被毛就可以。如果實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量較多，則可以選擇兩種染料。該方法對(duì)于實(shí)驗(yàn)周期短的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物較合適，時(shí)間長(zhǎng)了 染料易退掉；對(duì)于哺乳期的子畜也不適合，因母畜容易咬死子畜或把染料舔掉。（五）剪毛法：該法適用于大、中型動(dòng)物，如狗、兔等。方法是用剪毛刀在動(dòng)物一側(cè)或背部剪 出號(hào)碼，此法編號(hào)清楚可靠，但只適于短期觀察。（六）打孔或剪缺口法：可用打孔機(jī)在兔耳一定位置打一小孔來(lái)表示一定的號(hào)碼。如

29、用剪子剪 缺口，應(yīng)在剪后用滑石粉捻一下，以免愈合后看不出來(lái)。該法可以編至 19999號(hào)，此種方法 常在飼養(yǎng)大量動(dòng)物時(shí)作為終身號(hào)采用。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組（一）分組的原則：進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，經(jīng)常需要將選擇好的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按研究的需要分成若干組。動(dòng)物分組應(yīng)按隨機(jī)分配的原則，使每只動(dòng)物都有同等機(jī)會(huì)被分配到 各個(gè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中去，以避免各組之間的差別，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，特別是進(jìn)行準(zhǔn)確的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，必須在隨機(jī)分組的基礎(chǔ)上進(jìn)行。每組動(dòng)物數(shù)量應(yīng)按實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)短、實(shí)驗(yàn)類型及統(tǒng)計(jì)學(xué)要求而定。如果是慢性實(shí)驗(yàn)或需要定期處死動(dòng)物進(jìn)行檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)，就要求選較多的動(dòng)物，以補(bǔ)足動(dòng)物自然死亡和認(rèn)為處死所喪失的 數(shù)量，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)有合乎統(tǒng)計(jì)學(xué)要

30、求的動(dòng)物數(shù)量存在。（二）建立對(duì)照組：分組時(shí)應(yīng)建立對(duì)照組。1.自身對(duì)照組：是指實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)而言。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本身在實(shí)驗(yàn)處理前、后兩個(gè)階段的各項(xiàng)相關(guān)數(shù)據(jù)就分別是對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，此法可排除生物間的個(gè)體差異。2.平行對(duì)照組：有正對(duì)照組和負(fù)對(duì)照組兩種。給實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物某種處理，小鼠采血方法1 .割（剪）尾采血當(dāng)所需血量很少時(shí)采用本法。固定動(dòng)物并露出鼠尾。將尾部毛剪去后消毒， 然后浸在45 c左右的溫水中數(shù)分鐘，使尾部血管充盈。再將尾擦干，用銳器（刀或剪刀）割去尾尖0.3-0.5cm,讓血液自由滴入盛器或用血紅蛋白吸管吸取，采血結(jié)束，傷口消毒并壓迫 止血。也可在尾部作一橫切口，割破尾動(dòng)脈或靜脈，收集血液的方

31、法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml,大鼠0.30.5ml。2 .鼠尾刺血法 大鼠用血量不多時(shí)（僅做白細(xì)胞計(jì)數(shù)或血紅蛋白檢查），可采用本法。先將鼠尾用溫水擦拭，再用酒精消毒和擦拭，使鼠尾充血。用7號(hào)或8號(hào)注射針頭，刺入鼠尾靜脈，拔出針頭時(shí)即有血滴出，一次可采集1050mm3。如果長(zhǎng)期反復(fù)取血，應(yīng)先靠近鼠尾末端穿刺，以后再逐漸向近心端穿刺。3 .眼眶靜脈叢采血 采血者的左手拇食兩指從背部較緊地握住小鼠或大鼠的頸部（大鼠采血需帶上紗手套），應(yīng)防止動(dòng)物窒息。當(dāng)取血時(shí)左手拇指及食指輕輕壓迫動(dòng)物的頸部?jī)蓚?cè)，使眶 后靜脈叢充血。右手持續(xù)接7號(hào)針頭的1ml注射器或長(zhǎng)頸（34cm）硬質(zhì)

32、玻璃滴管（毛細(xì)管內(nèi)徑0.5-1.0mm）,使采血器與鼠面成 45c的夾角，由眼內(nèi)角刺入，針頭斜面先向眼球，刺入 后再轉(zhuǎn)180度使斜面對(duì)著眼眶后界。刺入濃度，小鼠約 23mm,大鼠約45mm。當(dāng)感到 有阻力時(shí)即停止推進(jìn)，同時(shí)，將針退出約0.1-0.5mm,邊退邊抽。若穿刺適當(dāng)血液能自然流入毛細(xì)管中，當(dāng)?shù)玫剿璧难亢螅闯ゼ佑陬i部的壓力，同時(shí)，將采血器拔出，以防止 術(shù)后穿刺孔出血。若技術(shù)熟練，用本法短期內(nèi)可重復(fù)采血均無(wú)多大困難。左右兩眼輪換更好。體重20-25g的小鼠每次可采血 0.2-0.3ml;體重200-300g大鼠每次可采血 0.5-1.0ml,可 適用于某些生物化學(xué)項(xiàng)目的檢驗(yàn)。4.斷

33、頭取血 采血者的左手拇指和食指以背部較緊地握住大（?。┦蟮念i部皮膚，并作動(dòng)物頭朝下傾的姿勢(shì)。右手用剪刀猛剪鼠頸，約 1/2-4/5的頸部前剪 斷，讓血自由滴入盛器。小鼠可采用約0.81.2ml;大鼠約5-10mlo5 .心臟采血 鼠類的心臟較小，且心率較快，心臟采血比較困難，故少用?；铙w采血方法與豚 鼠相同。若做開(kāi)胸一次死亡采血，先將動(dòng)物作深麻醉，打開(kāi)胸腔，暴露心臟，用針頭刺入右 心室，吸取血液。小鼠約 0.5-0.6ml ;大鼠約 0.8-1.2ml。6 .頸動(dòng)靜脈采血 先將動(dòng)物仰位固定，切開(kāi)頸部皮膚，分離皮下結(jié)締組織，使頸靜脈充分暴露， 可用注射器吸出血液。在氣管兩側(cè)分離出頸動(dòng)脈， 離心端

34、結(jié)扎，向心端剪口將血滴入試管內(nèi)。7 .腹主動(dòng)脈采血 最好先將動(dòng)物麻醉，仰臥固定在手術(shù)架上，從腹正中線皮膚切開(kāi)腹腔， 使腹主動(dòng)脈清楚暴露。用注射器吸出血液，防止溶血。或用無(wú)齒鐐子剝離結(jié)締組織，夾住動(dòng)脈近心端，用尖頭手術(shù)剪刀，剪斷動(dòng)脈，使血液噴入盛器。8 .股動(dòng)（靜）脈采血 先由助手握住動(dòng)物，采血者左手拉直動(dòng)物下肢，使靜脈充盈?；蛘咭圆珓?dòng) 為指標(biāo)，右手用注射器刺入血管。體重15-20g小鼠采血約0.2-0.8ml,大鼠約0.4-0.6ml。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用藥量的確定及計(jì)算方法（一）動(dòng)物給藥量的確定1 .先用少量小鼠粗略地探索中毒劑量或致死劑量，然后用小于中毒量的劑量，或取致死量的若干分之一作為應(yīng)用劑量，

35、一般可取1/101/5。2 .植物藥粗制劑的劑量多按生藥折算。3 .化學(xué)藥品可參考化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的已知藥物，特別是化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用都相似的劑量。4 .確定劑量后，如第一次用藥的作用不明顯，動(dòng)物也沒(méi)有中毒的表現(xiàn)，可以加大劑量再次實(shí)驗(yàn)。如出現(xiàn)中毒現(xiàn)象，作用也明顯，則應(yīng)降低劑量再次實(shí)驗(yàn)。在一般情況下，在適宜的劑量 范圍內(nèi)，藥物的作用常隨劑量的加大而增強(qiáng)。所以有條件時(shí)，最好同時(shí)用幾個(gè)劑量作實(shí)驗(yàn)， 以便迅速獲得關(guān)于藥物作用的較完整的資料。如實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)劑量與作用強(qiáng)度之間毫無(wú)規(guī)律時(shí)，則更應(yīng)慎重分析。5 .用大動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，防止動(dòng)物中毒死亡，開(kāi)始的劑量可采用鼠類的1/151/2，以后可根據(jù)動(dòng)物的反應(yīng)調(diào)整劑量。

36、6 .確定動(dòng)物給藥劑量時(shí)，要考慮給藥動(dòng)物的年齡大小和體質(zhì)強(qiáng)弱。一般說(shuō)確定的給藥劑量是指成年動(dòng)物的，如是幼齡動(dòng)物，劑量應(yīng)減小。如以狗為例：6個(gè)月以上的狗給藥劑量為 1份時(shí)，36個(gè)月的給1/2份，4589日的給1/4份，2044日的給1/8份，1019日的給 1/16 份。7 .確定動(dòng)物給藥劑量時(shí)，要考慮因給藥途徑不同，所用劑量也不同。以口服量為100時(shí)，皮下注射量為3050,肌肉注射量為2030,靜脈注射量為25。（二）人與動(dòng)物的用藥量換算方法人與動(dòng)物對(duì)同一藥物耐受性不同，一般動(dòng)物的耐受性要比人大，單位體重的用藥量動(dòng)物比人要高。必須將人的用藥量換算成動(dòng)物的用藥量。一般可按下列比例換算： 人用藥量

37、：1小鼠、大鼠：50100兔、豚鼠：1520狗、貓：510 以上系按單位體重口服用藥量換算。如給藥途徑為靜脈、 皮下、腹腔注射，換算比例應(yīng)適當(dāng)減小些。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥途徑和方法（一）皮下注射注射時(shí)以左手拇指和食指提起皮膚，將連有5 （1/2）號(hào)針頭的注射器刺入皮下。皮下注射部位一般狗、貓多在大腿外側(cè)，豚鼠在后大腿的內(nèi)側(cè)或小腹部；大白鼠可在側(cè)下腹部。兔在背部或耳根部注射。蛙可在脊背部淋巴腔注射。（二）皮內(nèi)注射皮內(nèi)注射時(shí)需將注射的局部脫去被毛，消毒后，用左手拇指和食指按住皮膚并使之繃緊，在兩指之間，用結(jié)核菌素注射器連4（1/2）細(xì)針頭，緊貼皮膚表層刺入皮內(nèi)，然后再向上挑起并再稍刺入，即可注射藥液，此時(shí)

38、可見(jiàn)皮膚表面鼓起一白色小皮丘。（三）肌肉注射肌肉注射應(yīng)選肌肉發(fā)達(dá)，無(wú)大血管通過(guò)的部位，一般多選臀部。注射時(shí)垂直迅速刺入肌肉，回抽針?biāo)ㄈ鐭o(wú)回血，即可進(jìn)行注射。給小白鼠、大白鼠等小動(dòng)物作肌肉注射時(shí)，用左手抓住鼠兩耳和頭部皮膚，右手取連有5 （1/2）針頭的注射器，將針頭刺入大腿外側(cè)肌肉，將藥液注入。（四）腹腔注射用大、小白鼠做實(shí)驗(yàn)時(shí)，以左手抓住動(dòng)物，使腹部向上，右手將注射針頭于左（或右）下腹部刺入皮下，使針頭向前推0.51.0cm,再以45度角穿過(guò)腹肌，固定針頭，緩緩注入藥液，為避免傷及內(nèi)臟，可使動(dòng)物處于頭低位，使內(nèi)臟移向上腹。若實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為家兔，進(jìn)針部位為下腹部的腹白線離開(kāi)1cm 處。 （五）靜脈

39、注射小白鼠和大白鼠：一般采用尾靜脈注射，鼠尾靜脈有三根，左右兩側(cè)及背側(cè)各一根，左右兩側(cè)尾靜脈比較容易固定，多采用，背側(cè)一根也可采用，但位置容易固定。操作時(shí)先將動(dòng)物固定在鼠筒內(nèi)或扣在燒杯中，使尾巴露出，尾部用4550c的溫水浸潤(rùn)半分鐘或用酒精擦拭使血管擴(kuò)張，并可使表皮角質(zhì)軟化，以左手拇指和食指捏住鼠尾兩側(cè)，使靜脈充盈，用中指從下面托起尾巴，以無(wú)名指和小指夾住尾巴的末梢，右手持注射器連4（1/2）號(hào)細(xì)針頭，使針頭與靜脈平行（小于30），從尾下四分之一處（約距尾尖2-3 厘米）處進(jìn)針，此處皮薄易于刺入，先緩注少量藥液，如無(wú)阻力，表示針頭已進(jìn)入靜脈，可繼續(xù)注入。注射完畢后把尾部向注射側(cè)彎曲以止血。如需

40、反復(fù)注射，應(yīng)盡可能從末端開(kāi)始，以后向尾根部方向移動(dòng)注射。 幾種常用的動(dòng)物不同給藥途徑的注射量（六）淋巴囊注射蛙類常采用此法，因其皮下有數(shù)個(gè)淋巴囊，注入藥物甚易吸收。腹部淋巴囊和頭背淋巴囊常作為蛙類給藥途徑。一般多選用腹部淋巴囊給藥。注射時(shí)將針頭從蛙大腿上端刺入，經(jīng)大腿肌層入腹壁肌層，再進(jìn)入腹壁皮下，即進(jìn)入淋巴囊，然后注入藥液。有時(shí)也可采用胸淋巴囊給藥。方法是將針頭刺入口腔，使穿過(guò)下頜肌層入胸淋巴囊內(nèi)注入藥液，一次最大注射量為 1 毫升。蛙全身分布為咽、胸、背、腹側(cè)、腹、大腿和腳等七個(gè)淋巴囊。（七）經(jīng)口給藥在急性試驗(yàn)中，經(jīng)口給藥多用灌胃法，此法劑量準(zhǔn)確，適用于小白鼠、大白鼠、 家兔等動(dòng)物。小鼠、

41、大鼠（或豚鼠）用輸血針頭或小號(hào)腰穿針頭，將其尖端斜面磨劑，用焊錫在針尖周圍焊一圓頭，注意勿堵塞針孔，即成灌胃針；亦可用燒成圓頭的硬質(zhì)玻璃毛細(xì)管或特制的塑料毛細(xì)秋，作為導(dǎo)管。灌胃時(shí)將針按在注射器上，吸入藥液。左手抓住鼠背部及頸部皮膚將動(dòng)物固定，右手持注射器，將灌胃針插入動(dòng)物口中，沿咽后壁徐徐插入食道。動(dòng)物應(yīng)固定成垂直體位，針插入時(shí)應(yīng)無(wú)阻力。若感到阻力或動(dòng)物掙扎時(shí)，應(yīng)立即停止進(jìn)針或?qū)⑨槹纬?，以兔損傷或穿破食道以及誤入氣管。一般當(dāng)灌胃針插入小鼠3 4cm,大鼠或豚鼠4-6cm后可將藥物注入。常用的灌胃量小鼠為0.2-1ml,大鼠1-4ml,豚鼠為1-5ml。各種動(dòng)物一次灌胃能耐受的最大容積小鼠為0.

42、5-1.0ml,大鼠4-7ml ,豚鼠為 4-7ml,家兔為 80-150ml ,狗為200-500ml。 八）其它途徑給藥1 呼吸道給藥呈粉塵、氣體及蒸氣或霧等癥狀存在藥物或毒氣，均需要通過(guò)動(dòng)物呼吸道給藥。如一般實(shí)驗(yàn)時(shí)給動(dòng)物乙醚作吸入麻醉，給動(dòng)物吸一定量的氨氣、二氧化碳等觀察呼吸、循環(huán)等變化；給動(dòng)物定期吸入一定量的SO2鋸末煙霧等可造成慢性氣管炎動(dòng)物模型等；特別在毒物學(xué)實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用更為廣泛。2皮膚給藥為了鑒定藥物或毒物經(jīng)皮膚的吸收作用、局部作用、致敏作用和光感作用等，均需采用經(jīng)皮膚給藥方法。如家兔和豚鼠常采用背部一定面積的皮膚脫毛后，將一定藥液涂在皮膚上，藥液經(jīng)皮膚吸收。3脊髓腔內(nèi)給藥此法主要

43、用于椎管麻醉或抽取腦脊液。的灌胃針頭的頭端用錫或者適宜的方法處理了針頭的銳口，自己用砂紙不可能將所有的銳口都磨掉，用這樣的針頭灌胃，損失小鼠食道的可能性比較大。2 .抓住小鼠，使其頭、頸和身體呈一直線。抓小鼠的動(dòng)作很簡(jiǎn)單，左手的小指和無(wú)名指抓住小鼠的尾巴，另外三個(gè)手指抓住小鼠的頸部即可。因?yàn)樾∈笫冀K在活動(dòng)中，若一次抓的感覺(jué)不是很順手，要放開(kāi)重新抓，不要逞強(qiáng)進(jìn)行下一步操作。3 . 抓好小鼠就可以灌胃了，一般用1ml 的注射器配灌胃針頭。灌胃針頭從小鼠的嘴角進(jìn)入，壓住舌頭，抵住上顎，輕輕向內(nèi)推進(jìn)，進(jìn)入食管后會(huì)有一個(gè)刺空感，進(jìn)入食道后就可以推注藥液了。 （我認(rèn)為，所謂的灌胃，不必要灌胃針頭進(jìn)入小鼠的

44、胃部，進(jìn)入食管后就可以推藥了，這樣對(duì)小鼠食道的損傷要小點(diǎn)，特別是要長(zhǎng)期灌胃給藥的情況下。）當(dāng)然，灌胃針頭也可以再往里面深入一點(diǎn)，防止藥液從口中流出。4 .灌胃容積一般是0.10.2ml/10g ,最大 0.35ml/10g ,每只小鼠的灌胃最大容積不超過(guò)0.8ml。 小鼠腹腔注射1. 小鼠腹腔注射可以用1ml 的注射器，配合4 號(hào)針頭。2. 腹腔注射時(shí)右手持注射器，左手的小指和無(wú)名指抓住小鼠的尾巴，另外三個(gè)手指抓住小鼠的頸部，使小鼠的頭部向下。這樣腹腔中的器官就會(huì)自然倒向胸部，防止注射器刺入時(shí)損傷大腸、小腸等器官。進(jìn)針的動(dòng)作要輕柔，防止刺傷腹部器官。3. 尤其是對(duì)于體重較小的小鼠，腹腔注射時(shí)針

45、頭可以在腹部皮下穿行一小段距離，最好是從腹部一側(cè)進(jìn)針，穿過(guò)腹中線后在腹部的另一側(cè)進(jìn)入腹腔，注射完藥物后，緩緩拔出針頭，并輕微旋轉(zhuǎn)針頭，防止漏液。4. 小鼠腹腔注射的給藥容積一般為510ml/kg。小鼠靜脈注射 操作步驟：1. 首先要固定小鼠，最簡(jiǎn)單的固定方法就是把小鼠放在盒子里面，讓它的尾巴伸在盒蓋的外面，用手抓住小鼠尾巴，輕輕往外拽，就可以固定好小鼠了。這種固定方法，小鼠可以在盒子里面活動(dòng)，固定的也不是很牢固，但是只要你尾靜脈注射的手法很熟練，就足以用來(lái)注射了。還有的固定方法就是用一個(gè)小的圓筒，最好是金屬做的，（可以在當(dāng)?shù)氐蔫F匠鋪，或者買白鐵鋪里面定做）首先是金屬比較結(jié)實(shí)，而且可以用來(lái)固定在

46、鐵架臺(tái)上，方便操作。圓筒的一段有個(gè)蓋子可以拿下來(lái)，蓋子中間有個(gè)小孔，可以讓小鼠的尾巴伸出來(lái)（中間的小孔可以用膠布纏一下，防止銳利的邊緣割傷小鼠尾巴）。另外一段可以用金屬網(wǎng)的結(jié)構(gòu)，網(wǎng)的形狀可以做成子彈頭的頭端形狀。網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)可以讓光線透近來(lái)，方便小鼠鉆進(jìn)圓筒里面。圓筒的長(zhǎng)度約10cm,直徑約34cm,可以做個(gè)系列長(zhǎng)度和直徑的圓筒，適合不同大小的小鼠。2.固定好小鼠后就是注射了，一般用一次性的1ml 的注射器就可以了，玻璃的 1ml 的注射器也可以用，針頭用4 號(hào)的就可以了。3. 注射前首先要讓小鼠的血管充盈?？梢圆捎?5%的酒精棉球擦拭的方法或者采用溫水浸泡的方法。若小鼠的血管很不清楚，推薦采用溫

47、水浸泡的方法，水溫以不燙手為宜。溫水浸泡23分鐘后，取出小鼠尾巴，用干棉球擦拭。等一會(huì)兒，待血管充盈后，酒精棉球擦拭后就可以進(jìn)針了。若血管還不充盈，可以反復(fù)用溫水浸泡，切不可冒險(xiǎn)注射，除非你手法很熟練，另當(dāng)別論。4. 小鼠尾部共有四條血管，一般認(rèn)為左右的兩條靜脈比較容易注射，多采用這兩條靜脈進(jìn)針。一般要求進(jìn)針部位靠近小鼠的尾端，這樣若注射失敗的話，還可以再向上選擇進(jìn)針點(diǎn)。但是進(jìn)針部位也不可以太靠下，因?yàn)樵酵?，靜脈越細(xì)，操作越難，一般以小鼠尾巴下三分之一的位置比較好。5. 最關(guān)鍵的就是進(jìn)針了。進(jìn)針時(shí)操作者左手食指和拇指固定住小鼠的尾巴，讓小鼠的尾巴在經(jīng)過(guò)拇指后向下彎曲，進(jìn)針點(diǎn)靠近拇指指甲。針頭

48、和血管呈約30°角，針尖斜面朝上，輕輕挑刺入皮膚后針頭立即和血管平行，一般情況下一次就可以進(jìn)入血管，可以將針頭刺入血管一大半，左右輕輕晃動(dòng)針頭，確定針頭在血管內(nèi)，就可以推注藥液了，正常情況下，推注的過(guò)程應(yīng)該沒(méi)有明顯阻力，血管也不會(huì)鼓起。推液時(shí)動(dòng)作宜輕柔，若發(fā)現(xiàn)血管鼓起，那是針頭沒(méi)有刺入血管，需立即拔出針頭。皮下注射給藥將藥液推入皮下結(jié)締組織，經(jīng)毛細(xì)血管、淋巴管吸收進(jìn)入血液循環(huán)的過(guò)程。作皮下注射常選項(xiàng)背或大腿內(nèi)側(cè)的皮膚。操作時(shí)，常規(guī)消毒注管。此法可采血0.81.2ml。swordzjsh 腫瘤造模實(shí)驗(yàn)中的一點(diǎn)心得：動(dòng)物選擇：KM小鼠，裸鼠，C57等均可作為，但是個(gè)人認(rèn)為KM能做出來(lái)最好

49、，畢竟比較有普遍性，還是正常生理狀態(tài)的健康動(dòng)物，比較有說(shuō)服力，還便宜， 裸鼠或者其他特定品種，比較適合特定的瘤株瘤株類型： H22 S180; EAC拿關(guān)于腫瘤細(xì)胞活力的問(wèn)題：一般買回來(lái)的瘤株，需要經(jīng)過(guò)復(fù)蘇過(guò)程，很多人復(fù)蘇以后就直接給動(dòng)物接種了，或者傳一代以后就開(kāi)始實(shí)驗(yàn)了，一般這個(gè)時(shí)候腫瘤細(xì)胞活力往往是不夠的，很難在短時(shí)間內(nèi)長(zhǎng)到規(guī)定重量，所以建議至少在動(dòng)物體內(nèi)傳2 代， 讓腫瘤細(xì)胞活力充分體現(xiàn)以后再開(kāi)始用于實(shí)驗(yàn)。關(guān)于接種部位的問(wèn)題：以小鼠為例一般可以選擇腋下或者后肢，有的文章說(shuō)是背部接種，但是背部血管不發(fā)達(dá)，營(yíng)養(yǎng)不夠，一般不建議采用。接種一般采用皮下注射，針頭我喜歡沿皮膚水平進(jìn)入，然后挑起表皮

50、，注射，接種后3 天我開(kāi)始給藥。給藥時(shí)間：一般從開(kāi)始造模起2 周內(nèi)我就會(huì)處理動(dòng)物了，因?yàn)槟[瘤如果擴(kuò)散后會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物的大量死亡，畢竟是腫瘤啊，動(dòng)物大量死亡的時(shí)間也相對(duì)集中，也許前一天還好，過(guò)一晚上就死掉不少，那個(gè)時(shí)候你哭都找不到墳頭，只要腫瘤差不多夠重了就處理吧。關(guān)于進(jìn)食水的問(wèn)題：別個(gè)都要死掉了，就別吝嗇了，想吃就吃，想喝就喝吧。關(guān)于模型對(duì)照組的問(wèn)題：我已經(jīng)在別的帖子里面強(qiáng)調(diào)過(guò)了，這次再?gòu)?qiáng)調(diào)一下，接種以后一定要每天去騷擾它們一下，我有次試驗(yàn)偷懶，模型組沒(méi)有管他們，結(jié)果模型組的腫瘤最后比給藥組還小，都只有綠豆大，導(dǎo)致試驗(yàn)失敗，郁悶死，后來(lái)重做的時(shí)候每天堅(jiān)持給模型組生理鹽水，結(jié)果腫瘤瘋長(zhǎng)。說(shuō)起來(lái)很奇怪

51、，但是這個(gè)是事實(shí)，以后我再?zèng)]有偷懶過(guò)，每次都成功復(fù)制出了模型。關(guān)于腫瘤重量的問(wèn)題：模型組腫瘤重量應(yīng)該不低于0。5g,我不記得在哪本書上看到的了，反正是有個(gè)規(guī)定的剝瘤zhangweilcb :腋窩的腫瘤長(zhǎng)到第12天時(shí)，腫瘤在2.0g左右，我在剝瘤子時(shí)感覺(jué)比較困難，對(duì)于一個(gè)瘤子，在剝的前半段還是比較好剝的，但越往里越難剝，主要是瘤子在腋窩深處和小鼠的右肢長(zhǎng)到一塊，不容易區(qū)分，每次剝完后，在最里面總感覺(jué)還剩一點(diǎn)腫瘤在那里。而且， 經(jīng)常把血管剪破，導(dǎo)致血液流出。不知該如何處理。腫瘤細(xì)胞可否接種到小鼠腋窩偏下，或是接近腹部？我想這樣在剝瘤子時(shí)會(huì)輕松些，請(qǐng)指教。swordzjsh： 接種的時(shí)候要精確控制接種在皮下，靠皮內(nèi)會(huì)與皮膚強(qiáng)烈粘連，靠肌肉會(huì)與肌肉強(qiáng)烈粘連，而且不要太靠腋窩里面，可以往尾部靠一些，多接幾次體會(huì)一下吧。另外也可