HPLC儀器實踐中具有實際使用價值的100個問題（五）

1、hplc儀器實踐中具有實際使用價值的100個問題（五） 41. hplc中產(chǎn)生色譜峰擴展的主要因素是什么？如何削減譜帶擴張？ 答：hplc中引起色譜峰擴展的主要因素是渦流蔓延、流淌相的流速過小、柱外效應(yīng)等。在hplc中，要減小色譜峰擴展或削減峰變形，可以采納提高柱效、增強流淌相的流速、采納提高檢測器敏捷度的量程等方法。還可以用削減填料顆粒直徑，減小填料孔穴深度，提高裝填的勻稱性，采納低黏度溶劑作流淌相。流淌相的流速盡可能低，同時要盡可能采納死體積較小的進樣器、檢測器(流淌池)、接頭和傳輸管線等。 42. hplc的流淌相為什么要預(yù)先脫氣？常用的脫氣辦法有哪幾種？ 答：hplc的流淌相中溶解氣體

2、后，存在以下幾個方面的害處：氣泡進入檢測器，引起光汲取變幻(電信號的變幻)，基線驟然跳躍，出異樣峰、干擾檢測正常工作；溶解在溶劑中的氣體進入色譜柱時，可能與流淌相或固定相發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；溶解氣體還會引起某些樣品的氧化降解，給分別和分析結(jié)果帶來誤差，嚴(yán)峻時還會引起色譜柱損壞。因此，用法前必需對流淌相舉行脫氣處理。 常用的脫氣法有以下幾種：加熱脫氣法；抽吸脫氣法；吹氦脫氣法；超聲波振蕩脫氣法。最常用、最容易的是抽吸脫氣法和超聲波振蕩脫氣法。 43. hplc的色譜柱有哪幾種類型？細徑柱有什么優(yōu)點？ 答：hplc色譜柱大致可分為三種類型：內(nèi)徑小于2mm的稱為細管徑或微管徑柱；內(nèi)徑在25mm范圍內(nèi)的是常

3、規(guī)高效液相色譜柱；內(nèi)徑大于5mm的普通稱為半制備柱或制備柱。細管徑柱的主要優(yōu)點是：分別效能高；流淌相最佳流速低，消耗量少；可采納多種檢測器，便于聯(lián)用(lc-ms, lgftir等)；采納細而短的毛細管柱可以提高分析速度，實現(xiàn)迅速分析。 44對 hplc的流淌相有哪些基本要求？ 答：用作液相色譜流淌相的溶劑，其純度和化學(xué)特性必需滿足色譜過程中穩(wěn)定性和重復(fù)性的要求。對樣品要有一定的溶解能力，黏度小，化學(xué)穩(wěn)定性好，避開發(fā)生不行逆的化學(xué)吸附。溶劑應(yīng)與檢測器相匹配，不干涉所用法檢測器的工作，制備色譜的溶劑應(yīng)不干擾對分別各組分的回收。除此以外，挑選的溶劑要對所給定的樣品組分具有合適的極性和良好的挑選性，還

4、要具有合適的ph。 概括起來說，我們平日用作hplc流淌相的溶劑，普通起碼應(yīng)當(dāng)有以下五個基本特點：價格比較廉價，最好毒性較??；其純度和化學(xué)特性必需滿足色譜過程中穩(wěn)定性和重復(fù)性的要求；對樣品要有一定的溶解能力，并且黏度要小，化學(xué)穩(wěn)定性要好，避開發(fā)生不行逆的化學(xué)吸附；溶劑應(yīng)與檢測器相匹配，不干涉所用法檢測器的工作，制備色譜的溶劑應(yīng)不干擾對分別各組分的回收；挑選的溶劑對所給定的樣品組分具有合適的極性和良好的挑選性。 45在硅膠柱上，用甲苯做流淌相，某組分的保留時光為30min；假如改用四氯化碳或乙醚做流淌相，哪一種溶劑可以削減該組分的保留時光？為什么？ 答：該體系是一種正向色譜體系。在該體系中流淌相

5、的極性增大時，保留時光的值會減小，而流淌相甲苯、和的溶劑強度參數(shù)分離是0.29、0.18、0.38,因此，選用溶劑強度參數(shù)大于甲苯的，可縮短該化合物的保留時光；但是詳細能縮短多少保留時光，還應(yīng)當(dāng)考慮流淌相的流速等因素。 46在hplc中，組分和溶劑分子之間存在哪幾種作用力？ 答：色譜理論告知我們：在hplc中，組分和溶劑之間存在色散力作用、偶極作用、氫鍵作用和介電作用等四種作用力。 47什么是溶劑極性參數(shù)與溶劑強度？它們之間的關(guān)系如何？ 答：我們把溶劑分子與溶質(zhì)分子以色散力、偶極作用力、氫鍵作用力及介電作用力四種方式舉行互相作用的能力稱為分子的“極性”。溶劑的這種互相作用的能力以溶劑極性參數(shù)表

6、示，溶劑極性參數(shù)值越大，溶劑的極性就越強。 溶劑強度是指用作流淌相的溶劑將組分從色譜柱上洗脫下來的能力，溶劑強度與溶劑的極性挺直相關(guān)，而且隨不同色譜體系轉(zhuǎn)變。普通來講，在正相色譜體系中，溶劑極性(p')增強，使組分從柱上洗脫下來的能力增強，即溶劑極性參數(shù)(p')越大的溶劑，溶劑強度越大。在反相色譜中，溶劑極性減小，使組分從柱上洗脫下來的能力增強，即溶劑極性參數(shù)(p')越小的溶劑，溶劑強度越大。 48在正相色譜與反相色譜體系中，普通組分的出峰次序如何？ 答：流淌相的極性比固定相的極性強的色譜體系叫反相色譜，例如以十八烷基硅膠鍵合相(ods)為固定相，以/水作流淌相，是典型

7、的反相色譜。流淌相的極性比固定相的極性弱的色譜體系叫正相色譜。在正相色譜體系中組分的出峰次序為：極性弱的組分，在流淌相中溶解度較大，因此分配系數(shù)k值小，先出峰。極性強的組分，在固定相中的溶解度較大，因此分配系數(shù)k值大，后出峰。 在反相色譜中組分的出峰次序為：極性弱的組分在固定相上的溶解度大，分配系數(shù)k值大，后出峰，相反極性強的組分在流淌相中溶解度大，k值小，所以先出峰。 49在ods固定相上，以甲醇為流淌相。某組分的分配容量k=1.2，如以為流淌相，其k增強還是削減？為什么？ 答：在ods固定相上，如將以為流淌相改為為流淌相，其k值絕對是增強了。由于在反相色譜體系中，流淌相由變?yōu)橐译?，溶劑極性參數(shù)由5.1變?yōu)?.8；但組分在流淌相中的溶解度反而減小，所以k值增大了，由1.2增大為2.24。 50什么叫離子色譜？ 答：在低交換容量的分別柱上分別樣品離子，而在高