S100蛋白S100作業(yè)指導(dǎo)書

1、Elecsys E 170/E 411 (S100) 蛋白S100文件編號(hào)：LAB- OP- MY0201頁,共 第 頁1 版本：A/0生效日期：2021-02-01XXXXXX 醫(yī)院檢驗(yàn)科 免疫室 分析工程作業(yè)指 導(dǎo)書分析原理1.采用雙抗體夾心法原理,整個(gè)過程18分鐘完成. 第1步：20 fd標(biāo)本、生物素化的抗S100單克隆抗體和釘Ru標(biāo)記的抗S100單克隆抗體混勻,形成夾心復(fù)合物. 第2步：參加鏈霉親和素包被的微粒,讓上述形成的復(fù)合物通過生物素與鏈霉親和素間的反響結(jié)合到微粒上.Elecsys 第3步：反響混和液吸到測量池中,微粒通過磁鐵吸附到電極上,未結(jié)合的物質(zhì)被清洗液洗去,電極加電壓后產(chǎn)

2、生化學(xué)發(fā)光,通過光電倍增管進(jìn)行測定.自動(dòng)將標(biāo)本產(chǎn)生的光電信號(hào)與從 S100定標(biāo)液彳#出的Cutoff值相比擬.2 .標(biāo)本要求血清必須用標(biāo)準(zhǔn)試管或內(nèi)有別離膠的試管收集.請(qǐng)勿使用血漿.在15-25 C可保存8小時(shí)；在-20 C可保存3個(gè)月34.在使用原始試管處理標(biāo)本時(shí),應(yīng)遵循試管生產(chǎn)商所提供的指導(dǎo).如標(biāo)本中有沉淀出現(xiàn),必須先作離心處理再進(jìn)行分析.已經(jīng)加熱失活的標(biāo)本無法分析.使用疊氮化物作為穩(wěn)定劑的標(biāo)本或質(zhì)控液無法分析.檢測前,請(qǐng)保證患者標(biāo)本、定標(biāo)液及質(zhì)控液放置在20-25 C的環(huán)境中.由于蒸發(fā)因素的影響,標(biāo)本、定標(biāo)液及質(zhì)控液在放入分析儀后請(qǐng)?jiān)?小時(shí)內(nèi)完成測定.3 .試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和其他所需材

3、料采用羅氏原裝配套試劑.試齊:M 鏈霉親和素包被的微粒透明瓶蓋,1瓶,6.5ml.粒子濃度0.72mg/ml,含防腐劑.R1:生物素化的抗S100單克隆抗體灰蓋,1瓶,9ml,濃度1.0mg/l ,磷酸緩沖液50mmol/l, pH7.2含防腐劑.R2: Rubpy32+標(biāo)記白T抗S100單克隆抗體黑蓋,1瓶,9ml.濃度1.0mg/l ,磷酸緩沖液50mmol/l, pH 7.2含防腐劑.校準(zhǔn)品：Cal 1陰性定標(biāo)液白蓋,2*1ml血清,含防腐劑Cal 2陽性定標(biāo)液黑蓋,2*1ml血清,含防腐劑質(zhì)控品：Elecsys S100 質(zhì)控品 1 和 2 PreciControl S100 貨號(hào) 0

4、3330648其他所需材料：日ecsys 2021/cobas e 411分析儀所需材料：貨號(hào) 11662988122, Elecsys ProCell, 6 x 380 mL ,系統(tǒng)緩沖液貨號(hào) 11662970122, Elecsys CleanCell, 6 x 380 mL,檢測池洗液貨號(hào) 11930346122, Elecsys SysWash, 1 x 500 mL附加洗液貨號(hào) 11933159001, SysClean 適配器貨號(hào) 11706829001, Elecsys 1010 分析杯,12 x 32 反響管,或貨號(hào) 11706802001, Elecsys 2021 分析杯,

5、60 x 60 反響管貨號(hào)11706799001, Elecsys 2021 分吸吸頭,30 x 120 移液管吸頭Modular Analytics E170/cobas e 601免疫分析儀所需材料：貨號(hào) 04880340, ProCell M, 2 x 2 L系統(tǒng)緩沖液貨號(hào) 04880293, CleanCell M, 2 x 2 L檢測池洗液貨號(hào)03023141001, PC/CC杯,50杯用于在測定前預(yù)熱Procell M 及Cleancell M .清洗液,用于在檢測完畢后或更換試劑時(shí)清洗系統(tǒng).03005712190,ProbeWash M, 12 x 70 mL貨號(hào).XXXXXX

6、 醫(yī)院檢驗(yàn)科 免疫室 分析工程作業(yè)指 導(dǎo)書Elecsys E 170/E 411文件編號(hào)：LAB- OP- MY02C2頁,共 第 頁2 版本：A/0生效日期：2021-02-01貨號(hào)12102137001,分析杯/分析吸頭 組合裝M, 48分析杯x 84反響管或加液器吸頭,廢物袋貨號(hào) 03023150001, WasteLiner,廢物袋貨號(hào) 03027651001, SysClean 適配器 M三種分析儀均需要的材料：貨號(hào) 11298500316, Elecsys SysClean, 5 x 100 mL系統(tǒng)清洗液4 .儀器和校準(zhǔn)使用儀器：瑞士羅氏診斷公司生產(chǎn) Elecsys 2021/E

7、 170/E 411全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫自動(dòng)分析儀儀器校準(zhǔn)：每批S100試劑盒必須用新鮮試劑和S100 Cal 1,Cal 2 定標(biāo)一次.另外,以下情況需要再次定標(biāo)：Elecsys2021 :, 一個(gè)月同一批號(hào)試劑 7天放置儀器上的同一試劑盒各種分析儀均適用的情況：根據(jù)要求進(jìn)行標(biāo)定：如質(zhì)控結(jié)果超出范圍時(shí)；根據(jù)規(guī)定進(jìn)行屢次標(biāo)定.5 .操作步驟以E 170為例5.1 校準(zhǔn)操作步驟：在編緝各工程的參數(shù)時(shí),已經(jīng)在 Application Calib菜單中定義好了定標(biāo)類型和幾點(diǎn)定標(biāo).因此在對(duì)各工程進(jìn)行定標(biāo)時(shí),只需在定標(biāo)菜單Calibration中進(jìn)行即可.1.2 進(jìn)入Calibration -Statu

8、s菜單,用鼠標(biāo)選擇需定標(biāo)的工程,再根據(jù)需要點(diǎn)單點(diǎn)定標(biāo)BLANK!或兩點(diǎn)定標(biāo)TWO POINT!、跨距定標(biāo)SPAN、多點(diǎn)定標(biāo)FULL,再選擇其它工程進(jìn)行相應(yīng)選擇,最后點(diǎn) SAVE將定標(biāo)物放入在Calibration -Calibrator中定義好的位置,點(diǎn)Start ,再點(diǎn)Start ,儀器開始定標(biāo).在Calibration -Status菜單中看定標(biāo)結(jié)果,點(diǎn) Calibration Result鍵看定標(biāo)結(jié)果,點(diǎn) Reaction Monitor 鍵看每個(gè)定標(biāo)物的反響曲線.1.3 樣本檢測程序：單個(gè)樣本輸入,在主菜單下選擇 Workplace- Testslection ,在SequenceNo

9、欄輸入標(biāo)本號(hào),然后選擇該標(biāo)本所需做的單個(gè)工程或組合工程,點(diǎn)SAVE,樣本號(hào)自動(dòng)累加.批量常規(guī)標(biāo)本的輸入,在主菜單下選擇 Workplace- Testslection ,在Sequence No欄輸入起始標(biāo)本號(hào),然后選擇該標(biāo)本所需做的單個(gè)工程或組合工程,點(diǎn)REPEAT輸入該批標(biāo)本的最后一個(gè)標(biāo)本號(hào),點(diǎn) OKffl可.進(jìn)樣分析,將標(biāo)本按在 Workplace菜單中輸入的標(biāo)本號(hào)順序在樣本架上排好,放入進(jìn)樣盤內(nèi),按START1,輸入該批上機(jī)標(biāo)本的起始標(biāo)本號(hào),再點(diǎn)START1,儀器自動(dòng)開始推架檢測標(biāo)本.6 .質(zhì)量限制用Elecsys S100質(zhì)控品1和2 PreciControl .質(zhì)控品1和質(zhì)才5品2

10、至少每24小時(shí)或每一次定標(biāo)后測定一次.質(zhì)控間隔期應(yīng)適用于各實(shí)驗(yàn)室的具體要求.檢測值 應(yīng)落在確定的范圍內(nèi),如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外,應(yīng)采取校正舉措.7 .計(jì)算方法儀器會(huì)自動(dòng)根據(jù)Cal 1和Cal 2的測定值計(jì)算Cut-off值.每一個(gè)標(biāo)本的結(jié)果以有反響性或無反響性以及Cutoff指數(shù)形式標(biāo)報(bào)告.本信號(hào)/ Cutoff8. 參考范圍健康成人和惡性黑色素瘤患者檢測結(jié)果如下：Elecsys S100來自健康成人和不同期別的惡性黑色素瘤隨訪患者的標(biāo)本,用.醫(yī)院XXXXXX 檢驗(yàn)科 免疫室 分析工程作業(yè)指 導(dǎo)書Elecsys E 170/E 411MY020LABC件編號(hào)：OP- 3 頁頁,共第 3 版本

11、：A/0 2021-02-01生效日期：GroupSubrojpNo. ola t piesMedian 附L95th p#rcntieNo. d sarrplss anas CLfatf ： 0-3z10即6曲 帕小回 idjtsC.(MO.lOfiIQ of 206malanoimaparents (al stag-os unoer follow-up021 口 0.0J40.1Q945 of 921 (55)Region斌 lyirph node metastases32 :鮑0.0470.12C4理(12 5%SkhdiEtanl hmpm node (nsiadases21 (IE)

12、工仁0511lOof 21Distant.* visceralE或回=eg70澗0.0770.7=93f 70 (429%健康成人范圍的樣本量b95%沒有疾病,不患腫瘤c可能為顱腦損傷的成年患者測定.外傷后小時(shí)內(nèi)進(jìn)行日ecsys S100GCS表現(xiàn)為稍微顱腦外傷格拉斯哥昏迷at分：13-15分和至少有一種病癥的患者 3s100Elecsys CCT作為參照,用頭顱計(jì)算機(jī)線斷層攝影術(shù)檢查.以健康個(gè)體的X95%!作為分界點(diǎn),6小時(shí)內(nèi)必須進(jìn)行CCT測定可獲得如下結(jié)果：PPV8.8-13.3%,NPV99.1-100% 32.9% 95%T信區(qū)間：,99.7% PPV陽性預(yù)測值11唳敏度98.8%,和

13、特異度NPV陰 性預(yù)測值30-35.9%.靈敏度96.5-100%,特異度CCT positivenegativeTollE CS100IX對(duì)蹲B3670753EC：.性d329330.逸84999K83g/Lid0.098每個(gè)實(shí)驗(yàn)室必須調(diào)查各自患者群體的參考范圍變異性,必要時(shí)根據(jù)具體情況制訂自己的參考范圍.9.分析性能分析儀的代表性試驗(yàn)數(shù)據(jù)如下.各實(shí)驗(yàn)室由于具體情況不同,所得出的數(shù)據(jù)可能會(huì)稍有差異.精密度根據(jù)NCCL.S全國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化操作委員會(huì)制訂的改進(jìn)試驗(yàn)方案EP5-A,應(yīng)用日ecsys試劑盒、人血液標(biāo)本和質(zhì)控液驗(yàn)證 ElecsysS100試劑盒檢測重復(fù)性.每日測6次共10日n=60

14、;在E170分析儀上的組間精密度n=21,得結(jié)果如下：Elecsys 1010f2021Within run precisionTota:l precitionSarr plcMm ,球SDMLCV %SD皿LCV %Hufrart scrr 10.080.0022.10.W22.SHurra ECrr 20.240.0031.1QMS2.0Hum 括czt2130.0422.0C.0522.4PriciuDntrt SI000.260.0051C.0062.3Preci ConLrclS1jO_23 330.046140,屈17El 70Withirrun precisionTalal pr

15、ecisionSampleV1eart 的LSD陪；cv%Moan lLSD的LCV10.090.0011.00.093.0G33.10.260.005IB0.263 0CE2.5Hurr an seruTi 32.250.3*50.72加3.0642.9PreGControlSlOO_10.270.0C11.30.283,00727Pr?ciu jnlrci Sl30_23.390.0310.93.38P 3.092注7分析靈敏度低濃度檢測限制 0,005 四 g/L .XXXXXX 醫(yī)院檢驗(yàn)科 免疫室 分析工程作業(yè)指 導(dǎo)書Elecsys E 170/E 411OP- MY020LABC件編

16、號(hào)：4 第 頁頁,共 4 版本：A/0 2021-02-01生效日期：.2SD組間精密度范圍之內(nèi),標(biāo)本數(shù) 21標(biāo)準(zhǔn)差系統(tǒng)定標(biāo),定標(biāo)2SD檢測限制定義為可以區(qū)別零濃度定標(biāo)液的最低可測濃度值,計(jì)算公式為定標(biāo)液最小濃度+ 液最小濃度+方法比擬將 Elecsys S100 現(xiàn)在的試劑盒 Elecsys S100 產(chǎn)品目錄號(hào) 03051986 y與 Liamat Sangtec100 x1 和 Liaison Sangtec100x2進(jìn)行比擬,得到以下線性關(guān)系pmol/L.E eys；Liamal %； - j.550xj + 0,025伍 072gSD fmd68l = 3.31 e標(biāo)本數(shù)：934E

17、ecss/Uaison ( y - 0,783X2 + 0-003 ；=0857標(biāo)本的濃度范圍為 0.00 and 9.87 g g/L. SD(mdB8) =0.018標(biāo)本數(shù)：379標(biāo)本的濃度范圍為 0.01 and 2.08 |ig/L.分析特異性所使用的單克隆抗體沒有交叉反響1%功能靈敏度0.02ug/l功能靈敏度是指可以重復(fù)檢測到的最低分析濃度,并且批內(nèi)變異系數(shù)為20%.10 .干擾因素測定結(jié)果不受黃疸膽紅素 428 nmol/L,或 25 mg/dl、溶血血紅蛋白0.621 mmol/L ,或1.0 g/dl、高脂血癥脂肪乳劑 1500 mg/dl 和生物素 205 nmol/ml

18、,或50ng/mL的影響.標(biāo)準(zhǔn)：回收率90110%.對(duì)于因某些疾病需要而接受高劑量生物素治療的患者 5mg/天,必須在末次生物素治療8小時(shí)后采集標(biāo)本.濃度達(dá)1000IU/mL的類風(fēng)濕因子對(duì)檢測沒有干擾.當(dāng)S100濃度達(dá)10ug/ml時(shí),未出現(xiàn)高劑量鉤鐮效應(yīng).體外對(duì)18種常用藥物進(jìn)行試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)藥物對(duì)本測定結(jié)果有影響.由于本試劑盒使用單克隆鼠抗體,所以因治療或者診斷需要而接受單克隆鼠抗體的患者,其標(biāo)本檢測結(jié)果可能有誤.極少數(shù)標(biāo)本中可出現(xiàn)大量鏈親和素和抗釘抗體而影響測定結(jié)果.Elecsys S100附帶有試劑添加劑以減少以上不良影響.所以,在診斷中必須結(jié)合患者病史、各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室檢查及其它臨床資料來綜合

19、評(píng)估測定結(jié)果.11 .臨床意義S100是一種小分子蛋白質(zhì)二聚體,分子量為 10.5kD,是鈣離子結(jié)合蛋白多基因家族中的一員 1,2.S100A1和S100B B 是首先發(fā)現(xiàn)的成員,最初由 Moore作為一種不能別離的混合物從牛腦中別離出來3,后來因其能溶于100%&和硫酸鎂溶液中,所以命名為S100.同時(shí),至少還發(fā)現(xiàn)了 21種不同成員4.S100A1和S100B主要在中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞表達(dá),特別是星型膠質(zhì)細(xì)胞,但是在黑色素細(xì)胞和其他組織也有一定程度的表達(dá).1,5,6的異型或同型二聚體組成的蛋白質(zhì),具有多種調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外活動(dòng)的功能B1和A1這種由.Elecsys E 170/E 411文件編號(hào)

20、：LAB- OP3- MY02c5頁,共 第 頁5 版本：A/0生效日期：2021-02-01醫(yī)院XXXXXX 檢驗(yàn)科 免疫室 分析工程作業(yè)指 導(dǎo)書惡性黑色素瘤患者,特別是II、III和IV期患者,血清S100濃度升高情況可能預(yù)示其疾病進(jìn)展情況.一系列的濃度測定對(duì)成功跟蹤和監(jiān)測患者治療非常有用 7,8,9,10,11,12,13.另外,大腦損傷后,CSF(腦脊液)中S100濃度升高,并且釋放到周圍血液中.血清S100濃度增加提示血腦屏障被破壞,并且這種升高可能出現(xiàn)在神經(jīng)損害之前14.多種不同原因,如腦外傷15,16,17,18,19,10和中風(fēng)21,22,23引起的大腦損傷患者均可檢測到S10

21、Q12 .參考文獻(xiàn)1. Donato R. S100: a multigenic family of calcium-modulated proteins of the EF-hand type with intacellular and extracellular functional roles. Int J Biochem Cell Biol 2001;33:637-668.2. Zimmer DB, Cornwall EH, Landar A, Song W. The S100 protein family: history, function, and expression. Bra

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