植物體葉綠素熒光測定儀的原理與使用方法

1、植物體葉綠素熒光測定儀的原理與使用方法【實驗?zāi)康摹苛私饽壳霸诠夂献饔醚芯恐邢冗M的葉綠素熒光技術(shù)，了解便攜式葉綠素熒光儀測定 植物光合作用葉綠素熒光參數(shù)的基本原理和儀器的使用方法。老師演示和學(xué)生分組利用便攜式葉綠素熒光儀(PAM2100)測定實驗植物的葉綠素熒光基本參數(shù)(Fo, Fm, Fv/Fm, Fm , Fo, Yield, ETR, PAR, qP, qN 等)。了解熒光儀的廣泛應(yīng)用【實驗原理】 儀器介紹和工作原理葉綠素熒光(Chlorophyll Fluorescence)的產(chǎn)生傳統(tǒng)的光合作用測定是通過測量植物光合作用時CO2 的消耗或干物質(zhì)積累計算出來。葉綠素熒光分析技術(shù)通過測量葉綠

2、素熒光量準確獲得光合作用量及相關(guān)的植物 生長潛能數(shù)據(jù)。葉綠素熒光動力學(xué)技術(shù)在測定葉片光合作用過程中光系統(tǒng)對光能的吸收、傳遞、耗散、分配等方面具有獨特的作用，與表觀性”的氣體交換指標相比，葉綠素熒光參數(shù)更具有反映 內(nèi)在性”特點。本實驗以調(diào)制式葉綠素熒光儀PAM-2100 (WALZ )為例，測定植物葉綠素熒光主要參數(shù)。植物葉片的生長狀況不同，所處位置的不同，光照不同，葉綠素熒光參數(shù) 數(shù)值也會有所不同，所以不同葉片之間葉綠素熒光產(chǎn)量存在著一定的差異?！緦嶒瀮?nèi)容與步驟】一、儀器使用步驟講解1. 儀器安裝連接將光纖和主控單元和葉夾2030-8 相連接。光纖的一端必須通過位于前面板的三孔光纖連接器連接到

3、主控單元，光纖的另一端固定到葉夾 2030-B 上。同時，葉夾 2030-B 還應(yīng)通過 LEAF CLIP 插孔連接到主控單元。2. 開機按 POWER ON ”鍵打開內(nèi)置電腦后，綠色指示燈開始閃爍，說明儀器工作正常。隨后在主控單元的顯示器中會出現(xiàn)PAM-2100 的表示。從儀器啟動到進入主控單元界面大概要40 秒。3. PAM-2100 的鍵盤PAM-2100 主控單元上有 20 個按鍵，現(xiàn)分別簡要介紹主要按鍵的功能。Esc：退出菜單或報告文件Edit:打開報告文件Pulse：打開/停止固定時間間隔的飽和脈沖Fm：葉片暗適應(yīng)后打開飽和脈沖測量Fo、Fm 和 Fv/FmMenu :打開動力學(xué)窗

4、口的主菜單Shift:該鍵只有和其它鍵結(jié)合時才能起作用+ :增加選定區(qū)的數(shù)值(參數(shù))設(shè)置減少選定區(qū)的數(shù)值(參數(shù))設(shè)置Store：存儲記錄的動力學(xué)曲線Com :打開命令菜單:指針右移A:指針上移V:指針下移Act:打開光化光Yield :打開一個飽和脈沖以測定照光狀態(tài)的光系統(tǒng) II 有效量子產(chǎn)量 F/Fm 。4.開始測量(1)通過選擇合適的測量光強、增益和樣品與光纖的距離來調(diào)節(jié)Fo 在 200-400 mV 之間。 同時，為了避免人為誤差，得到最好的結(jié)果，建議通過檢查飽和脈沖時得到的熒光動力學(xué)變化曲線來設(shè)置合理的飽和脈沖強度和持續(xù)時間，通過按 Com 菜單的 Pulse kinetics 功能來

5、實現(xiàn)。(2)Fo、Fm 和 Fv/Fm 的獲得：可以通過按 shift + return 鍵調(diào)出菜單執(zhí)行 Fo-determination 來測定 Fo,也可以通 過按外接鍵盤的 Z”鍵來測量 Fo?？梢酝ㄟ^按 Fm”鍵或按外接鍵盤的 M”鍵來測量 Fm , Fv/Fm 也會自動獲得。(3)量子產(chǎn)量 Yield 的獲得：只需按 Yield ”鍵即可?；蛘邔⒅羔樢频?RUN ”處，激活 RUN 1 ”，只需按葉夾 2030-B 上的紅色遙控按鈕即可。5.數(shù)據(jù)輸出(1)將 RS-232 數(shù)據(jù)線和 PAM-2100 主控單元連接好(2)進入動力學(xué)窗口，按 Menu 鍵，進入 Data 子菜單，選擇

6、Transfer Files 并按回車鍵。(3)打開一個窗口選擇 RS-232 數(shù)據(jù)線的 Com-Port，選擇并激活 Com-Port 后，出現(xiàn)另一 個窗口，其中示出了 PAM-2100 中存儲的數(shù)據(jù)文件。雙擊該文件就可進行傳輸。6.關(guān)閉儀器按 Com鍵，會出現(xiàn)一個命令選擇菜單，通過按 V,選擇 Quit program ,并按回車 鍵即可關(guān)閉儀器。將光纖和葉夾 2030-B 卸下并整理好，放入熒光儀專用箱子中。7.儀器充電當 PAM-2100 電力不足時，需進行充電。關(guān)閉主機，連接充電器2120-N 對內(nèi)置鋰電池進行充電。8.注意事項禁止在開機的情況下連接外接電源！禁止過度彎曲光導(dǎo)纖維！二、植物葉片葉綠素熒光主要參數(shù)的測定(實驗報告)1 .葉片 Fo、Fm 和 Fv/Fm 的測定在校園內(nèi)，選取兩個樹種成熟葉片測定Fo、Fm 和 Fv/Fm，試比較不同植物之間的異同。2.葉片量子產(chǎn)量 Yield 的測定在校園內(nèi)，選取 2-3 種實驗植