潔凈室環(huán)境控制與檢測(cè)方法

1、潔凈室環(huán)境控制與檢測(cè)方法一、 目的對(duì)塵粒及微生物污染進(jìn)行控制并監(jiān)測(cè)，使被控制的房間或區(qū)域達(dá)到生產(chǎn)所需的潔凈度要求。 二、 相關(guān)術(shù)語(yǔ)1. 潔凈室（區(qū)）指對(duì)塵粒及微生物污染規(guī)定需進(jìn)行環(huán)境控制的房間或區(qū)域。其建筑結(jié)構(gòu)、裝備及其使用均具有減少對(duì)該區(qū)域內(nèi)污染源的介入、產(chǎn)生和滯留的功能。其他相關(guān)參數(shù)如：溫度、濕度、壓力也有必要控制。2. 潔凈室狀態(tài)（1）空態(tài)（as-built）潔凈室（區(qū)）在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)已安裝完畢且功能完備的情況下，但是沒有生產(chǎn)設(shè)備、原材料或人員的狀態(tài)。（2）靜態(tài) (at-rest）靜態(tài)a潔凈室（區(qū)）在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)已安裝完畢且功能完備的情況下，生產(chǎn)工藝設(shè)備已安裝、潔凈室（區(qū)）內(nèi)沒有

2、生產(chǎn)人員的狀態(tài)。靜態(tài)b潔凈室（區(qū)）在生產(chǎn)操作全部結(jié)束，生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場(chǎng)并經(jīng)過20 min自凈后。（3）動(dòng)態(tài)（operational）潔凈室（區(qū)）已處于正常生產(chǎn)狀態(tài)，設(shè)備在指定的方式下進(jìn)行，并且有指定的人員按照規(guī)范操作。3. 氣流形式 （1）單向流（unidirectional airflow）沿單一方向呈平行流線并且與氣流方向垂直的斷面上風(fēng)速均勻的氣流。與水平面垂直的叫垂直單向流（vertical unidirectional airflow ) ，與水平面平行的叫水平單向流（horizontal unidirectional airflow ）。（2）非單向流（non-unidirect

3、ional airflow）具有多個(gè)通路循環(huán)特性或氣流方向不平行的氣流。4. 潔凈工作臺(tái) （clean bench）一種工作臺(tái)或者與之類似的一個(gè)封閉圍擋工作區(qū)。其特點(diǎn)是自身能夠供給經(jīng)過過濾的空氣或氣體，按氣流形式分為垂直單向流工作臺(tái)、水平單向流工作臺(tái)等。5. 潔凈度 （cleanliness）潔凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中含大于或等于某一粒徑懸浮粒子的統(tǒng)計(jì)數(shù)量來區(qū)分的潔凈程度。6. 懸浮粒子（airborne particle）用于空氣潔凈度分級(jí)的空氣懸浮粒子尺寸范圍在0.1-1000 mm的固體和液體粒子。對(duì)于懸浮粒子計(jì)數(shù)測(cè)量?jī)x，一個(gè)微粒球的面積或體積產(chǎn)生一個(gè)響應(yīng)值，不同的響應(yīng)值等價(jià)于不同的微粒直

4、徑。7. 菌落（colony forming units）微生物培養(yǎng)后，由一個(gè)或幾個(gè)微生物繁殖而形成的微生物集落，簡(jiǎn)稱CFU。8. 浮游菌(airborne microbe)按照標(biāo)準(zhǔn)（GBT 16293-2010）提及的方法收集懸浮在空氣中的活微生物粒子，通過專門的培養(yǎng)基，在適宜的生長(zhǎng)條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。9. 浮游菌濃度（airborne microbe concentration）單位體積空氣中含浮游菌菌落數(shù)的多少，以計(jì)數(shù)濃度表示，單位是CFU/m3或CFU/L。10. 沉降菌（settling microbe）用標(biāo)準(zhǔn)（ GBT 16294-2010 ）提及的方法收集空氣中的活微生物粒

5、子，通過專門的培養(yǎng)基，在適宜的生長(zhǎng)條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。11. 沉降菌菌落數(shù)（settling microbe plate count）規(guī)定時(shí)間內(nèi)每個(gè)平板培養(yǎng)皿收集到空氣中沉降菌的數(shù)目，以CFU/皿表示。三、 潔凈室環(huán)境監(jiān)測(cè)指標(biāo)溫度、濕度、風(fēng)速、靜壓差（預(yù)測(cè)試指標(biāo)）懸浮粒子、沉降菌、浮游菌。四、 預(yù)測(cè)試指標(biāo)1. 溫度和相對(duì)濕度的測(cè)試潔凈室（區(qū)）的溫度和濕度應(yīng)與其生產(chǎn)及工藝要求相適應(yīng)（無特殊要求時(shí)，溫度在18-26，相對(duì)濕度在45-65%為宜）。2. 靜壓差的測(cè)試潔凈室與非潔凈室之間的靜壓差應(yīng)大于10 Pa；相鄰不同潔凈級(jí)別的潔凈室之間的壓差應(yīng)大于5 Pa；潔凈區(qū)與室外壓差應(yīng)大于12 Pa。

6、 3. 風(fēng)量、風(fēng)速的測(cè)試 （1）非單向流潔凈室系統(tǒng)的各項(xiàng)實(shí)測(cè)風(fēng)量及換氣次數(shù)應(yīng)大于各自的設(shè)計(jì)風(fēng)量或換氣次數(shù)，但不應(yīng)超過20%；室內(nèi)各風(fēng)口的風(fēng)量與各風(fēng)口設(shè)計(jì)風(fēng)量之差均不應(yīng)超過設(shè)計(jì)風(fēng)量的±15%。 （2）單向流凈室實(shí)測(cè)室內(nèi)平均風(fēng)速應(yīng)大于設(shè)計(jì)風(fēng)速，但不應(yīng)超過15%。 五、 懸浮粒子測(cè)試方法在空態(tài)或靜態(tài)測(cè)試時(shí)，懸浮粒子采樣點(diǎn)數(shù)目及其布置應(yīng)力求均勻，并不得少于最少采樣點(diǎn)數(shù)目；在動(dòng)態(tài)測(cè)試時(shí)，懸浮粒子采樣點(diǎn)數(shù)目及其布置應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的生產(chǎn)及工藝關(guān)鍵操作區(qū)設(shè)置。1. 儀器光散射粒子計(jì)數(shù)器（用于粒徑大于或等于0.5um的懸浮粒子計(jì)數(shù)）、激光粒子計(jì)數(shù)器（用于粒徑大于或等于0.1um的懸浮粒子計(jì)數(shù)）。2. 最少

7、采樣點(diǎn)數(shù)目的確定方法（1）最少采樣點(diǎn)數(shù)目公式 NL=A公式中：NL：最少采樣點(diǎn)數(shù) A：潔凈室或潔凈區(qū)的面積（單位為m2）。注：在水平單向?qū)恿鲿r(shí)，面積A可以看作是與氣流方向呈垂直流動(dòng)的空氣的截面積。 （2）最少采樣點(diǎn)數(shù)目表-最少采樣點(diǎn)數(shù)面積 m2潔凈度級(jí)別10010 000100 000300 000<102322210 <20422220 <40822240 <10016422100 <200401033200 <400802066400 <10001604013131000 <2000400100323220008002006363注：對(duì)于10

8、0級(jí)的單向流潔凈室（區(qū)），包括100級(jí)潔凈工作臺(tái)，面積指的是送風(fēng)口表面積；對(duì)于10 000級(jí)以上的非單向流潔凈室（區(qū)），面積指的是房間面積。3. 采樣點(diǎn)位置（1）采樣點(diǎn)一般在離地面0.8 m高度的水平面上均勻布置。（2）采樣點(diǎn)多于5點(diǎn)時(shí)，也可以在離地面0.8-1.5 m高度的區(qū)域內(nèi)分層布置，但每層不少于5點(diǎn)。采樣點(diǎn)位置示意圖 4. 采樣次數(shù)的限定對(duì)任何小潔凈室（區(qū)）或局部空氣凈化區(qū)域，采樣點(diǎn)數(shù)目不得少于2個(gè)，總采樣點(diǎn)次數(shù)不得少于5次。每個(gè)采樣點(diǎn)的采樣次數(shù)可以多于1次，且不同采樣點(diǎn)的采樣次數(shù)可以不同。5. 采樣量表-最小采樣量最小采樣量L/次潔凈度級(jí)別10010 000100 000300 00

9、0 0.5 mm5.662.832.832.83 5 mm8.58.58.58.56. 采樣注意事項(xiàng)（1）對(duì)于單向流潔凈室（區(qū)），粒子計(jì)數(shù)器的采樣管口應(yīng)正對(duì)氣流方向；對(duì)于非單向流潔凈室（區(qū)），粒子計(jì)數(shù)器的采樣管口宜向上。（2）布置采樣點(diǎn)時(shí)，應(yīng)盡量避開回風(fēng)口。（3）采樣時(shí)，測(cè)試人員應(yīng)在采樣口的下風(fēng)側(cè)，并盡量少活動(dòng)。（4）采樣完畢后，宜對(duì)粒子計(jì)數(shù)器進(jìn)行自凈。（5）應(yīng)采取一切措施防止采樣過程的污染。7. 測(cè)試狀態(tài)（1）空態(tài)、靜態(tài)和動(dòng)態(tài)三種狀態(tài)均可進(jìn)行測(cè)試。（2）空態(tài)或靜態(tài)時(shí)，室內(nèi)測(cè)試人員不得多于2人。8. 測(cè)試時(shí)間（1）在空態(tài)或靜態(tài)a測(cè)試時(shí)，對(duì)單向流潔凈室（區(qū)）而言，測(cè)試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運(yùn)行

10、時(shí)間不少于10 min后開始。對(duì)非單向流潔凈室，測(cè)試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運(yùn)行時(shí)間不少于30 min后開始。在靜態(tài)b測(cè)試時(shí)，對(duì)單向流潔凈室（區(qū)），測(cè)試宜在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場(chǎng)并經(jīng)過10 min自凈后開始；對(duì)非單向流潔凈室（區(qū)），測(cè)試宜在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場(chǎng)并經(jīng)過20 min自凈后開始。（2）在動(dòng)態(tài)測(cè)試時(shí)，則須記錄生產(chǎn)開始的時(shí)間以及測(cè)試時(shí)間。9. 采樣按照粒子計(jì)數(shù)器的操作規(guī)程，選擇合適的粒徑、采樣量、采樣時(shí)間及每個(gè)采樣點(diǎn)的采樣次數(shù)進(jìn)行采樣。10. 結(jié)果計(jì)算（1）計(jì)算每個(gè)采樣點(diǎn)的平均懸浮粒子濃度（粒/m3）。（2）計(jì)算潔凈室的平均粒子濃度（粒/m3）。（3）計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差SE。（4）95%置信上限（

11、UCL）：UCL = M + t*SE。表-95%置信上限的t分布系數(shù)采樣點(diǎn)數(shù)23456789>9t6.312.922.352.132.021.941.901.86-注：當(dāng)采樣點(diǎn)數(shù)多于9點(diǎn)時(shí)，不需要計(jì)算UCL。11. 結(jié)果評(píng)定判斷懸浮粒子的潔凈度級(jí)別應(yīng)同時(shí)滿足以下兩個(gè)條件：（1）每個(gè)采樣點(diǎn)的平均懸浮粒子濃度必須不大于規(guī)定的級(jí)別界限。（2）全部采樣點(diǎn)才懸浮粒子濃度平均值均值的95%置信上限必須不大于規(guī)定的級(jí)別界限。表-我國(guó)潔凈室（間）對(duì)懸浮粒子的技術(shù)要求（五個(gè)潔凈度等級(jí)）藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（1998年修訂）無菌醫(yī)療器具生產(chǎn)管理規(guī)范 YY 0033-2000潔凈度級(jí)別靜態(tài)測(cè)試最大允許數(shù)（個(gè)

12、/m3）潔凈度級(jí)別靜態(tài)測(cè)試最大允許數(shù)（個(gè)/m3）0.5 mm5mm0.5 mm5 mm1003 50001003 50001000-1000-10 000350 0002 00010 000350 0002 000100 0003 500 00020 000100 0003 500 00020 000300 00010 500 00060 000300 00010 500 00060 000表-ISO標(biāo)準(zhǔn)中潔凈室及潔凈區(qū)對(duì)懸浮粒子的技術(shù)要求ISO等級(jí)序（N）大于或等于表中被考慮的粒徑的最大濃度限值（pc/m3 空氣）0.1 mm0.2 mm0.3 mm0.5 mm1 mm5 mmISO Cla

13、ss 1102ISO Class 210024104ISO Class 31 000237102358ISO Class 410 0002 3701 02035283ISO Class 5100 00023 70010 2003 52083229ISO Class 61 000 000237 000102 00035 2008 320293ISO Class 7352 00083 2002 930ISO Class 83 520 000832 00029 300ISO Class 935 200 0008 320 000293 00012. 示例房間面積為80 m2 （8 m*10 m）l 最

14、少采樣點(diǎn)數(shù)目：9l 采樣點(diǎn)布置：代表采樣點(diǎn)位置，旁邊的數(shù)字代表采樣編號(hào)l 選擇0.5 mm粒徑的粒子l 采樣量為2.83 Ll 采樣時(shí)間設(shè)為1 minl 每個(gè)采樣點(diǎn)采樣次數(shù)為2次l 在粒子計(jì)數(shù)器上設(shè)置參數(shù)，開始采樣六、 浮游菌測(cè)試方法1. 儀器和試劑浮游菌采樣儀、培養(yǎng)皿、大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）、沙氏培養(yǎng)基（SDA）、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器。2. 最少采樣點(diǎn)數(shù)目參照懸浮粒子測(cè)試方法。3. 采樣點(diǎn)的位置參照懸浮粒子測(cè)試方法。4. 采樣次數(shù)每個(gè)采樣點(diǎn)一般采樣一次。5. 采樣量不同潔凈度級(jí)別的最小采樣量見表。表-最小采樣量潔凈度級(jí)別采樣量 L/次100100010 000500100 00

15、0100300 0001006. 采樣注意事項(xiàng)（1）對(duì)于單向流潔凈室（區(qū)）或送風(fēng)口，采樣器采樣口朝向應(yīng)正對(duì)氣流方向；對(duì)于非單向流潔凈室（區(qū)），采樣口向上。（2）布置采樣點(diǎn)時(shí)，應(yīng)盡量避開塵粒較集中的回風(fēng)口。（3）采樣時(shí)，測(cè)試人員應(yīng)在采樣口的下風(fēng)側(cè)，并盡量少活動(dòng)。（4）應(yīng)采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對(duì)樣本的污染。（5）培養(yǎng)皿在用于檢測(cè)時(shí)，為避免培養(yǎng)皿運(yùn)輸或搬運(yùn)過程造成的影響，宜同時(shí)進(jìn)行陰性對(duì)照試驗(yàn)，每次或每個(gè)區(qū)域取1個(gè)對(duì)照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿一起放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無菌落生長(zhǎng)。7. 測(cè)試狀態(tài)（參照懸浮粒子測(cè)試方法）8. 測(cè)試時(shí)間（參照懸浮粒子測(cè)試

16、方法）9. 采樣及培養(yǎng)按照浮游菌采樣器的操作規(guī)程進(jìn)行采樣。全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）配置的培養(yǎng)基經(jīng)采樣后，在30-35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于2 d；采用沙氏培養(yǎng)基（SDA）配置的培養(yǎng)基經(jīng)采樣后，在20-25培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于5 d。10. 結(jié)果觀察及計(jì)算用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)，并計(jì)算出每個(gè)測(cè)點(diǎn)的浮游菌平均濃度（CFU/m3或CFU/L ）。表-潔凈室（區(qū)）浮游菌技術(shù)要求潔凈度級(jí)別藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（1998修訂）CFU/m31005-10 000100100 000500七、 沉降菌測(cè)試方法1. 儀器和試劑培養(yǎng)皿、大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）、沙氏培養(yǎng)基（SDA）、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器。2. 最少采樣點(diǎn)數(shù)目（參照懸浮粒子測(cè)試方法）3. 采樣點(diǎn)的位置（參照懸浮粒子測(cè)試方法）4. 采樣次數(shù)（參照懸浮粒子測(cè)試方法）5. 最少培養(yǎng)皿數(shù)在滿足最少采樣點(diǎn)數(shù)目的同時(shí)，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)。表-最少培養(yǎng)皿數(shù)潔凈度級(jí)別最少培養(yǎng)皿數(shù)1001410 0002100 0002300 00026. 采樣注意事項(xiàng)（參照懸浮粒子測(cè)試方法）7. 測(cè)試狀態(tài)（參照懸浮粒子測(cè)試方法）8. 測(cè)試時(shí)間（參照懸浮粒子測(cè)試