作業(yè)指導(dǎo)書--醫(yī)療器械無菌檢測操作指引,直接接種法,薄膜過濾法

1、XXX文件褊虢XXXPage 1 of 8工作指引名稱:無菌檢測方法操作指引1適用范圍Scope適用于對產(chǎn)品及BI的無菌檢測及評估.2參考文件Normative reference2.1ISO 11737-2, Sterilization of medical devices Microbiological methods Part 2: Tests of sterilityperformed in the definition, validation and maintenance of a sterilization process2.2ISO 13485 Medical devices

2、Quality management systems Requirements for regulatory purposes2.3中華人民共和國藥典2021年版 二部 附錄XI H無菌檢查法2.4COP093定義Definitions3.1無菌sterile:無存活的微生物.3.2無菌測試test of sterility:開發(fā)，確認(rèn)或重新確認(rèn)的一部份，確定產(chǎn)品上是否存在活微 生物的技術(shù)操作.3.3生物指示劑biological indicator(BI):對特定滅菌過程具有確定抗力的染菌測試系統(tǒng).3.4樣品份額sample item portion(SIP):從產(chǎn)品上取的用于測試的規(guī)定局部

3、.4職責(zé)Responsibility4.1實驗員:具備微生物方面知識，熟悉測試操作，負(fù)責(zé)產(chǎn)品的測試及報告.4.2實驗工程師：熟悉測試，指導(dǎo)實驗員測試，檢查測11t報告.4.3質(zhì)量主管/經(jīng)理:負(fù)責(zé)審批測試報告.5檢測程序Test procedure5.1測試準(zhǔn)備5.1.1檢測設(shè)備A.潔凈工作臺B.超聲清洗機(jī)C.細(xì)菌過濾器D.生化培養(yǎng)箱E.高壓蒸汽滅菌鍋制定:XXX確咕日期：2-Mar-19修定版次：2XXX文件褊虢XXXPage 2 of 8工作指引名稱:無菌檢測方法操作指引5.1.2檢測用品A.稀釋液，沖洗液:0.1%蛋白陳水溶液，0.9 %NaCl,PH7.0氯化鈉-蛋白凍緩沖液；B.營養(yǎng)肉

4、湯或胰蛋白陳大豆肉湯，胰蛋白陳大豆瓊脂培養(yǎng)基；C.剪刀，鑲子，微孔濾膜0.45叩；D.酒精燈,75%酒精,培養(yǎng)皿，培養(yǎng)缸/管，試管；5.1.3根據(jù)檢測需要，按規(guī)定要求配制好培養(yǎng)基，稀釋液和沖洗液；5.1.4將配制好的培養(yǎng)基，稀釋液和沖洗液分裝到三角瓶中密封并用白紙包住封口，微孔濾膜用水潤濕放入培養(yǎng)皿中，剪刀，銀子，培養(yǎng)皿，培養(yǎng)缸/管，試管，細(xì)菌過濾器不銹鋼杯用分別用白紙包好，所有物品經(jīng)121c高壓蒸氣滅菌30min;5.1.5超聲清洗機(jī)和細(xì)菌過濾器用75%酒精擦洗干凈；5.1.6實驗前兩小時翻開潔凈工作臺，無菌室，更衣室的紫外燈進(jìn)行環(huán)境消毒30min,在開啟紫外燈時人員必須遠(yuǎn)離，以免灼傷眼睛和

5、皮膚造成人身傷害；5.1.7所有檢測用品，樣品由傳遞窗遞入無菌室.5.2測試樣品份額SIP的選擇:假設(shè)驗證生物負(fù)載在產(chǎn)品上是均勻分布的，SIP可以是該產(chǎn) 品的任何部份，否那么樣品應(yīng)包含能代表所制產(chǎn)品的每種相應(yīng)材質(zhì)而隨機(jī)選取的產(chǎn)品 部位.假設(shè)生物負(fù)載分布，可以從認(rèn)為對滅菌工藝最有挑戰(zhàn)性的產(chǎn)品部份選取SIP.可在長度，質(zhì)量,體積或外表積根底上計算SIP:SIP的類型產(chǎn)品類型外表積植入類無滲透吸收型質(zhì)量粉塵類衣服類植入類可滲透吸收型長度管道類管徑 T體積液體奧5.3樣品測試前包裝應(yīng)完整，應(yīng)先用75%酒精對包裝外表進(jìn)行清潔再傳入傳遞窗；5.4在無菌測試前，應(yīng)先驗證測試方法的適用性，以證明所采用的方法適

6、合于樣品的無菌 檢測,檢測方法參照?抑余田菌抑真菌就;5.5方法驗證試驗可與樣品的無菌檢測同時進(jìn)行，或外發(fā)至具有微生物檢驗資質(zhì)的實驗 室進(jìn)行；5.6陽性對照：應(yīng)根據(jù)樣品的特性選擇陽性對照菌：制定:XXX確咕日期：2-Mar-19修定版次：2XXX文件褊虢XXXPage 3 of 8工作指引名稱:無菌檢測方法操作指引5.6.1無抑菌作用及抗革蘭陽性菌為主的樣品，以金黃色葡萄球菌為對照菌；5.6.2抗革蘭陰性菌為主的樣品，以大腸埃希菌為對照菌；5.6.3抗壓氧菌的樣品，以生抱梭菌為對照菌；5.6.4抗真菌的樣品，以白色念珠菌為對照菌；5.6.5陽性對照試驗的菌液制備方法同?抑余田菌抑真菌就?；5.

7、6.6加菌量小于100cfu,樣品用量同樣品的無菌測試每份培養(yǎng)基接種的樣品量；5.6.7陽性對照管培養(yǎng)4872小時應(yīng)生長良好.5.7陰性對照：樣品的無菌測試時，應(yīng)取相應(yīng)培養(yǎng)基，稀釋液，沖洗液同法操作，作為陰性對 照.陰性對照不得有菌生長.5.8無菌測試有以下兩種方法：5.8.1直接接種法：將樣品直接接種到培養(yǎng)基中或?qū)⒖缮L培養(yǎng)基參加到樣品里進(jìn)行培養(yǎng)，觀察是否有菌生長；5.8.2薄膜過濾法：將微生物從樣品上移除別離后，再接種到培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，觀察是否 有菌生長；5.9直接接種法5.9.1醫(yī)療器械的無菌檢測方法應(yīng)首選直接接種法；5.9.2將樣品或SIP接種于含有足以浸沒樣品的適量培養(yǎng)基的無菌容器

8、中直接培養(yǎng)；5.9.3培養(yǎng)基的用量應(yīng)能浸沒整個樣品或SIP;5.9.4假設(shè)樣品無法直接放入容器中，可在滅菌前對產(chǎn)品進(jìn)行拆分單獨包裝，或在測試培養(yǎng) 前進(jìn)行拆分；5.9.5樣品放入培養(yǎng)基后可適當(dāng)?shù)臄嚢瑁?.9.6假設(shè)樣品具有抑菌作用，可參加適量的無菌中和劑或外表活性劑，或加大每個容器的 培養(yǎng)基用量.5.10薄膜過濾法5.10.1由于某些醫(yī)療器械的特性如具有抑細(xì)菌抑真菌的作用，而不能選用直接接種法 時，可選擇薄膜過濾法；5.10.2在選用薄膜過濾法時應(yīng)注意洗提技術(shù)，洗提能力和操作過程中的污染對測試結(jié) 果的影響；5.10.3無菌測試樣品的洗提技術(shù)應(yīng)與該樣品的生物負(fù)載測試技術(shù)一致，檢測方法可參照品生物H

9、載檢測?；制定:XXX確咕日期：2-Mar-19修定版次：2XXX文件褊虢XXXPage 4 of 8工作指引名稱:無菌檢測方法操作指引5.10.4操作步驟：a將樣品包裝去除，用無菌銀子將樣品放入超聲清洗機(jī)中，如樣品過大而無法放 入可將樣品進(jìn)行適當(dāng)拆分；b將樣品浸入含有適量洗脫液的超聲清洗機(jī)中，參加適量的稀釋液和外表活性齊I以洗脫液浸沒樣品外表為準(zhǔn)；c翻開超聲清洗機(jī)，清洗5min,超聲清洗頻率不應(yīng)過高，以免造成微生物死亡；d清洗結(jié)束后將樣品取出，洗脫液在細(xì)菌過濾器上進(jìn)行過濾，應(yīng)注意濾膜在使用 前后的完整性；e洗脫液經(jīng)薄膜過濾后，可用PH7.0氣化鈉-蛋白凍緩沖液沖洗濾膜，每張濾膜每 次沖洗量為

10、100ml;f過濾完成取出濾膜，將其分成2等份，置于含培養(yǎng)基的容器中，其中一份作陽性 對照用.5.11培養(yǎng)及觀察：5.11.1將上述含培養(yǎng)基的容器按規(guī)定溫度培養(yǎng)，培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生長；樣品類型A 口加工培療溫度培療時間火菌產(chǎn)品營養(yǎng)肉湯/胰蛋白陳大豆肉湯30 35 c14天生物指示劑營養(yǎng)肉湯/胰蛋白陳大豆肉湯30 35 c7天5.11.2如在參加樣品后或在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)7天或14天后，不能從外 觀上判斷有無微生物生長，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同各新鮮培養(yǎng)基中，細(xì)菌培 養(yǎng)2大，真菌培養(yǎng)3天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁，或取培養(yǎng)液 涂片,染色,鏡檢,判斷是

11、否有菌.5.12結(jié)果判斷5.12.1陽性對照管應(yīng)生長良好，陰性對照管不得有菌生長，否那么試驗無效；5.12.2假設(shè)樣品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無菌生長，判樣品符合規(guī)定；5.12.3假設(shè)樣品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長，判樣品不符合規(guī)定，除非能充分證 明試驗結(jié)果無效，即生長的微生物非樣品所含；5.12.4當(dāng)符合以下至少一個條件時，方可判試驗結(jié)果無效：a無菌測試所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無菌測試的要求；b回憶無菌測試過程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素；制定:XXX確咕日期：2-Mar-19修定版次：2XXX文件褊虢XXXPage 5 0f 8工作指引名稱:無菌檢測方法操作指引

12、c樣品管中生長的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無菌測試中所使用的物品或無菌 操作技術(shù)不當(dāng)引起的.5.12.5測試假設(shè)經(jīng)確認(rèn)無效，應(yīng)重試.重試時，重新取同量樣品，依法檢查，假設(shè)無菌生長，判樣 品符合規(guī)定；假設(shè)有菌生長，判樣品不符合規(guī)定.5.13檢測報告編號規(guī)那么：5.13.1Sterility Testing Report For Sterile ProductsTL-YY-XXYY:年份XX:流水號5.13.2Biological Indicator Sterility test ReportBI_S_YY-XXXYY:年份XXX:滅菌批流水號6文件保存期限：相關(guān)檢測報告保存10年.7附錄7.1St

13、erility Testing Report For Sterile Products7.2Biological Indicator Sterility test Report制定:XXX確咕日期：2-Mar-19修定版次：2XXX文件褊虢XXXPage 6 of 8工作指引名稱:無菌檢測方法操作指引附錄7.1 Sterility Testing Report For Sterile ProductsSterility Testing Report For Sterile Products(Ref： IS011/37-2； G日15駝陰Report No:Sans e Inlonution.P

14、roduct Lot ND.:SanipieSanipie Qty.:Qty.:SterilzationSterilzation No.:No.:NegativeNegative oortrol:oortrol:SarpinqSarpinq Date:Date:siUve oontrol:S4PTstTst TemperatureTemperature：RH:Mt*diaMediaMedia LolLolNoIncubation Tf?irpe Fai LireIncubnlion Period：ItemsQuantityTeal resultCDncIbisJonNegativeNegati

15、ve ConlrolConlrolPositive ConlTQlSten ec ProductsNote. 1 Qcstr,白：represent have Groaniirn gron： 2. wprcstni no organism grown.Conclusion:TestedTested：CheckedChecked：ApprovedApproved：Date.Date.Date:Date:DateDateMMEB明山E制定:XXX確濫日期：2-Mar-19修定版次：2XXX文件褊虢XXXPage 7 of 8工作指引名稱:無菌檢測方法操作指引附錄7.2 Biological Ind

16、icator Sterility test ReportBiological Indicator Sterility Test Report( (Ref:Ref: I ISO11737-Z*GBSO11737-Z*GB 1 155805580 ) )ReportReport No.No.Bl orcarisrr:B Lot No.：FILill、,LI廿IF川Bl EXDVVtiBtESteriled Bl qusnhK:PDstVECDnzrol 31 quant ty:M M單tjveconutjveconu。!A A歸口3 3 qjaitihqjaitih1 1: :resting bn

17、vironmem.i fiHi:Steriliziriiun prudde!rrodcct Lot No.:tefllizanontefllizanon RunRun No.:No.:Tesii ! starbna Cate.oad.oad NumbersNumbers andand CvclcCvclc Number:Number:Incubat-or tcin0crati.rcr jedis/Lot Ko ,incLtiatian period:FTEMFTEMSAMPLESAMPLE Qty.Qty.TESTTEST RESULTRESULTCONCLUSIONCONCLUSIONIpflss/rejecflIpflss/rejecflStenlied BlBl Positive ControlMHim Ne歸tve controlNote:Note: 1 1 PositlK.PositlK. lepfesenllepfesenl rwerwe oigaoiga】困T Tgrowngrown, , 2.2. NegafiveNegafive i i印i i 6 6 1 111m m organisnnorganisnn gra*ngra*n. .FINALFINAL CONCLUSIONCONCLUSIO