Lab-1培養(yǎng)基的配制與滅菌ppt課件

1、一一 教學(xué)要求教學(xué)要求通過(guò)配制牛肉膏蛋白胨等培養(yǎng)基，掌握配制培養(yǎng)通過(guò)配制牛肉膏蛋白胨等培養(yǎng)基，掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟。基的一般方法和步驟。了解采用的滅菌方法和原理，掌握高壓蒸汽滅菌了解采用的滅菌方法和原理，掌握高壓蒸汽滅菌技術(shù)。技術(shù)。二二 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 1、Media TypesSolid Media,semi-solid Media, liquid Media .Enriched Media, Selective Media, Differential Media， combination selective and differential media Physical Met

2、hodsMoist heatAutoclaving Action - protein denaturation. Very effective method of sterilization; at about 15 psiIb/in2 ） of pressure (121C 250F), all vegetative cells and their endospores are killed in about 15 min. Direct flaming example: Inoculation loopHot-air sterilization Baking in oven Very ef

3、fective method of sterilization, but requires temperature of 170C 340 Ffor about 2 hr.lSeparationofbacteriafromsuspendingliquid.lRemovesmicrobesbypassageofaliquidorgasthroughascreenlikematerial.Mostfiltersconsistofdiatomaceousearth,celluloseacetateornitrocellulose.l0.45mfiltersremovesmostbacteria,l0

4、.20mmoreinclusive,virusesneed0.01m.lUsefulforsterilizingliquids(enzymes,vaccines)thataredestroyedbyheat.l培養(yǎng)基：牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉紅、鏈霉素、1 mol/L NaOH、 1 mol/L HCl、KNO3 、K2HPO43H2O MgSO47H2O FeSO47H2O.l器材：玻璃器皿、天平、pH試紙、滅菌鍋等稱(chēng)量溶解調(diào)pH *（過(guò)濾*）分裝*加塞*包扎高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌滅菌操作步驟首先將內(nèi)層滅菌桶取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。

5、 放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠，以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)。再以?xún)蓛蓪?duì)稱(chēng)的方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。開(kāi)啟電源加熱，并同時(shí)打開(kāi)排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣。待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時(shí)，控制熱源，維持壓力至所需時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)用 1.05 kg/ cm2 ，121.3 ，20 min滅菌。滅菌所需時(shí)間到后，切斷電源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降至0時(shí)，打開(kāi)排氣閥，旋松螺栓，打開(kāi)蓋子，取出滅菌物品。如果壓力未降到0時(shí)，打開(kāi)排氣閥，就會(huì)因鍋內(nèi)壓力突然下降，使容器內(nèi)的培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染。將取出的滅菌培養(yǎng)基放入 37 溫箱培養(yǎng)24 h，經(jīng)檢查若無(wú)雜菌生長(zhǎng)，即可待用。五 本卷須知 培養(yǎng)基分裝過(guò)程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。 使用滅菌鍋應(yīng)嚴(yán)格按照操作程序進(jìn)行。滅菌所需時(shí)間到后，要先