葡萄球菌屬的常規(guī)鑒定標準操作程序

1、葡萄球菌屬的常規(guī)鑒定標準操作程序1概述葡萄球菌屬是一類觸媒試驗陽性的革蘭陽性球菌，包括金黃色葡萄球菌，表 面葡萄球菌、腐生葡萄球菌等32個種。是臨床最常見的化膿性球菌，廣泛分布 于自然界中，在人體表面鼻、咽、腸道也經(jīng)常存在。2形態(tài)與染色革蘭陽性球菌，直徑仙 m成單、雙、短鏈或不規(guī)則狀排列。在液體培養(yǎng) 基濃汁標本中，往往排列成雙或短鏈狀多數(shù)有鞭毛。3培養(yǎng)特性金黃色葡萄球菌在血瓊脂平板上典型菌落為金黃色，周圍有明顯的透明（B） 溶血環(huán)，部分菌落呈橙色，在高鹽甘露醇平板上呈橙色菌落。表皮葡萄球菌等 其他葡萄球菌在血瓊脂平板上菌落為白色或檸檬色，不溶血。4生化反應(yīng)觸酶試驗陽性，多數(shù)能分解葡萄糖、麥財糖

2、、蔗糖和甘露醇。不分解棉籽 糖和水楊甘，液化明膠，血漿凝固酶和DNA酶實驗分陽性。5鑒別要點本菌屬特征：觸酶實驗陽性，革蘭陽性球菌，葡萄狀排列，菌落中等大小，中 等干燥。與微球菌屬的鑒別：觸酶實驗都為陽性，但O/ F試驗葡萄球菌屬為發(fā)酵型， 而微球菌為氧化型或無反應(yīng)，而且菌體較葡萄菌屬更大，排列呈四聯(lián)狀為主。與鏈球菌屬的鑒別：葡萄球菌屬觸酶試驗都為陽性，而鏈球菌為陰性，O/ F 試驗葡萄球菌屬為發(fā)酵型而鏈球菌為氧化型。凝固酶陽性葡萄球菌的鑒別見下表。結(jié)合型凝 游離型凝鳥氨酸脫菌名PYP試驗 DNA試驗 VP試驗固 酶 試 驗固 酶 試 驗竣酶實驗金黃色葡萄球菌+-+-中間型葡萄球菌-+-施氏葡

3、萄球菌+-+-路鄧葡萄球菌+-+-+注：“+”為90%以上菌株為陽性，”-”為90%以上菌株為陽性凝固酶陽性葡萄球菌的鑒別見下表叱咯烷酮芳基新生霉素耐藥多黏菌素B耐菌名露醇蔗糖凝固因子月尿酶甘(50 g)酰胺酶藥300U紙片(PYR)表面匍萄球菌 一一+ 一 +腐生葡萄球菌 一一一+V+溶血葡萄球菌+一一V+一一人型葡萄球菌一一+一+一一華納葡萄球菌一一+V+一一模仿葡萄球菌+一+一一頭狀葡萄球菌一一V+一一耳葡萄球菌V一一一V一一施氏葡萄球菌+一一一一一路鄧葡萄球菌+VV+一V注：" +"為90%以上菌株為陽性，“一”為90%以上菌株為陰性。6細菌鑒定與藥物敏感試驗取平板

4、上菌落直接涂片、革蘭染色并鏡檢，葡萄球菌為革蘭陽性球菌。呈單個、 成雙或葡萄狀排列，菌體呈圓形。在血瓊脂平板上，成圓形、凸起、邊緣整齊、表面光滑、濕潤德不透明菌落， 可產(chǎn)生脂溶性色素，在血瓊脂平板上部分葡萄球菌表現(xiàn)為B溶血。觸酶試驗（3%過氧化氫試驗）陽性。發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸。血漿凝固酶試驗（用混合德人血漿）。6.4.1 試管法：檢測分泌型凝固酶：取1 : 4枸檬酸鈉抗凝血漿，加入35個菌 落，35c培養(yǎng)箱46小時，觀察血漿有無凝固發(fā)生，凝固者為陽性，若陰性， 繼續(xù)觀察到24小時，不凝固者為陰性，試驗應(yīng)同時作陰性、陽性對照。6.4.2 玻片法：檢測結(jié)合凝固酶，但要注意假陽性和假陰性的出現(xiàn)。取純化后

5、的單個菌落，用V4ek2 系統(tǒng)GPS藥敏卡進行細菌鑒定和藥敏試驗， 如有必要加入做補充試驗。耐苯睡西林的金黃色葡萄球菌為MRSA耐苯睡西林的凝固酶陰性葡萄球菌為 MRSCN也可選頭 報西丁來檢測MRSA和MRSCN7檢驗結(jié)果分析與報告金黃色葡萄球菌在任何標本中分離出都要及時鑒定報告，輸液管、人工植 入組織分離的表皮葡萄球菌和尿液中的腐生葡萄球菌視為病原菌；凝固酶陰性 感染鑒定到種；注意MRS的報告。根據(jù)NCCLS標準，如果該菌B -內(nèi)酰胺酶陽性， 則應(yīng)報告該菌對所有的青霉素類、大多數(shù)一代頭抱菌素耐藥，治療時建議臨床 醫(yī)師選擇含酶抑制的復(fù)合抗生素或?qū)υ撁阜€(wěn)定的藥物；如該菌MRS陽性，則應(yīng) 報告該菌對所有B -內(nèi)酰胺酶類抗生素（包括含抑酶劑復(fù)合劑）耐藥，要注意其 他藥物的多重耐藥性。8臨床意義葡萄球菌屬在自然界分布很廣，大部分無致病性。金黃色葡萄球菌是最重 要的治病性葡萄球菌，以金黃色葡萄球菌代表的致病性葡萄球菌寄人類化膿性 感染中最重要的病原菌，能引起多組織、多系統(tǒng)尤其是深部組織的化膿性感染， 另外還可以引起心內(nèi)膜炎、敗血癥