利用HPLC法測定注射用黃芩苷原料中黃芩苷及有關(guān)物質(zhì)的含量

1、利用HPLC法測定注射用黃苓苷原料中黃苓苷及有關(guān)物質(zhì)的含量在今天， 黃芩苷在我國的臨床醫(yī)療中應用越來越廣泛， 但是 與其相關(guān)的中藥制劑有關(guān)物質(zhì)的研究報道卻很少， 為了能夠有效 的提高黃芩苷用藥的安全性， 就需要對相關(guān)的黃芩苷原料藥的生 產(chǎn)和使用進行全面的探究， 在探究的過程中， 不斷的提升其應用 的安全性和有效性， 從而使得其在臨床醫(yī)學中的應用會越來越廣 泛。本文就利用HPLC法測定注射用黃苓苷原料中黃苓苷及有關(guān) 物質(zhì)的含量進行了簡要的探究，具體報道如下。1、材料本文研究所采用的儀器主要為分析天平、 HPLC儀、泵、脫 氣機、自動進樣器、檢測器、柱溫箱以及色譜工作站，并對各類 儀器的型號進行合

2、理的配置，以保障測定工作可以有效的開展。 同時在藥品和試劑上要做好相應的選擇， 所選擇的測定藥品為注 射使用的黃芩苷原料， 而其中的對照品需要選用多種， 主要包括 黃芩苷、漢黃芩苷、千層紙素 A-7-O 葡萄醛酸苷，另外選擇的色 譜純?yōu)榧状?，分析純?yōu)榱姿?，同時還需要準備一定量的水，而準 備的這些水需要能夠?qū)﹄x子具有去除作用。2、方法2.1 色譜條件2.1.1 檢測波長的選擇需要選用適量的黃芩苷、 千層紙素 A-7-O 葡糖醛酸苷、 漢黃 芩苷對照品以及注射使用的黃芩苷原料， 采用流動相來對這些物 質(zhì)分別進行溶液的配置，在配置完成后，每種溶液選取一定量， 對其進行紫外掃描，注意掃描的波長要控制在

3、 200-800nm 之間， 根據(jù)掃描的結(jié)果可以看出，各種對照品溶液的波長均在 274nm 處，并且具有較大的吸收效果， 而注射使用的黃芩苷原料溶液的 波長處于274nm外其他的位置，而且其在掃描的過程中，并沒有 出現(xiàn)雜質(zhì)峰， 因此， 可以將注射用黃芩苷原料溶液的波長認定在 274nm處。除此之外，還需要采用二極管陣列檢測器對各種配置 的溶液進行詳細的檢驗， 以保障溶液檢驗的合理性， 在檢驗過后， 可以得到一個吸收光譜， 而從所得的吸收光譜中， 可以明顯的驗 證黃苓苷以及其中的各種雜質(zhì)其波長均在274nm處，具有較強的吸收能力。2.1.2 流動相的選擇就有關(guān)的資料顯示， 在本文的實驗中， 采用

4、甲醇作為流動相， 采用這種溶液作為流動相做研究， 由研究的結(jié)果可以了解到， 黃 芩苷與各個成分之間所保留的時間相對來說比較均衡， 其中的主 要構(gòu)成成分，相對來說具有較好的峰形，在研究結(jié)果中，還可以 看出，其中的黃芩苷峰和其他物質(zhì)的色譜峰均能夠有效的滿足分 離度的實際標準。2.2 破壞性試驗在進行加速破壞的過程中，需要選用NaOH乍為實驗溶液加入到注射用黃芩苷原料所配置好的溶液中，注意所選擇的 NaOH 溶液的濃度分別為 1mol/L 、0.5mol/L ，而加入的注射用黃芩苷 原料所配置的溶液量為2ml，然后對溶液的變化情況進行觀察， 可以明顯的發(fā)現(xiàn)，在 NaOH加入之后，黃苓苷馬上就出現(xiàn)了分

5、離 或者是變性的現(xiàn)象，而且其中的主成分的色譜峰也立刻就消失， 使得加速破壞試驗的有效性喪失。 因此， 在進行加速破壞試驗的 過程中， 所選擇的添加溶液應該是較為溫和的堿性溶液， 也就是 對相應的NaOH容液的濃度進行降低處理，最好采用0.05mol/L的NaOH加入到注射用黃苓苷原料所配置的溶液中。2.3 溶液的制備2.3.1 供試品溶液的制備稱取注射用黃苓苷原料樣品約 5.0mg，用50%甲醇溶解并定 容至 50ml 量瓶中，作為供試品溶液。2.3.2 對照品溶液的制備 （1）黃芩苷對照品溶液：準確稱取黃芩苷對照品適量，加70%甲醇溶解并稀釋，制成質(zhì)量濃度約為100卩g/ml的黃苓苷對照品溶

6、液。（ 2）有關(guān)物質(zhì)混合對照品溶液：準確稱取千層紙素 A-7-O 葡糖醛酸苷對照品和漢黃芩苷對照品各適量，加70%甲醇溶解并稀釋，制成質(zhì)量濃度分別約為100卩g/ml的有關(guān)物質(zhì)混合 對照品溶液。2.3.31%對照溶液的制備精密量取供試品溶液 0.5ml ，置 50ml 量瓶中， 用 50%甲醇稀 釋至刻度，搖勻，作為 1%對照溶液。2.4 有關(guān)物質(zhì)測定方法取供試品溶液和對照品溶液各20卩l(xiāng)，按上述色譜條件注入HPLC儀，記錄色譜圖至主成分保留時間的4倍，以供試品溶液色譜圖中各雜質(zhì)峰峰面積、所有雜質(zhì)峰峰面積總和分別與1%對照溶液中黃芩苷色譜峰的峰面積比較，計算有關(guān)物質(zhì)的質(zhì)量分 數(shù)。2.5 線性關(guān)

7、系考察2.5.1 黃芩苷的線性關(guān)系考察分別取黃苓苷對照品溶液 5、10、15、20、25、30卩l(xiāng)，按 上述色譜條件注入HPLC儀測定，記錄峰面積。以峰面積積分值(y)對質(zhì)量濃度(x,卩g/ml )進行線性回歸，得回歸方程為 y=34241x-42184 (r=0.9999 , n=6)。結(jié)果表明，黃苓苷的質(zhì)量 濃度在50.00300.00卩g/ml范圍內(nèi)與其峰面積積分值呈良好 線性關(guān)系。2.5.2 千層紙素 A-7-O 葡糖醛酸苷的線性關(guān)系考察 取混合對照品溶液適量，用 50%甲醇稀釋成質(zhì)量濃度分別為0.21、1.27、2.33、3.39、4.45、5.51、6.57 卩 g/ml 的系列溶

8、 液，按上述色譜條件各進樣 10卩l(xiāng)，記錄峰面積。以峰面積積分 值(y)對質(zhì)量濃度(x,卩g/ml )進行線性回歸，得回歸方程為 y=36082x-3390.2 (r=0.9993 , n=7)。結(jié)果表明，千層紙素 A-7-0 葡糖醛酸苷的質(zhì)量濃度在 0.216.57卩g/ml范圍內(nèi)與其峰面積 積分值呈良好線性關(guān)系。 2.5.3 漢黃芩苷的線性關(guān)系考 察取混合對照品溶液適量，用 50%甲醇稀釋成質(zhì)量濃度分別為0.16、0.32、0.48、0.64、0.80卩g/ml的系列溶液，按上述色 譜條件各進樣10卩l(xiāng)，記錄峰面積。以峰面積積分值（y）對質(zhì) 量濃度（x，卩g/ml ）進行線性回歸，得回歸方

9、程為 y=42799x-1049.5 （r=0.9993 , n=5）。結(jié)果表明，漢黃苓苷的質(zhì) 量濃度在0.160.80卩g/ml范圍內(nèi)與其峰面積積分值呈良好線 性關(guān)系。3. 結(jié)果黃芩苷、 千層紙素 A-7-O 葡糖醛酸苷、 漢黃芩苷的質(zhì)量濃度分別在 50.00 300.00、0.21 6.57、0.16 0.80 卩 g/ml 范圍內(nèi) 與各自峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系（ r 分別為 0.9999、 0.9993、 0.9993）；平均加樣回收率分別為 99.16%、 100.69%、 99.18%, RSD分別為 1.2%、2.4%、4.6% （ n 均為 9）。黃苓苷與 有關(guān)物質(zhì)分離良好， 千層紙素 A-7-O 葡糖醛酸苷與漢黃芩苷的檢 出限分別為 0.43、 0.64ng。4. 討論樣品中漢黃芩苷的質(zhì)量分數(shù)很低， 致使本試驗中漢黃芩苷重 復性、精密度、穩(wěn)定性及加樣回收率試驗的 RSD>2%但仍符合 微量試驗對方法學的要求。 與化學原料藥相比， 注射用黃芩苷原 料中同源雜質(zhì)種類多、含量高，針對這種情況，筆者對其中的部 分雜質(zhì)建立了定