基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室常用儀器的使用

1、 基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備的使用和維護(hù)PCR熱循環(huán)儀（DNA擴(kuò)增儀）高速( 冷凍)離心機(jī)漩渦振蕩混旋器恒溫水浴箱/ /恒溫金屬浴洗板機(jī)（PCR-ELISA)PCR-ELISA)酶標(biāo)儀(PCR-ELISA)(PCR-ELISA)加樣器PCR熱循環(huán)儀（DNA擴(kuò)增儀） PCR擴(kuò)增儀的原理及發(fā)展?fàn)顩r： PCRPCR擴(kuò)增儀原理 國(guó)內(nèi)常見(jiàn)擴(kuò)增儀簡(jiǎn)介 國(guó)內(nèi)常見(jiàn)熒光定量PCR儀簡(jiǎn)介 PCR擴(kuò)增儀的使用與保養(yǎng) 變性:如94C 退火:如55C 延伸:如72C溫溫度度變變化化快快，時(shí)時(shí)間間準(zhǔn)準(zhǔn)確確，溫溫度度可可調(diào)調(diào)，合合適適 于于試試驗(yàn)驗(yàn)研研究究，省省時(shí)時(shí)、省省力力效效果果明明顯顯。 （2 2）空氣驅(qū)動(dòng)循環(huán)恒溫裝

2、置（3）變溫金屬塊作恒溫裝置國(guó)內(nèi)常見(jiàn)擴(kuò)增儀簡(jiǎn)介2400型DNA擴(kuò)增系統(tǒng)( 美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司） 最大樣本數(shù)：可同時(shí)擴(kuò)增3 3* *8 8個(gè)0.2ml PCR0.2ml PCR反應(yīng)管。 溫度范圍：4-99.94-99.9 加熱冷卻速度：樣本實(shí)際升降溫速度平均為1/1/秒。 靜態(tài)樣本均衡性： 0.50.5，35-10035-100范圍。 溫度精度：35-10035-100間誤差小于0.750.75。 特點(diǎn)：所附加熱蓋保證防止樣品蒸發(fā)，無(wú)需加石蠟油操作，滿(mǎn)足最小5 5 l l體積；擴(kuò)增反應(yīng)的要求；可儲(chǔ)存6868個(gè)PCRPCR方法，每個(gè)方法包括PCRPCR前處理，保溫，PCRPCR循環(huán)及PCRPCR

3、擴(kuò)增后保溫條件；斷電后有自動(dòng)啟動(dòng)功能。PTC-200 熱循環(huán)儀（MJ公司產(chǎn)品）Eppendorf梯度PCR儀PCR擴(kuò)增儀的使用與保養(yǎng)PCR擴(kuò)增儀的使用與保養(yǎng)國(guó)內(nèi)常見(jiàn)熒光定量PCR儀簡(jiǎn)介L(zhǎng)ightCycler (Roche)Rotor-Gene (Corbett Research)ABI Prism (Applied Biosystems)GeneAmp 5700GeneAmp 5700型熒光定量PCRPCR儀儀器特點(diǎn)GeneAmp 5700GeneAmp 5700型熒光定量PCRPCR儀 影響測(cè)定結(jié)果的因素用用Taqman探探針針進(jìn)行HBV檢測(cè) (深圳 試劑盒)用用Taqman探探針針進(jìn)行HC

4、V檢測(cè)(深圳試劑盒)Lightcycler 熒光定量PCR系統(tǒng) 原理和特點(diǎn) 可使用外標(biāo)法定量，可加內(nèi)對(duì)照，可做熔點(diǎn)曲線(xiàn)分析。 單一光路的三個(gè)檢測(cè)點(diǎn)對(duì)樣本同時(shí)進(jìn)行三個(gè)波長(zhǎng)的熒光檢測(cè)，擴(kuò)贈(zèng)與檢測(cè)同時(shí)進(jìn)行，提供實(shí)時(shí)分析和在線(xiàn)監(jiān)測(cè)。引入獨(dú)特的顏色補(bǔ)償試劑和軟件以消除個(gè)檢測(cè)通道其它染料熒光的干擾。 一次可做32個(gè)樣本。 公用熱室，保證單次PCR個(gè)樣本的狀況連續(xù)一致。循環(huán)速度快，20-30分鐘完成30-40個(gè)循環(huán)，一次檢測(cè)樣本數(shù)32個(gè)。Lightcycler 熒光定量PCR系統(tǒng)ABI 7000ABI 7000型熒光定量PCRPCR儀檢測(cè)原理和特點(diǎn)檢測(cè)原理和特點(diǎn)高速( 冷凍)離心機(jī)使用方法注意事項(xiàng)維護(hù)和保養(yǎng)

5、使用方法注意事項(xiàng)造成事故。注意事項(xiàng)根據(jù)RCFRCF計(jì)算公式，減小離心體積。維護(hù)和保養(yǎng)洗板機(jī)機(jī)理及主要類(lèi)型選購(gòu)洗板機(jī)的注意事項(xiàng)洗板機(jī)使用中注意事項(xiàng)基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室應(yīng)備有4套連續(xù)可調(diào)加樣器，分別用于試劑準(zhǔn)備、樣本處理、擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測(cè)四個(gè)試驗(yàn)區(qū)。加樣器加樣器的類(lèi)型加樣器的使用吸液的位置 把按鈕壓至第一停點(diǎn)垂直握持移液器，使吸嘴浸入液樣中，浸入液體深度視型號(hào)而定： P2和P10 1mm P20和P100 2-3mm P200和P1000 2-4mm P5000 3-6mm P10ML 5-7mm設(shè)定容量值 設(shè)定容量 容量計(jì)讀數(shù)由三位撥號(hào)數(shù)字組成（顯示所轉(zhuǎn)移液體容量） ，從上（最大有效數(shù)字）到下（最小有效

6、數(shù)字）讀取。利用底部刻度可將容量調(diào)節(jié)到更精確的分度。根據(jù)型號(hào)不同，數(shù)字可能是黑色或紅色的。 P2 P10 P20 P100 P200 1 0 1 0 1 2 7 2 7 2 5 5 5 5 5 1.25l7.5l 12.5l 75l 125lP型移液器的應(yīng)用范圍P型移液器技術(shù)指標(biāo)(1)(GILSON)型號(hào) 容量 準(zhǔn)確度（標(biāo)準(zhǔn)誤差） 精度（重復(fù)性）2 (L) 絕對(duì)誤差(L) 相對(duì)誤差(%) 標(biāo)準(zhǔn)誤差(L) 相對(duì)離差(%)P2 最小 0.2 0.024 12 0.012 6 0.5 0.025 5 0.012 2.50 最大 2 0.030 1.5 0.014 0.70P10最小 1 0.025

7、2.5 0.012 1.25 5 0.075 1.5 0.030 0.60 最大 10 0.10 1 0.040 0.40P20 最小 2 0.1 5.0 0.03 1.50 5 0.1 2.0 0.04 0.80 10 0.1 1.0 0.05 0.50 最大 20 0.2 1.0 0.06 0.30P型移液器技術(shù)指標(biāo)(2) (GILSON)型號(hào) 容量 準(zhǔn)確度（標(biāo)準(zhǔn)誤差） 精度（重復(fù)性）2 (L) 絕對(duì)誤差(L) 相對(duì)誤差(%) 標(biāo)準(zhǔn)誤差(L) 相對(duì)離差(%)P100 最小 20 0.35 1.8 0.10 0.5 50 0.4 0.8 0.12 0.24 最大 100 0.8 0.8 0.

8、15 0.15P200最小 50 0.5 1 0.2 0.40 100 0.8 0.8 0.25 0.25 最大 200 1.6 0.8 0.30 0.15P1000 最小 200 3.0 1.5 0.6 0.3 500 4.0 0.8 1.0 0.2 最大 1000 8.0 0.8 1.5 0.15P型移液器技術(shù)指標(biāo)(3) (eppendorf)型號(hào) 容量 (L) 不準(zhǔn)確度(%) 不精密度(%)P10 最小 0.5 5.0 2.8 1 2.5 1.8 最大 10 1.0 0.4P20最小 2 5.0 1.5 最大 20 1.0 0.3P100 最小 10 3.0 1.0 最大 100 0.8

9、 0.2 P200 最小 20 2.5 0.7 最大 200 0.6 0.2P1000 最小 100 3.0 0.6 最大 1000 0.6 0.2 加樣器的校準(zhǔn) 校準(zhǔn)環(huán)境和用具要求： 室 溫：2025，測(cè)定中波動(dòng)范圍不大于0.50.5。 電子天平：放置于無(wú)塵和震動(dòng)影響的臺(tái)面上，房間盡可能有空調(diào)。稱(chēng)量時(shí)，為保證天平內(nèi)的濕度（相對(duì)濕度60-60-90%90%），天平內(nèi)應(yīng)放置一裝有10 ml10 ml蒸餾水的小燒杯。 小燒杯： 5 510 ml10 ml體積。 測(cè)定液體：溫度為2025的去氣雙蒸水。 選定校準(zhǔn)體積：（擬校準(zhǔn)體積；（加樣器標(biāo)定體積的中間體積；（最小可調(diào)體積（不小于擬校準(zhǔn)體積的10%）

10、。 如為固定體積加樣器，則只有一種校準(zhǔn)體積。 校準(zhǔn)步驟： 將加樣器調(diào)至擬校準(zhǔn)體積，選擇合適的吸頭； 調(diào)節(jié)好天平； 來(lái)回吸吹蒸餾水3次，以使吸頭濕潤(rùn)，用紗布拭干吸頭 垂直握住加樣器，將吸頭浸入液面23 mm處，緩慢（13秒）一致地吸取蒸餾水； 將吸頭離開(kāi)液面，靠在管壁，去掉吸頭外部的液體；將加樣器以30角放入稱(chēng)量燒杯中，緩慢一致地將加樣器壓至第一 檔，等待13秒，再壓至第二檔，使吸頭里的液體完全排出； 記錄稱(chēng)量值； 擦干吸頭外面； 按上述步驟稱(chēng)量10次； 取10次測(cè)定值的均值作為最后加樣器吸取的蒸餾水重量，按附表所列蒸餾水Z因子計(jì)算體積。按校準(zhǔn)結(jié)果調(diào)節(jié)加樣器。注意事項(xiàng) 根據(jù)所需取液量選擇相應(yīng)的移

11、液器及吸頭，基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)要求使用帶濾芯的吸頭，防止交叉污染。吸取液體時(shí)應(yīng)緩慢勻速吸取，避免液體濺到移液器頭上；打出液體后拇指不應(yīng)松開(kāi)按鈕，將吸液嘴壓掉后再將拇指松開(kāi)，避免液體回吸。在調(diào)整取液量的旋鈕時(shí)，不要用力過(guò)猛，并應(yīng)注意計(jì)數(shù)器顯示的數(shù)值不要超過(guò)其可調(diào)范圍。連續(xù)可調(diào)式移液器不可在無(wú)吸頭時(shí)使用，吸頭有液體時(shí)不可平放或倒置。注意事項(xiàng) 操作時(shí)要慢和穩(wěn)，吸嘴浸入液體深度要合適，吸液過(guò)程盡量保持不變；改吸不同液體、樣品或試劑前要換新吸嘴；發(fā)現(xiàn)吸嘴內(nèi)有殘液時(shí)必須更換；新吸嘴使用前應(yīng)先預(yù)測(cè)。 為防止液體進(jìn)入移液器套筒內(nèi)，注意以下幾點(diǎn)：壓放按鈕時(shí)保持平穩(wěn)；移液器不得倒轉(zhuǎn)；吸嘴中有液體時(shí)不可將移液器平放；P5

12、000及P10ML移液器一定要加過(guò)濾芯。 切勿用油脂等潤(rùn)滑活塞或密封圈。 使用了酸或有腐蝕蒸氣的溶液后，最好拆下套筒，用蒸餾水清洗活塞及密封圈。注意事項(xiàng)連續(xù)可調(diào)式移液器在取樣加樣過(guò)程中應(yīng)注意移液嘴不能觸及其他物品，以免被污染；移液嘴盒（架子）、廢液瓶、所取試劑及加樣的樣品管應(yīng)擺放合理，以方便操作過(guò)程、避免污染為原則。連續(xù)可調(diào)式移液器在使用完畢后應(yīng)置于以液器架上，遠(yuǎn)離潮濕及腐蝕性物質(zhì)。在取液之前，所取液體應(yīng)在室溫（15-25 C）平衡；液體溫度與室溫有異時(shí)，將吸嘴預(yù)洗多次再用；移液溫度不得超過(guò)70。不可把容量計(jì)數(shù)調(diào)超其適用范圍。維護(hù) 加樣器應(yīng)根據(jù)使用頻率進(jìn)行維護(hù)，但至少應(yīng)每3個(gè)月進(jìn)行一次，具體方

13、法如下：1一般維護(hù)可用中性洗滌劑（如洗餐具用的洗滌靈）清潔，或者用60%的異丙醇，然后用蒸餾水反復(fù)洗滌，去除洗滌劑或異丙醇，晾干。清潔后活塞處可使用一定量的潤(rùn)滑劑。2如果有液體進(jìn)入加樣器內(nèi)的嚴(yán)重污染，可以將加樣器拆開(kāi)后進(jìn)行清潔，具體拆開(kāi)步驟參照加樣器說(shuō)明書(shū)（不同的加樣器的拆開(kāi)方式有所不同）。3高壓消毒，有的加樣器的吸管部分可高壓消毒（121及1巴壓力下消毒20分鐘），如Eppendor的Research單道可調(diào)加樣器。但消毒時(shí)不可超溫超時(shí)，也不能擠壓放置，以免造成變型。4各區(qū)（試劑準(zhǔn)備、樣本提取、擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測(cè)）的加樣器應(yīng)有各自的標(biāo)識(shí)，清潔和消毒 時(shí)，應(yīng)分別處理。PCR擴(kuò)增儀的使用與保養(yǎng)PCR

14、擴(kuò)增儀的使用與保養(yǎng)維護(hù)和保養(yǎng)洗板機(jī)加樣器的類(lèi)型加樣器的類(lèi)型加樣器的校準(zhǔn) 校準(zhǔn)環(huán)境和用具要求： 室 溫：2025，測(cè)定中波動(dòng)范圍不大于0.50.5。 電子天平：放置于無(wú)塵和震動(dòng)影響的臺(tái)面上，房間盡可能有空調(diào)。稱(chēng)量時(shí)，為保證天平內(nèi)的濕度（相對(duì)濕度60-60-90%90%），天平內(nèi)應(yīng)放置一裝有10 ml10 ml蒸餾水的小燒杯。 小燒杯： 5 510 ml10 ml體積。 測(cè)定液體：溫度為2025的去氣雙蒸水。 選定校準(zhǔn)體積：（擬校準(zhǔn)體積；（加樣器標(biāo)定體積的中間體積；（最小可調(diào)體積（不小于擬校準(zhǔn)體積的10%）。 如為固定體積加樣器，則只有一種校準(zhǔn)體積。維護(hù) 加樣器應(yīng)根據(jù)使用頻率進(jìn)行維護(hù)，但至少應(yīng)每3個(gè)月進(jìn)行一次，具體方法如下：1一般維護(hù)可用中性洗滌劑（如洗餐具用的洗滌靈）清潔，或者用60%的異丙醇，然后用蒸餾水反復(fù)洗滌，去除洗滌劑或異丙醇