吸光光度法的靈敏度與準(zhǔn)確度ppt課件

1、吸光光度法的靈敏度與準(zhǔn)確度吸光光度法的靈敏度與準(zhǔn)確度一一. 靈敏度的表示方法靈敏度的表示方法:摩爾吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù) () A= b c =A/bc (Lmol-1cm-1) 越大越大, 靈敏度越高靈敏度越高: 1045104 為中等靈敏度為中等靈敏度; 105為高靈敏度為高靈敏度; 104104* *選擇性好選擇性好* *顯色劑在測定波優(yōu)點(diǎn)無明顯吸收。顯色劑在測定波優(yōu)點(diǎn)無明顯吸收。 對照性好對照性好, , max60 nm .max60 nm .* *反響生成的有色化合物組成恒定，穩(wěn)定。反響生成的有色化合物組成恒定，穩(wěn)定。* *顯色條件易于控制，重現(xiàn)性好。顯色條件易于控制，重現(xiàn)性好。8.4

2、.2 顯色條件確實(shí)定顯色條件確實(shí)定c(R)c(R)c(R)1. 顯色劑用量顯色劑用量c(M)、pH一定一定Mo(SCN)32+ 淺淺紅紅Mo(SCN)5 橙紅橙紅Mo(SCN)6- 淺紅淺紅Fe(SCN)n3-n2. 顯色反響酸度顯色反響酸度c(M)、 c(R)一定一定pH1pHpH2pH鄰二氮菲亞鐵反響完全度與鄰二氮菲亞鐵反響完全度與pHpH的關(guān)系的關(guān)系 Fe2+3RR(H)Fe(A)33333FeR FeR 33Fe(A)R(H)FeR lglglg3lg3lgRFe HHA檸檬酸檸檬酸c(R)R=10-4molL-131021.33FeR33FeR lgFe pH38為適宜為適宜的酸度范

3、圍的酸度范圍3. 顯色溫度及顯色時間顯色溫度及顯色時間另外，還有介質(zhì)條件、有機(jī)溶劑、另外，還有介質(zhì)條件、有機(jī)溶劑、外表活性劑等外表活性劑等T1()T2()t(min)A8.4.3 8.4.3 干擾及消除干擾及消除Co2, Fe3+Co2+FeF63-Co(SCN)2 (藍(lán)藍(lán))NaFSCNCo2+Fe2+,Sn4+(2)Sn2+Co(SCN)2SCN測測Co2(含含F(xiàn)e3+) : (掩蔽法掩蔽法)1.1.化學(xué)法化學(xué)法 Co2+, Zn2+,Ni2+, Fe2+ CoR,ZnR NiR,FeRCoR, Zn2+ ,Ni2+ , Fe2+ 鈷試劑鈷試劑RH+測測Co2 :(生成絡(luò)合物性質(zhì)不同生成絡(luò)合

4、物性質(zhì)不同)如不能經(jīng)過控制酸度和掩蔽的方法消除干擾，如不能經(jīng)過控制酸度和掩蔽的方法消除干擾，那么需采取分別法。那么需采取分別法。測測Fe3:(控制控制pH)Fe3+, Cu2+FeSS 紫紅紫紅Cu2+pH 2.5SS2. 物理法物理法 選擇適當(dāng)?shù)臏y定波長選擇適當(dāng)?shù)臏y定波長515655415500釷-偶氮砷III 鈷-亞硝基紅鹽 AA絡(luò)合物絡(luò)合物絡(luò)合物絡(luò)合物試劑試劑試劑試劑 1. 1. 僅絡(luò)合物有吸收，溶劑作參比。僅絡(luò)合物有吸收，溶劑作參比。 如如 phenFe2+ phenFe2+ 規(guī)范曲線規(guī)范曲線2.2.待測液也有吸收，被測液作參比。待測液也有吸收，被測液作參比。 如如 測汽水中的測汽水中

5、的 Fe Fe3. 3. 顯色劑或其他試劑也有吸收，空白溶液作參比顯色劑或其他試劑也有吸收，空白溶液作參比 例例: :鄰二氮菲光度法測鄰二氮菲光度法測Li2CO3Li2CO3中的中的 Fe Fe， 參比溶液為不含參比溶液為不含Li2CO3Li2CO3樣品的一切試劑。樣品的一切試劑。4. 4. 干擾組分與顯色劑有反響干擾組分與顯色劑有反響, ,又無法掩蔽消除時：又無法掩蔽消除時： 1 1掩蔽被測組分，再參與顯色劑，作參比掩蔽被測組分，再參與顯色劑，作參比. .2 2參與等量干擾組分到空白溶液中參與等量干擾組分到空白溶液中, ,作參比作參比. . - - 選擇適當(dāng)?shù)膮⒈热芤哼x擇適當(dāng)?shù)膮⒈热芤?.5

6、 吸光光度法的運(yùn)用吸光光度法的運(yùn)用1. 單一組分測定單一組分測定1) 金屬離子金屬離子: Fe-phen, Ni-丁二酮肟丁二酮肟, Co-鈷試劑鈷試劑2) 磷的測定磷的測定: DNA中含中含P9.2%, RNA中含中含P9.5%, 可得核酸量可得核酸量.H3PO4+12(NH4)2MoO4+21HNO3=(NH4)3PO412MoO3+12NH4NO3+12H2O磷鉬黃磷鉬黃(小小)磷鉬磷鉬(V)藍(lán)藍(lán)(大大)Sn2+3) 蛋白質(zhì)測定蛋白質(zhì)測定溴甲酚綠、考馬司亮藍(lán)等溴甲酚綠、考馬司亮藍(lán)等4) 氨基酸測定氨基酸測定茚三酮茚三酮(紫色化合物紫色化合物)5) 水質(zhì)檢測水質(zhì)檢測: NH4+、NO2-、

7、Mn2+、Fe2+、SO42-、Hg2+-6) 藥物含量測定藥物含量測定比吸光系數(shù)定量；荷移比吸光系數(shù)定量；荷移光譜法測定光譜法測定.7) 紫外吸收紫外吸收(UV): NO2-、NO3-、SO42-、SO32-、CO32-、SCN-、酪氨酸、色氨、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋白質(zhì)等。酸、苯丙氨酸、蛋白質(zhì)等。2. 多組分的測定多組分的測定 xl1, yl1, xl2, yl2xl1, yl1, xl2, yl2由由x,yx,y標(biāo)液標(biāo)液 在在l l1, 1, l l2 2處分別測得處分別測得在1處測組分x, 在2處測組分yb) 在1處測組分x; 在2處測總吸收,扣除x吸收,可求yc) x,y組分不

8、能直接測定組分不能直接測定A1=exl1bcx+ eyl1bcy(在在l l1處測得處測得A1) A2 =exl2bcx+ eyl2bcy(在在l l2處測得處測得A2) 3. 3. 光度滴定光度滴定NaOH滴定滴定 對硝基酚對硝基酚 pKa=7.15 間硝基酚間硝基酚 pKa=8.39 pKa =1.24V1V2V(NaOH)/mL對硝基酚對硝基酚間硝基酚間硝基酚酸形均酸形均無色無色. .堿形均堿形均黃色黃色典型的光度滴定曲線典型的光度滴定曲線根據(jù)滴定過程中溶液吸光度變化來確定終點(diǎn)的滴定分析方法。根據(jù)滴定過程中溶液吸光度變化來確定終點(diǎn)的滴定分析方法。Vsp滴定劑吸收滴定劑吸收Vsp被滴物吸收

9、被滴物吸收Vsp滴定劑與待滴定劑與待測物均吸收測物均吸收Vsp產(chǎn)物吸收產(chǎn)物吸收4. 4. 絡(luò)合物組成的測定絡(luò)合物組成的測定(1)(1)摩爾比法摩爾比法: : 固定固定cM ,cM ,改動改動cR cR 1:13:1c(R)/c(M)A1.0 2.0 3,0 (2)(2)等摩爾延續(xù)變化法等摩爾延續(xù)變化法: :M:R=1:10.50.33cM/ccM/cM:R=1:2MRMRnn MR(ccc） 常常數(shù)數(shù)表觀構(gòu)成常數(shù)的測定表觀構(gòu)成常數(shù)的測定 (設(shè)設(shè)M、R均無吸均無吸收收)0.5cM/cM:R=1:1A0A00-=A AA c(M)=c(R)=c)2MR(1-1-=M R cKccc MmRn型型

10、?5.5.一元弱酸離解常數(shù)的測定一元弱酸離解常數(shù)的測定 p330p330HL HLHLHLL=HL+LKccAKK +L+aaa(HL)H (HL)=+H +H KaH+L/HL高酸度下，幾乎全部以高酸度下，幾乎全部以HL存在，可測得存在，可測得AHLHLc(HL)；低酸度下，幾乎全部以低酸度下，幾乎全部以L存在，可測得存在，可測得AL Lc(HL).代入整理：代入整理：AAKAA +HLaL-=H -HLLL HLAAKAAa-p= pH+lg-或配制一系列配制一系列c一樣一樣,pH不同的溶液不同的溶液,測測A.MO吸收曲線吸收曲線Aa(HL)Ab(L)123456Ab654321Aa350

11、400450500550600l l/nmA曲線曲線pHpH1 11.10, 1.381.10, 1.382 22.652.653 33.063.064 43.483.485 53.983.986 65.53,6.805.53,6.80由每份溶液的一由每份溶液的一對對pH、A，可求，可求得一個得一個Ka, 取平取平均值即可均值即可.MO離解常數(shù)的測定離解常數(shù)的測定作圖法作圖法LHLappHlgAAKAA HLL2AAA AHL3.32(pKa)123456ApH=pKapHpHA曲曲線線ALLHLlgpHAAAA 曲線曲線0.60.40.20-0.2-0.4-0.63.04.0pHHLLHLl

12、ggLlAAAA 3.346. 雙波長分光光度法消除干擾雙波長分光光度法消除干擾(不要求不要求)在2， A2 = Ax2+Ay2在1， A1= Ax1+Ay1 A= Al l2 - Al l1 = Ax2+Ay2 (Ax1+Ay1) = Ax2 Ax1 = AxAy2 Ay1 Ax =( x2 x1)bcx消除了消除了y的干擾的干擾X被測被測Y干擾干擾l2l1l1Ay1AX1Ay2AX2Al/nm雙波長分光光度法消除渾濁背景干擾雙波長分光光度法消除渾濁背景干擾 l l1 l l2AA 1 -A 2 = A Ac例例 牛奶中微量牛奶中微量Fe的測定的測定7. 導(dǎo)數(shù)分光光度法導(dǎo)數(shù)分光光度法(不要求

13、不要求)A圖圖混合物導(dǎo)數(shù)光譜混合物導(dǎo)數(shù)光譜01234Al ll l 圖圖常藥降壓片中氫氯噻嗪含量的測定常藥降壓片中氫氯噻嗪含量的測定1.氫氯噻嗪氫氯噻嗪.2.硫酸雙肼肽硫酸雙肼肽嗪嗪3. 鹽酸可樂定鹽酸可樂定4.常藥降壓片常藥降壓片 250 290 330 412312AAl l 肝中茚滿二酮類抗凝血?dú)⑹髣┑墓滔噍腿「沃熊釢M二酮類抗凝血?dú)⑹髣┑墓滔噍腿》椒ǎ焊蝿驖{用乙腈浸提，浸提液用方法：肝勻漿用乙腈浸提，浸提液用6的的HClO4稀釋，然后用稀釋，然后用GDX100大孔樹脂萃大孔樹脂萃取，用二氯甲烷取，用二氯甲烷5mL洗脫殺鼠劑，洗脫殺鼠劑，40揮干，剩余物用揮干，剩余物用0.1molL-1N

14、aOH4mL溶溶解后，紫外導(dǎo)數(shù)光譜測定。解后，紫外導(dǎo)數(shù)光譜測定。A22ddAl l0.0cdabDa.空白肝普通光譜空白肝普通光譜b.2.5 mg/L敵鼠溶液的普通光譜敵鼠溶液的普通光譜c.空白肝二階導(dǎo)數(shù)光譜空白肝二階導(dǎo)數(shù)光譜d.2.5 mg/L敵鼠溶液的二階導(dǎo)數(shù)光譜敵鼠溶液的二階導(dǎo)數(shù)光譜8.1 了解分子對光的吸收與溶液顏色的關(guān)系了解分子對光的吸收與溶液顏色的關(guān)系. 吸收曲線吸收曲線定定性分析的根底。性分析的根底。定量分析的根底定量分析的根底朗伯朗伯-比爾定律：比爾定律：A=bc=-lgT 式中各式中各參數(shù)的物理意義，定量計算。參數(shù)的物理意義，定量計算。8.2 了解目視比色法、分光光度法的特點(diǎn)，分光光度計的了解目視比色法、分光光度法的特點(diǎn)，分光光度計的根本部件。根本部件。8.3 靈敏度的表示靈敏度的表示摩爾吸光系數(shù)的意義和計算