國內(nèi)原發(fā)性肝癌的中醫(yī)藥動物實驗采用的組方和方法

1、1國內(nèi)原發(fā)性肝癌的中醫(yī)藥動物實驗采用的組方和方法2教師提出的問題 國內(nèi)原發(fā)性肝癌的中醫(yī)藥動物實驗采用了哪些組方或方法，與臨床報道異同，為什么？我們發(fā)現(xiàn)的問題 我們的分工 成高雅 葛程 金文玉 國內(nèi)原發(fā)性肝癌的中醫(yī)藥動物實驗采用了的組方或方法 顧婷婷 司嘉琪 奚善君 許贇姣 這些實驗中采用的方法與臨床報道異同3文獻檢索所采用的具體方法我們采用以下關鍵詞在CNKI以及VIP等數(shù)據(jù)庫進行了大量文獻檢索 原發(fā)性肝癌、辨證論治、證候 大鼠、小鼠、證候動物模型、動物實驗同時，我們還參閱了中醫(yī)內(nèi)科學等課本進行參照進一步分析討論 4中草藥中草藥中成藥中成藥國內(nèi)原發(fā)性肝癌的中醫(yī)藥動物實驗采用的組方和方法 清熱解

2、毒清熱解毒 活血化瘀活血化瘀 軟堅散結(jié)軟堅散結(jié) 收斂固澀收斂固澀 健脾理氣健脾理氣 補益氣血補益氣血 滋養(yǎng)肝陰滋養(yǎng)肝陰活血化瘀健脾理氣清熱解毒消癥散結(jié)祛邪：扶正：51. 祛邪：清熱解毒： 半枝蓮、白花蛇舌草、蒲公英、冬凌草等 活血化瘀： 桃仁、丹參、赤芍、八月札、茵陳、郁金、柴胡、莪術等 軟堅散結(jié)： 鱉甲、牡蠣、山慈菇等 收斂固澀: 椿皮、烏梅、山茱萸等 中草藥62. 扶正：健脾理氣： 黃芪、白芍、白術、薏苡仁、神曲、法夏、 云苓等； 補益氣血： 黃芪、肉桂、紅參、茯苓、白術、甘草、 熟地、白芍、川芎、當歸滋養(yǎng)肝陰： 生地、鱉甲、牡蠣、女貞子 7常用方劑：健脾理氣方 （黨參、白術、茯苓、八月札

3、、甘草等）； 補脾益氣方（四君子湯加黃芪）； 十全大補湯 （黃芪、肉桂、紅參、茯苓、白術、甘草、 熟地、白芍、川芎、當歸）； 扶正抑瘤方 （黃芪、靈芝、女貞子、山藥）； 養(yǎng)陰柔肝方 （由北沙參、麥冬、鱉甲、當歸等18味中藥組成）； 百合地黃湯 （百合、地黃） 。2.扶正：83. 扶正祛邪合用： 溫陽散結(jié)： 人參、附子、黃芪、白術、川椒、 莪術、青皮、白芍、甘草等解毒消癥飲: 白花蛇舌草、山慈姑、夏枯草、苦參復肝春六號: 黃芪、女貞子、牡蠣、鱉甲、莪術、 白花蛇舌草、薏苡仁、半枝蓮、桔梗等 93. 扶正祛邪合用： 扶正化瘀319方: 由蟲草菌絲、桃仁、丹參等6 6味中藥組成 扶正抗癌方: 西洋參

4、、白術、鰲甲、穿山甲、急性子、 石見穿、龍葵、漏蘆、核桃樹枝等 養(yǎng)陰解毒方: 北沙參、蟲草菌絲、七葉一枝花和莪術等 10中成藥活血化瘀： 大黃螫蟲丸、鱉甲煎丸健脾理氣： 益氣免疫沖劑（四君子湯加減）清熱解毒，消癥散結(jié)： 清肝消癥丹（成分：蟾蜍、蟑螂等）解毒散結(jié)、活血化瘀： 鱉甲煎丸和大黃蟄蟲丸聯(lián)合蟾蜍制劑疏肝理氣，化瘀通絡，健脾和胃： 肝康寧 （成分：螺旋藻粉、菊花、陳皮、山楂）解毒，消腫，止痛： 華蟾素（成分：干蟾皮提取物 ）11 國內(nèi)原發(fā)性肝癌中醫(yī)藥動物實驗采用方法舉例 不同治則對DEN誘發(fā)大鼠肝癌作用的比較研究動物造模及分組：Wistar大鼠，雄性，體重100120g，自由飲用60 80

5、ppm DEN水溶液，直到24周末實驗結(jié)束。將70只大鼠隨機分為7組，每組10只，分別為正常組、模型組、西藥組、全方組、清熱組、活血組、健脾組。西藥組加用西藥FT- 207；全方組加用清熱解毒、活血健脾理氣中藥，全方由清熱、活血、健脾方合并而成；清熱組用清熱解毒中藥，清熱方由半枝蓮、白花蛇舌草等組成；活血組用活血化癖中藥，活血方由桃仁、丹參等組成；健脾組用健脾理氣中藥，健脾方由黃芪、白術等組成。中藥的制備與給藥方法：中藥水煎劑按2：3比例兌入乙醇，4C靜置48h，過濾，濃縮至1ml含2g生藥，4C存放。FT- 207用雙蒸水溶解，4C存放。各組藥物均于下午19時加入飲水中給藥。劑量均為成人單位

6、體重的10倍量。 不同治法對大鼠肝癌相關基因轉(zhuǎn)錄作用的研究12 肝癌動物模型 二乙基亞硝胺（DEN）誘發(fā)大鼠肝癌：取體重250g左右的封閉群大白鼠，雌雄不拘。按性別分籠飼養(yǎng)。除給普通食物外，飼以致癌物，即用0.25轓水溶液灌胃，劑量為10mg/kg，每周一次，其余5天用0.025轓水溶液放入水瓶中，任其自由飲用。共約4個月可誘發(fā)成肝癌?；騿斡?.005%摻入飲水中口吸服8個月誘發(fā)肝癌。 4-2甲基氨基氮苯（DBA）誘發(fā)大鼠肝癌： 2-乙酰氨基酸（2AAF）誘發(fā)大鼠肝癌： 亞胺基偶氮甲苯（OAAT）誘發(fā)小鼠肝癌：13 國內(nèi)原發(fā)性肝癌中醫(yī)藥動物實驗采用方法舉例 大黃螫蟲丸對荷瘤小鼠免疫作用的研究藥

7、物制備：取大黃螫蟲丸(上海雷允上藥業(yè)有限公司提供，生產(chǎn)批號:040501)置煎煮容器內(nèi)，加適量的冷水浸泡12h，煮沸30 min，過濾。藥渣加35倍量水繼續(xù)煎煮，煮沸20 min，過濾。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成相當于原生藥材1g/mL的藥液，冷卻裝人滅菌藥瓶，置4冰箱備用。實驗方法 造模方法：無菌條件下取生長79 d傳代接種的H22細胞株，將細胞5x106接種于每只小鼠右側(cè)腋窩皮下。 動物分組及給藥方法：小鼠30只，10只作為正常組，其余均按上法造模。小鼠接種腫瘤5d后，隨機分成對照組和實驗組，每組10只，對照組予以生理鹽水處理，實驗組給予大黃蟄蟲丸水煎液1g/mL該劑量通過LD50確定，

8、均灌胃0. 2 mL/只，連續(xù)給藥15 d。14 國內(nèi)原發(fā)性肝癌中醫(yī)藥動物實驗采用方法舉例 清熱解毒和補益中藥對小鼠腹水肝癌H22細胞的作用及免疫學機制選擇冬凌草、半枝蓮為清熱解毒中藥代表藥，并與補益代表藥黃芪進行比較將50只KM小鼠隨機分為模型組、冬凌草組、半枝蓮組、黃芪組和熱休克處理對照組(熱休克組) 。在活體肝癌H22腹水細胞腹腔接種后當天，冬凌草組、半枝蓮組和黃芪組分別以30、15、15 gk g-1d-1的劑量灌胃給藥，連續(xù)12 d；熱休克組小鼠以43熱處理20m i n，每4天1次，共 3次；模型組不予任何處理。12 d 后處死小鼠分別抽取腹水制片，光鏡下觀察細胞形態(tài)，并采用免疫組

9、化法檢測腹水CD4+、CD8 +T細胞表達。15u 這些實驗研究中存在的異同 肝癌小鼠造模的不同 給藥方式的不同抑癌扶正行氣活血方(半枝蓮、白花蛇舌草、桃仁、丹參、黃芪、白術等),清熱方(半枝蓮、白花蛇舌草等)、活血方(桃仁、丹參等)、健脾方(黃芪、白術等)。采用標準的水煎醇沉工藝制備的中藥及西藥加工混合于喂混合于喂養(yǎng)大鼠的顆粒飼料中養(yǎng)大鼠的顆粒飼料中，作為一種治療方式。用清熱解毒、活血化安和健脾益氣方藥治療時，將中藥水煎劑提醉、過濾、濃縮后加入飲水中給藥加入飲水中給藥。大黃螫蟲丸對荷瘤小鼠免疫作用的研究中，水煎液1g/mL該劑量通過LD50確定，均灌胃灌胃0. 2 mL/只，連續(xù)給藥15 d

10、。用清熱解毒、疏肝理氣、活血化瘀治法組方時，可以通過采用灌胃灌胃的給藥方式。肝康寧和華蟾素可用局部注射局部注射的給藥途徑。16國內(nèi)原發(fā)性肝癌的中醫(yī)藥動物實驗研究的治法與臨床異同動物實驗動物實驗臨床試驗臨床試驗同同清熱解毒：半枝蓮、白花蛇舌草、蒲公英、冬凌草清熱解毒：半枝蓮、白花蛇舌草、蒲公英、冬凌草活血化瘀：大黃螫蟲丸，莪術、三棱、郁金、赤芍、桃仁活血化瘀：大黃螫蟲丸，莪術、三棱、郁金、赤芍、桃仁健脾理氣：以四君子湯為基礎方，如益氣免疫沖劑（四君子湯健脾理氣：以四君子湯為基礎方，如益氣免疫沖劑（四君子湯加減），健脾理氣方（黨參、白術、茯苓、八月札、甘草等）加減），健脾理氣方（黨參、白術、茯苓、

11、八月札、甘草等），補脾益氣方（四君子湯加黃芪），補脾益氣方（四君子湯加黃芪）滋補肝陰肝血：生地、女貞子、鱉甲、當歸滋補肝陰肝血：生地、女貞子、鱉甲、當歸所用的經(jīng)方：四君子湯、小柴胡湯、四君子湯加減所用的經(jīng)方：四君子湯、小柴胡湯、四君子湯加減 選用華蟾素注射液選用華蟾素注射液 異異滋陰涼血、清熱潤肺的百合滋陰涼血、清熱潤肺的百合地黃湯地黃湯自擬方劑如扶正化瘀自擬方劑如扶正化瘀319方、方、扶正抑瘤方等扶正抑瘤方等收澀類中藥收澀類中藥化濕化濕以毒攻毒以毒攻毒疏肝理氣疏肝理氣滋補肝陰肝血滋補肝陰肝血選用的方劑范圍更大，使用的中選用的方劑范圍更大，使用的中藥更多更復雜藥更多更復雜17 臨床用藥與實驗研

12、究藥物的異同及其可能原因 臨床上，治療原發(fā)性肝癌以經(jīng)方、名方偏多,出現(xiàn)頻次最多的前20種依次排列如下: 一貫煎、逍遙散、茵陳蒿湯、四君子湯、龍膽瀉肝湯、膈下逐瘀湯、柴胡疏肝散、補中益氣湯、小柴胡湯、香砂六君子湯、參苓白術散、茵陳五苓散、六君子湯、血府逐瘀湯、知柏地黃湯。 而在已有實驗中，我們確實可以看到對于四君子湯、小柴胡湯等的實驗研究，但是對于臨床上的常用方的研究并不全面。18 臨床用藥與實驗研究藥物的異同及其可能原因 而我們所查找到的文獻中，有相當數(shù)量的文獻進行動物實驗研究的是一些上市成藥如復肝春6號、木回春片、自制中藥復方等。 我們小組討論認為可能與以下原因有關：a) 新藥的研發(fā)與推廣需

13、要b)研究的難易度（實驗設計的難度、結(jié)果獲取難易度、成效的預期等因素）c) 科研的一些其他軟硬件問題（如經(jīng)費、科研設施、研究人員等）19 在中醫(yī)藥動物實驗研究中應注意的問題 中醫(yī)動物實驗研究應以中醫(yī)理論為指導 中醫(yī)動物實驗研究應從中醫(yī)臨床出發(fā) 中醫(yī)動物實驗研究應突出中醫(yī)治療原則 中醫(yī)動物模型不能照搬西醫(yī)動物模型20 中醫(yī)藥動物實驗研究的發(fā)展趨勢隨著現(xiàn)代醫(yī)學的發(fā)展，實驗研究越來越受到人們的重視。經(jīng)過近幾十年的不懈努力，我國目前已建立中醫(yī)動物模型150余種，這僅僅是初步的探索，還有待于進一步研究。中醫(yī)藥只有通過大量實驗研究，借用現(xiàn)代醫(yī)學先進技術和方法，才能使中醫(yī)藥逐漸發(fā)揚光大，逐步走向世界，為人類

14、健康事業(yè)做出更大貢獻。21參考文獻參考文獻1.包素珍等.中國中醫(yī)藥科技J. 百合地黃湯對肝癌H22荷瘤小鼠抑瘤作用的實驗研究.2006.13（5）:332.2.管冬元等.上海中醫(yī)藥大學學報J.不同治法對大鼠肝癌相關基因轉(zhuǎn)錄作用的究. 2001.9（15）:41-46.3.王洪濤等.河北中醫(yī)J.原發(fā)性肝癌中醫(yī)辨治體會.2009，31（8）:1168-1169.張軍民，張會民，賈紅敬，現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生J.中西醫(yī)結(jié)合治療原發(fā)性肝癌51 例療效觀察.2007，23（10）:1524-1525.4.閆建國等.中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志J.中醫(yī)對原發(fā)性肝癌的辨證研究及治療.2010；20（3）:189-1905.李大

15、鵬等.今日藥學J.原發(fā)性肝癌的中醫(yī)藥治療研究新進展臨床研究.2008，18（3）:13-15.6.劉慶等.中西醫(yī)結(jié)合學報J.原發(fā)性肝癌的中醫(yī)治法與方藥.2005，3（4）:260-262.7.姜勝攀.中醫(yī)雜志J.原發(fā)性肝癌的中醫(yī)治則治法與方藥芻議.2010，（51）:9394.8.王洪琦等.廣州中醫(yī)藥大學學報J. 清熱解毒和補益中藥對小鼠腹水肝癌H22細胞的作用及免疫學機制比較.2006，3（23）:156-159.9.孫 靜. 中藥新藥與臨床藥理J. 收澀類中藥對小鼠肝癌血道及淋巴道轉(zhuǎn)移的影響.2008.9（19）:347-350.10.周阿高等，中成藥J. 大黃蟄蟲丸對荷瘤小鼠免疫作用的研

16、究.2006.12（18）:1772-1774.11.孫保國等.中藥材J.復方中藥對裸鼠肝癌模型的抗癌作用研究.2007.11（30）:1417-1421.22Thank you23教師提出的問題 國內(nèi)原發(fā)性肝癌的中醫(yī)藥動物實驗采用了哪些組方或方法，與臨床報道異同，為什么？我們發(fā)現(xiàn)的問題 我們的分工 成高雅 葛程 金文玉 國內(nèi)原發(fā)性肝癌的中醫(yī)藥動物實驗采用了的組方或方法 顧婷婷 司嘉琪 奚善君 許贇姣 這些實驗中采用的方法與臨床報道異同241. 祛邪：清熱解毒： 半枝蓮、白花蛇舌草、蒲公英、冬凌草等 活血化瘀： 桃仁、丹參、赤芍、八月札、茵陳、郁金、柴胡、莪術等 軟堅散結(jié)： 鱉甲、牡蠣、山慈菇

17、等 收斂固澀: 椿皮、烏梅、山茱萸等 中草藥253. 扶正祛邪合用： 溫陽散結(jié)： 人參、附子、黃芪、白術、川椒、 莪術、青皮、白芍、甘草等解毒消癥飲: 白花蛇舌草、山慈姑、夏枯草、苦參復肝春六號: 黃芪、女貞子、牡蠣、鱉甲、莪術、 白花蛇舌草、薏苡仁、半枝蓮、桔梗等 26中成藥活血化瘀： 大黃螫蟲丸、鱉甲煎丸健脾理氣： 益氣免疫沖劑（四君子湯加減）清熱解毒，消癥散結(jié)： 清肝消癥丹（成分：蟾蜍、蟑螂等）解毒散結(jié)、活血化瘀： 鱉甲煎丸和大黃蟄蟲丸聯(lián)合蟾蜍制劑疏肝理氣，化瘀通絡，健脾和胃： 肝康寧 （成分：螺旋藻粉、菊花、陳皮、山楂）解毒，消腫，止痛： 華蟾素（成分：干蟾皮提取物 ）27u 這些實驗

18、研究中存在的異同 肝癌小鼠造模的不同 給藥方式的不同抑癌扶正行氣活血方(半枝蓮、白花蛇舌草、桃仁、丹參、黃芪、白術等),清熱方(半枝蓮、白花蛇舌草等)、活血方(桃仁、丹參等)、健脾方(黃芪、白術等)。采用標準的水煎醇沉工藝制備的中藥及西藥加工混合于喂混合于喂養(yǎng)大鼠的顆粒飼料中養(yǎng)大鼠的顆粒飼料中，作為一種治療方式。用清熱解毒、活血化安和健脾益氣方藥治療時，將中藥水煎劑提醉、過濾、濃縮后加入飲水中給藥加入飲水中給藥。大黃螫蟲丸對荷瘤小鼠免疫作用的研究中，水煎液1g/mL該劑量通過LD50確定，均灌胃灌胃0. 2 mL/只，連續(xù)給藥15 d。用清熱解毒、疏肝理氣、活血化瘀治法組方時，可以通過采用灌胃灌胃的給藥方式。肝康寧和華蟾素可用局部注射局部注射的給藥途徑。28u 這些實驗研究中存在的異同 肝癌小鼠造模的不同 給藥方式的不同抑癌扶正行氣活血方(半枝蓮、白花蛇