雞傳染性支氣管炎研究進(jìn)展

1、收稿日期：2011-12-04中圖分類(lèi)號(hào)：S858.31文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1673-1085（201201-0045-06雞傳染性支氣管炎研究進(jìn)展劉瑞生，呂永鋒,王必慧（甘肅省畜牧獸醫(yī)研究所，平?jīng)?44000傳染性支氣管炎（Infectious Brochitis，簡(jiǎn)稱(chēng)舊是由傳染性支氣管炎病毒（IBV引起雞的一種急性、高度接觸性傳染病，主要 危害雞呼吸和泌尿生殖道，感染雞可由于呼吸道或腎臟病變而引起死亡。耐過(guò)雞生 產(chǎn)性能和飼料報(bào)酬降低，極易繼發(fā)細(xì)菌感染，因此對(duì)本病的研究具有重要意義。本病 最早由Schalk于1930年在美國(guó)北科他州發(fā)現(xiàn)，隨后在世界各地相繼發(fā)現(xiàn)，自1982年 以來(lái)，腎型傳

2、染性支氣管炎在我國(guó)廣泛流行，目前仍然是威脅集約化養(yǎng)雞場(chǎng)的主要疫 病之一，即使在免疫雞群中也時(shí)有發(fā)生。1病原學(xué)IBV屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬，具有囊膜，直徑90200nm呈不規(guī)則形或圓形, 表面有長(zhǎng)20nm排列整齊的桿狀纖突，似花冠狀?；蚪M為單股正鏈 RNA，全長(zhǎng)約27kb。其病原血清型眾多，同毒株之間又有組織親嗜性的差異，表現(xiàn)為呼吸型、腎 型、腸型、腺胃型等?；瘜W(xué)成分分析發(fā)現(xiàn)，IBV的主要結(jié)構(gòu)蛋白有3種，纖突蛋白（S 蛋白、膜基質(zhì)蛋白（M蛋白和核衣殼蛋白（N蛋白,3種結(jié)構(gòu)蛋白分子摩爾比為1 ： 6 ： 15。M蛋白形成抗原決定蛋性能的影響J.江西畜牧獸醫(yī)雜志，2002,4:25.18McIn

3、tosh J I,Slinger S J,Sibbald I R,et al.Theeffects of three physical forms of wheat on the weight gains and feed efficiencies of pullets from batching to fifteen weeks of age J.Poultry Science,1962,41:438-444.19Umar Faruk M,Bouvarel I,Meme N.Sequential feeding using whole wheat and a separate protein

4、 -mineral concentrate improved feed efficiency in laying hensJ.Poultry Science,2010,89:785-796.20Amerah A M,Ravindran V,Lentle R G,et al.Influenceof particle size on the performance,digest characteristics and energy utilisation of broilers fed maize and wheat based diets J.Proceedings of the Austral

5、ian Poultry Science Symposium,2007(19:89-92.21宋凱,單安山.不同小麥日糧對(duì)肉仔雞肉質(zhì)、脂肪酸合成酶mRNA與脂蛋白脂肪酶mRNA表達(dá)的影響J.動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2008,20(1:69-74.22呂明斌，燕磊，李國(guó)平等.日糧中添加整粒小麥對(duì)肉雞生產(chǎn)性能、胴體指標(biāo)和消化器官的影響J.中國(guó)家禽,2009,31(6:16-19.23陳朝江，侯水生，高玉鵬.日糧纖維對(duì)鵝消化生理功能的影響J.飼料博覽,2005,3:33-34.24李杰，李凌.家禽飼料代謝能的研究 V日糧和小麥萩對(duì)雞和水禽彳t謝能的比較J.東北農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，1984,3:91-95.25王瑞曉，鄭

6、誠(chéng).對(duì)幾種飼料原料在鵝消化道排空時(shí)問(wèn)的測(cè)定J.中國(guó)家禽,2001,2:12.26周秀麗.日糧中苜蓿、黑麥草和小麥萩含量對(duì)仔鵝生產(chǎn)性能和消化生理影響的研究D.碩士畢業(yè)論文,揚(yáng)州:揚(yáng)州大學(xué)，2004.27盛東峰.鵝代謝能生物學(xué)評(píng)定方法的研究D.碩士畢業(yè)論文,揚(yáng)州:揚(yáng)州大學(xué),2005.簇,N蛋白是病毒內(nèi)部核衣殼的組成蛋白，S蛋白構(gòu)成了冠狀病毒的最表層纖狀 突起。舊V經(jīng)56 C 15min及45c 90min滅活,對(duì)乙醴和氯仿極敏感，能被20%的乙醴 及5%的氯仿滅活，0.1%去氧膽酸鈉4 c作用18h能使舊V完全失去感染性。1%煤 酚、1/10000高鈕酸鉀、70%酒精和1%福爾馬林均可在室溫下幾分

7、鐘內(nèi)殺死病毒。 不同毒株在pH3時(shí)穩(wěn)定性不同。2流行病學(xué)本病在世界許多國(guó)家均有發(fā)生，易感動(dòng)物主要是雞，不同品種和品系的雞對(duì)本病 的敏感性不同，但是所有年齡的雞都容易感染，尤其326周齡的雞最易感染。一年四 季均可發(fā)生，分布廣，傳播速度快，發(fā)病率和死亡率高，雛雞死亡率約為15%30%。傳 播途徑主要為呼吸道和消化道傳染，傳染源為病雞和帶毒雞，從病雞和帶毒雞呼吸 道、糞便排出的病毒經(jīng)空氣、飛沫傳染給易感雞 ，也可以通過(guò)飼養(yǎng)人員、遭受污染 的飼料、飲水及用具等經(jīng)消化道感染本病，通常在48h內(nèi)出現(xiàn)癥狀。3臨床癥狀及病 理變化發(fā)病后很快出現(xiàn)幼雞流鼻涕，發(fā)出氣管啰音，頻繁咳嗽，打噴嚏，精神沉郁，怕冷擠 堆

8、，飲水增加，呼吸道癥狀持續(xù)14d后消失，雞群不見(jiàn)異常表現(xiàn)。隨后雞群突然發(fā) 病,23d內(nèi)逐漸加劇，病雞擠堆厭食，排白色稀糞，體重明顯減輕，雞冠和皮膚變暗，肛門(mén)周?chē)碀M(mǎn)白色水樣糞便，感染幼雞出現(xiàn)死亡，產(chǎn)蛋雞群產(chǎn)蛋量下降，部分耐過(guò)雞可逐漸 康復(fù)。前期剖檢病死雞可以看到氣管和喉頭內(nèi)有多量粘液，氣管粘膜充血，肺臟充血，氣 囊渾濁。后期病變主要在腎臟，病雞腎臟月中大、蒼白，腎小管和輸尿管擴(kuò)張，里面充滿(mǎn) 大量白色尿酸鹽，整個(gè)腎臟外表有許多花紋，呈檳榔樣。切開(kāi)腎臟有多量白色尿酸鹽 流出。嚴(yán)重病例在腹膜、心包膜和胸膜上也有白色尿酸鹽沉積，母雞卵巢發(fā)生退行 性變化，腹腔內(nèi)有游離的卵黃樣物質(zhì)，卵巢充血或出血，有的呈

9、紫色。4診斷4.1 血清學(xué)診斷技術(shù)自發(fā)現(xiàn) 舊至90年代初，主要采用血清中和試驗(yàn)（雞胚氣管環(huán) 培養(yǎng)觀測(cè)纖毛運(yùn)動(dòng)情況、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、血凝和血凝抑制試驗(yàn)等常規(guī)血清學(xué)技術(shù)對(duì) 舊進(jìn)行診斷。血清中和試驗(yàn)可用于檢測(cè)舊V抗體、抗原及分型，雖然方法簡(jiǎn)便易行,但花費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)。瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)用于檢測(cè)舊V抗體操作簡(jiǎn)便，但敏感度不高，不適用于免疫后抗體的檢測(cè)。血凝和血凝抑制試驗(yàn)可用于檢測(cè)舊V抗原及抗體，但用不同毒株制成的HI抗原檢測(cè)抗體時(shí)，抗體水平參差不齊。反向間接血凝試驗(yàn)可用于檢測(cè) 舊V抗原，但可靠性不及中和試驗(yàn)。王樂(lè)元（1993首次成功的建立了檢測(cè) 舊V抗原的 間接Dot-ELISA,對(duì)舊V抗原的最低檢出量為1.36

10、g/m用以作為疫病早期診斷的依 據(jù)和進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查1。王紅寧（1996在國(guó)內(nèi)首先采用對(duì)流免疫電泳技術(shù)對(duì)128份人工感染雞樣品進(jìn)行檢測(cè)，該方法簡(jiǎn)便，具有較高的敏感性和準(zhǔn)確性，生產(chǎn)場(chǎng)可用此 方法進(jìn)行舊的免疫檢測(cè)。劉興友等（1997建立了胰酶分散抗原間接熒光抗體法，該 方法具有良好的特異性，檢測(cè)程序簡(jiǎn)單，檢測(cè)抗原時(shí)間短，適合于制備大批量抗原用于 臨床檢測(cè)或抗體監(jiān)測(cè)。王宏俊等（2003將舊V N基因在大腸桿菌中表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物N 蛋白作為ELISA診斷抗原，可用于 舊V抗體檢測(cè)2。4.2 分子生物學(xué)診斷技術(shù)4.2.1 反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCRRT-PCR技術(shù)用于 舊診斷使診斷技術(shù)提 高到基因

11、水平，具有簡(jiǎn)便、快速和敏感性、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。Jackwook（1992提取了分屬于5個(gè)血清型的8株舊V的RNA,將其反轉(zhuǎn)錄成DNA后，用PCR擴(kuò)增,然后用一生物素標(biāo)記的探針進(jìn)行斑點(diǎn)雜交，結(jié)果這8株病毒均被檢出。王林川等（1992率先 在我國(guó)采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)了廣東分離的 舊V。黃勇等（2000對(duì)四川分離的多株 舊V S1基因和N基因用RT-PCR進(jìn)行了擴(kuò)增，結(jié)果證明RT-PCR檢測(cè)方法具有敏 感、特異、快速等特點(diǎn)，適用于不同來(lái)源及不同血清型 舊V的檢測(cè)。胡建和等（2003 應(yīng)用設(shè)計(jì)合成的RT-PCR技術(shù)檢測(cè)雞傳染性支氣管炎，特異性強(qiáng),成本低，檢出率高，可 有效用于雞傳染性支氣管炎的早期

12、檢測(cè)和流行病學(xué)研究3。程曉霞等（2009以舊V疫苗株為模板，建立了檢測(cè)舊V的RT-PCR方法，對(duì)舊V的檢測(cè)敏感性高、特異性強(qiáng) 可用于舊V感染的診斷和流行病學(xué)調(diào)查4。劉金朋等（2011根據(jù)雞傳染性支氣管炎病毒（IBVN基因序列（FJ767920利用引物軟件Premier5.0設(shè)計(jì)并合成了 1對(duì)特 異引物，通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增條件的優(yōu)化，建立了一種快速檢測(cè) 舊V的RT-PCR方法，應(yīng) 用該方法成功地從 舊V M41和河南株HN99中擴(kuò)增出318bp的目的片段，而傳染性 喉氣管炎病毒、新城疫病毒及馬立克病毒基因組均未擴(kuò)增出相應(yīng)的片段；將回收的RT-PCR產(chǎn)物克隆到pGEM-T Easy載體后測(cè)序，進(jìn)

13、一步證實(shí)RT-PCR檢測(cè)方法的特 異性，對(duì)IBV的最低檢出量為0.6pg的cDNA;經(jīng)初步應(yīng)用表明，該方法的建立為 舊V 的早期診斷和臨床檢測(cè)奠定基礎(chǔ)5。張琳等（2011根據(jù)禽呼腸孤病毒（ARV、禽流 感病毒（AIV、新城疫病毒（NDV和雞傳染性支氣管炎病毒（IBV的基因保守區(qū)設(shè)計(jì) 了 4對(duì)特異性引物，建立了針對(duì)四種病毒的多重 PCR檢測(cè)體系，并對(duì)該體系進(jìn)行了條 件優(yōu)化及特異性、敏感性試驗(yàn)，該體系擴(kuò)增的四種病毒基因片斷大小分別為199bp（ARV、264bp（AIV、362bp（NDV和459bp（IBV,且特異性、敏感性良好，能夠檢出 1pg AIV和10Pg ARV、NDV、舊V的RNA,

14、臨床應(yīng)用結(jié)果證明，該體系具有很高的 實(shí)用價(jià)值和應(yīng)用前景6。4.2.2 核酸探針技術(shù)核酸探針技術(shù)具有很高的敏感性。Kwon（1993將此法同電鏡（EM觀察病毒方法進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)此法敏感度比EM高。劉蘋(píng)等（1997用地高辛 標(biāo)記舊V標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株M41的S1基因，將標(biāo)記的S1基因探針與12株已知 舊V的 RNA提取物進(jìn)行斑點(diǎn)雜交，結(jié)果該探針與12株已知舊V毒株均成陽(yáng)性反應(yīng)，而與 NDV、IBDV、ILTV、正常胚液、蒸儲(chǔ)水對(duì)照均成陰性。該探針的檢測(cè)靈敏度為 9.77fg,雜交靈敏度為24.41pg,具有很高的靈敏性。莫?jiǎng)偬m等（2007用該方法檢測(cè)了38份疑似 舊V臨床病料,31份陽(yáng)性，而用RT-PC

15、R法擴(kuò)增 舊VS2基因確診為陽(yáng)性的 只有29份;對(duì)人工接種舊V H52弱毒苗雞咽喉和肛門(mén)拭子32份進(jìn)行檢測(cè)，檢出15份陽(yáng)性，表明利用DIG探針檢 測(cè)舊V的RT-PCR產(chǎn)物，特異性和敏感性強(qiáng)，可重復(fù),能克服RT-PCR非特異性反應(yīng)和 探針Northern雜交的不穩(wěn)定性。4.2.3 限制性酶切片斷長(zhǎng)度多態(tài)性分析（RFLP這是一種通過(guò)病毒基因限制性酶 切圖譜進(jìn)行分型的方法，該法新穎，重復(fù)性好，可用于舊V從分子水平上進(jìn)行了分型。 Kown等（1993對(duì)舊V S1基因的RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，經(jīng)限制性?xún)?nèi)切酶消化后電泳，根 據(jù)電泳圖譜對(duì)25株舊V進(jìn)行了分類(lèi)，結(jié)果得到了與中和試驗(yàn)相一致的結(jié)論。黃勇等 （199

16、6、王林川等（1997、磨美蘭等（2001、Jackwood（1997等人均用限制性酶切片段 長(zhǎng)度多態(tài)性分析對(duì)舊V進(jìn)行了分型研究。4.2.4 寡核甘酸指紋圖譜分析主要用于 舊V的流行病學(xué)調(diào)查，可區(qū)分新的變異株 是由當(dāng)?shù)刂曜儺惗鴣?lái)，還是從外地傳入的。盡管該法重復(fù)性好、靈敏，可以區(qū)分同一 血清型不同突變株之間的差異。但該法只有用于基因序列同源率在95%以上時(shí)才有價(jià)值。Butcher等（1990利用此法對(duì)DPI毒株10代、100代雞胚傳代物、T株、 M41株進(jìn)行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這4株圖譜都有差別。該法一般應(yīng)與其它方法相結(jié)合 來(lái)進(jìn)行舊V的診斷。5防治技術(shù)傳染性支氣管炎病毒血清型眾多，新的變異株不斷出現(xiàn)

17、，不同血清型之間沒(méi)有或 很少有交叉保護(hù)，而且病毒對(duì)器官的親嗜性不斷變化，致使臨床癥狀和病理變化完全 不同，給傳染性支氣管炎的防治帶來(lái)了很大困難。盡管現(xiàn)在預(yù)防雞傳染性支氣管炎 的疫苗很多，但免疫失敗現(xiàn)象經(jīng)常發(fā)生，給養(yǎng)殖戶(hù)造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失。5.1 疫苗及其研究進(jìn)展5.1.1 弱毒疫苗以呼吸型代表株 Massachusetts (Mt舊V致弱的弱毒疫苗，是50 年代以來(lái)開(kāi)發(fā)應(yīng)用的血清型，該血清型的H52、H120和Ma5等弱毒疫苗被絕大多數(shù)國(guó)家所采用；其次是Conn株強(qiáng)毒致弱的 疫苗株?；钜呙缒苡行Т碳C(jī)體的免疫系統(tǒng)，激發(fā)體液免疫和細(xì)胞免疫，使用方便，生 產(chǎn)成本低。但是多株、多種弱毒疫苗的混合使

18、用可能因基因重組而出現(xiàn)新的變異毒 株甚至強(qiáng)毒株，在疫苗使用過(guò)程中可能存在毒力返強(qiáng)問(wèn)題。這使得致弱毒疫苗在理 論和實(shí)踐上都不可能從根本上控制 舊的流行。秦玉明等(2009應(yīng)用舊H52株與不 同耐熱保護(hù)劑配方和凍干曲線(xiàn)進(jìn)行篩選試制耐熱活疫苗，經(jīng)過(guò)37c放置10d的每羽份病毒含量下降0.60.8個(gè)滴度，每羽份病毒含量達(dá)104.7105.1EID50;28c保存24個(gè)月疫苗每羽份病毒含量下降 0.40.6個(gè)滴度，每羽份 病毒達(dá)104.1 104.3EID50疫苗28c保存24個(gè)月后效檢抗體水平達(dá)到1 ： 161 ： 32;免疫21日齡SPF雞,6個(gè)月后血清中和抗體效價(jià)達(dá)到1 ： 321 ： 64;田

19、問(wèn)試驗(yàn)表明臨床觀察無(wú)不良反應(yīng)，安全有效；特異性試驗(yàn)表明耐熱活疫苗抗原性不變， 耐熱保護(hù)劑生物學(xué)和理化特性表明保護(hù)劑安全、穩(wěn)定 ，室溫保存期達(dá)3個(gè)月7。5.1.2 滅活疫苗Gough等1997年報(bào)道了用油乳劑滅活苗使 舊得到有效控制，但是由 于舊血清型的多樣性，單價(jià)滅活苗并不能阻止 舊V的暴發(fā)。Finney(1990等研究表 明舊二價(jià)苗能刺激良好的抗體反應(yīng)。王紅寧等 (1999對(duì)我國(guó)舊的流行病學(xué)調(diào)查表 明,Mass型占19.7%、T型占21.1%、Gray型占9.3%、Hotie型占3.9%、變異株占 43.4%提出了用不同類(lèi)型多價(jià)滅活疫苗預(yù)防本病更為有效的科學(xué)依據(jù)。王紅寧等 (1994在國(guó)內(nèi)率

20、先試制出(呼吸型、腎型多價(jià)油乳劑滅活疫苗，經(jīng)區(qū)域試驗(yàn)證明 該疫 苗對(duì)雞安全無(wú)副作用，并能有效的預(yù)防IB。滅活疫苗的不足之處是使用劑量大，需要 配合佐劑,制備比較復(fù)雜，因而成本較高。5.1.3 基因工程苗采用核酸重組方法研制新型、高效、安全的 舊V基因工程疫 苗是近年來(lái) 舊研究的一個(gè)重要方向。宋延福等將 舊V的主要免疫原基因S1克隆 到形成多角體的桿狀病毒表達(dá)載體；黃亞?wèn)|等構(gòu)健了含 舊V GD6株S1基因的大腸桿菌重組表達(dá)載體pET-S1。已有的研究表明，幾乎所有的亞單位表達(dá)產(chǎn)物均出現(xiàn) N- 糖基化不完全，S1亞單位疫苗必須經(jīng)34次反復(fù)加強(qiáng)免疫方可形成確實(shí)的免疫保護(hù), 因此舊基因工程疫苗的實(shí)用化

21、還有待進(jìn)一步研究。5.1.4 舊活載體疫苗Binns等（1986利用雞痘病毒做載體研制出了 舊V活載體疫 苗。Tomley用Beaudette株纖突蛋白基因和痘病毒 WR株重組，得到了能產(chǎn)生含有 S1和S2亞基的糖基化的180kd的多肽前體的重組病毒。目前全球已有多個(gè)研究單 位在致力于適合舊免疫的疫苗載體和活載體疫苗的研究，但考慮到舊V S1蛋白具 有很高的突變率，因此活載體疫苗的保護(hù)范圍還值得進(jìn)一步研究。石星明等（2009將表達(dá)舊V S1基因和雞干擾素-丫基因的重組雞痘病毒（FPV-IFNyS聯(lián)種4周齡SPF 雞,重組疫苗接種1周后,免疫雞產(chǎn)生抗舊V的抗體，而且外周血中CD4+和CD8+T

22、淋巴細(xì)胞的含量略高于非免疫對(duì)照組；免疫3周后攻毒，異源強(qiáng)毒株攻毒的免疫組 CD4+T淋巴細(xì)胞呈下降趨勢(shì)，并且該組低水平CD4+的狀態(tài)一直持續(xù)到試驗(yàn)結(jié)束，而 其他組CD4+T淋巴細(xì)胞均迅速上升，峰值達(dá)到14.5%;同源強(qiáng)毒株攻毒的免疫組 CD8+T淋巴細(xì)胞呈高水平的表達(dá)，而其他組攻毒后均無(wú)明顯變化；保護(hù)率結(jié)果顯示， 同源強(qiáng)毒株攻毒免疫組的發(fā)病率和死亡率為21.43%和0%,與其他各組相比均有顯著差異;另外同源強(qiáng)毒株攻毒的免疫組病理?yè)p傷與異源強(qiáng)毒株攻毒的試驗(yàn)組相比明 顯減輕，其排毒時(shí)間和排毒量也均有所減少；強(qiáng)毒攻毒后所有試驗(yàn)組體重?zé)o顯著差 異。說(shuō)明重組疫苗能對(duì)同源強(qiáng)毒株產(chǎn)生較好的免疫保護(hù)，但不能對(duì)

23、遺傳關(guān)系較遠(yuǎn)的強(qiáng)毒株產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答8。5.1.5 核酸疫苗DNA疫苗能夠同時(shí)激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫，在安全 性和有效性上具有突出的優(yōu)點(diǎn)。步志高等（1998以M41地方流行株 舊V S1基因構(gòu) 建了 DNA免疫表達(dá)質(zhì)粒，并對(duì)其免疫原性進(jìn)行了初步分析。結(jié)果表明，該表達(dá)質(zhì)粒 可同時(shí)誘導(dǎo)機(jī)體形成針對(duì)舊V的細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)，有希望取代普遍采用的 弱毒疫苗應(yīng)用于我國(guó) 舊的免疫預(yù)防。陳洪巖等（1999、劉思國(guó)等（2001分別選用 IBV的S1基因和N基因構(gòu)建核酸疫苗，結(jié)果表明質(zhì)粒DNA免疫雞攻毒后的保護(hù)率 為 40%。5.1.6 轉(zhuǎn)基因植物疫苗轉(zhuǎn)基因植物疫苗是 Mason于1992年提出的

24、，該技術(shù)是利 用分子生物學(xué)技術(shù)把重組的疫苗基因?qū)胫参?，并使植物能夠大量表達(dá)重組蛋白的 一類(lèi)生物技術(shù)。由于其應(yīng)用前景可觀，已引起免疫學(xué)家、分子生物學(xué)家和植物學(xué)家 的極大興趣與關(guān)注利用該技術(shù)國(guó)外已獲得成功的有乙型肝炎表面抗原、流感病毒 血凝素、艾滋病病毒抗原、口蹄疫病毒抗原等10多種疫苗。王紅寧等（2003通過(guò)對(duì)RT-PCR取得舊V S1基因片斷，已將其導(dǎo)入玉米表達(dá)載體進(jìn)行表達(dá)工作9。5.2免疫接種5.2.1 疫苗的選擇和配合對(duì)于曾經(jīng)發(fā)生 舊的地方，國(guó)內(nèi)外主要采用疫苗免疫接種 的方法來(lái)預(yù)防舊。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為弱毒疫苗比滅活疫苗具有更好的免疫效果也有學(xué)者認(rèn)為弱毒疫苗在雞群中的周期性感染有毒力返強(qiáng)的潛

25、在危險(xiǎn)。實(shí)際生產(chǎn)中，由于舊血清型眾多，單一的疫苗只能對(duì)同型毒株產(chǎn)生保護(hù)作用 對(duì)不同型毒株往往只能產(chǎn)生部分保護(hù)或不保護(hù)，所以在H52、H120等弱毒疫苗免疫后，也可能發(fā)生既是抗體水平很高卻因流行毒株的感染 而導(dǎo)致發(fā)病的現(xiàn)象。J.K.Cook等（1984研究證實(shí)體液免疫和細(xì)胞免疫在抵抗 舊V感 染中幾乎占有同等重要的地位。王紅寧等（1996認(rèn)為采用弱毒疫苗H120滴鼻同時(shí)與舊多價(jià)滅活苗注射相結(jié)合能有效提高呼吸道細(xì)胞免疫和抗體水平,達(dá)到良好的預(yù)防效果。張安國(guó)等（2003用腺胃型傳支（GIBJB9702株和腎型傳支 （KIBSN9301株為制苗病毒株，分別經(jīng)雞胚繁殖后甲醛滅活，加入油佐劑中乳化制成 G

26、IB-KIB二價(jià)油乳劑滅活苗，測(cè)定結(jié)果表明：疫苗安全穩(wěn)定，易于保存，用于雞群免疫 注射后15d產(chǎn)生免疫,21d抗體達(dá)峰值,40d對(duì)相應(yīng)強(qiáng)毒攻擊的保護(hù)率為 93.3%100%10。5.2.2 免疫程序王紅寧等（1997結(jié)合我國(guó)目前蛋用種雞場(chǎng) 舊發(fā)生現(xiàn)狀，經(jīng)過(guò)區(qū)域 試驗(yàn)，建議舊免疫程序如下：34或712日齡，雞傳染性支氣管炎H120滴鼻,同時(shí)用舊多價(jià)油苗注射；3235日齡，傳支H120滴鼻,同時(shí)用舊多價(jià)油苗1頭份注射；100140日齡，商品蛋雞用ND-IB（多價(jià)二 聯(lián)苗加強(qiáng)免疫種雞用ND-IBD-IB（多價(jià)三聯(lián)苗加強(qiáng)免疫；220280日齡種雞加強(qiáng)免疫 用ND-IBD-IB（多價(jià)三聯(lián)苗。當(dāng) 舊呈暴發(fā)

27、流行，采取緊急接種時(shí)選用相應(yīng)血清型的 多價(jià)油乳劑滅活疫苗緊急接種效果較好，而不宜采用毒力較強(qiáng)的弱毒疫苗如H52生產(chǎn)中采用相應(yīng)的單苗進(jìn)行多次免疫接種預(yù)防雞傳染病，不僅費(fèi)工費(fèi)時(shí)，頻繁免 疫接種還會(huì)引起雞的應(yīng)激反應(yīng)。聯(lián)苗免疫可以減少免疫接種次數(shù)，從而減輕雞群應(yīng)激反應(yīng)，節(jié)省人力，對(duì)于舊的預(yù)防具有重要的實(shí)際意義。為此，國(guó)外已研制出雞ND- IB-IBD三聯(lián)弱毒疫苗應(yīng)用于生產(chǎn)。近年來(lái)國(guó)內(nèi)也開(kāi)展了這方面的研究工作。劉文 惠等（1996在同一宿主細(xì)胞一一一雞全胚細(xì)胞上同步增殖培養(yǎng)了雞 ND、舊和舊D三株細(xì)胞弱毒，并研制成三 聯(lián)細(xì)胞弱毒疫苗11。楊峻等（1999用NDLa Sota株、雞 舊M41株接種雞胚，收

28、獲含 毒雞胚尿囊液；用舊DV接種3040日齡肉雞，發(fā)病后取囊組織制成含毒組織懸液，將 三種病毒液按一定比例混合，制備成三聯(lián)油乳劑滅活苗12。李大山等（2002將 NDLa Sota、IBH120和 舊DB87弱毒株經(jīng)適當(dāng)稀釋后等量混合，經(jīng)10日齡SPF雞胚 同胚接種聯(lián)合培養(yǎng)，收獲含毒雞胚液和胎兒混合制成 ND、IB、IBD三聯(lián)活疫苗 13。姜北宇等（2003研制成ND-IB-EDS76-AE四聯(lián)滅活疫苗，測(cè)定證明安全、無(wú)任 何副彳用，免疫1054d后產(chǎn)生免疫力，ND攻毒100%保護(hù)，免疫2128d后舊攻毒保 護(hù)率達(dá)80% 100%免疫后21d EDS76HI效價(jià)1:128,AER護(hù)率達(dá)80%1

29、00%。連 京華等（2005制備了雞新城疫、傳染性支氣管炎、減蛋綜合征和禽流感四聯(lián)油乳劑 滅活疫苗，試驗(yàn)結(jié)果表明：采用抗原濃縮技術(shù)制備的四聯(lián)苗抗體水平高，維持時(shí)間長(zhǎng)， 能夠有效地保護(hù)雞群14。王新衛(wèi)等（2008用自制的ND-IB二聯(lián)苗與相應(yīng)的ND、 舊單苗及不同來(lái)源的ND-IB二聯(lián)苗免疫雞群，結(jié)果自制ND-IB二聯(lián)苗與相應(yīng)的ND、舊單苗的免疫抗體水平相當(dāng)，且二聯(lián)苗中的2種成分彼此沒(méi)有干擾15。5.3治療中草藥能顯著增加病雞的體重，促進(jìn)免疫器官生長(zhǎng)發(fā)育，提高淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn) 化率和血清中和抗體效價(jià)，明顯改善傳染性支氣管炎感染雞細(xì)胞免疫和體液免疫功 能低下的狀態(tài)，具有提高機(jī)體抗病毒感染的作用，因此可以應(yīng)

30、用于 舊的防治。汪德剛 等（1997從8日齡開(kāi)始,在飼料中添加1.5%中藥 腎支方”黃苓、金錢(qián)草、魚(yú)腥草、 大青葉、桔梗、甘草、車(chē)前草、瞿麥等份混合組成飼喂雛雞，連用2周，可明顯降低雞腎型傳染性支氣管炎發(fā)病率和死亡率，并減輕該病對(duì)雞生殖機(jī)能的損害。畢玉霞 等（2006以0.5%、1%、1.5%、2%的不同比例在飼料中添加 麻杏石甘散”結(jié)果試驗(yàn) 組治愈率分別高出對(duì)照組16.00、18.75、24.3、24.5個(gè)百分點(diǎn)，差異極顯著（P<0.01，麻杏石甘散防治 舊效果 顯著16。劉玉芹等（2009對(duì)貫眾、黃苓等10種中藥及復(fù)方組合進(jìn)行了抗雞傳染性 支氣管炎病毒的篩選試驗(yàn)，應(yīng)用篩選出的中藥復(fù)方

31、制劑（由綜述家禽科學(xué)2012.1毒RT-PCR快速檢測(cè)方法的建立J.中國(guó)農(nóng)學(xué)通 報(bào)，2011 , （ 3 ） : 3-5.張琳，胡北俠，楊 少華，等.禽四種病毒多重診 斷技術(shù)的建立和應(yīng)用J.家畜生態(tài)學(xué)報(bào)，2011 , 32 （ 4 ）:黃苓、板藍(lán) 根、柴胡、魚(yú)腥草、貫眾、麻黃、杏仁、百部、桔梗、黃黃、甘草組成）對(duì) 其進(jìn)行預(yù)防和治療試驗(yàn)，除黃黃外，各單味中藥和復(fù)方組合對(duì)舊V均具有不同程度的直接滅活作用，最小有效濃度均達(dá) 到1/128以上；在接種舊V前2h以及接種舊V后6 71-74. 7 8秦玉明，王利永，朱良全，等. 雞傳染性支氣管炎耐熱活疫苗的研究J.中國(guó)家禽，2009 , (22 : 8-

32、10. 石星明，王玫，王云峰，等.雞傳染性支氣管炎重組雞痘病毒基因工 程疫苗對(duì)異源LTJ95 I株病毒攻擊的免疫保護(hù)J.中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué) 報(bào)，2009 , ( 3 ) : 24-26.王紅寧禽傳染性支氣管炎診斷與防治技術(shù) 研究進(jìn)展J.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2003 ( 8 ) : 36-38.張安國(guó)，左穎，劉 彥，等.雞傳染性支氣管炎腺胃型-腎型二價(jià)油乳劑苗的研究J動(dòng)物 科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué)，2003 ,( 5 ) : 12-14.劉文蕙，胡毓驥.雞新城疫、支氣管炎、法氏囊病三聯(lián)細(xì)胞弱毒疫苗的研制及應(yīng)用研究J.中國(guó) 畜禽傳染病，1996 ( 4 ) : 8-11.楊峻，邵華斌，黎秋華，等.雞新城 疫、支氣管炎

33、、法氏囊病三聯(lián)油乳劑滅活疫苗研制及其應(yīng)用J.中國(guó) 預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，1999 , (4 ) : 256-259.李大山，方紅梅，劉 洪斌，等.雞新 城疫、傳染性支氣管炎、傳染性法氏囊病三聯(lián)活疫苗的研究J.中 國(guó)獸藥雜志，2002 ,( 9 ) : 22-24.連京華，何葉峰，徐懷英，等.雞新城疫、傳染性支氣管炎、減蛋綜合征、禽流感四聯(lián)濃縮油乳劑滅 活疫苗的研制J.中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2005 , ( 3 ) : 24-27. 2h給藥， 黃苓、貫眾、板藍(lán)根、魚(yú)腥草及復(fù)方中藥均能明顯抑制IBV的繁 殖，最小有效濃度均達(dá)到1/256以上；人工感染防治試驗(yàn)顯示：治 療組和預(yù)防組所分離到的病毒毒力均低于感染組，復(fù)方中藥