(完整版)微生物實(shí)驗(yàn)思考題

1、微生物實(shí)驗(yàn)思考題1、用油鏡觀察時(shí)應(yīng)該注意哪些問(wèn)題？在載破片和鏡頭之間加滴什么油？起什么作用？答：應(yīng)該先用擦鏡紙將鏡頭擦干凈 ，以防上次實(shí)驗(yàn)的污染.操作時(shí)，先低倍再高倍.用完要擦掉 油.加滴香柏油。作用：增加折光率，也就是增加了顯微鏡的分辨率 .2、根據(jù)實(shí)驗(yàn)體會(huì)，談?wù)剳?yīng)如何根據(jù)所觀察微生物的大小，選擇不同的物鏡進(jìn)行有效的觀察。答：細(xì)菌用油鏡，真菌用高倍鏡.都是先用低倍鏡找到目標(biāo)后，再用高倍鏡調(diào)到合適的視野和合 適的清晰度.放線菌、酵母菌、多細(xì)胞真菌相對(duì)較大，用放大40倍的物鏡就可以看了， 細(xì)菌小， 要用放大1000倍的物鏡看，感覺還很小。病毒那就要用電子顯微鏡看了。3、哪些環(huán)節(jié)會(huì)影響革蘭氏染色結(jié)

2、果的正確性？其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是什么？答：涂片環(huán)節(jié)、加熱固定環(huán)節(jié)、脫色環(huán)節(jié)；其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是 脫色環(huán)節(jié)。4、進(jìn)行革蘭氏染色時(shí)，為什么特別強(qiáng)調(diào)菌齡不能太老，用老齡細(xì)菌染色會(huì)出現(xiàn)什么問(wèn)題？答：著色不均，染色效果不好。陰性陽(yáng)性不明顯分不太清楚 ，問(wèn)題是：不便于顯微鏡下觀察 是 陽(yáng)性菌還是陰性菌。5、革蘭氏染色時(shí)，初染前能加碘液?jiǎn)?？乙醇脫色后?fù)染之前， 革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌 應(yīng)分別是什么顏色？答：不可以。因?yàn)榈馀c染料會(huì)結(jié)合成大分子，使得染料分子不能穿過(guò)細(xì)胞的細(xì)胞壁，對(duì)實(shí) 驗(yàn)結(jié)果造成影響。脫色后復(fù)染前，革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫色，陰性菌無(wú)色。6、不經(jīng)過(guò)復(fù)染這一步，能否區(qū)別革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌？答：不

3、行。在復(fù)染之前，革蘭氏陰性菌是無(wú)色透明的，在顯微鏡下很難觀察到；或者脫色 過(guò)度，也會(huì)造成陽(yáng)性菌脫色，不經(jīng)過(guò)復(fù)染，無(wú)法進(jìn)一步區(qū)別。7、你認(rèn)為制備細(xì)菌染色標(biāo)本時(shí)，應(yīng)該注意哪些環(huán)節(jié)？答：1制備適宜的培養(yǎng)基2在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行，保持無(wú)菌環(huán)境3對(duì)培養(yǎng)基，接種環(huán)等物品的高溫高壓滅菌 .4倒置培養(yǎng)基 ，防止冷凝水內(nèi)流8. 為什么要求制片完全干燥后才能用油鏡觀察？答：1、若未完全干燥，載玻片上的液體會(huì)污染油鏡鏡頭。鏡頭非常精密，被污染后不利于下次觀察；2、若未完全干燥，水滴會(huì)影響油與玻璃之間折光率，造成視野不夠清晰。9. 如果涂片未以熱固定，將會(huì)出現(xiàn)彳f么問(wèn)題？加熱溫度過(guò)高、時(shí)間太長(zhǎng)，又會(huì)怎么樣呢？答:如果沒

4、有加熱固定的話，水分蒸發(fā)太慢或者在染色時(shí)菌體會(huì)被沖洗掉；如果加熱時(shí)間過(guò)久，菌體變形或形態(tài)破壞，無(wú)法染色。10. 制備培養(yǎng)基的一般程序是什么？答：稱量一一溶解一調(diào) PH值一融化瓊脂一過(guò)濾分裝一包扎標(biāo)記一一滅菌一一倒平板11. 做過(guò)本次實(shí)驗(yàn)后，你認(rèn)為在制備培養(yǎng)基時(shí)要注意些什么問(wèn)題？答： 溶解配料的水要適量； PH 要調(diào)到 7.3 左右；要小心手提式高壓鍋的使用；倒平板時(shí)要 防止培養(yǎng)基被污染12. 滅菌在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作中有何重要意義？答：防止培養(yǎng)基被污染；防止雜菌影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果13. 試述高壓蒸汽滅菌的操作方法和原理。答：高壓滅菌的原理是：在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點(diǎn)

5、不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。在0.1MPa 的壓力下，鍋內(nèi)溫度達(dá)121。在此蒸 汽溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢。 操作方法：加水裝料、加蓋排氣升壓、保壓、和降壓取料14. 高壓蒸汽滅菌時(shí)應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？答： 第一， 無(wú)菌包不宜過(guò)大， 不宜過(guò)緊， 各包裹間要有間隙， 使蒸汽能對(duì)流易滲透到包裹中央。第二，布類物品應(yīng)放在金屬類物品上，否則蒸汽遇冷凝聚成水珠，使包布受潮。阻 礙蒸 汽進(jìn)入包裹中央，嚴(yán)重影響滅菌效果。第三，定期檢查滅菌效果。15. 試述如何在接種中，貫徹?zé)o菌操作的原則 ?答： 保持操作臺(tái)的無(wú)菌狀態(tài)與在無(wú)菌室操作；操作前，要進(jìn)行手的消毒； 接種環(huán)要加熱滅菌；接種物品

6、要標(biāo)記。16. 以斜面上的菌種接種到新的斜面培養(yǎng)基為例說(shuō)明操作方法和注意事項(xiàng)。答： 在接種箱或者超凈工作臺(tái)上 .將母種經(jīng)過(guò)消毒處理以后 ,在酒精燈火焰區(qū)上方打開棉塞.用接種針挑取一小塊菌絲體,接入新的試管培養(yǎng)基上即可.17. 試設(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)，從土壤中分離酵母菌并進(jìn)行計(jì)數(shù)。答： 無(wú)標(biāo)準(zhǔn)答案。18. 在酵母菌死活細(xì)胞的觀察中，使用美藍(lán)液有什么作用？答 ：區(qū)別死活細(xì)胞。19. 為何要用乳酸-石碳酸溶液作霉菌水浸片？答： 用乳酸-石炭酸的優(yōu)點(diǎn)是可使細(xì)胞不變形，具有殺菌、 防腐作用； 不易干燥， 能保持較 長(zhǎng)時(shí)間；能防止孢子四處飛散。, 菌落疏松,呈絨毛狀、蜘蛛網(wǎng)20. 細(xì)菌與霉菌的菌落有何區(qū)別？答：

7、細(xì)菌菌落光滑，易于基質(zhì)脫離；霉菌菌落較大、菌絲細(xì)長(zhǎng)狀、棉絮狀,無(wú)固定大小,多有光澤 ,不易挑。21. 如何區(qū)分霉菌與放線菌的菌落？什么是擴(kuò)展性菌落？答： 霉菌的菌落形態(tài)較大,質(zhì)地一般比放線菌疏松,細(xì)胞分化明顯菌絲粗壯 有核 菌落邊緣有粗絲狀細(xì)胞生長(zhǎng)快 有霉味。而霉菌往往形成復(fù)雜的孢子囊孢子梗等結(jié)構(gòu)。放線菌菌落小 菌絲細(xì)而均勻 菌落邊緣可見細(xì)絲狀細(xì)胞 有泥腥味，放線菌的分生孢子形態(tài)結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單。擴(kuò)展性菌落：就是原本培養(yǎng)的細(xì)菌由于發(fā)生擴(kuò)散,形成的一些非預(yù)期的菌落,通常這些菌落會(huì)影響正常實(shí)驗(yàn)觀察,可以用藥物抑制 .22. 能否用血球計(jì)數(shù)板在油鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)？為什么？答： 不能。 計(jì)數(shù)時(shí)滴在血球計(jì)數(shù)板上的是

8、菌懸液， 相當(dāng)于在鏡頭和計(jì)數(shù)板直接加了一層水。水層會(huì)降低視野的亮度和顯微鏡的分辨率，造成菌體和網(wǎng)格線不清晰。23. 根據(jù)自己體會(huì)，說(shuō)明血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的誤差主要來(lái)自那些方面？如何減少誤差？答：誤 差主要來(lái)自試劑誤差、方法誤差、儀器誤差；減少誤差有保持樣品的純凈、細(xì)胞溶液必須震蕩均勻、樣品濃度要適中、血球計(jì)數(shù)板要整潔清晰。24. 菌種保藏中，石蠟油的作用是什么？答： 作用是密封。防止空氣進(jìn)入，降低菌種的生理活性。25. 經(jīng)常使用的細(xì)菌菌株，使用哪種保藏方法比較好？答： 用甘油冷凍保藏方法保存， 在液體培養(yǎng)基中加入百分子十五的甘油， 然后低溫冷凍（ -7 度）左右。26. 食品檢驗(yàn)為什么要測(cè)定細(xì)菌菌

9、落總數(shù)？答：測(cè)定細(xì)菌菌落總數(shù)是檢驗(yàn)食品純度程度的指標(biāo)。也是判斷其保存能力的指標(biāo)。27. 實(shí)驗(yàn)操作如何使數(shù)據(jù)可靠 ?答：1、向平皿傾注液體時(shí),平皿僅微微開啟即可；2、檢樣從開始稀釋到傾注最后一個(gè)平皿所用時(shí)間不宜超過(guò)20min.3、培養(yǎng)液和檢液在培養(yǎng)皿內(nèi)要搖勻；4、培養(yǎng)液傾注培養(yǎng)皿時(shí)溫度要在45 攝氏度 , 以免燙死菌落.28. 食品中檢出的菌落總數(shù)是否代表該食品上的所有細(xì)菌數(shù)？為什么？答： 不能代表該食品上所有細(xì)菌數(shù)。 因?yàn)樵趯?shí)驗(yàn)過(guò)程中會(huì)造成細(xì)菌的損失或死亡、 食品上 的 細(xì)菌包括了各種各樣的微生物。29. 為什么營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基在使用前要保持在（ 46± 1）的溫度？答 ：營(yíng)養(yǎng)瓊脂是用

10、來(lái)做菌落總數(shù)項(xiàng)目的,如果太熱就會(huì)將細(xì)菌燙死,而太冷則瓊脂還沒倒就凝固了（凝固點(diǎn)大約在40 度） 。30. 大腸菌群檢驗(yàn)中為什么首先要用乳糖膽鹽發(fā)酵管？答： 因?yàn)槿樘悄扄}發(fā)酵管中的成分有溴甲酚紫， 中性時(shí)呈藍(lán)紫色， 酸性時(shí)呈黃色， 如果顏 色不變（呈藍(lán)紫色） ，說(shuō)明無(wú)產(chǎn)酸的大腸菌群；如果顏色變黃色，說(shuō)明可能出現(xiàn)能分解乳糖產(chǎn) 酸的大腸菌群；膽鹽可以抑制其它細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖；看杜氏小管中是否有氣體，判斷是否為分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的大腸菌群。31. 做空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)的目的 ?答： 目的是檢驗(yàn)培養(yǎng)基是否受到污染，驗(yàn)證無(wú)菌操作 。32. 為什么大腸菌群的檢驗(yàn)要經(jīng)過(guò)復(fù)發(fā)酵才能證實(shí)答 ： 初發(fā)酵是樣品的發(fā)酵結(jié)果， 不是大腸