β-胡蘿卜素和番茄紅素的提取分離與測定

1、伊胡蘿卜素和番茄紅素的提取別離與測定1 .實驗目的：掌握色素提取方法、柱層析別離方法及薄層色譜初步定性方法.了 解B -胡蘿卜素與番茄紅素性質的差異.2 .實驗原理：番茄中含有番茄紅素和少量的B -胡蘿卜素,二者均屬于類胡蘿卜素.類胡蘿卜素為多烯類色素,不溶于水而溶于脂溶性有機溶劑.本實 驗先用乙醇將番茄中的水脫去,再用二氯甲烷萃取類胡蘿卜素.由于二 氯甲烷與水不混溶,故只有除去水分后才能有效地從組織中萃取出類胡 蘿卜素.根據番茄紅素與B-胡蘿卜素極性的差異,用柱層析可以將它 們別離.別離效果可以用薄層層析進行檢驗.3 .實驗儀器及材料：新鮮番茄或番茄醬.95%乙醇,二氯甲烷,石油醍60c 9

2、0C,氯仿,中性或酸性氧化鋁柱層析用,環(huán)己烷,硅膠 G,飽 和氯化鈉溶液,無水硫酸鈉.4 .實驗過程： 1原料處理與色素提取稱取新鮮番茄漿20 g于100 mL圓底燒瓶中,力口 95%乙醇40 mL, 搖勻,裝上回流冷凝管,在水浴上加熱回流 5min,趁熱稠濾,只將溶液 傾出,殘渣留在瓶內,參加 30 mL二氯甲烷,水浴上加熱回流5 min, 冷卻,將上層溶液傾出抽濾,固體仍保存在燒瓶內,再加10 mLX氯甲烷重復萃取一次.合并乙醇和 2次二氯甲烷提取液,倒入分液漏斗中, 加5 mL飽和氯化鈉溶液有利分層,振搖,靜止分層.分出橙黃色 有機相,使其流經一個在頸部塞有疏松棉花且在棉花上鋪一層1 c

3、m厚的無水硫酸鈉的三角漏斗,以除去微量水分.將此溶液貯存于枯燥的有 塞子的錐形瓶中.層析之前,將此溶液在通風櫥中用熱水浴蒸發(fā)至干.2層析柱的制備取一支長15cm左右內徑為的枯燥的層析柱,將其垂直固定于鐵架 上,底部鋪上少量棉花,翻開活塞.稱取 8g氧化鋁小心傾入層析柱中, 在氧化鋁上鋪一層棉花.然后向柱內參加 15ml石油醍,讓溶劑浸潤并 流過層析柱,注意柱頂部溶劑不能干涸.待溶劑液面剛好與氧化鋁外表 相切時,關閉活塞,備用.3柱層析別離向蒸干的粗樣品中參加2ml苯使其溶解.用一長頸滴管取樣,小心 滴入層析柱內,注意產品不能接觸柱壁.翻開活塞,讓溶液自然流下,待液面剛好與柱頂氧化鋁外表相切時,

4、參加2ml石油醍,用50ml枯燥 的錐形瓶接收滴出的溶液.待溶劑液面與氧化鋁外表相切時,再參加8ml 或更多的石油醍,至滴出的溶液無色,關閉活塞,收集紅色的番茄紅素 溶液a;翻開活塞,再往層析柱中先后參加 2ml及8ml的氯仿,洗至 滴出的溶液無色,用另一 50ml枯燥的錐形瓶接收,關閉活塞,收集黃 色的B -胡蘿卜素溶液b.然后用相應溫度的水浴蒸干a、b,差 重法分別稱出相應濃縮物的重量 Wa Wb精確到.4蘇丹紅n工作曲線用分析天平準確稱取約蘇丹紅n于小燒杯中,參加少量溶劑建 議用氯仿在通風櫥內水浴加熱攪拌溶解,待溶液冷卻至室溫后全部轉 移到100ml的容量瓶中,用溶劑建議用氯仿稀釋定容至刻度線,可得 到50g/ml的標準液.然后用10ml的移液管分別移取該溶液2ml、4ml、 6ml、8ml、10ml于五個25ml的容量瓶中,然后參加溶劑將其稀釋定容 至刻度,它們濃度分別為 4t g/ml、8區(qū)g/ml、12 g/ml > 16g / ml、 20