Claudin2在大腸癌中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系

1、Claudin-2在大腸癌中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系 作者：張東 楊春 楊銀學(xué) 張寧妹 李海 蔣波 馬曉強(qiáng) 楊萍【摘要】 目的 觀察緊密連接蛋白 Claudin-2在大腸癌組織中的表達(dá)及其與大腸癌發(fā)生和發(fā)展的關(guān)系。方法 運(yùn)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)Claudin-2在大腸癌及癌旁組織、正常組織中的表達(dá)，并分析Claudin-2蛋白表達(dá)與大腸癌臨床各病理特征的關(guān)系。結(jié)果 Claudin-2在大腸癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織及正常組織(P<0.05)。Claudin-2在大腸癌組織中的陽性表達(dá)與腫瘤的分化程度、Dukes分期密切相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論 大腸癌與

2、癌旁組織及正常組織相比，Claudin-2表達(dá)陽性率明顯升高，其改變?cè)诖竽c癌的發(fā)生發(fā)展中可能起重要作用。 【關(guān)鍵詞】 緊密連接蛋白;大腸癌;免疫組織化學(xué)大腸癌是臨床上最常見的消化道惡性腫瘤之一，嚴(yán)重地威脅著人類的健康。大腸癌的發(fā)病率男女均處于惡性腫瘤的第 3 位，其中在西方發(fā)達(dá)國家，大腸癌的發(fā)病率處于第 2 位1-2，在我國病死率列癌癥死因的第5位3。目前，大腸癌的病因和發(fā)病機(jī)制尚無明確定論，因此從分子水平研究大腸癌的發(fā)病機(jī)制，尋找與大腸癌發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的致病因素，以達(dá)到早期預(yù)防、早期診斷、早期治療的目的，提高5年生存率具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。緊密連接是細(xì)胞之間主要的黏附形式之一，對(duì)維持機(jī)體內(nèi)

3、環(huán)境的穩(wěn)定，保持上皮細(xì)胞的極性，調(diào)節(jié)細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、增殖、分化，以及細(xì)胞功能的發(fā)揮均起重要作用。近年已證實(shí)claudins蛋白是構(gòu)成緊密連接的主要骨架蛋白4，其異常表達(dá)可能在多種疾病的發(fā)病過程中起重要作用。目前研究較多的有claudin-1,-3,-4,-7和-16等，對(duì)于Claudin-2卻鮮有報(bào)道。我們應(yīng)用免疫組化技術(shù)對(duì)大腸癌、癌旁及正常組織中Claudin-2進(jìn)行檢測(cè)，觀察其在大腸癌組織中的表達(dá)。1 材料與方法1.1 臨床資料 選自寧夏醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院2008年11月-2009年6月間，經(jīng)病理證實(shí)為大腸癌的手術(shù)標(biāo)本35例。其中，男19例，女16例，年齡2582歲。高分化腺癌9例，中分化腺癌1

4、6例，低分化腺癌10例。Dukes分期：A期3例，B期12例，C期16例，D期4例。腸管離體后立即取材，每例標(biāo)本癌組織取1塊，癌旁組織(距腫瘤切緣外3 cm)1塊，正常組織(距腫瘤10cm以上)1塊。各約0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm大小。全部病例術(shù)前均未行放、化療，臨床病例資料完整。1.2 試劑與儀器 一抗：鼠抗人claudin抗體(Zymed公司，美國);S-P免疫組化染色試劑盒(即用型免疫組化ElivisionTMplus廣譜試劑盒)購自福州邁新生物技術(shù)公司;PBS液(pH7.4);95%乙醇;10%PLL;石蠟切片機(jī)(LEICAKM2245切片機(jī)，德國);

5、脫水機(jī)(LEICAKM300，德國);Nikon eclipse E800顯微鏡(日本產(chǎn))。1.3 免疫組化 標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，5mm連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟、水化，用常規(guī)S-P法進(jìn)行免疫組織染色，分別檢測(cè)Claudin-2在大腸癌組織、癌旁組織和正常大腸組織中的表達(dá)。一抗為鼠抗人Claudin-2抗體，嚴(yán)格依照試劑盒使用說明操作。1.4 免疫組化陽性結(jié)果的判定 所有石蠟切片由兩名病理科醫(yī)師獨(dú)立評(píng)判后綜合評(píng)定。Claudin-2蛋白陽性反應(yīng)為在細(xì)胞漿呈棕黃色顆粒。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：陽性細(xì)胞數(shù)<25%時(shí)記為(-)，26%50%為(+)，51%75%為(+)，>7

6、5%為(+)。1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié)果2.1 Claudin-2在大腸癌組織、癌旁組織及正常組織中陽性表達(dá)的免疫組化結(jié)果免疫組化染色結(jié)果顯示，大腸癌組織中Claudin-2陽性染色為棕黃色，主要定位于細(xì)胞漿中。Claudin -2在大腸癌組織、癌旁組織及正常組織中的陽性表達(dá)率分別為68.57%(24/35)、42.86% (15/35)和25.71% (9/35)，見圖1-6(封4)。Claudin-2在大腸癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織和正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。表1 Claudin-

7、2在大腸癌、癌旁組織及正常組織中的表達(dá)2.2 大腸癌組織中Claudin-2表達(dá)與大腸癌臨床病理特征的關(guān)系大腸癌組織中Claudin-2陽性表達(dá)率在患者年齡、性別、腫瘤大小分組中的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);在不同的Dukes分期和分化程度分組中Claudin-2的陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。表2 大腸癌組織中Claudin-2表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系3 討論腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)由多基因參與和受多因素影響的復(fù)雜過程，目前普遍認(rèn)為細(xì)胞間的黏附力減弱或喪失可導(dǎo)致細(xì)胞間連接的破壞，并與腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)5。細(xì)胞間的黏附形式主要有以

8、下幾種：緊密連接(TJs)、縫隙連接和黏附連接等。現(xiàn)已證明，緊密連接是腸上皮細(xì)胞間主要的連接方式，并有多種蛋白質(zhì)參與其形成，包括閉鎖(occludin)蛋白、Claudins蛋白、zo-na occludens(ZOs)蛋白以及連接黏附分子(JAM)等。Claudins蛋白是一種相對(duì)分子量約為17×10327×103的跨膜蛋白，目前，已發(fā)現(xiàn)至少有24種異構(gòu)體6。Claudins蛋白主要分布于腦、皮膚、神經(jīng)系統(tǒng)和內(nèi)臟組織中，其表達(dá)有組織特異性，大部分組織中表達(dá)兩種以上的Claudins，并且在不同組織中Claudins的成員蛋白是不同的。它的功能主要是組成緊密連接的通透屏障，

9、調(diào)控離子、大分子和細(xì)胞穿過旁細(xì)胞途徑的通透性。我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)了Claudin-2在大腸癌組織、癌旁組織和正常組織中的表達(dá)，結(jié)果顯示Claudin-2在大腸癌組織中的陽性表達(dá)率為68.57%，較癌旁組織和正常組織中的陽性表達(dá)率明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明Claudin-2在大腸癌組織中表達(dá)上調(diào)。近來研究顯示，Claudins在許多腫瘤中表達(dá)異常，Montgomery等7利用免疫組化發(fā)現(xiàn)Claudin-3、4、7在胃腺癌、食管癌及胃黏膜分化不良細(xì)胞、Barretts食管中表達(dá)較正常組織增高。Kominsky等8證實(shí)了Claudin-3、4在乳腺癌中均

10、呈高表達(dá)。然而，也有研究顯示Claudins在某些部位腫瘤組織中的表達(dá)是下調(diào)或不表達(dá)的。比如， Soini9通過免疫組化發(fā)現(xiàn)， Claudin-2在前列腺癌、乳腺癌中，Claudin-3在腎癌、膀胱癌中的表達(dá)均是下調(diào)的。Claudin-7在乳腺浸潤(rùn)癌中的表達(dá)缺失10。但claudins蛋白在惡性腫瘤組織中的表達(dá)無論高或低，最終總會(huì)引起緊密連接的正常結(jié)構(gòu)破壞，從而引起細(xì)胞間分子異常側(cè)向擴(kuò)散、細(xì)胞極性消失等一系列變化，導(dǎo)致更多的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和其他因子供腫瘤生長(zhǎng)。因此，Claudin-2在大腸癌組織中的高表達(dá)可能與大腸癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。在本次研究中，我們還分析了Claudin-2蛋白的表達(dá)與大腸癌各臨床

11、病理特征的關(guān)系，結(jié)果表明Claudin-2蛋白在不同Dukes分期、分化程度的大腸癌組織中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Dukes分期越晚、分化程度越低，Claudin-2的陽性表達(dá)率越高。表明隨著腫瘤的進(jìn)展Claudin-2在大腸癌組織的表達(dá)會(huì)增強(qiáng)。由此推測(cè)，Claudin-2在大腸癌組織中的高表達(dá)可能導(dǎo)致大腸黏膜相鄰腸上皮細(xì)胞間連接的完整性破壞，緊密連接完整性破壞可能是腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要步驟。綜上所述，Claudin-2在大腸癌組織中呈高表達(dá)，其表達(dá)異常可能與人大腸癌的發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，但確切的發(fā)病機(jī)制仍有待于進(jìn)一步研究?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1 Peto

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