實驗四微生物細胞大小測定及顯微鏡下細胞數(shù)量測定

1、實驗四實驗四 微生物細胞大小的測定微生物細胞大小的測定及顯微鏡下直接計數(shù)及顯微鏡下直接計數(shù)主要實驗內(nèi)容：主要實驗內(nèi)容：1 顯微鏡下細菌細胞顯微鏡下細菌細胞大小大小的測定的測定2 血球計數(shù)板測定微生物細胞的血球計數(shù)板測定微生物細胞的數(shù)量數(shù)量 （顯微鏡下直接計數(shù)）（顯微鏡下直接計數(shù)） 一一 顯微鏡下細菌細胞顯微鏡下細菌細胞大小大小的測定的測定1 實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康? 實驗原理實驗原理3 實驗材料實驗材料4 實驗方法步驟實驗方法步驟5 實驗報告實驗報告1 實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康?學習用鏡臺測微尺校正目鏡測微尺的方法學習用鏡臺測微尺校正目鏡測微尺的方法 學習并掌握用目鏡測微尺測定細菌細胞大小學習并掌握用目鏡測

2、微尺測定細菌細胞大小 的方法的方法 鞏固顯微鏡油鏡的使用方法鞏固顯微鏡油鏡的使用方法2 實驗原理實驗原理 測定微生物細胞大小是在顯微鏡下利用測定微生物細胞大小是在顯微鏡下利用測微尺測微尺進行。進行。測微尺可分為測微尺可分為目鏡測微尺目鏡測微尺和和鏡臺測微尺鏡臺測微尺。目鏡測微尺目鏡測微尺是特是特制的圓形玻片，中央有一刻度尺（制的圓形玻片，中央有一刻度尺（100100等分等分），可放入目），可放入目鏡鏡筒內(nèi)，用于測定細胞大小。鏡鏡筒內(nèi)，用于測定細胞大小。鏡臺測微尺鏡臺測微尺為一載玻片，為一載玻片，上貼有圓形蓋片，中央有總長度為上貼有圓形蓋片，中央有總長度為1 1mm(100mm(100等分等分)

3、 )，每小格，每小格長長0.010.01mmmm (10um) (10um) 。目鏡測微尺每小格大小隨顯微鏡放大目鏡測微尺每小格大小隨顯微鏡放大倍數(shù)不同而改變，倍數(shù)不同而改變，使用目鏡測微尺進行測量之前必須用鏡使用目鏡測微尺進行測量之前必須用鏡臺測微尺標定臺測微尺標定，以求出在某一放大倍數(shù)下目鏡測微尺每小，以求出在某一放大倍數(shù)下目鏡測微尺每小格所代表的長度，然后用標定好的目鏡測微尺進行測量。格所代表的長度，然后用標定好的目鏡測微尺進行測量。 3 實驗材料實驗材料 枯草桿菌標本片枯草桿菌標本片4 實驗方法步驟實驗方法步驟（1）用鏡臺測微尺標定目鏡測微尺。）用鏡臺測微尺標定目鏡測微尺。（2）用目鏡

4、測微尺測定枯草桿菌大小。）用目鏡測微尺測定枯草桿菌大小。（1）用鏡臺測微尺標定目鏡測微尺。）用鏡臺測微尺標定目鏡測微尺。 放置目尺放置目尺：取出目鏡，旋開接目鏡，將目尺放在目鏡鏡筒：取出目鏡，旋開接目鏡，將目尺放在目鏡鏡筒的中間隔板上（有刻度的一面朝下），旋上接目鏡，并插入的中間隔板上（有刻度的一面朝下），旋上接目鏡，并插入鏡筒。鏡筒。 放置臺尺放置臺尺：將臺尺放置于顯微鏡的載物臺上，使刻度面朝：將臺尺放置于顯微鏡的載物臺上，使刻度面朝上。上。 標定目尺標定目尺：先用低倍鏡觀察，找到臺尺刻度，轉(zhuǎn)動目鏡使：先用低倍鏡觀察，找到臺尺刻度，轉(zhuǎn)動目鏡使目尺與臺尺的刻度軸線相平行，移動臺尺使目尺與臺尺某

5、一目尺與臺尺的刻度軸線相平行，移動臺尺使目尺與臺尺某一區(qū)間的兩對刻度線完全重合，然后計數(shù)出兩重合線間各自所區(qū)間的兩對刻度線完全重合，然后計數(shù)出兩重合線間各自所占格數(shù)，通過如下公式計算：占格數(shù)，通過如下公式計算：目尺每小格長度（目尺每小格長度（um）=兩對重合刻度線之間臺尺所占格數(shù)兩對重合刻度線之間臺尺所占格數(shù)1010 兩對重合刻度線之間目尺所占格數(shù)兩對重合刻度線之間目尺所占格數(shù) 標定低倍鏡目尺每小格所代表的實際長度標定低倍鏡目尺每小格所代表的實際長度 （2）用目鏡測微尺測定枯草桿菌大?。┯媚跨R測微尺測定枯草桿菌大小取下臺尺，將染色片放在載物臺上，先用低倍鏡取下臺尺，將染色片放在載物臺上，先用低

6、倍鏡觀察，后換油鏡觀測，計量細菌觀察，后換油鏡觀測，計量細菌長和寬長和寬所占小所占小格數(shù)，將測得格數(shù)乘以已標定的目尺每小格長，格數(shù)，將測得格數(shù)乘以已標定的目尺每小格長，即得菌體實際大小。即得菌體實際大小。測定測定2020個菌體個菌體求出平均值。求出平均值。 5 實驗結(jié)果記錄實驗結(jié)果記錄（1 1） 目鏡測微尺標定結(jié)果記錄目鏡測微尺標定結(jié)果記錄物鏡物鏡物鏡放大倍數(shù)物鏡放大倍數(shù)目鏡測微尺格數(shù)目鏡測微尺格數(shù)鏡臺測微尺格數(shù)鏡臺測微尺格數(shù)目鏡測微尺每格目鏡測微尺每格代表長度（代表長度（umum）低倍鏡低倍鏡10?油鏡油鏡1000.5um只標定低倍鏡每格的長度。高倍鏡和油鏡學生不要標定！只標定低倍鏡每格的長

7、度。高倍鏡和油鏡學生不要標定！（2 2） 在油鏡下測量枯草桿菌大小結(jié)果記錄在油鏡下測量枯草桿菌大小結(jié)果記錄 菌體菌體編號編號寬寬長長菌體大小菌體大小（平均值）（平均值）寬寬 長（長（umum） 目尺目尺格數(shù)格數(shù)菌體寬菌體寬（um）平均值平均值（um）目尺目尺格數(shù)格數(shù)菌體長菌體長（um）平均值平均值（um）1234520.二二 血球計數(shù)板測定微生物細胞的數(shù)量血球計數(shù)板測定微生物細胞的數(shù)量1 實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康? 實驗原理實驗原理3 實驗材料實驗材料4 實驗方法步驟實驗方法步驟5 實驗報告實驗報告1 實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康?掌握血球計數(shù)板測定微生物細胞數(shù)量的原理。掌握血球計數(shù)板測定微生物細胞數(shù)量的原理。

8、學習用血球計數(shù)板測定微生物細胞數(shù)量的方法。學習用血球計數(shù)板測定微生物細胞數(shù)量的方法。2 實驗原理實驗原理 利用血球計數(shù)板在顯微鏡下直接計利用血球計數(shù)板在顯微鏡下直接計數(shù)，是將菌懸液放入血球計數(shù)板與蓋玻數(shù)，是將菌懸液放入血球計數(shù)板與蓋玻片之間的計數(shù)室中，然后在顯微鏡下計片之間的計數(shù)室中，然后在顯微鏡下計數(shù)，因為計數(shù)室容積一定，所以可根據(jù)數(shù)，因為計數(shù)室容積一定，所以可根據(jù)測定值推算出菌懸液單位體積所含微生測定值推算出菌懸液單位體積所含微生物的總數(shù)量。物的總數(shù)量。 血球計數(shù)板的結(jié)構(gòu)血球計數(shù)板的結(jié)構(gòu) 它是特制的厚載玻片，中央?yún)^(qū)域有四條凹槽而形成三它是特制的厚載玻片，中央?yún)^(qū)域有四條凹槽而形成三個平臺，中

9、間平臺較寬，它又被一短橫槽分隔為兩部分，個平臺，中間平臺較寬，它又被一短橫槽分隔為兩部分，每一部分均有一個方格網(wǎng)。每一部分均有一個方格網(wǎng)。中間平臺比兩邊平臺低中間平臺比兩邊平臺低0.1mm0.1mm。每一方格網(wǎng)可分為九個大方格，每一方格網(wǎng)可分為九個大方格，中央大方格就是計數(shù)室中央大方格就是計數(shù)室。大大方格方格分為分為1616個中個中方格，每個方格，每個中中方格又方格又可分為可分為2525個小個小方格。每個大方格方格。每個大方格共含有共含有400400個小方格。計數(shù)室大個小方格。計數(shù)室大方格邊長為方格邊長為1 1mmmm，底面積為底面積為1 1mmmm2 2，高高0.10.1mm,mm,所以所以

10、每個計數(shù)室固定每個計數(shù)室固定容積為容積為0.10.1mmmm3 3。 計數(shù)方法計數(shù)方法 在計數(shù)時，用含在計數(shù)時，用含2525個中方格的計數(shù)板，要按對角線方位個中方格的計數(shù)板，要按對角線方位計數(shù)左上、左下、右上、右下等四個中方格（計數(shù)左上、左下、右上、右下等四個中方格（8080個小方格）個小方格）所含有的菌數(shù)；由此可計算得出每個小方格所含有的菌數(shù)所含有的菌數(shù)；由此可計算得出每個小方格所含有的菌數(shù)的平均值，的平均值，計數(shù)室每個小方格容積為：計數(shù)室每個小方格容積為： 0.1 0.11010-3-3400400（1 14 4）1010-6-6( (ml)ml)計算公式：計算公式：每每mlml菌液含菌數(shù)

11、菌液含菌數(shù) = = N N K K d d N N：每個小方格含菌數(shù)平均值；每個小方格含菌數(shù)平均值； d d：菌液稀釋倍數(shù)；菌液稀釋倍數(shù)； K = 4 K = 410106 6 3 實驗材料實驗材料稀釋稀釋100倍倍的酵母菌菌懸液的酵母菌菌懸液即即 d=1004實驗方法步驟實驗方法步驟1 1 鏡檢計數(shù)室：鏡檢計數(shù)室：對計數(shù)室進行鏡檢，若內(nèi)有污物，清洗后才能計對計數(shù)室進行鏡檢，若內(nèi)有污物，清洗后才能計 數(shù)。數(shù)。2 2 加樣液：加樣液：先先在血球計數(shù)板兩個計數(shù)室部位在血球計數(shù)板兩個計數(shù)室部位加蓋玻片加蓋玻片，再用無菌，再用無菌 玻棒玻棒或滴管沾取待測或滴管沾取待測菌懸液稀釋液菌懸液稀釋液（已搖勻）

12、，從蓋玻片（已搖勻），從蓋玻片邊緣邊緣 滴加滴加，使菌液沿縫隙靠，使菌液沿縫隙靠毛細作用毛細作用自行進入計數(shù)室內(nèi)。自行進入計數(shù)室內(nèi)。靜置靜置5 5minmin。3 3 顯微鏡計數(shù)：顯微鏡計數(shù)：將血球計數(shù)板置于載物臺上，先用將血球計數(shù)板置于載物臺上，先用低倍鏡低倍鏡觀察，后觀察，后 換換高倍鏡高倍鏡觀察計數(shù)。位于格線上菌體只計觀察計數(shù)。位于格線上菌體只計上邊線和左邊線上上邊線和左邊線上的，的， 如果如果出芽酵母芽體大小達到母細胞一半時，可計作兩個菌體。出芽酵母芽體大小達到母細胞一半時，可計作兩個菌體。選選 擇擇五個視野五個視野，在每個視野內(nèi)任意選擇，在每個視野內(nèi)任意選擇五個小方格五個小方格計數(shù)，

13、計數(shù)，求出小方求出小方 格菌體數(shù)量平均值格菌體數(shù)量平均值。4 4 根據(jù)公式計算每根據(jù)公式計算每mlml菌液含菌數(shù)。菌液含菌數(shù)。5 5 測量完畢后，取下蓋玻片用水沖洗血球計數(shù)板（測量完畢后，取下蓋玻片用水沖洗血球計數(shù)板（嚴禁用硬物刷嚴禁用硬物刷 洗洗），晾干，放入盒內(nèi)保存。），晾干，放入盒內(nèi)保存。注意事項注意事項（1 1）取待測稀釋菌懸液向血球計數(shù)板加樣前，須將菌懸）取待測稀釋菌懸液向血球計數(shù)板加樣前，須將菌懸 液充分搖勻。液充分搖勻。（2 2）加樣過程中，應(yīng)避免將菌液滴在蓋玻片上。）加樣過程中，應(yīng)避免將菌液滴在蓋玻片上。（3 3）由于菌體在計數(shù)室中處于不同空間位置，須在不同）由于菌體在計數(shù)室中處于不同空間位置，須在不同 焦距下才能觀察到，故觀察時須不斷調(diào)節(jié)微調(diào)，計焦距下才能觀察到，故觀察時須不斷調(diào)節(jié)微調(diào)，計 數(shù)菌液中全部菌體，盡量避免遺漏。數(shù)