病理組織切片制作技術(shù)

1、最新資料推薦病理組織切片制作技術(shù)病理組織切片制作技術(shù) 病理組織切片常用的制作方法有三種。即石蠟切片法， 冰凍切片法和火棉膠切片法。以石蠟 切片法為代表， 切片的基本制作過程是：組織取材固定沖洗脫水透明浸蠟組織包埋組織切片展片附貼切 片脫蠟染色脫水染片透明封固。以上基本過程是互相聯(lián)系的，任何一環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題，都將使整個(gè)切片制作歸于失敗。因此應(yīng) 細(xì)致、耐心、認(rèn)真負(fù)責(zé)， 并事先做好計(jì)劃安排。一、取材 采取病料，要刀剪銳利，剪切時(shí)不可擠壓， 扯拉 病料，以防人為損傷。切取的工具要清潔。采取病料越新鮮越好，一般不超過死后24小時(shí)。應(yīng)選擇病變部與可疑病變部切取，切取時(shí) 要由表及里，有淺入深并包括周圍正常組織

2、一部分。特殊病料應(yīng)根據(jù)器官的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)切取。管狀，囊狀和皮膚組織應(yīng)注意垂直切?。M切）。帶有薄膜的組織，要防止切時(shí)薄膜分離和脫落。切取組織塊大小，以1.51.50.3 厘米為宜， 最厚不宜超過0.5厘米。組織塊病變一面應(yīng) 平整光滑， 另一面可不平整，以便包埋時(shí)辨認(rèn)。切取后，放入事先準(zhǔn)備好的裝有固定液的磨口玻璃廣口瓶中，并做好標(biāo)記。二、固定 固定的目的是迅速將組織細(xì)胞殺死，使細(xì)胞中的蛋 白質(zhì)，糖，脂肪等凝固，從而保持與活組 織相似的結(jié)構(gòu)狀態(tài)。材料取下后， 應(yīng)迅速固定。固定液數(shù)量應(yīng)為病理組織塊的 5到20倍。由于一般把組織塊浸入固定液后數(shù)小時(shí)，固定液滲入組織液的深度只達(dá)2到3厘米。因此， 可以放置冰

3、箱內(nèi)固定， 使組織內(nèi)酶失去作用， 細(xì)菌也 能停止滋生。最常用的固定液是10%的福爾馬林溶液：使用時(shí)，用40%的甲醛飽和水溶液10毫升，加水90毫升配 成。三、沖洗 固定后的組織塊， 應(yīng)將固定液洗去。一般均用流水（自來水）沖洗12到24小時(shí)左右。及時(shí) 沖洗尚有停止固定的作用，防止固定過度， 有利于制片染色。沖洗時(shí)如不方便用流水沖洗， 也可用較大容器盛裝水浸洗， 每 隔相當(dāng)時(shí)間換水一次。整個(gè)浸 洗時(shí)間比流水沖洗應(yīng)稍長一些。酒精固定的組織材料不需沖洗四、脫水 經(jīng)過固定的組織，沖洗后要進(jìn)行脫水。脫水的目的在于將組織內(nèi)的水分用酒精或其他溶劑置換出來，為石蠟等其他包埋劑浸入組織創(chuàng)造條件。常用的脫水劑為酒精

4、。由于酒精可以任何比例與水結(jié)合，對(duì)組織穿透力強(qiáng)，又能使組織硬化，因而不能將組織從水中直接移入濃度高的酒精中，應(yīng)從低濃度逐漸到高濃度。脫水必須充分，否則給浸蠟造成困難。除用酒精作脫水劑外， 還可以用正丁醇(NButyla alcohol )。正丁醇微溶于水， 能與各種濃 度酒精混合， 也能直接溶解石 蠟。故組織經(jīng)正丁醇脫水后，不須經(jīng)二甲苯透明。用正丁醇作 脫水劑，組織塊收縮減低， 也不會(huì)過硬， 故比酒 精優(yōu)越。五、透明 透明的目的是將組織內(nèi)的酒精用礦物油或植物油置 換出來，并溶解石蠟，幫助石蠟浸透組織。由于經(jīng)過透明劑處理的組織塊用肉眼觀察呈透明狀，故稱這一過程為透明。常用的透明劑為二甲苯 (Xy

5、lol ) 因其穿透力較強(qiáng)，因 而組織在二甲苯中停留時(shí)間不宜過長， 一般透明時(shí)間在30分鐘左 右即可。六、浸蠟 浸蠟是指組織經(jīng)過透明作用以后，放入溶化的石蠟中浸滲，使石蠟浸入組織塊中，冷卻后，才能進(jìn)行切片。通常選擇熔點(diǎn)在5256c之間的石蠟， 并視切片時(shí)環(huán)境的氣 溫而選擇。室溫高則選用熔點(diǎn) 稍高的石蠟， 反之，則選用熔點(diǎn)較低的石 蠟，這樣可防止切片時(shí)石蠟太軟或易碎裂。浸蠟的過程是：二甲苯石蠟混合液（1：1 ） 1小時(shí)二甲苯石蠟混合液（1:2 ） 1 小時(shí)石蠟（1） 1 小時(shí)30分石蠟（2） 1 小時(shí)30 分 上述過程可在56C58c恒溫箱中進(jìn)行， 含二甲苯的混合液可 用磨口小瓶盛裝。七、 包埋

6、 包埋就是將已浸滲好的組織包埋于浸滲劑中。根據(jù)需要，包埋的方法常有石蠟包埋法和火棉膠包埋法。石蠟包埋法：（1）先將熔化的石蠟倒入包埋框，用加熱的鐐子將欲包埋的組織塊在蠟液內(nèi)放置好。注意 各組織塊之間的距離和每個(gè)組織塊的位置和方向。（2）迅速第二次往平皿內(nèi)傾倒蠟液，淹沒組織塊。待蠟液出現(xiàn)凝固層后，即輕輕放入冷水 盆中或冰箱中使其凝固。石蠟完全凝固后， 倒出冷縮的蠟塊片， 用加熱的外科刀， 按 組織塊位置修整蠟片待用。對(duì)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（狗和兔等）組織，一般的脫水透明和浸蠟時(shí) 間如下：處理步驟處理時(shí)間（min）處理步驟處理時(shí)間 （min） 75% 酒精長短不定二甲苯I 、 H3085%酉精120 300

7、二甲苯 田60 95%酉精I(xiàn) 和H 120 -300 5658C石蠟30無水 酒精I(xiàn) 、 n、 m 30 56 58C石蠟60 -120無水酒精出60 -120 5658C 石蠟 120 180 注：摘自病理學(xué)技術(shù)， 人民衛(wèi)生出版社， 王伯，李玉松，黃高， 張遠(yuǎn)強(qiáng)主編。八、組織切片 不同的切片制備方法，其切片方法也有較大差別， 組織切片法包括石蠟切片法、 冰凍切片法、火棉膠切片法、石蠟包埋半薄切片法、樹脂包埋薄切片法和大組織石蠟切片法 等。常用的切 片工具包括組織切片機(jī)、切片刀和自動(dòng)磨刀儀器等。以下分別加以敘述。（一）石蠟切片法 組織經(jīng)石蠟包埋后制成的蠟塊，用切片機(jī)制成切片的過程稱為石蠟切片法

8、。為現(xiàn)在病理診斷常用的制作切片的方法。在切片前應(yīng)先切去標(biāo)本周圍過多的石蠟（此過程稱為修塊）但也不 能留得太少， 否則易造成組織破壞，連續(xù)切片時(shí)分片困難。一般切46 m的切片， 特殊 情況可切12 m。要觀察病變的連續(xù)性， 可制作連續(xù)切片。除此之外， 石蠟包埋的組織 便于長期保存， 因此石蠟切片仍 是目前各種切片制作方法中最常用，最普遍的一種方法。1 .切片前的準(zhǔn)備 （1）固定后的標(biāo)本經(jīng)脫水、 透明、浸蠟和包埋后，制成蠟塊。高質(zhì)量的蠟塊和鋒利的切片 刀是保證切片質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。檢查切片刀是否鋒利，簡便的方法是用頭發(fā)在刀鋒上碰一下， 如一碰即斷，說明刀鋒鋒利。用顯微鏡觀察可確定刀口是否平整，有無缺

9、口。（2）準(zhǔn)備充足的經(jīng)過處理的清潔載玻片和恒溫烤片裝置， 大 中號(hào)優(yōu)質(zhì)狼毫毛筆和鉛筆（用于在載玻片的粗糙端寫號(hào)） ，如用 普通載玻片， 可用碳素墨水和蛋白甘油按3:1 體積混合后書寫。2 .切片制作過程 （1）將預(yù)先修好的組織塊先在冰箱中冷卻，而后裝在切片機(jī)固定裝置上。將切片刀裝在刀 架上，刀刃與蠟塊表面呈5 c夾角。將蠟塊固定， 調(diào)整蠟塊與刀至合適位置，并移動(dòng)刀架或 蠟塊固定裝置，使蠟塊與刀刃接觸。（2）切片多使用輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)， 使用時(shí)左手執(zhí)毛筆，右手旋轉(zhuǎn)切片機(jī)轉(zhuǎn)輪。先修出標(biāo)本， 直到組織全部暴露于切面為止，但小標(biāo)本注意不要修得太多，以免無法切出滿意的用于診斷 的切片，標(biāo)本應(yīng)注意切全。切出蠟片后， 用毛筆輕輕地托起， 爾后用眼科鐐夾起， 正面 向上 放入展片箱(展片溫度根據(jù)作用的石蠟熔點(diǎn)進(jìn)行調(diào)整， 一般低 于蠟熔點(diǎn)1012C),待切片 展平后，即可進(jìn)行分片和撈片。切片經(jīng)30%的酒精初展后，再用載玻片撈起放入展片箱更易展 平。為減少切片刀與組織塊在切片過程中產(chǎn)生的熱量， 使石蠟保持 合適的硬度，切片時(shí)可 經(jīng)常用冰塊冷卻