-干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制指導(dǎo)原則

1、干細(xì)胞制劑質(zhì)量限制及臨床前研究指導(dǎo)原那么試行1 .前言2 .干細(xì)胞制劑的質(zhì)量限制一干細(xì)胞的采集、別離及干細(xì)胞系的建立二干細(xì)胞制劑的制備三干細(xì)胞制劑的檢驗(yàn)四干細(xì)胞制劑的質(zhì)量研究3 .干細(xì)胞制劑的臨床前研究一平安性評(píng)價(jià)二有效性評(píng)價(jià)名詞解釋參考文獻(xiàn).前言干細(xì)胞是一類具有不同分化潛能,并在非分化狀態(tài)下自我更新的細(xì)胞.干細(xì)胞治療是指應(yīng)用人自體或異體來(lái)源的干 細(xì)胞經(jīng)體外操作后輸入或植入人體,用于疾病治療的過(guò) 程.這種體外操作包括干細(xì)胞的別離、純化、擴(kuò)增、修飾、 干細(xì)胞系的建立、誘導(dǎo)分化、凍存和凍存后的復(fù)蘇等過(guò) 程.用于細(xì)胞治療的干細(xì)胞主要包括成體干細(xì)胞、胚胎干細(xì) 胞及誘導(dǎo)的多能性干細(xì)胞iPSC o成體干細(xì)

2、胞包括自體或 異體、胎兒或成人不同分化組織,以及發(fā)育相伴隨的組織如 臍帶、羊膜、胎盤等來(lái)源的造血干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、 各種類型的祖細(xì)胞或前體細(xì)胞等.目前國(guó)內(nèi)外已開(kāi)展了多項(xiàng)干細(xì)胞指非造血干細(xì)胞臨 床應(yīng)用研究,涉及多種干細(xì)胞類型及多種疾病類型.主要疾 病類型包括骨關(guān)節(jié)疾病、肝硬化、移植物宿主排斥反響GVHD、脊髓損傷及退行性神經(jīng)系統(tǒng)疾病和糖尿病等.其中許多干細(xì)胞類型,是從骨髓、脂肪組織、臍帶血、臍帶或胎盤組織來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞,它們具有一定的多向分化 潛能及抗炎和免疫調(diào)控水平等.用于干細(xì)胞治療的細(xì)胞制備技術(shù)和治療方案,具有多樣 性、復(fù)雜性和特殊性.但作為一種新型的生物治療產(chǎn)品,所 有干細(xì)胞制劑都

3、可遵循一個(gè)共同的研發(fā)過(guò)程,即從干細(xì)胞制 劑的制備、體外試驗(yàn)、體內(nèi)動(dòng)物試驗(yàn),到植入人體的臨床研 究及臨床治療的過(guò)程.整個(gè)過(guò)程的每一階段,都須對(duì)所使用 的干細(xì)胞制劑在細(xì)胞質(zhì)量、平安性和生物學(xué)效應(yīng)方面進(jìn)行相 關(guān)的研究和質(zhì)量限制.本指導(dǎo)原那么提由了適用于各類可能應(yīng)用到臨床的干細(xì) 胞除已有規(guī)定的造血干細(xì)胞移植外在制備和臨床前研究 階段的根本原那么.每個(gè)具體干細(xì)胞制劑的制備和使用過(guò)程, 必須有嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)操作程序并按其執(zhí)行,以保證干細(xì)胞制劑 的質(zhì)量可控性以及治療的平安性和有效性.每一研究工程所 涉及的具體干細(xì)胞制劑,應(yīng)根據(jù)本指導(dǎo)原那么對(duì)不同階段的基本要求,結(jié)合各自干細(xì)胞制劑及適應(yīng)證的特殊性,準(zhǔn)備并實(shí) 施相關(guān)

4、的干細(xì)胞臨床前研究.二.干細(xì)胞制劑的質(zhì)量限制一干細(xì)胞的采集、別離及干細(xì)胞系的建立1 .對(duì)干細(xì)胞供者的要求每一干細(xì)胞制劑都須具有包括供者信息在內(nèi)的、明確的細(xì)胞制備及生物學(xué)性狀信息.作為細(xì)胞制備信息中的重要內(nèi)容之一,需提供干細(xì)胞的獲取方式和途徑以及相關(guān)的臨床資 料,包括供者的一般信息、既往病史、家族史等.既往史和 家族史要對(duì)遺傳病單基因和多基因疾病,包括心血管疾病和 腫瘤等相關(guān)信息進(jìn)行詳細(xì)采集.對(duì)用于異體干細(xì)胞臨床研 究的供者,必須經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)篩選證實(shí)無(wú)人源特定病毒包括HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、CMV 等的感染,無(wú)梅 毒螺旋體感染.必要時(shí)需要收集供者的ABO血型、HLA-I類和II類分

5、型資料,以備追溯性查詢.如使用體外授精術(shù)產(chǎn) 生的多余胚胎作為建立人類胚胎干細(xì)胞系的主要來(lái)源,須能 追溯配子的供體,并接受篩選和檢測(cè).不得使用既往史中患有嚴(yán)重的傳染性疾病和家族史中有明確遺傳性疾病的供者作為異體干細(xì)胞來(lái)源.自體來(lái)源的干細(xì)胞供者,根據(jù)干細(xì)胞制劑的特性、來(lái)源 的組織或器官,以及臨床適應(yīng)證,可對(duì)供體的質(zhì)量要求和篩 查標(biāo)準(zhǔn)及工程進(jìn)行調(diào)整.2 .干細(xì)胞采集、別離及干細(xì)胞系建立階段質(zhì)量限制的根本要求應(yīng)制定干細(xì)胞采集、別離和干細(xì)胞系建立的標(biāo)準(zhǔn)操 作及治理程序,并在符合?藥品生產(chǎn)質(zhì)量治理標(biāo)準(zhǔn)?GMP 要求根底上嚴(yán)格執(zhí)行.標(biāo)準(zhǔn)操作程序應(yīng)包括操作人員培訓(xùn)； 材料、儀器、設(shè)備的使用和治理；干細(xì)胞的采集

6、、別離、純 化、擴(kuò)增和細(xì)胞系的建立；細(xì)胞保存、運(yùn)輸及相關(guān)保證 舉措,以及清潔環(huán)境的標(biāo)準(zhǔn)及常規(guī)維護(hù)和檢測(cè)等.為盡量減少不同批次細(xì)胞在研究過(guò)程中的變異性,研究 者在干細(xì)胞制劑的制備階段應(yīng)對(duì)來(lái)源豐富的同一批特定代次的細(xì)胞建立多級(jí)的細(xì)胞庫(kù),如主細(xì)胞庫(kù)Master Cell Bank 和工作細(xì)胞庫(kù)Working Cell Bank .細(xì)胞庫(kù)中細(xì)胞根本的 質(zhì)量要求,是需有明確的細(xì)胞鑒別特征, 無(wú)外源微生物污染.在干細(xì)胞的采集、別離及干細(xì)胞系建立階段,應(yīng)當(dāng)對(duì)自體來(lái)源的、未經(jīng)體外復(fù)雜操作的干細(xì)胞,進(jìn)行細(xì)胞鑒別、成活率及生長(zhǎng)活性、外源致病微生物,以及根本的干細(xì)胞特 性檢測(cè).而對(duì)異體來(lái)源的干細(xì)胞,或經(jīng)過(guò)復(fù)雜的體外

7、培養(yǎng)和 操作后的自體來(lái)源的干細(xì)胞,以及直接用于臨床前及臨床研 究的細(xì)胞庫(kù)如工作庫(kù)中的細(xì)胞,除進(jìn)行上述檢測(cè)外,還應(yīng)當(dāng)進(jìn)行全面的內(nèi)外源致病微生物、詳細(xì)的干細(xì)胞特性檢測(cè), 以及細(xì)胞純度分析.干細(xì)胞特性包括特定細(xì)胞外表標(biāo)志物群、 表達(dá)產(chǎn)物和分化潛能等.二干細(xì)胞制劑的制備1 .培養(yǎng)基干細(xì)胞制劑制備所用的培養(yǎng)基成分應(yīng)有足夠的純度并符合無(wú)菌、無(wú)致病微生物及內(nèi)毒素的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),殘留的培養(yǎng)基對(duì)受者應(yīng)無(wú)不良影響；在滿足干細(xì)胞正常生長(zhǎng)的情況下,不 影響干細(xì)胞的生物學(xué)活性,即干細(xì)胞的“干性及分化水平. 在干細(xì)胞制劑制備過(guò)程中,應(yīng)盡量防止使用抗生素.假設(shè)使用商業(yè)來(lái)源培養(yǎng)基,應(yīng)中選擇有資質(zhì)的生產(chǎn)商并由 其提供培養(yǎng)基的組成成

8、分及相關(guān)質(zhì)量合格證實(shí).必要時(shí),應(yīng) 對(duì)每批培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn).除特殊情況外,應(yīng)盡可能防止在干細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中使用 人源或動(dòng)物源性血清,不得使用同種異體人血清或血漿.如 必須使用動(dòng)物血清,應(yīng)保證其無(wú)特定動(dòng)物源性病毒污染.嚴(yán) 禁使用海綿體狀腦病流行區(qū)來(lái)源的牛血清.假設(shè)培養(yǎng)基中含有人的血液成份,如白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和 各種細(xì)胞因子等,應(yīng)明確其來(lái)源、批號(hào)、質(zhì)量檢定合格報(bào)告, 并盡量采用國(guó)家已批準(zhǔn)的可臨床應(yīng)用的產(chǎn)品.2 .滋養(yǎng)層細(xì)胞用于體外培養(yǎng)和建立胚胎干細(xì)胞及 iPS細(xì)胞的人源或動(dòng) 物源的滋養(yǎng)層細(xì)胞,需根據(jù)外源性細(xì)胞在人體中使用所存在 的相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素,對(duì)細(xì)胞來(lái)源的供體、細(xì)胞建立過(guò)程引入外 源致病微生物的風(fēng)險(xiǎn)

9、等進(jìn)行相關(guān)的檢驗(yàn)和質(zhì)量限制.建議建 立滋養(yǎng)層細(xì)胞的細(xì)胞庫(kù),并按細(xì)胞庫(kù)檢驗(yàn)要求進(jìn)行全面檢驗(yàn), 特別是對(duì)人源或動(dòng)物源特異病毒的檢驗(yàn).3 .干細(xì)胞制劑的制備工藝應(yīng)制定干細(xì)胞制劑制備工藝的標(biāo)準(zhǔn)操作流程及每一過(guò)程的標(biāo)準(zhǔn)操作程序SOP并定期審核和修訂；干細(xì)胞制劑 的制備工藝包括干細(xì)胞的采集、別離、純化、擴(kuò)增和傳代, 干細(xì)胞系的建立、向功能性細(xì)胞定向分化,培養(yǎng)基、輔 料和包材的選擇標(biāo)準(zhǔn)及使用,細(xì)胞凍存、復(fù)蘇、分裝和標(biāo)記, 以及剩余物去除等.從整個(gè)制劑的制備過(guò)程到輸入 或植入 到受試者體內(nèi)全過(guò)程,需要追蹤觀察并詳細(xì)記錄.對(duì)不合格 并需要丟棄的干細(xì)胞制劑,需對(duì)丟棄過(guò)程進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)治理和記 錄.對(duì)于剩余的干細(xì)胞制劑必

10、須進(jìn)行合法和符合倫理要求的 處理,包括制定相關(guān)的 SOP并嚴(yán)格執(zhí)行.干細(xì)胞制劑的相 關(guān)資料需建檔并長(zhǎng)期保存.應(yīng)對(duì)制劑制備的全過(guò)程,包括細(xì)胞收獲、傳代、操作、 分裝等,進(jìn)行全面的工藝研究和驗(yàn)證,制定適宜的工藝參數(shù)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),保證對(duì)每一過(guò)程的有效限制.三干細(xì)胞制劑的檢驗(yàn)1 .干細(xì)胞制劑質(zhì)量檢驗(yàn)的根本要求為保證干細(xì)胞治療的平安性和有效性,每批干細(xì)胞制劑均須符合現(xiàn)有干細(xì)胞知識(shí)和技術(shù)條件下全面的質(zhì)量要求.制 劑的檢驗(yàn)內(nèi)容,須在本指導(dǎo)原那么的根底上,參考國(guó)內(nèi)外有關(guān) 細(xì)胞基質(zhì)和干細(xì)胞制劑的質(zhì)量限制指導(dǎo)原那么,進(jìn)行全面的細(xì) 胞質(zhì)量、平安性和有效性的檢驗(yàn).同時(shí),根據(jù)細(xì)胞來(lái)源及特 點(diǎn)、體外處理程度和臨床適應(yīng)證等不

11、同情況,對(duì)所需的檢驗(yàn) 內(nèi)容做必要調(diào)整.另外,隨著對(duì)干細(xì)胞知識(shí)和技術(shù)熟悉的不 斷增加,細(xì)胞檢驗(yàn)內(nèi)容也應(yīng)隨之不斷更新.針對(duì)不同類型的干細(xì)胞制劑,根據(jù)對(duì)輸入或植入人體前誘導(dǎo)分化的需求,須對(duì)未分化細(xì)胞和終末分化細(xì)胞分別進(jìn)行 必要的檢驗(yàn).對(duì)胚胎干細(xì)胞和 iPS細(xì)胞制劑制備過(guò)程中所使 用的滋養(yǎng)細(xì)胞,根據(jù)其細(xì)胞來(lái)源,也需進(jìn)行針對(duì)相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因 素的質(zhì)量限制和檢驗(yàn).為保證制劑的質(zhì)量及其可控性,干細(xì)胞制劑的檢驗(yàn)可分 為質(zhì)量檢驗(yàn)和放行檢驗(yàn).質(zhì)量檢驗(yàn)是為保證干細(xì)胞經(jīng)特定體外處理后的平安性、有效性和質(zhì)量可控性而進(jìn)行的較全面質(zhì)量檢驗(yàn).放行檢驗(yàn)是在完成質(zhì)量檢驗(yàn)的根底上,對(duì)每一類型 的每一批次干細(xì)胞制劑,在臨床應(yīng)用前所應(yīng)進(jìn)行的

12、相對(duì)快速 和簡(jiǎn)化的細(xì)胞檢驗(yàn).為保證制劑工藝和質(zhì)量的穩(wěn)定性,須對(duì)多批次干細(xì)胞制 劑進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)；在制備工藝、場(chǎng)地或規(guī)模等發(fā)生變化時(shí), 需重新對(duì)多批次干細(xì)胞制劑進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn).制劑的批次是指 由同一供體、同一組織來(lái)源、同一時(shí)間、使用同一工藝采集 和別離或建立的干細(xì)胞.對(duì)胚胎干細(xì)胞或iPS細(xì)胞制劑,應(yīng)當(dāng)視一次誘導(dǎo)分化所獲得的可供移植的細(xì)胞為同一批次制 劑.對(duì)需要由多個(gè)供體混合使用的干細(xì)胞制劑,混合前應(yīng)視 每一獨(dú)立供體或組織來(lái)源在相同時(shí)間采集的細(xì)胞為同一批 次細(xì)胞.對(duì)于由不同供體或組織來(lái)源的、需要混合使用的干細(xì)胞制劑,需對(duì)所有獨(dú)立來(lái)源的細(xì)胞質(zhì)量進(jìn)行檢驗(yàn),以盡可能避免混合細(xì)胞制劑可能具有的危險(xiǎn)因素.2 .

13、細(xì)胞檢驗(yàn)2.1 質(zhì)量檢驗(yàn)(1)細(xì)胞鑒別應(yīng)當(dāng)通過(guò)細(xì)胞形態(tài)、遺傳學(xué)、代謝酶亞型譜分析、外表 標(biāo)志物及特定基因表達(dá)產(chǎn)物等檢測(cè),對(duì)不同供體及不同類型 的干細(xì)胞進(jìn)行綜合的細(xì)胞鑒別.(2)存活率及生長(zhǎng)活性采用不同的細(xì)胞生物學(xué)活性檢測(cè)方法,如活細(xì)胞計(jì)數(shù)、 細(xì)胞倍增時(shí)間、細(xì)胞周期、克隆形成率、端粒酶活性等,判 斷細(xì)胞活性及生長(zhǎng)狀況.(3)純度和均一性通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞外表標(biāo)志物、遺傳多態(tài)性及特定生物學(xué)活 性等,對(duì)制劑進(jìn)行細(xì)胞純度或均一性的檢測(cè).對(duì)胚胎干細(xì)胞 及iPS細(xì)胞植入人體前的終末誘導(dǎo)分化產(chǎn)物,必須進(jìn)行細(xì)胞 純度和/或分化均一性的檢測(cè).對(duì)于需要混合使用的干細(xì)胞制劑,需對(duì)各獨(dú)立細(xì)胞來(lái)源之間細(xì)胞外表標(biāo)志物、細(xì)胞活性

14、、純度和生物學(xué)活性均一性 進(jìn)行檢驗(yàn)和限制.(4)無(wú)菌試驗(yàn)和支原體檢測(cè)應(yīng)依據(jù)現(xiàn)行版?中華人民共和國(guó)藥典?中的生物制品無(wú) 菌試驗(yàn)和支原體檢測(cè)規(guī)程,對(duì)細(xì)菌、真菌及支原體污染進(jìn)行 檢測(cè).(5)細(xì)胞內(nèi)外源致病因子的檢測(cè)應(yīng)結(jié)合體內(nèi)和體外方法,根據(jù)每一細(xì)胞制劑的特性進(jìn)行 人源及動(dòng)物源性特定致病因子的檢測(cè).如使用過(guò)牛血清,須 進(jìn)行牛源特定病毒的檢測(cè)；如使用胰酶等豬源材料,應(yīng)至少 檢測(cè)豬源細(xì)小病毒；如胚胎干細(xì)胞和 iPS細(xì)胞在制備過(guò)程中 使用動(dòng)物源性滋養(yǎng)細(xì)胞,需進(jìn)行細(xì)胞來(lái)源相關(guān)特定動(dòng)物源性 病毒的全面檢測(cè).另外還應(yīng)檢測(cè)逆轉(zhuǎn)錄病毒.(6)內(nèi)毒素檢測(cè)應(yīng)依據(jù)現(xiàn)行版?中華人民共和國(guó)藥典?中的內(nèi)毒素檢測(cè)規(guī)程,對(duì)內(nèi)毒素進(jìn)行

15、檢測(cè).(7)異常免疫學(xué)反響檢測(cè)異體來(lái)源干細(xì)胞制劑對(duì)人總淋巴細(xì)胞增殖和對(duì)不 同淋巴細(xì)胞亞群增殖水平的影響,或?qū)ο嚓P(guān)細(xì)胞因子分泌的 影響,以檢測(cè)干細(xì)胞制劑可能引起的異常免疫反響.(8)致瘤性對(duì)于異體來(lái)源的干細(xì)胞制劑或經(jīng)體外復(fù)雜操作的自體 干細(xì)胞制劑,須通過(guò)免疫缺陷動(dòng)物體內(nèi)致瘤試驗(yàn),檢驗(yàn)細(xì)胞 的致瘤性.(9)生物學(xué)效力試驗(yàn)可通過(guò)檢測(cè)干細(xì)胞分化潛能、誘導(dǎo)分化細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和生 理功能、對(duì)免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)水平、分泌特定細(xì)胞因子、表達(dá) 特定基因和蛋白等功能,判斷干細(xì)胞制劑與治療相關(guān)的生物 學(xué)有效性.對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞,無(wú)論何種來(lái)源,應(yīng)進(jìn)行體外多種類型 細(xì)胞(如成脂肪細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞等)分化水平的檢測(cè),以判

16、斷其細(xì)胞分化的多能性( Multipotency ).對(duì)未 分化的胚胎干細(xì)胞和iPS細(xì)胞,須通過(guò)體外擬胚胎體形成能 力,或在SCID鼠體內(nèi)形成畸胎瘤的水平,檢測(cè)其細(xì)胞分化 的多能性(Pluripotency ).除此以外,作為特定生物學(xué)效應(yīng) 試驗(yàn),應(yīng)進(jìn)行與其治療適應(yīng)證相關(guān)的生物學(xué)效應(yīng)檢驗(yàn).(10)培養(yǎng)基及其他添加成分剩余量的檢測(cè)應(yīng)對(duì)制劑制備過(guò)程中剩余的、影響干細(xì)胞制劑質(zhì)量和安全性的成分,如牛血清蛋白、抗生素、細(xì)胞因子等進(jìn)行檢測(cè).2.2 放行檢驗(yàn)工程申請(qǐng)者應(yīng)根據(jù)上述質(zhì)量檢驗(yàn)各工程中所明確的檢驗(yàn)內(nèi)容及標(biāo)準(zhǔn),針對(duì)每一類型干細(xì)胞制劑的特性,制定放行 檢驗(yàn)工程及標(biāo)準(zhǔn).放行檢驗(yàn)工程應(yīng)能在相對(duì)短的時(shí)間內(nèi),反

17、 映細(xì)胞制劑的質(zhì)量及平安信息.3 .干細(xì)胞制劑的質(zhì)量復(fù)核由專業(yè)細(xì)胞檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)/實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行干細(xì)胞制劑的質(zhì)量復(fù)核檢驗(yàn),并由具檢驗(yàn)報(bào)告.(四)干細(xì)胞制劑的質(zhì)量研究在滿足上述干細(xì)胞制劑質(zhì)量檢驗(yàn)要求的根底上,建議在 臨床前和臨床研究各階段,利用不同的體外實(shí)驗(yàn)方法對(duì)干細(xì) 胞制劑進(jìn)行全面的平安性、有效性及穩(wěn)定性研究.1 .干細(xì)胞制劑的質(zhì)量及特性研究1.1 生長(zhǎng)活性和狀態(tài)生長(zhǎng)因子依賴性的檢測(cè)：在培養(yǎng)生長(zhǎng)因子依賴性的干細(xì) 胞時(shí),需對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)行為進(jìn)行連續(xù)檢測(cè),以判斷不同代次的 細(xì)胞對(duì)生長(zhǎng)因子的依賴性.假設(shè)細(xì)胞在傳代過(guò)程中,特別是在 接近高代次時(shí),失去對(duì)生長(zhǎng)因子的依賴,那么不能再繼續(xù)將其 視為合格的干細(xì)胞而繼續(xù)培養(yǎng)和

18、使用.1.2 致瘤性和促瘤性由于大多數(shù)間充質(zhì)干細(xì)胞制劑具有相對(duì)的弱致瘤性,建 議在動(dòng)物致瘤性試驗(yàn)中,針對(duì)不同類型的干細(xì)胞,選擇必要 數(shù)量的細(xì)胞和必要長(zhǎng)的觀察期.在動(dòng)物致瘤性試驗(yàn)不能有效判斷致瘤性時(shí),建議檢測(cè)與 致瘤性相關(guān)的生物學(xué)性狀的改變,如細(xì)胞對(duì)生長(zhǎng)因子依賴性的改變、基因組穩(wěn)定性的改變、 與致瘤性密切相關(guān)的蛋白如 癌變信號(hào)通路中的關(guān)鍵調(diào)控蛋白表達(dá)水平或活性的改變、對(duì)凋亡誘導(dǎo)敏感性的改變等,以此來(lái)間接判斷干細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的可能性.目前,普遍認(rèn)為間充質(zhì)干細(xì)胞“不致瘤或具有“弱致瘤性, 但不排除其對(duì)已存在腫瘤的“促瘤性作用.因此,建議根據(jù) 各自間充質(zhì)干細(xì)胞制劑的組織來(lái)源和臨床適應(yīng)證的不同,設(shè) 計(jì)相應(yīng)

19、的試驗(yàn)方法,以判斷其制劑的“促瘤性.1.3 生物學(xué)效應(yīng)隨著研究的進(jìn)展,建議針對(duì)臨床治療的適應(yīng)證,不斷研究更新生物學(xué)效應(yīng)檢測(cè)方法.如研究介導(dǎo)臨床治療效應(yīng)的關(guān)鍵基因或蛋白的表達(dá),并以此為根底提由與預(yù)期的生物學(xué)效應(yīng)相關(guān)的替代性生物標(biāo)志物Surrogate Biomarker .2 .干細(xì)胞制劑穩(wěn)定性研究及有效期確實(shí)定應(yīng)進(jìn)行干細(xì)胞制劑在儲(chǔ)存液氮凍存和細(xì)胞植入前的臨時(shí)存放和運(yùn)輸過(guò)程中的穩(wěn)定性研究.檢測(cè)工程應(yīng)包括細(xì)胞活性、密度、純度、無(wú)菌性等.根據(jù)干細(xì)胞制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果,確定其制劑的保存液 成份與配方、保存及運(yùn)輸條件、有效期,同時(shí)確定與有效期 相適應(yīng)的運(yùn)輸容器和工具,以及合格的細(xì)胞凍存設(shè)施和條件C3 .

20、快速檢驗(yàn)方法的研發(fā)應(yīng)根據(jù)新的干細(xì)胞根底及實(shí)驗(yàn)技術(shù)研究成果,針對(duì)各自 干細(xì)胞制劑的特性、特定的臨床適應(yīng)證,研發(fā)新的快速檢驗(yàn) 方法,用于干細(xì)胞制備過(guò)程各階段的質(zhì)量限制和制劑的放行 檢驗(yàn).三.干細(xì)胞制劑的臨床前研究應(yīng)進(jìn)行干細(xì)胞制劑的臨床前研究,為治療方案的平安性 和有效性提供支持和依據(jù).在臨床前研究方案中,應(yīng)設(shè)計(jì)和提由與適應(yīng)證相關(guān)的疾 病動(dòng)物模型,用于預(yù)測(cè)干細(xì)胞在人體內(nèi)可能的治療效果、作 用機(jī)制、不良反響、適宜的輸入或植入途徑和劑量等臨床研 究所需的信息.應(yīng)在適宜的動(dòng)物模型根底上,研究和建立干細(xì)胞有效標(biāo)記技術(shù)和動(dòng)物體內(nèi)干細(xì)胞示蹤技術(shù),以便于研究上述內(nèi)容, 特別是干細(xì)胞的體內(nèi)存活、分布、歸巢、分化和組

21、織整合等 功能的研究.在綜合動(dòng)物模型研究根底上,應(yīng)對(duì)干細(xì)胞制劑 的平安性和生物學(xué)效應(yīng)進(jìn)行合理評(píng)價(jià).鑒于干細(xì)胞治療的特殊性,其臨床前的平安有效性評(píng)價(jià) 具有較大難度和局限性,以下只提由一些根本的原那么,具體 的研究方案可根據(jù)這些原那么制定.如進(jìn)行的相關(guān)研究工作與 下述原那么不符,應(yīng)提供相應(yīng)的依據(jù)和支持性資料.一平安性評(píng)價(jià)1 .毒性試驗(yàn)可通過(guò)適宜的動(dòng)物試驗(yàn)?zāi)Ｐ陀^察干細(xì)胞制劑各種可能 的毒性反響,如細(xì)胞植入時(shí)和植入后的局部和整體的毒性反 應(yīng).如難以采用相關(guān)動(dòng)物評(píng)價(jià)人干細(xì)胞的毒性,可考慮盡可 能模擬臨床應(yīng)用方式,采用動(dòng)物來(lái)源相應(yīng)的干細(xì)胞制劑,以 高于臨床應(yīng)用劑量回輸動(dòng)物體內(nèi),觀察其毒性反響.2 .異常免

22、疫反響對(duì)干細(xì)胞制劑特別是異體來(lái)源、經(jīng)體外傳代培養(yǎng)和特殊處理的自體或異體來(lái)源的制劑,應(yīng)當(dāng)通過(guò)體外及動(dòng)物試驗(yàn)評(píng) 價(jià)其異常免疫反響,包括對(duì)不同免疫細(xì)胞亞型及相關(guān)細(xì)胞因 子的影響.對(duì)胚胎干細(xì)胞及 iPS細(xì)胞,在體外誘導(dǎo)分化后重 新表達(dá)供體的HLA抗原分子,植入體內(nèi)后可能形成的免疫排 斥反響,需進(jìn)行有效評(píng)價(jià).3 .致瘤性對(duì)高代次的或經(jīng)過(guò)體外復(fù)雜處理和修飾的自體來(lái)源以及各種異體來(lái)源的干細(xì)胞制劑,應(yīng)當(dāng)進(jìn)行臨床前研究階段動(dòng) 物致瘤性評(píng)估.建議選擇適宜的動(dòng)物模型,使用適宜數(shù)量的 干細(xì)胞、合理的植入途徑和足夠長(zhǎng)的觀察期,以有效評(píng)價(jià)制 劑的致瘤性.4 .非預(yù)期分化非預(yù)期分化包括非靶細(xì)胞分化或非靶部位分化.建議利 用

23、特定的檢測(cè)技術(shù),在體內(nèi)動(dòng)物試驗(yàn)中研究、評(píng)估和監(jiān)控干 細(xì)胞非預(yù)期分化的可能性.二有效性評(píng)價(jià)1 .細(xì)胞模型見(jiàn)前述-干細(xì)胞制劑的質(zhì)量研究2 .動(dòng)物模型用于觀察植入的干細(xì)胞或其分化產(chǎn)物改變模型中疾病 的病理進(jìn)程；研究干細(xì)胞的歸巢水平和免疫調(diào)節(jié)功能；通過(guò) 分析干細(xì)胞植入后,特定細(xì)胞因子和/或特定基因表達(dá)情況,提由替代性生物學(xué)效應(yīng)標(biāo)志物.假設(shè)所申請(qǐng)的研究方案,因目前國(guó)際上干細(xì)胞生物學(xué)知識(shí) 和技術(shù)方面的局限性,無(wú)法提由有效的體內(nèi)動(dòng)物模型研究?jī)?nèi) 容,那么應(yīng)在臨床前研究報(bào)告中進(jìn)行全面細(xì)致的說(shuō)明.名詞解釋：干細(xì)胞制劑Stem cell-based medicinal products :是指用 于治療疾病或改善健

24、康狀況的、以不同類型干細(xì)胞為主要成分、 符合 相應(yīng)質(zhì)量及平安標(biāo)準(zhǔn),且具有明確生物學(xué)效應(yīng)的細(xì)胞制劑.胚胎干細(xì)胞Embryonic stem cell :源自第5-7天的胚胎中內(nèi) 細(xì)胞團(tuán)的初始未分化細(xì)胞,可在體外非分化狀態(tài)下“無(wú)限制地 自我更新,并且具有向三個(gè)胚層所有細(xì)胞分化的潛力,但不具有形成胚外組織如胎盤的水平.成體干細(xì)胞Somatic stem cell :位于各種分化組織中未分化 的干細(xì)胞,這類干細(xì)胞具有有限的自我更新和分化潛力.間充質(zhì)干細(xì)胞Mesenchymalstromal/stem cell , MS.： 一類 存在于多種組織如骨髓、臍帶血和臍帶組織、胎盤組織、脂肪組織 等,具有多向

25、分化潛力,非造血干細(xì)胞的成體干細(xì)胞.這類干細(xì)胞 具有向多種間充質(zhì)系列細(xì)胞如成骨、成軟骨及成脂肪細(xì)胞等或非 間充質(zhì)系列細(xì)胞分化的潛能,并具有獨(dú)特的細(xì)胞因子分泌功能.祖細(xì)胞Progenitors :一類只能向特定細(xì)胞系列分化,并且只具備有限的分裂增殖水平的成體細(xì)胞前體細(xì)胞(Precursors ):一類只能向特定終末分化細(xì)胞分化的, 較祖細(xì)胞更有限的增殖水平的成體細(xì)胞.造血干細(xì)胞(Hematopoietic stem cell )：具有高度自我更新能 力和多向分化潛能的造血前體細(xì)胞,可分化成紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小 板和淋巴細(xì)胞.誘導(dǎo)的多能性干細(xì)胞(Induced pluripotent stem c

26、ell, iPS): 一類通過(guò)基因轉(zhuǎn)染等細(xì)胞重編程技術(shù)人工誘導(dǎo)獲得的,具有類似于胚 胎干細(xì)胞多能性分化潛力的干細(xì)胞.胚胎干細(xì)胞系(Embryonic stem cell line ):在體外培養(yǎng)的條 件下,可保持未分化狀態(tài)連續(xù)增殖的胚胎干細(xì)胞.全能性(Totipotent ):是早期數(shù)天胚胎中,具有分化成機(jī)體所 有類型細(xì)胞和形成完全胚胎水平的干細(xì)胞.亞全能性(Pluripotent )：是具有形成機(jī)體各種類型細(xì)胞,即所 有三胚層來(lái)源細(xì)胞的水平,但不具有形成胚外胎組織細(xì)胞的水平.多能性(Multipotent ):是指具有形成機(jī)體內(nèi)超過(guò)一種類型細(xì)胞 的水平,但往往是針對(duì)特定細(xì)胞系列的.滋養(yǎng)層細(xì)胞

27、(Feeder layer ):是指通過(guò)細(xì)胞-細(xì)胞相互作用,或 分泌蛋白或其他物質(zhì),位于胚胎干細(xì)胞和iPS細(xì)胞的培養(yǎng)底層,以支 持這些干細(xì)胞生長(zhǎng)的動(dòng)物源性或人源性細(xì)胞.畸胎瘤(Teratoma): 一種含有三個(gè)胚層組織細(xì)胞和分化的組織 的良性腫瘤.參考文獻(xiàn)：1 .?人體細(xì)胞治療研究和制劑質(zhì)量限制技術(shù)指導(dǎo)原那么?(2003)2 .?中華人民共和國(guó)藥典?2021版,第三部.3 .王軍志等.?生物技術(shù)藥物研究開(kāi)發(fā)和質(zhì)量限制?(第二版),科學(xué)出版社,2007.4 .European Pharmacopeia-Method 5.2.3-Cell substrates for the production

28、 of vaccines for human use.5 .WHO - Recommendations for the evaluation of animal cell cultures as substrates for the manufacture of biological medicinal products and for the characterization of cell banks (2021).6 . FDA Guidance for Industry-Characterization and Qualification of Cell Substrates and other Biological Materials Used in the Production of Viral Vaccines for Infectious Disease Indications (2021)7 . ICH Guidelin