分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作方法與技巧

1、本課程的特色本課程的特色 1、本門課專注于分子生物學(xué)基本操作方法 的操作技巧研究，力求提供最簡(jiǎn)單、最快 速、最可靠的分子生物學(xué)操作方法； 2、完全公開，沒有校內(nèi)校外、專業(yè)的限 制，自2005年開課以來，始終保持著很高的 報(bào)名人數(shù)； 3、根據(jù)個(gè)人多年從事分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn), 講述很 多分子生物學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn)的具體操作要點(diǎn),試劑和儀 器的品牌與選擇。實(shí)用性高，即學(xué)即用；注重細(xì) 節(jié)，避免不必要的花費(fèi)、實(shí)驗(yàn)彎路和失??；方法注 重簡(jiǎn)單、快速，重復(fù)性高；研究生從事分子生物學(xué)研究工作的原則與方法；研究生從事分子生物學(xué)研究工作的原則與方法；1質(zhì)粒的提取技術(shù)；質(zhì)粒的提取技術(shù)；3DNADNA和和RNARNA提取方法

2、；提取方法；4酶切與連接；酶切與連接；5新生在實(shí)驗(yàn)室最容易犯的錯(cuò)誤；新生在實(shí)驗(yàn)室最容易犯的錯(cuò)誤；2電泳技術(shù)；電泳技術(shù)；6PCRPCR技術(shù)；技術(shù)；8SouthernSouthern、NorthernNorthern和和WesternWesternblotblot雜交；雜交；9酶聯(lián)免疫技術(shù)（酶聯(lián)免疫技術(shù)（ElisaElisa）；）；10分子生物學(xué)常用轉(zhuǎn)化技術(shù)；分子生物學(xué)常用轉(zhuǎn)化技術(shù)；7文庫(kù)的建立與篩選；文庫(kù)的建立與篩選；11宏基因組技術(shù)；宏基因組技術(shù)；13酶的定向進(jìn)化技術(shù)；酶的定向進(jìn)化技術(shù)；14克隆基因的策略；克隆基因的策略；12考試方式考試方式 學(xué)分為3分，總學(xué)時(shí)60。 開卷考試，在學(xué)期末將布置

3、一次作業(yè)，根據(jù)作業(yè)的成績(jī)（70%）和出席情況（30%）決定總成績(jī)。 作業(yè)期限：本學(xué)期末或下學(xué)期開學(xué)后一個(gè)星期內(nèi)交作業(yè)，過期無(wú)效?；脽羝l(fā)送方式 選舉一個(gè)愿意為大家服務(wù)的同學(xué)任課程班長(zhǎng)，每次上完課后，當(dāng)次課的幻燈片可以拷貝給課程班長(zhǎng)，然后由他（她）負(fù)責(zé)通過郵件發(fā)送給其他同學(xué)。研究生對(duì)科研的正確態(tài)度態(tài)度決定一切！我想，我試，我樂！ -北大生科院院長(zhǎng)饒毅 饒毅對(duì)神經(jīng)發(fā)育研究了二十多年，成就頗高。對(duì)于科研，饒毅樂在其中，果蠅和小鼠是他的寶貝。最近幾年，他用果蠅和小鼠研究社會(huì)行為的分子生物學(xué)基礎(chǔ)，比如研究果蠅的打架斗毆、求偶失戀。研究生論文設(shè)計(jì)的三要素研究生論文設(shè)計(jì)的三要素 1 1、實(shí)驗(yàn)對(duì)象實(shí)驗(yàn)對(duì)象。實(shí)

4、驗(yàn)所用的材料即為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。如用小鼠做實(shí)驗(yàn)，小鼠就是本次實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)對(duì)象，或稱為受試對(duì)象。實(shí)驗(yàn)對(duì)象選擇的合適與否直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)實(shí)施的難度，以及別人對(duì)實(shí)驗(yàn)新穎性和創(chuàng)新性的評(píng)價(jià)。實(shí)驗(yàn)對(duì)象選擇的合適與否直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)實(shí)施的難度，以及別人對(duì)實(shí)驗(yàn)新穎性和創(chuàng)新性的評(píng)價(jià)。一個(gè)完整的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中所需實(shí)驗(yàn)材料的總數(shù)稱為樣本含量。最好根據(jù)特定的設(shè)計(jì)類型估計(jì)出較合適的樣本含量。樣本過大或過小都有弊端。研究生論文設(shè)計(jì)的三要素研究生論文設(shè)計(jì)的三要素 2 2、 實(shí)驗(yàn)因素。實(shí)驗(yàn)因素。所有影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的條件都稱為影響因素，實(shí)驗(yàn)研究的目的不同，對(duì)實(shí)驗(yàn)的要求也不同。影響因素有客觀與主觀，主要與次要因素之分。研究者希望通過研究設(shè)計(jì)進(jìn)行有

5、計(jì)劃的安排，從而能夠科學(xué)地考察其作用大小的因素稱為實(shí)驗(yàn)因素（如藥物的種類、劑量、濃度、作用時(shí)間等）；對(duì)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)因素作用大小有一定干擾性且研究者并不想考察的因素稱為區(qū)組因素或稱重要的非實(shí)驗(yàn)因素（如動(dòng)物的窩別、體重等）；其他未加控制的許多因素的綜合作用統(tǒng)稱為實(shí)驗(yàn)誤差。最好通最好通過一些統(tǒng)計(jì)學(xué)方法和預(yù)實(shí)驗(yàn)，初步篩選實(shí)驗(yàn)因素并確定取哪些過一些統(tǒng)計(jì)學(xué)方法和預(yù)實(shí)驗(yàn)，初步篩選實(shí)驗(yàn)因素并確定取哪些水平較合適，以免實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)過于復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)難以完成。水平較合適，以免實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)過于復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)難以完成。 研究生論文設(shè)計(jì)的三要素研究生論文設(shè)計(jì)的三要素 3 3、 實(shí)驗(yàn)效應(yīng)實(shí)驗(yàn)效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)因素取不同水平時(shí)在實(shí)驗(yàn)單位上所產(chǎn)生的反應(yīng)

6、稱為實(shí)驗(yàn)效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)效應(yīng)是反映實(shí)驗(yàn)因素作用強(qiáng)弱的標(biāo)志，它必須通過具體的指標(biāo)來體現(xiàn)。要結(jié)合專業(yè)知識(shí)，盡可能多地選用客觀性強(qiáng)的指標(biāo)，在儀器和試劑允許的條件下，應(yīng)盡可能多選用特異性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確可靠應(yīng)盡可能多選用特異性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確可靠的客觀指標(biāo)。的客觀指標(biāo)。對(duì)一些半客觀（比如讀pH試紙上的數(shù)值）或主觀指標(biāo)（對(duì)一些定性指標(biāo)的判斷上），一定要事先規(guī)定讀取數(shù)值的嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)，只有這樣才能準(zhǔn)確地分析自己的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，從而也大大提高了自己實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。另外，研究中盡量研究中盡量使用一些最成熟的技術(shù)，而不要一味追求高新技使用一些最成熟的技術(shù)，而不要一味追求高新技術(shù)術(shù)，也是增加實(shí)驗(yàn)效應(yīng)（實(shí)驗(yàn)成功率），降低風(fēng)

7、險(xiǎn)的一個(gè)方法。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的六原則實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的六原則1、隨機(jī)原則隨機(jī)原則：即運(yùn)用“隨機(jī)數(shù)字表”實(shí)現(xiàn)隨機(jī)化；運(yùn)用“隨機(jī)排列表”實(shí)現(xiàn)隨機(jī)化；運(yùn)用計(jì)算機(jī)產(chǎn)生“偽隨機(jī)數(shù)”實(shí)現(xiàn)隨機(jī)化。 盡量運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)盡量運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)知識(shí)來設(shè)計(jì)自己的實(shí)驗(yàn)（如正交設(shè)計(jì)，均勻設(shè)計(jì)法等知識(shí)來設(shè)計(jì)自己的實(shí)驗(yàn)（如正交設(shè)計(jì)，均勻設(shè)計(jì)法等），減少外在因素和人為因素的干擾。 2、對(duì)照原則對(duì)照原則：空白對(duì)照組的設(shè)立只有通過對(duì)照的設(shè)立我們才能清楚地只有通過對(duì)照的設(shè)立我們才能清楚地看出實(shí)驗(yàn)因素在當(dāng)中所起的作用看出實(shí)驗(yàn)因素在當(dāng)中所起的作用。當(dāng)某些處理本身夾雜著重要的非處理因素時(shí)，還需設(shè)立僅含該非處理因素的實(shí)驗(yàn)組為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組；（對(duì)照就象電泳實(shí)驗(yàn)的分子量m

8、arker一樣重要?。?、重復(fù)原則重復(fù)原則：所謂重復(fù)原則，就是在相同實(shí)驗(yàn)條件下必須做多次獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn)。一般認(rèn)為重復(fù)一般認(rèn)為重復(fù)5 5次以上的實(shí)驗(yàn)才具有較高的可信度。次以上的實(shí)驗(yàn)才具有較高的可信度。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的六原則實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的六原則4、平衡原則平衡原則：一個(gè)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案的均衡性好壞，關(guān)系到實(shí)驗(yàn)研 究的成敗。應(yīng)充分發(fā)揮具有各種知識(shí)結(jié)構(gòu)和背景的人的應(yīng)充分發(fā)揮具有各種知識(shí)結(jié)構(gòu)和背景的人的作作 用用， 群策群力，方可有效地提高實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案的均衡性。 在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的過程中要注意時(shí)間上的分配要注意時(shí)間上的分配，只有在時(shí)間上分 配好了，才不會(huì)出現(xiàn)一段時(shí)間特別忙而一段時(shí)間特別閑的情 況。5、彈性原則：彈性原則：所謂

9、空格，指的是在時(shí)間分配圖上留有空缺時(shí)間分配圖上留有空缺。適當(dāng)?shù)目杖笔欠浅１匾?，只有這樣才能富有彈性的實(shí)施實(shí)驗(yàn)計(jì)劃，并不斷地調(diào)整好自己的實(shí)驗(yàn)進(jìn)度調(diào)整好自己的實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。6、最經(jīng)濟(jì)原則最經(jīng)濟(jì)原則：不論什么實(shí)驗(yàn)，都有它的最優(yōu)選擇方案最優(yōu)選擇方案，這包括在資金的使用上，也包括人力時(shí)間的損耗上，必要時(shí)可以預(yù)測(cè)一下自己實(shí)驗(yàn)的產(chǎn)出和投入的比值，這個(gè)比值越大越好，當(dāng)然是以你所擁有的實(shí)驗(yàn)條件你所擁有的實(shí)驗(yàn)條件作基礎(chǔ)的。 （量力而為，看米下鍋?。?shí)驗(yàn)計(jì)劃、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與小結(jié)實(shí)驗(yàn)計(jì)劃、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與小結(jié)- -引自鄒承魯?shù)囊脏u承魯?shù)奈业目茖W(xué)之路我的科學(xué)之路 一計(jì)劃 二實(shí)驗(yàn)工作 三實(shí)驗(yàn)記錄 四實(shí)驗(yàn)結(jié)果 五實(shí)驗(yàn)小結(jié)一計(jì)劃一計(jì)劃

10、 在開始工作前，制定一個(gè)現(xiàn)實(shí)可行的研究計(jì)劃是必要的。除課題計(jì)劃外，日常工作也要有計(jì)劃，日有日計(jì)劃日常工作也要有計(jì)劃，日有日計(jì)劃，周有周計(jì)劃周有周計(jì)劃，并根據(jù)計(jì)劃準(zhǔn)備必要的實(shí)驗(yàn)條件，安排進(jìn)行工作。一個(gè)值得推薦的做法是把日計(jì)劃和周計(jì)劃記載一個(gè)值得推薦的做法是把日計(jì)劃和周計(jì)劃記載在實(shí)驗(yàn)記錄本上，每日最后檢查日計(jì)劃完成情況，制定次日計(jì)劃，每周最在實(shí)驗(yàn)記錄本上，每日最后檢查日計(jì)劃完成情況，制定次日計(jì)劃，每周最后檢查周計(jì)劃完成情況后檢查周計(jì)劃完成情況，制定次周計(jì)劃，由于基礎(chǔ)研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果有一定的不可預(yù)見性。因此，隨時(shí)根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果修訂計(jì)劃也是必要的。除自己的實(shí)驗(yàn)結(jié)果有一定的不可預(yù)見性之外，現(xiàn)代科學(xué)的發(fā)展很快，

11、瞬息萬(wàn)變，同樣有一定程度上的不可預(yù)見性。必需隨時(shí)根據(jù)文獻(xiàn)上的最新動(dòng)態(tài)，修改自己必需隨時(shí)根據(jù)文獻(xiàn)上的最新動(dòng)態(tài)，修改自己的課題計(jì)劃。的課題計(jì)劃。從小的方面來說，文獻(xiàn)上有更好的實(shí)驗(yàn)方法發(fā)表，可以代替原來采用的方法。從較大的方面來說，有時(shí)本來準(zhǔn)備作的工作，文獻(xiàn)上已文獻(xiàn)上已經(jīng)有人發(fā)表報(bào)道，或者新的發(fā)展使得原來認(rèn)為重要的問題喪失了其重要性，經(jīng)有人發(fā)表報(bào)道，或者新的發(fā)展使得原來認(rèn)為重要的問題喪失了其重要性，不得不完全放棄原來計(jì)劃或從根本上予以修改。不得不完全放棄原來計(jì)劃或從根本上予以修改。二實(shí)驗(yàn)工作二實(shí)驗(yàn)工作實(shí)驗(yàn)是一切實(shí)驗(yàn)科學(xué)的根本，所有結(jié)論都必需建立在堅(jiān)實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果之上，因此取得可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是怎樣強(qiáng)調(diào)也

12、不會(huì)過分的。實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果最主要的是可重復(fù)性，不僅事后自己能夠重復(fù)，別人在同樣最主要的是可重復(fù)性，不僅事后自己能夠重復(fù)，別人在同樣實(shí)驗(yàn)條件下也能夠重復(fù)。實(shí)驗(yàn)條件下也能夠重復(fù)。這樣不僅自己有把握，別人也會(huì)相信。實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性體現(xiàn)在每次都能得到同樣的結(jié)果，在一場(chǎng)足球比賽中3:2 就是決定性的勝利，但在實(shí)驗(yàn)結(jié)果上在實(shí)驗(yàn)結(jié)果上3:23:2的結(jié)果只能認(rèn)為是的結(jié)果只能認(rèn)為是失敗。比較滿意的勝利至少應(yīng)該是失敗。比較滿意的勝利至少應(yīng)該是3:03:0，在一定條件下2:0 是可以接受的，但1:0就不能認(rèn)為是可以接受的結(jié)果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性首先建立在實(shí)驗(yàn)材料，其次是實(shí)驗(yàn)條件的嚴(yán)格性和可重復(fù)性上。再者實(shí)驗(yàn)環(huán)境

13、的清潔，工作程序的嚴(yán)格有序也是實(shí)驗(yàn)結(jié)果可重復(fù)性的重要因素。在工作開始之前，對(duì)這些問題給以充分的注意，花費(fèi)一些時(shí)間，不僅是絕對(duì)必要的，總體來說，在時(shí)間上也是經(jīng)濟(jì)的，正確的結(jié)論只能建立在可重復(fù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果上，實(shí)驗(yàn)結(jié)果出于意外并不可怕，從負(fù)面結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果出于意外并不可怕，從負(fù)面結(jié)果有時(shí)同樣可以得出有價(jià)值的結(jié)論?？膳碌氖菍?shí)驗(yàn)結(jié)果不能果有時(shí)同樣可以得出有價(jià)值的結(jié)論?？膳碌氖菍?shí)驗(yàn)結(jié)果不能重復(fù)重復(fù)，如果多次實(shí)驗(yàn)，而每次都得到不同結(jié)果，每次都得到不同結(jié)果，只能表示整個(gè)工作完全得不到有價(jià)值的結(jié)果，那才是最大的時(shí)間浪費(fèi)。三實(shí)驗(yàn)記錄三實(shí)驗(yàn)記錄實(shí)驗(yàn)記錄是研究工作的一項(xiàng)極其重要的內(nèi)容，是工作的基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)記錄是研究工作的一項(xiàng)

14、極其重要的內(nèi)容，是工作的基礎(chǔ)。而多數(shù)青年人對(duì)此常常不夠重視。我曾經(jīng)有一個(gè)學(xué)生，有吸煙的習(xí)慣，一次在去儀器室做實(shí)驗(yàn)時(shí)，發(fā)現(xiàn)忘記帶記錄本，就把身上的煙盒拆了，把實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄記在煙合的背面，隨后就把這張紙弄丟了，恰恰這一實(shí)驗(yàn)用了一個(gè)寶貴實(shí)驗(yàn)材料，因此重復(fù)這一實(shí)驗(yàn)十分費(fèi)力。當(dāng)然，現(xiàn)在的儀器都與計(jì)算機(jī)連接，結(jié)果都存儲(chǔ)在計(jì)算機(jī)內(nèi)，但隨手抓一個(gè)紙片記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果是絕對(duì)隨手抓一個(gè)紙片記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果是絕對(duì)不能允許的壞習(xí)慣不能允許的壞習(xí)慣。四實(shí)驗(yàn)結(jié)果四實(shí)驗(yàn)結(jié)果現(xiàn)代科學(xué)在很大程度上依賴儀器，特別是現(xiàn)代儀器自動(dòng)化程度很高，進(jìn)樣之后，啟動(dòng)程序自動(dòng)取得數(shù)據(jù)并自動(dòng)存儲(chǔ)于計(jì)算機(jī)之中。但是千萬(wàn)不能忘記，任何儀器都不是萬(wàn)能的，所有儀

15、器都有一定的條件限制，必需充分認(rèn)識(shí)到，超出儀器所能允許的條件之外，儀器完全可能給出一個(gè)甚至一組完全不可靠的數(shù)據(jù)。因此在使用儀器之前務(wù)須全面了解充分了解儀器的性能及適用范圍，才能得到可信的結(jié)果。在我多年的經(jīng)驗(yàn)中，有一項(xiàng)值得特別在此提出，就是使用儀器必需事先仔細(xì)閱讀使用儀器必需事先仔細(xì)閱讀儀器說明書。進(jìn)行實(shí)驗(yàn)必需仔細(xì)閱讀原始文獻(xiàn)中的實(shí)驗(yàn)方法，向做過類似儀器說明書。進(jìn)行實(shí)驗(yàn)必需仔細(xì)閱讀原始文獻(xiàn)中的實(shí)驗(yàn)方法，向做過類似實(shí)驗(yàn)的師兄姐們請(qǐng)教是必要的，但決不能代替自己閱讀文獻(xiàn)或說明書。實(shí)驗(yàn)的師兄姐們請(qǐng)教是必要的，但決不能代替自己閱讀文獻(xiàn)或說明書。我們?cè)谟變簣@時(shí)代都玩過傳話游戲。老師給第一個(gè)小朋友說一句話，第

16、一個(gè)小朋友把話傳給第二個(gè)，第二個(gè)再傳給第三個(gè)。這句話傳到最后，可以和老師最早給第一個(gè)小朋友說的話，完全不同。這就說明根據(jù)師兄姐們口頭傳授的經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行工作有多么危險(xiǎn)。有時(shí)實(shí)驗(yàn)方法的錯(cuò)誤對(duì)一項(xiàng)工作可以是致命的錯(cuò)誤，向你傳授經(jīng)驗(yàn)的人是不會(huì)代你負(fù)責(zé)的。與此有關(guān)的一條經(jīng)驗(yàn)與此有關(guān)的一條經(jīng)驗(yàn)是，論文中的引用文獻(xiàn)必需自己核對(duì)過，轉(zhuǎn)引自其他文獻(xiàn)同樣可能是，論文中的引用文獻(xiàn)必需自己核對(duì)過，轉(zhuǎn)引自其他文獻(xiàn)同樣可能發(fā)生錯(cuò)誤。發(fā)生錯(cuò)誤。和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性同樣重要而又密切相關(guān)的，是實(shí)驗(yàn)結(jié)果的和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性同樣重要而又密切相關(guān)的，是實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確度。精確度。對(duì)不同實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確度有不同的要求，要求過高是一種浪費(fèi)，給

17、人以殺雞焉用牛刀之譏，過低則不能滿足需要。給出數(shù)據(jù)，也有類似問題。每一項(xiàng)測(cè)定都有一定的精確度，如果一項(xiàng)測(cè)定的精確度為三位有效數(shù)字，則給出三位以上數(shù)字不僅是完全沒有意義的，并且只能說明作者完全缺乏有效數(shù)字的概念，這不僅適用于直接獲得的初始數(shù)據(jù)，對(duì)從初始數(shù)據(jù)得出的次級(jí)數(shù)據(jù)也同樣適用。例如，對(duì)一組精確度為三位有效數(shù)字的測(cè)定結(jié)果予以平均，給出四位以上的平均數(shù)計(jì)算結(jié)果，也只能表明作者的無(wú)知。五實(shí)驗(yàn)小結(jié)五實(shí)驗(yàn)小結(jié)不斷進(jìn)行小結(jié)與不斷完善。不斷進(jìn)行小結(jié)與不斷完善。在實(shí)驗(yàn)記錄本上記載每周計(jì)劃的目的之一就是在周末進(jìn)行檢查和小結(jié)，并根據(jù)結(jié)果制定下周計(jì)劃。我的導(dǎo)師教導(dǎo)我在工作順利時(shí)要注意隨時(shí)在工作順利時(shí)要注意隨時(shí)進(jìn)行

18、階段性小結(jié)，特別是在工作順利時(shí)，新的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不斷涌現(xiàn)，進(jìn)行階段性小結(jié)，特別是在工作順利時(shí)，新的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不斷涌現(xiàn)，常常會(huì)使人忙于收集大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，而忽略檢查實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性以及對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)所說明的問題深入思考，或者說是只見樹木，不見森林。因而收集了大量無(wú)用的、錯(cuò)誤的或意義不大的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，反而忽略了真正關(guān)鍵的數(shù)據(jù)，包括必不可少的對(duì)照實(shí)驗(yàn)。這些必不可少的對(duì)照實(shí)驗(yàn)，當(dāng)時(shí)做當(dāng)時(shí)做是非常方便的，而事后補(bǔ)做往往費(fèi)時(shí)費(fèi)力。是非常方便的，而事后補(bǔ)做往往費(fèi)時(shí)費(fèi)力。隨時(shí)進(jìn)行階段性小結(jié)不僅可以隨時(shí)發(fā)現(xiàn)問題隨時(shí)予以解決，還可以隨時(shí)注意不僅要深入問題，重視每一個(gè)細(xì)節(jié)，還要不斷總覽全局，才不致迷失方向，這就是我國(guó)古人說做學(xué)問

19、不僅要入乎其中還要出乎其外的意思。隨時(shí)進(jìn)行階段性小結(jié)的另一目的就是對(duì)所得的初步結(jié)論隨時(shí)予以隨時(shí)進(jìn)行階段性小結(jié)的另一目的就是對(duì)所得的初步結(jié)論隨時(shí)予以檢查，每一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果都可能有多種不同的解釋，特別是在實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)檢查，每一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果都可能有多種不同的解釋，特別是在實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)重要結(jié)果時(shí)，最容易犯的錯(cuò)誤就是輕率得出結(jié)論，要有自以為非的勇重要結(jié)果時(shí)，最容易犯的錯(cuò)誤就是輕率得出結(jié)論，要有自以為非的勇氣。氣。我一生犯過多次這樣的錯(cuò)誤。五十年代，王應(yīng)睞教授、汪靜英同志和我在國(guó)際上首先純化了琥珀酸脫氫酶，并發(fā)現(xiàn)它有一個(gè)與蛋白部分共價(jià)連接含有核黃素的輔基。當(dāng)時(shí)已知的兩種核黃素輔基，核黃素單核苷酸和核黃素腺嘌呤二核苷酸

20、，都是與蛋白部分非共價(jià)結(jié)合，與蛋白部分共價(jià)連接含的核黃素輔基，文獻(xiàn)上尚未見有報(bào)道。因此我想，我們很可能發(fā)現(xiàn)了一種新型的核黃素輔基，經(jīng)過把蛋白部分水解進(jìn)行鑒定，我們觀察到這一輔基含有兩種堿基，一種是核黃素，而另一種在雙向紙層析上的位置表明它不是腺嘌呤而是次黃嘌呤，紫外吸收光譜也與次黃嘌呤相同。這導(dǎo)致我輕率得出結(jié)論認(rèn)為我們獲得了一種全新的，文獻(xiàn)中從未報(bào)道過的與蛋白部分共價(jià)連接的輔基，核黃素次黃呤嘌呤二核苷酸。但在結(jié)構(gòu)上次黃嘌呤僅比腺嘌呤少一個(gè)氨基，為此王應(yīng)睞教授建議檢查在我們的酶制劑中是否會(huì)含有一種從腺嘌呤分子上水解除去氨基的酶，雖然我們的酶經(jīng)過純化，含有雜酶的可能性不大，但我們?nèi)匀贿M(jìn)行了檢查，結(jié)

21、果酶制劑中果然含有腺嘌呤脫氨酶作為雜質(zhì)，輔基雖然與蛋白部分共價(jià)連接，但仍然是核黃素腺嘌呤二核苷酸，次黃呤嘌是在酶純化過程中腺嘌呤的水解產(chǎn)物。這就避免了在論文發(fā)表時(shí)出現(xiàn)重大錯(cuò)誤。五實(shí)驗(yàn)小結(jié)五實(shí)驗(yàn)小結(jié) 參加各種水平的學(xué)術(shù)會(huì)議也是不斷進(jìn)行小結(jié)的一種方法。參加各種水平的學(xué)術(shù)會(huì)議也是不斷進(jìn)行小結(jié)的一種方法。工作報(bào)告目的在于交流和隨時(shí)聽取不同意見，自己容易忽視的問題別人有時(shí)可以一眼發(fā)現(xiàn)。所謂當(dāng)局者迷，旁觀者清在科學(xué)上也是完全正確的。參加國(guó)際學(xué)術(shù)會(huì)議是考驗(yàn)自己工作的極好機(jī)會(huì)。特別是小型會(huì)議，在國(guó)外與自己工作有關(guān)的實(shí)驗(yàn)室作學(xué)術(shù)報(bào)告，由于熟悉自己工作領(lǐng)域的同行較多，討論比較充分，更由于熟悉自己工作領(lǐng)域的同行較多

22、，討論比較充分，更容易發(fā)現(xiàn)自己工作中的問題。容易發(fā)現(xiàn)自己工作中的問題。一個(gè)系列性工作，在多次報(bào)告，經(jīng)過多次討論的考驗(yàn)后，才會(huì)逐漸趨向成熟，得出可靠的結(jié)論。最近國(guó)際生物化學(xué)與分子生物學(xué)聯(lián)合會(huì)發(fā)表的分子水平生命科學(xué)博士標(biāo)準(zhǔn)一書中強(qiáng)調(diào)參加學(xué)術(shù)活動(dòng)和做學(xué)術(shù)報(bào)告是博士學(xué)位訓(xùn)練的一個(gè)重要組成部分，我對(duì)此深有同感。做分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)失敗的最常見原因做分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)失敗的最常見原因 (一)心理素質(zhì)問題； (二)操作問題； (三)試劑問題 ； (四)背景知識(shí)問題； (五)安全問題 。( (一一) )心理素質(zhì)問題心理素質(zhì)問題 做實(shí)驗(yàn)實(shí)際上也是一種人的活動(dòng)，所以個(gè)人的心理素質(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)是有影響的，一般來講，平常心態(tài)穩(wěn)定、

23、習(xí)慣良好的人，實(shí)驗(yàn)的成功率要高平常心態(tài)穩(wěn)定、習(xí)慣良好的人，實(shí)驗(yàn)的成功率要高，反之則低些。下面例舉的是實(shí)驗(yàn)中遇到的實(shí)驗(yàn)人員心理問題。1 1、不能正確對(duì)待實(shí)驗(yàn)、不能正確對(duì)待實(shí)驗(yàn) 分子生物學(xué)分子生物學(xué)是一門年輕的學(xué)科，從開始創(chuàng)立到如今，才短短的從開始創(chuàng)立到如今，才短短的4040余余年。年。由于它的應(yīng)用十分廣泛，所以發(fā)展特別快，已開始形成了一套完整而成熟的基礎(chǔ)理論和實(shí)驗(yàn)體系。分子生物學(xué)涉及的知識(shí)領(lǐng)域廣泛，許多學(xué)科的新進(jìn)展都很快與它聯(lián)系起來，故它具有一定的神秘性具有一定的神秘性，所以還沒有進(jìn)分子生物學(xué)這個(gè)門的人，都有一些畏懼心理。有一些畏懼心理。實(shí)際上分子生物學(xué)的基礎(chǔ)理論本身還是比較簡(jiǎn)明具體，同時(shí)它的實(shí)

24、驗(yàn)操作也都有專門的書籍詳細(xì)介紹 (如分子克隆)，讀上幾本基礎(chǔ)書，再到有經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室去實(shí)踐，在較短的時(shí)間內(nèi)是可以入門的。另一方面，有些己具有部分分子生物學(xué)知識(shí)的人，從各個(gè)公司的產(chǎn)品介紹書、專業(yè)文獻(xiàn)中看到，很多實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)步驟經(jīng)過前人的不斷改迸進(jìn)，變得十分的簡(jiǎn)便，有些大的實(shí)驗(yàn)在幾天內(nèi)即可完成，便認(rèn)為實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單，產(chǎn)生輕視心認(rèn)為實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單，產(chǎn)生輕視心理，這種心理同樣也是有害的。理，這種心理同樣也是有害的。因?yàn)閷?shí)驗(yàn)的操作是精細(xì)而微量的，實(shí)驗(yàn)的操作是精細(xì)而微量的，本身中間步驟多且用直觀方法難以檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)中的每一種試劑，本身中間步驟多且用直觀方法難以檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)中的每一種試劑，每一個(gè)步驟出錯(cuò)都可能是致命的，可能導(dǎo)致

25、實(shí)驗(yàn)完全失敗每一個(gè)步驟出錯(cuò)都可能是致命的，可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)完全失敗，所以分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)是不能完全按實(shí)驗(yàn)流程來計(jì)算時(shí)間的。例如在本實(shí)驗(yàn)室做基因拼接，按標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)程序，合成完寡聚核苷酸片段后只需10天即可完成拼接、克隆及測(cè)序鑒定，但在實(shí)際中，還沒有人能在10天內(nèi)做完。由于各種各樣的原因(包括試劑、操作及個(gè)人心理素質(zhì)等)，平均要2個(gè)月左右才能完成這樣一個(gè)工作。所以，輕視心理也是必須糾正的?？傊瑢?duì)待分子對(duì)待分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，引用偉人毛澤東的一句話在戰(zhàn)略上藐視它，在戰(zhàn)術(shù)上在戰(zhàn)略上藐視它，在戰(zhàn)術(shù)上重視它重視它才是正確的態(tài)度。 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)面前人人平等，沒有一本、二本和三本的區(qū)別！分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)面前人

26、人平等，沒有一本、二本和三本的區(qū)別！2 2、使用試劑時(shí)缺乏微量概念、使用試劑時(shí)缺乏微量概念 在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，試劑的用量往往很少在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，試劑的用量往往很少，液體常?？捎玫?微升，而普通的一滴水就有20-100微升;固體物質(zhì)可用到微克甚至納克級(jí)，這是平常肉眼看不見的，所以剛剛接觸分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的人，總是擔(dān)心要取的東剛剛接觸分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的人，總是擔(dān)心要取的東西能否取到，準(zhǔn)不準(zhǔn)確，操作的樣品是不是會(huì)丟失?？偸羌哟笥昧课髂芊袢〉剑瑴?zhǔn)不準(zhǔn)確，操作的樣品是不是會(huì)丟失?？偸羌哟笥昧?，認(rèn)為多總比少好，實(shí)際上這些顧慮是多余的。在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，一般都有專門的儀器設(shè)備檢測(cè)和觀察樣品，有一整套方法

27、保證取樣的正確。許多樣品的量很少，肉眼看不見，而肉眼看不見通常意味著樣品純度好，不帶雜質(zhì)，超量使用酶等試劑反而會(huì)干擾正確的結(jié)果。所以實(shí)驗(yàn)人員必須在心理實(shí)驗(yàn)人員必須在心理上逐漸適應(yīng)用這些微量概念。上逐漸適應(yīng)用這些微量概念。3 3、粗心大意、粗心大意 在基因工程實(shí)驗(yàn)中，由于粗心大意造成的錯(cuò)誤可說是千奇萬(wàn)怪，在每一個(gè)實(shí)驗(yàn)中幾乎都可以舉出實(shí)例。在一個(gè)課題的研究中，可能要用到一系列的實(shí)驗(yàn)，每一個(gè)實(shí)驗(yàn)中又包含幾個(gè)小實(shí)驗(yàn)，小實(shí)驗(yàn)中又有許多具體的步驟，每一個(gè)步驟中又用到許多試劑，在這些過程中因?yàn)榇中拇笠舛加谐鲥e(cuò)的可能，產(chǎn)生的后果小則重做某一步驟，大則整個(gè)課題必須重新開頭。主要表主要表現(xiàn)為試劑配制錯(cuò)誤現(xiàn)為試劑配

28、制錯(cuò)誤; ;樣品取錯(cuò)樣品取錯(cuò); ;實(shí)驗(yàn)順序顛倒實(shí)驗(yàn)順序顛倒; ;樣品混淆，樣品意外丟失樣品混淆，樣品意外丟失; ;加錯(cuò)試劑加錯(cuò)試劑; ;看錯(cuò)實(shí)驗(yàn)條件等等不一而足?？村e(cuò)實(shí)驗(yàn)條件等等不一而足。例如某人大量制備DNA，所有的細(xì)菌培養(yǎng)、擴(kuò)增及堿法抽提、分步純化、乙醇沉淀DNA都己做完，最后離心收集DNA時(shí)，不小心將離心管碰翻到地上，樣品全部丟失，一周成果全部損失。我們建議實(shí)驗(yàn)人員要克服粗心大意的不良習(xí)慣，嚴(yán)格細(xì)心地做每一步操作，以保證整體實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。4 4、缺乏整體實(shí)驗(yàn)的概念、缺乏整體實(shí)驗(yàn)的概念許多實(shí)驗(yàn)人員在剛開始一項(xiàng)新的實(shí)驗(yàn)時(shí)，對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程缺少全面的了解，許多實(shí)驗(yàn)人員在剛開始一項(xiàng)新的實(shí)驗(yàn)時(shí)，對(duì)

29、整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程缺少全面的了解，對(duì)實(shí)驗(yàn)需要多少時(shí)間?要用何種試劑?用量多少?要用到何種實(shí)驗(yàn)材料?何種實(shí)驗(yàn)設(shè)備等都沒有概念，往往實(shí)驗(yàn)做到中途，再急匆匆來尋找缺少的東西實(shí)驗(yàn)做到中途，再急匆匆來尋找缺少的東西。分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，所用到的試劑、藥品通常都價(jià)錢昂貴，一般實(shí)驗(yàn)室不可能儲(chǔ)備得種類齊全而又充足，另外許多試劑還依賴進(jìn)口，購(gòu)買周期長(zhǎng)，這就會(huì)迫使實(shí)驗(yàn)中途停止，致使實(shí)驗(yàn)效率嚴(yán)重降低，有的實(shí)驗(yàn)不能中途停頓，就可能使整個(gè)實(shí)驗(yàn)全部失敗。我們建議實(shí)驗(yàn)人員在做分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)建議實(shí)驗(yàn)人員在做分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)之前，應(yīng)在基礎(chǔ)知識(shí)、實(shí)驗(yàn)方法、實(shí)驗(yàn)材料及實(shí)驗(yàn)試劑上有充分的準(zhǔn)備，之前，應(yīng)在基礎(chǔ)知識(shí)、實(shí)驗(yàn)方法、實(shí)驗(yàn)材料及實(shí)驗(yàn)試劑上

30、有充分的準(zhǔn)備，在實(shí)驗(yàn)時(shí)間上做好充分的安排，以保證實(shí)驗(yàn)的順利開展。在實(shí)驗(yàn)時(shí)間上做好充分的安排，以保證實(shí)驗(yàn)的順利開展。5 5、僥幸心理、僥幸心理 僥幸心理是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中致使實(shí)驗(yàn)人員犯錯(cuò)誤最多的原因，想僥幸心理是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中致使實(shí)驗(yàn)人員犯錯(cuò)誤最多的原因，想省時(shí)間、省步驟及因?qū)η耙徊綄?shí)驗(yàn)盲目自信是產(chǎn)生這種心理的主要省時(shí)間、省步驟及因?qū)η耙徊綄?shí)驗(yàn)盲目自信是產(chǎn)生這種心理的主要原因。原因。因?yàn)榉肿由飳W(xué)實(shí)驗(yàn)方法是在依據(jù)分子生物學(xué)基礎(chǔ)理論的基礎(chǔ)上，輔以前人大量的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)而建立的，實(shí)驗(yàn)條件的細(xì)小改變，不一定會(huì)使實(shí)驗(yàn)失敗，但幾個(gè)步驟的細(xì)小改變，累積起來必出大錯(cuò)，做分子生物學(xué)實(shí)做分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)每個(gè)步驟的結(jié)果

31、，在能夠檢測(cè)的情況下都應(yīng)檢測(cè)，否則不應(yīng)進(jìn)入驗(yàn)每個(gè)步驟的結(jié)果，在能夠檢測(cè)的情況下都應(yīng)檢測(cè)，否則不應(yīng)進(jìn)入下一步實(shí)驗(yàn)。下一步實(shí)驗(yàn)。由于各種原因，實(shí)驗(yàn)人員經(jīng)常省略檢測(cè)這一步，從表面上看省了事、實(shí)際上使后面的實(shí)驗(yàn)失去了保證，最后實(shí)驗(yàn)失敗而且連原因都找不出，對(duì)重做實(shí)驗(yàn)也無(wú)補(bǔ)益。結(jié)果是花費(fèi)更多的時(shí)間。還浪費(fèi)了寶貴的樣品和試劑。例如某人從克隆載體上分離基因，限制性內(nèi)切酶酶切后沒有檢測(cè)是否切動(dòng)、是否完全，即進(jìn)入電泳分離基因，電泳完在紫外光下收割基因片段時(shí)，才看到載體DNA根本沒有切斷，只好重做。還有的人在前面的情況下，抱一種僥幸心理，認(rèn)為可能會(huì)有少量基因切下，在基因DNA電泳應(yīng)出現(xiàn)的位置割膠分離，將假想分離到的

32、基因直接進(jìn)行克隆;，當(dāng)然這些人的僥幸心理是有基礎(chǔ)的，因?yàn)榛駾NA分子太少，在EB染色中是看不到的，但這樣做實(shí)驗(yàn)成功的機(jī)會(huì)甚微，從我們實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)計(jì)的情況看，花的時(shí)間成倍地多?？傊?，僥幸心理是導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗最大的原因，是實(shí)驗(yàn)人員最忌諱的事，所有的人都應(yīng)加以杜絕。我們建議實(shí)驗(yàn)人員充分安排好實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)格按照每一實(shí)驗(yàn)步驟的要求操作。當(dāng)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)沒有把握的情況時(shí)，應(yīng)停止實(shí)驗(yàn)，尋找原因加以克服，或找有經(jīng)驗(yàn)的同行解決問題，直到有把握再進(jìn)入下一步實(shí)驗(yàn)。我們之所以在這里一再?gòu)?qiáng)調(diào)這一點(diǎn)，是因?yàn)檫@方面犯錯(cuò)誤的人太多太多，有經(jīng)驗(yàn)的和沒經(jīng)驗(yàn)的人都不例外。（二（二) )操作問題操作問題在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)常要進(jìn)行微生物學(xué)方面

33、、生物化學(xué)方面及儀器方面等等的操作，不了解這些操作的要求，也會(huì)影響實(shí)驗(yàn)人員的實(shí)驗(yàn)工作，甚至可能使實(shí)驗(yàn)室造成重大損失，所以每個(gè)實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室時(shí)，必須參閱有關(guān)的書籍，或請(qǐng)有經(jīng)驗(yàn)的人員演示說明，方可開展實(shí)驗(yàn)。另外要著重說明的一點(diǎn)是做標(biāo)簽，由于實(shí)驗(yàn)室做實(shí)驗(yàn)的人員通常都很多，每人自己的樣品較易與他人的樣品混淆，自己的樣品之間太多時(shí)也易混淆;許多樣品需要保存的時(shí)間較長(zhǎng)，到時(shí)可能找不到，所以手頭的樣品、試劑應(yīng)隨手標(biāo)好。標(biāo)簽應(yīng)寫明樣品名稱、日期和配制人姓名，應(yīng)牢靠、不能模糊。（三（三) )試劑問題試劑問題 在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，要用到多種試劑，并且對(duì)試劑的要求十分嚴(yán)格，主要表現(xiàn)為:1 試劑等級(jí)不夠，如應(yīng)該用

34、分析純分析純的誤用了化學(xué)純;2 試劑配制不當(dāng)，如有的化學(xué)試劑化學(xué)試劑結(jié)晶體，含有水分子含有水分子， 在稱量時(shí)沒有扣除它的份額，配制的試劑濃度過低;3 除菌條件不對(duì)，某些試劑應(yīng)過濾除菌過濾除菌，另一些試劑應(yīng)高溫高壓高溫高壓滅菌滅菌;4 試劑污染試劑污染，如稱量稱量時(shí)，取用試劑時(shí)，別人污染時(shí)都可能造成污染;5 試劑儲(chǔ)存時(shí)間過長(zhǎng)試劑儲(chǔ)存時(shí)間過長(zhǎng)，如測(cè)序用的丙烯酰胺膠母液，在4條件下只 能存放一個(gè)月;6 試劑保存不當(dāng)試劑保存不當(dāng)，如有的試劑應(yīng)保存在-20下，另一些試劑則只能 在室溫下保存。所以實(shí)驗(yàn)人員在配制試劑時(shí)，要嚴(yán)格按各個(gè)特定試 劑的配制要求來操作。( (四四) )背景知識(shí)問題背景知識(shí)問題第一是對(duì)

35、研究課題的背景知識(shí)了解不夠。第一是對(duì)研究課題的背景知識(shí)了解不夠。實(shí)驗(yàn)人員不知道實(shí)驗(yàn)要解決何種問題，怎樣解決問題，不知道采用何種技術(shù)路線最有效地解決問題，這一現(xiàn)象是很嚴(yán)重的;第二是對(duì)具體的實(shí)驗(yàn)原第二是對(duì)具體的實(shí)驗(yàn)原理不懂，以至不能正確地分析實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，不能理不懂，以至不能正確地分析實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，不能靈活地解決實(shí)驗(yàn)中遇到的問題。靈活地解決實(shí)驗(yàn)中遇到的問題。我們建議實(shí)驗(yàn)人員盡可能多地占有有關(guān)課題的背景資料，詳細(xì)地閱讀和理解有關(guān)的實(shí)驗(yàn)資料。( (五五) )安全問題安全問題 在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)人員經(jīng)常要接觸到一些對(duì)人體有害的實(shí)驗(yàn)試劑，在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)人員經(jīng)常要接觸到一些對(duì)人體有害的實(shí)驗(yàn)試劑，如溴

36、化乙錠、丙烯酰胺、放射性同位素溴化乙錠、丙烯酰胺、放射性同位素等，它們或者可能誘發(fā)癌癥，或者對(duì)人神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生累積毒害。因此，為了實(shí)驗(yàn)人員的人身安全，每一個(gè)人都應(yīng)嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)安全操作的有關(guān)要求進(jìn)行操作。另一個(gè)問題是，實(shí)驗(yàn)室另一個(gè)問題是，實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常要使用經(jīng)常要使用煤氣、水及電器水及電器，煤氣泄漏導(dǎo)致爆炸或人員中毒死亡，實(shí)驗(yàn)室水龍頭未關(guān)，下水道堵塞造成實(shí)驗(yàn)室水災(zāi)，實(shí)驗(yàn)室人員觸電等時(shí)有發(fā)生，所以每一個(gè)實(shí)驗(yàn)人員在離開實(shí)驗(yàn)室時(shí)都應(yīng)注意檢查水、電、煤氣，有關(guān)用電設(shè)備都應(yīng)按操作說明使用，以防止不必要的人身意外傷亡。分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵穩(wěn)定的心理素質(zhì)、正確而精準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)、良好的實(shí)驗(yàn)

37、習(xí)慣，是實(shí)驗(yàn)獲得成功的關(guān)鍵。！實(shí)驗(yàn)室基本注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室基本注意事項(xiàng) 一、新生進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后必須做好的幾件事情: 1 1、實(shí)驗(yàn)記錄本、實(shí)驗(yàn)記錄本，上面寫清楚日期每天的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，操作步驟、結(jié)果.如 果結(jié)果不好，應(yīng)試著分析并寫出原因以便以后參考。需要拍照的照 片，必須當(dāng)時(shí)拍完，并編好文件日期妥善保存（格式一般是 *.tif）。如果犯了很不應(yīng)該的錯(cuò)誤,必須在實(shí)驗(yàn)記錄本上注明,下次 不要再犯同樣的錯(cuò)誤. 2 2、有自己專用的實(shí)驗(yàn)樣品盒、有自己專用的實(shí)驗(yàn)樣品盒，盒子放在冰箱的固定位置并且在盒子上面 用標(biāo)簽紙或記號(hào)筆標(biāo)記上自己的名字以查找方便。盒子中的所有樣品 必須都用記號(hào)筆標(biāo)記好，最好在管子頂部和側(cè)壁各寫一

38、個(gè)標(biāo)記，以防 記號(hào)模糊。 3 3、實(shí)驗(yàn)儀器使用前必須仔細(xì)看懂操作方法、實(shí)驗(yàn)儀器使用前必須仔細(xì)看懂操作方法，切忌不懂裝懂。儀器用完應(yīng) 登記登記。 4 4、看分子克隆等經(jīng)典實(shí)驗(yàn)操作手冊(cè)中實(shí)驗(yàn)的原理和關(guān)鍵步驟、看分子克隆等經(jīng)典實(shí)驗(yàn)操作手冊(cè)中實(shí)驗(yàn)的原理和關(guān)鍵步驟，提高自己 的理論水平。 5、跟師兄師姐做實(shí)驗(yàn)的時(shí)侯，應(yīng)保持謙虛謹(jǐn)慎，不懂的地方及時(shí)請(qǐng)教。 6、認(rèn)真學(xué)習(xí)防盜、防水、放電、防爆、防輻射、防污染的安全常識(shí)安全常識(shí)。 7、接觸濃鹽酸、濃硫酸、苯酚、EB實(shí)驗(yàn)時(shí)，必須小心謹(jǐn)慎，防止受防止受傷傷。新生做實(shí)驗(yàn)時(shí)最容易犯的錯(cuò)誤新生做實(shí)驗(yàn)時(shí)最容易犯的錯(cuò)誤1 1、離心機(jī)使用常見錯(cuò)誤：、離心機(jī)使用常見錯(cuò)誤： （1

39、）離心機(jī)使用不規(guī)范。 正確操作應(yīng)該是：首先應(yīng)該根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的離心機(jī)和轉(zhuǎn)子以及離心根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的離心機(jī)和轉(zhuǎn)子以及離心管管，使用離心機(jī)時(shí)的工作轉(zhuǎn)速不應(yīng)該超過離心機(jī)、轉(zhuǎn)子以及離心管的最大允許轉(zhuǎn)速。離離心前注意嚴(yán)格平衡樣品心前注意嚴(yán)格平衡樣品。安裝轉(zhuǎn)子和轉(zhuǎn)子蓋要規(guī)范、準(zhǔn)確。離心時(shí)要留人看守，發(fā)現(xiàn)離離心時(shí)要留人看守，發(fā)現(xiàn)離心機(jī)異常應(yīng)立即關(guān)閉離心機(jī)。心機(jī)異常應(yīng)立即關(guān)閉離心機(jī)。離心結(jié)束后要安放好轉(zhuǎn)子，一般要倒扣轉(zhuǎn)子一般要倒扣轉(zhuǎn)子（？）。 （2）3個(gè)樣品、5個(gè)樣品等的平衡問題。 （3）使用常溫離心機(jī)時(shí)，必須蓋上轉(zhuǎn)頭的頂蓋必須蓋上轉(zhuǎn)頭的頂蓋。 （4）使用低溫離心機(jī)時(shí)，用后應(yīng)將轉(zhuǎn)頭拿下

40、來，倒置放好倒置放好。同時(shí)將離心機(jī)中的冷凝水冷凝水擦干擦干，將離心機(jī)的頂蓋打開離心機(jī)的頂蓋打開。 （5）使用低溫離心機(jī)時(shí)，應(yīng)提前預(yù)冷。預(yù)冷時(shí)應(yīng)低速空轉(zhuǎn)使用低溫離心機(jī)時(shí)，應(yīng)提前預(yù)冷。預(yù)冷時(shí)應(yīng)低速空轉(zhuǎn)，以免損傷電機(jī)。離心機(jī)不用的時(shí)侯，必須及時(shí)關(guān)閉。制冷時(shí)切忌長(zhǎng)時(shí)間打開頂蓋，以保護(hù)電機(jī)。制冷時(shí)切忌長(zhǎng)時(shí)間打開頂蓋，以保護(hù)電機(jī)。2 2、使用移液器有哪些注意事項(xiàng)？、使用移液器有哪些注意事項(xiàng)？ 垂直吸液、慢吸慢放垂直吸液、慢吸慢放；選擇合適的量程范圍，不能超過量程使用；選擇與移液器匹配的槍頭，安裝槍頭時(shí)不要用力太猛；移移液器每日用完后，應(yīng)旋到最大刻度。液器每日用完后，應(yīng)旋到最大刻度。 移液器是精密儀器，調(diào)刻

41、度時(shí)要慢慢調(diào)調(diào)刻度時(shí)要慢慢調(diào)。 玻璃移液管的吸取要用吸耳球，而不能用口吸。 吸200微升液體，用100200微升移液器還是2001000微升移液器？吸250微升液體，如果要求體積精確度很高，用哪個(gè)移液器？3 3、滅菌鍋使用注意事項(xiàng)、滅菌鍋使用注意事項(xiàng) （1）定期清洗，一般一般1 12 2個(gè)月必須清洗一次。個(gè)月必須清洗一次。 否則滅菌鍋底部排水處容易染菌。 （2）根據(jù)不同的滅菌條件選擇不同的程序。如 固體、液體滅菌程序，并根據(jù)自己的特殊根據(jù)自己的特殊 要求設(shè)定合適的程序。如要求設(shè)定合適的程序。如116116度滅菌。度滅菌。 （3）必須等滅菌鍋內(nèi)溫度降到必須等滅菌鍋內(nèi)溫度降到9090度以下才可以打

42、度以下才可以打開開 滅菌鍋。滅菌鍋。 （4）滅菌鍋內(nèi)滅菌物品不能塞得太滿滅菌鍋內(nèi)滅菌物品不能塞得太滿，以免影響蒸 汽流通，影響滅菌效果。4 4、電泳實(shí)驗(yàn)容易犯的錯(cuò)誤、電泳實(shí)驗(yàn)容易犯的錯(cuò)誤（1）電泳結(jié)束后膠拿走，不關(guān)電泳儀。電泳結(jié)束后膠拿走，不關(guān)電泳儀。（2）配膠時(shí)侯用水配配膠時(shí)侯用水配，而沒有用電泳緩沖液（TAE、TBE等）配。（3）膠板、梳子到處放膠板、梳子到處放。膠板梳子上有EB等有毒物質(zhì)，必須放在固定 地方。（4）跑完電泳，膠長(zhǎng)期留在膠板上，不聞不問；另外每次電泳過后， 不要的膠必須立刻丟棄不要的膠必須立刻丟棄，防止膠干在上面；膠板用過后需要清膠板用過后需要清 洗，以防止污染。洗，以防止

43、污染。（5）EBEB的污染的污染。很多新生為了保護(hù)自己，電泳的時(shí)侯戴著手套，然后 開抽屜、開門或透射儀時(shí)，仍戴著手套。導(dǎo)致EB污染到很多地方。（6）膠拍照的時(shí)侯必須在照像儀上貼一張保鮮膜，防止污染和弄花儀器面板。 同時(shí)不能戴著手套操作儀器和電腦鍵盤不能戴著手套操作儀器和電腦鍵盤。（7）剛學(xué)倒膠的時(shí)侯，很容易發(fā)生膠的泄漏，造成生膠的泄漏，造成EBEB的污染的污染。為了防止這種情 況，可用雙層透明膠帶封嚴(yán)膠板可用雙層透明膠帶封嚴(yán)膠板。（8）每次熔化膠后再加EB，不要預(yù)先把EB加到膠中。當(dāng)然也可以電泳完后在用 EB液浸泡，但EBEB染色液一定要放好染色液一定要放好。5 5、廢棄溴化乙錠、廢棄溴化乙錠

44、EBEB凈化和處理方法凈化和處理方法（1） 嚴(yán)禁隨便丟棄。嚴(yán)禁隨便丟棄。因?yàn)镋B是強(qiáng)致癌性，而且易揮發(fā)，揮發(fā)至空氣 中，危害很大。（2） 廢廢EBEB溶液的處理方法溶液的處理方法：對(duì)于EB含量大于0.5mg/ml的溶液，可如下處理： a.將EB溶液用水稀釋至濃度低于0.5mg/ml； b.加入一倍體積的0.5mol/LKMnO4，混勻，再加入等量的 2.5mol/LHCl，混勻，置室溫?cái)?shù)小時(shí)； c.加入一倍體積的2.5mol/LNaOH，混勻并廢棄。 EB含量小于0.5mg/ml的溶液可如下處理： a.按1mg/ml的量加入活性炭，不時(shí)輕搖混勻，室溫放置1小時(shí)； b.用濾紙過濾并將活性碳與濾紙

45、密封后丟棄。 (3) 廢廢EBEB接觸物接觸物，如抹布，槍頭。 一般回收至黑色的玻璃瓶中，定期進(jìn)行焚燒處理。定期進(jìn)行焚燒處理。6 6、使用恒溫水浴槽容易犯的錯(cuò)誤、使用恒溫水浴槽容易犯的錯(cuò)誤（1）水浴槽高溫過夜高溫過夜，比如65度。（2）沒有樣品時(shí)儀器長(zhǎng)期不關(guān)閉沒有樣品時(shí)儀器長(zhǎng)期不關(guān)閉。（3）水浴槽里面添加自來水水浴槽里面添加自來水（產(chǎn)生水垢、 腐蝕）。應(yīng)該加蒸餾水。（4）使用低溫循環(huán)水浴（16度連接實(shí)驗(yàn)）時(shí) 樣品管一定要在浮板上固定好樣品管一定要在浮板上固定好，以免水 流循環(huán)時(shí)把樣品沖走。7 7、使用超低溫冰箱時(shí)容易犯的錯(cuò)誤、使用超低溫冰箱時(shí)容易犯的錯(cuò)誤（1）一般情況下，酶不要放在超低溫冰箱中

46、酶不要放在超低溫冰箱中，會(huì)影 響活性，放在-20C冰箱即可。（2）超低溫冰箱主要用來保存菌種保存菌種和某些容易降解某些容易降解 或變質(zhì)的樣品或變質(zhì)的樣品。（3）不帶加厚手套找樣品時(shí)很容易凍傷不帶加厚手套找樣品時(shí)很容易凍傷。（4）樣品盒上沒有名字樣品盒上沒有名字（要用中文），很難查 找；（3）樣品盒亂放樣品盒亂放，放到別人的空間；（4）尋找樣品時(shí)，長(zhǎng)時(shí)間打開超低溫冰箱尋找樣品時(shí)，長(zhǎng)時(shí)間打開超低溫冰箱，使得冰 箱很容易損壞。8 8、使用（電子）天平稱量樣品時(shí)、使用（電子）天平稱量樣品時(shí)易犯的錯(cuò)誤易犯的錯(cuò)誤（1）天平?jīng)]有調(diào)水平調(diào)水平；（2）天平超過了量程超過了量程；（3）直接將樣品放在天平上稱，沒有

47、使用稱使用稱 量皿量皿或稱量管稱量管；（4）稱量化學(xué)試劑時(shí)，沒有做到一個(gè)樣品一做到一個(gè)樣品一 個(gè)藥匙個(gè)藥匙，造成試劑的交叉污染；（5）稱量普通的化學(xué)試劑，用高精密度的電普通的化學(xué)試劑，用高精密度的電 子天平子天平而不用普通的電子天平；9 9、使用（玻璃探頭）、使用（玻璃探頭）pHpH計(jì)時(shí)計(jì)時(shí)易犯的錯(cuò)誤易犯的錯(cuò)誤（1）長(zhǎng)時(shí)間不校正長(zhǎng)時(shí)間不校正；（2）標(biāo)準(zhǔn)液沒有用容量瓶配，或者配標(biāo)準(zhǔn)液標(biāo)準(zhǔn)液沒有用容量瓶配，或者配標(biāo)準(zhǔn)液 的化學(xué)試劑的純度不夠的化學(xué)試劑的純度不夠（優(yōu)級(jí)純、分析 純、化學(xué)純、普通試劑）；（3）探頭長(zhǎng)期保存，應(yīng)浸沒在探頭長(zhǎng)期保存，應(yīng)浸沒在pH7.0pH7.0的保護(hù)的保護(hù) 緩沖液中緩沖液中

48、；（4）過一段時(shí)間，探頭中應(yīng)該補(bǔ)加一些補(bǔ)加一些KClKCl 緩沖液緩沖液。1010、使用烘箱時(shí)的常犯錯(cuò)誤、使用烘箱時(shí)的常犯錯(cuò)誤（1）高溫（超過100度）烘干過夜；（2）沒有烘干物品時(shí)長(zhǎng)期開著；（3）有些物品（tips、離心管）不宜高溫烘干，需特別注意；1111、使用、使用PCRPCR儀最易犯的錯(cuò)誤儀最易犯的錯(cuò)誤（1）必須學(xué)會(huì)自己編程序必須學(xué)會(huì)自己編程序，然后設(shè)定自己的程序號(hào)設(shè)定自己的程序號(hào) 碼碼，而不要總是用別人的程序，更不要隨意 修改別人的程序；（2）有的有的PCRPCR儀要加礦物油，有的不用加儀要加礦物油，有的不用加，必須 搞清楚；（3）PCR儀器可以過夜反應(yīng)，但如果過夜最后一如果過夜最后

49、一 步的溫度應(yīng)設(shè)定在步的溫度應(yīng)設(shè)定在1212度而不是度而不是4 4度度，長(zhǎng)時(shí)間的 4度會(huì)嚴(yán)重影響PCR儀的壽命。（4）嚴(yán)禁用嚴(yán)禁用PCRPCR儀來進(jìn)行酶切或連接反應(yīng)儀來進(jìn)行酶切或連接反應(yīng)?。?）PCRPCR管子一定要蓋嚴(yán)管子一定要蓋嚴(yán)，防止樣品蒸發(fā)！1212、使用超凈臺(tái)容易犯的錯(cuò)誤、使用超凈臺(tái)容易犯的錯(cuò)誤（1）超凈臺(tái)中并不是絕對(duì)無(wú)菌超凈臺(tái)中并不是絕對(duì)無(wú)菌，所以在里面進(jìn)行接種的時(shí)侯，仍然要用仍然要用 酒精燈酒精燈，并小心操作；（2）涂布細(xì)菌時(shí)涂布細(xì)菌時(shí)玻璃棒用酒精消毒時(shí)經(jīng)常容易引起放在平皿中的酒精燃酒精燃 燒燒，此時(shí)不要驚慌，只需要迅速用一個(gè)平板蓋住平皿迅速用一個(gè)平板蓋住平皿，酒精在接觸 不到空

50、氣后會(huì)立刻熄滅。（3）每次操作完，應(yīng)把自己的物品從超凈臺(tái)中拿走。除非必要，超凈臺(tái)除非必要，超凈臺(tái) 不要堆積物品不要堆積物品。另外，每次操作完后，要用清水和酒精清潔臺(tái)面清潔臺(tái)面。（4）超凈臺(tái)中的過濾層應(yīng)定期取出清潔后再放入過濾層應(yīng)定期取出清潔后再放入，以免堵塞和增加染菌 機(jī)會(huì)。（5）不用的時(shí)侯，超凈臺(tái)應(yīng)關(guān)燈，并保持密封，防止雜菌進(jìn)入。（6）一般半小時(shí)或1小時(shí)已足夠滅菌，嚴(yán)禁超凈臺(tái)長(zhǎng)時(shí)間紫外消毒嚴(yán)禁超凈臺(tái)長(zhǎng)時(shí)間紫外消毒，以 增加燈管的壽命，并減少臭氧的產(chǎn)生。1313、同位素操作時(shí)容易犯的錯(cuò)誤、同位素操作時(shí)容易犯的錯(cuò)誤（1）使用同位素前，沒有進(jìn)行過同位素安全培訓(xùn)；（2）進(jìn)入同位素操作室后，沒有對(duì)室內(nèi)

51、（操作臺(tái)、地面等）的同位素情況進(jìn)行檢測(cè)；（3）操作同位素時(shí)沒有帶防護(hù)裝備（眼睛、頭盔、實(shí)驗(yàn)服等）。（4）試驗(yàn)完后沒有清理臺(tái)面，并對(duì)環(huán)境進(jìn)行同位素檢測(cè)；（5）放射性廢棄物沒有放入同位素廢物桶中；（6）操作應(yīng)盡可能快速，減少在同位素室中的操作時(shí)間；（7）經(jīng)常進(jìn)行同位素操作者，應(yīng)定期進(jìn)行身體檢查。文庫(kù)的建立與篩選；文庫(kù)的建立與篩選；11宏基因組技術(shù)；宏基因組技術(shù)；13酶的定向進(jìn)化技術(shù)；酶的定向進(jìn)化技術(shù)；14克隆基因的策略；克隆基因的策略；12文庫(kù)的建立與篩選；文庫(kù)的建立與篩選；11宏基因組技術(shù)；宏基因組技術(shù)；13酶的定向進(jìn)化技術(shù)；酶的定向進(jìn)化技術(shù)；14克隆基因的策略；克隆基因的策略；12實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的六

52、原則實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的六原則4、平衡原則平衡原則：一個(gè)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案的均衡性好壞，關(guān)系到實(shí)驗(yàn)研 究的成敗。應(yīng)充分發(fā)揮具有各種知識(shí)結(jié)構(gòu)和背景的人的應(yīng)充分發(fā)揮具有各種知識(shí)結(jié)構(gòu)和背景的人的作作 用用， 群策群力，方可有效地提高實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案的均衡性。 在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的過程中要注意時(shí)間上的分配要注意時(shí)間上的分配，只有在時(shí)間上分 配好了，才不會(huì)出現(xiàn)一段時(shí)間特別忙而一段時(shí)間特別閑的情 況。5、彈性原則：彈性原則：所謂空格，指的是在時(shí)間分配圖上留有空缺時(shí)間分配圖上留有空缺。適當(dāng)?shù)目杖笔欠浅１匾?，只有這樣才能富有彈性的實(shí)施實(shí)驗(yàn)計(jì)劃，并不斷地調(diào)整好自己的實(shí)驗(yàn)進(jìn)度調(diào)整好自己的實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。6、最經(jīng)濟(jì)原則最經(jīng)濟(jì)原則：不論什么實(shí)驗(yàn)，都

53、有它的最優(yōu)選擇方案最優(yōu)選擇方案，這包括在資金的使用上，也包括人力時(shí)間的損耗上，必要時(shí)可以預(yù)測(cè)一下自己實(shí)驗(yàn)的產(chǎn)出和投入的比值，這個(gè)比值越大越好，當(dāng)然是以你所擁有的實(shí)驗(yàn)條件你所擁有的實(shí)驗(yàn)條件作基礎(chǔ)的。 （量力而為，看米下鍋！）五實(shí)驗(yàn)小結(jié)五實(shí)驗(yàn)小結(jié)不斷進(jìn)行小結(jié)與不斷完善。不斷進(jìn)行小結(jié)與不斷完善。在實(shí)驗(yàn)記錄本上記載每周計(jì)劃的目的之一就是在周末進(jìn)行檢查和小結(jié)，并根據(jù)結(jié)果制定下周計(jì)劃。我的導(dǎo)師教導(dǎo)我在工作順利時(shí)要注意隨時(shí)在工作順利時(shí)要注意隨時(shí)進(jìn)行階段性小結(jié)，特別是在工作順利時(shí)，新的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不斷涌現(xiàn)，進(jìn)行階段性小結(jié)，特別是在工作順利時(shí)，新的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不斷涌現(xiàn)，常常會(huì)使人忙于收集大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，而忽略檢查實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

54、的可靠性以及對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)所說明的問題深入思考，或者說是只見樹木，不見森林。因而收集了大量無(wú)用的、錯(cuò)誤的或意義不大的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，反而忽略了真正關(guān)鍵的數(shù)據(jù)，包括必不可少的對(duì)照實(shí)驗(yàn)。這些必不可少的對(duì)照實(shí)驗(yàn)，當(dāng)時(shí)做當(dāng)時(shí)做是非常方便的，而事后補(bǔ)做往往費(fèi)時(shí)費(fèi)力。是非常方便的，而事后補(bǔ)做往往費(fèi)時(shí)費(fèi)力。隨時(shí)進(jìn)行階段性小結(jié)不僅可以隨時(shí)發(fā)現(xiàn)問題隨時(shí)予以解決，還可以隨時(shí)注意不僅要深入問題，重視每一個(gè)細(xì)節(jié)，還要不斷總覽全局，才不致迷失方向，這就是我國(guó)古人說做學(xué)問不僅要入乎其中還要出乎其外的意思。隨時(shí)進(jìn)行階段性小結(jié)的另一目的就是對(duì)所得的初步結(jié)論隨時(shí)予以隨時(shí)進(jìn)行階段性小結(jié)的另一目的就是對(duì)所得的初步結(jié)論隨時(shí)予以檢查，每一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)

55、結(jié)果都可能有多種不同的解釋，特別是在實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)檢查，每一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果都可能有多種不同的解釋，特別是在實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)重要結(jié)果時(shí)，最容易犯的錯(cuò)誤就是輕率得出結(jié)論，要有自以為非的勇重要結(jié)果時(shí)，最容易犯的錯(cuò)誤就是輕率得出結(jié)論，要有自以為非的勇氣。氣。我一生犯過多次這樣的錯(cuò)誤。五十年代，王應(yīng)睞教授、汪靜英同志和我在國(guó)際上首先純化了琥珀酸脫氫酶，并發(fā)現(xiàn)它有一個(gè)與蛋白部分共價(jià)連接含有核黃素的輔基。當(dāng)時(shí)已知的兩種核黃素輔基，核黃素單核苷酸和核黃素腺嘌呤二核苷酸，都是與蛋白部分非共價(jià)結(jié)合，與蛋白部分共價(jià)連接含的核黃素輔基，文獻(xiàn)上尚未見有報(bào)道。因此我想，我們很可能發(fā)現(xiàn)了一種新型的核黃素輔基，經(jīng)過把蛋白部分水解進(jìn)行鑒定，我們

56、觀察到這一輔基含有兩種堿基，一種是核黃素，而另一種在雙向紙層析上的位置表明它不是腺嘌呤而是次黃嘌呤，紫外吸收光譜也與次黃嘌呤相同。這導(dǎo)致我輕率得出結(jié)論認(rèn)為我們獲得了一種全新的，文獻(xiàn)中從未報(bào)道過的與蛋白部分共價(jià)連接的輔基，核黃素次黃呤嘌呤二核苷酸。但在結(jié)構(gòu)上次黃嘌呤僅比腺嘌呤少一個(gè)氨基，為此王應(yīng)睞教授建議檢查在我們的酶制劑中是否會(huì)含有一種從腺嘌呤分子上水解除去氨基的酶，雖然我們的酶經(jīng)過純化，含有雜酶的可能性不大，但我們?nèi)匀贿M(jìn)行了檢查，結(jié)果酶制劑中果然含有腺嘌呤脫氨酶作為雜質(zhì)，輔基雖然與蛋白部分共價(jià)連接，但仍然是核黃素腺嘌呤二核苷酸，次黃呤嘌是在酶純化過程中腺嘌呤的水解產(chǎn)物。這就避免了在論文發(fā)表時(shí)出現(xiàn)重大錯(cuò)誤。五實(shí)驗(yàn)小結(jié)五實(shí)驗(yàn)小結(jié)不斷進(jìn)行小結(jié)與不斷完善。不斷進(jìn)行小結(jié)與不斷完善。在實(shí)驗(yàn)記