藥物QT間期延長潛在作用非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則 (2014-05-13)

1、附件7藥物QT間期延長潛在作用非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則一、 概述心電圖（ECG）中QT間期（從QRS波群開始到T波結(jié)束）反映心室去極化和復(fù)極化所需的時(shí)間。當(dāng)心室復(fù)極化延遲和QT間期延長，尤其伴有其他風(fēng)險(xiǎn)因素（如低血鉀、結(jié)構(gòu)性心臟病、心動(dòng)過緩）時(shí)，患者發(fā)生室性快速心律失常的風(fēng)險(xiǎn)增加，包括尖端扭轉(zhuǎn)型室性心動(dòng)過速（torsade de pointes，TdP）。本指導(dǎo)原則主要是關(guān)于評價(jià)受試物延遲心室復(fù)極化潛在作用的非臨床研究策略，以及對非臨床研究信息的分析和綜合風(fēng)險(xiǎn)性評估。QT間期研究結(jié)果可以和其他信息一起，用來闡明藥物作用機(jī)制，以及對人體的延遲心室復(fù)極化和延長QT間期的風(fēng)險(xiǎn)評估。本指導(dǎo)原則適用于中藥

2、、天然藥物和化學(xué)藥物。二、基本原則（一）試驗(yàn)方法藥物安全藥理學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則中所述的關(guān)于研究設(shè)計(jì)的基本原則和推薦方法，也適用于本指導(dǎo)原則。建議采用體內(nèi)和體外的方法進(jìn)行研究。應(yīng)基于受試物的藥效學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)、安全性的特點(diǎn)對研究方法設(shè)計(jì)、風(fēng)險(xiǎn)性證據(jù)進(jìn)行個(gè)體化分析。（二）執(zhí)行GLP的要求體外試驗(yàn)建議執(zhí)行藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范（GLP）規(guī)范，體內(nèi)試驗(yàn)遵循GLP，追加研究（Follow-up studies）應(yīng)在最大可行限度內(nèi)遵循GLP。（三）受試物中藥、天然藥物：受試物應(yīng)采用能充分代表臨床試驗(yàn)擬用樣品和/或上市樣品質(zhì)量和安全性的樣品。應(yīng)采用工藝路線及關(guān)鍵工藝參數(shù)確定后的工藝制備，一般應(yīng)為中試或中

3、試以上規(guī)模的樣品，否則應(yīng)有充分的理由。應(yīng)注明受試物的名稱、來源、批號(hào)、含量（或規(guī)格）、保存條件、有效期及配制方法等，并提供質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告。由于中藥的特殊性，建議現(xiàn)用現(xiàn)配，否則應(yīng)提供數(shù)據(jù)支持配制后受試物的質(zhì)量穩(wěn)定性及均勻性。當(dāng)給藥時(shí)間較長時(shí)，應(yīng)考察配制后體積是否存在隨放置時(shí)間延長而膨脹造成終濃度不準(zhǔn)的因素。如果由于給藥容量或給藥方法限制，可采用原料藥進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)中所用溶媒和/或輔料應(yīng)標(biāo)明名稱、標(biāo)準(zhǔn)、批號(hào)、有效期、規(guī)格及生產(chǎn)單位?；瘜W(xué)藥物：受試物應(yīng)采用工藝相對穩(wěn)定、純度和雜質(zhì)含量能反映臨床試驗(yàn)擬用樣品和/或上市樣品質(zhì)量和安全性的樣品。受試物應(yīng)注明名稱、來源、批號(hào)、含量（或規(guī)格）、保存條件、有效期及

4、配制方法等，并提供質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告。試驗(yàn)中所用溶媒和/或輔料應(yīng)標(biāo)明名稱、標(biāo)準(zhǔn)、批號(hào)、有效期、規(guī)格和生產(chǎn)單位等，并符合試驗(yàn)要求。在藥物研發(fā)的過程中，若受試物的工藝發(fā)生可能影響其安全性的變化，應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的安全性研究?；瘜W(xué)藥物試驗(yàn)過程中應(yīng)進(jìn)行受試物樣品分析，并提供樣品分析報(bào)告。成分基本清楚的中藥、天然藥物也應(yīng)進(jìn)行受試物樣品分析。三、基本內(nèi)容（一）試驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本要求1.生物材料應(yīng)選擇合適的試驗(yàn)體系和動(dòng)物種屬。體外研究可采用離體心肌細(xì)胞、培養(yǎng)心肌細(xì)胞系或克隆的人離子通道的異種表達(dá)體系、離體心臟標(biāo)本。用于體外研究的組織和細(xì)胞標(biāo)本可來源于不同的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，包括兔、雪貂、豚鼠、犬、豬。當(dāng)采用原代組織或細(xì)胞時(shí)，應(yīng)考慮

5、所用標(biāo)本的特點(diǎn)及來源，因?yàn)殡x子通道的分布可因組織和細(xì)胞類型而不同。用于整體研究的動(dòng)物包括犬、猴、豬、兔、雪貂以及豚鼠。成年大鼠和小鼠復(fù)極化的離子機(jī)制不同于包括人在內(nèi)的大動(dòng)物種屬（在成年大鼠、小鼠，復(fù)極化的主要離子流是Ito），因此用這些種屬的組織或動(dòng)物是不合適的。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)符合國家對相應(yīng)等級(jí)動(dòng)物的質(zhì)量規(guī)定要求，并具有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證明。2.樣本量體外試驗(yàn)：體外樣本量每組不少于4個(gè)平行樣本，一般35個(gè)組。體內(nèi)試驗(yàn)：試驗(yàn)組的組數(shù)及每組動(dòng)物數(shù)的設(shè)定，應(yīng)以能夠科學(xué)合理地分析所獲得的試驗(yàn)結(jié)果，恰當(dāng)?shù)胤从秤猩飳W(xué)意義的作用，并符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求為原則。小動(dòng)物每組一般不少于10只，大動(dòng)物每組一般不少于6只，一

6、般雌雄各半。3.劑量體外研究中，受試物的濃度應(yīng)涵蓋和超過預(yù)期臨床最大治療血藥濃度。試驗(yàn)中逐步提高藥物濃度直到出現(xiàn)特征性的濃度-反應(yīng)曲線或達(dá)到因受試物理化特性所限的最高濃度。除了受到細(xì)胞或組織活性的限制外，理想狀態(tài)下應(yīng)有充分的藥物暴露時(shí)間以獲得穩(wěn)態(tài)電生理效應(yīng)，應(yīng)注明藥物暴露時(shí)間的長短。體外研究中應(yīng)使用合適的陽性對照藥，以確認(rèn)該體外試驗(yàn)系統(tǒng)的敏感性。體外研究應(yīng)確定受試物的濃度-效應(yīng)關(guān)系。當(dāng)體外研究無明顯作用時(shí)，應(yīng)對濃度選擇的范圍進(jìn)行說明。整體試驗(yàn)劑量范圍應(yīng)與藥物安全藥理學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則的原則一致。如果可能，劑量范圍應(yīng)包括和超過預(yù)期的人暴露水平。當(dāng)給藥劑量可能會(huì)因動(dòng)物的耐受性而受到限制時(shí)，如動(dòng)物出

7、現(xiàn)嘔吐、震顫、活動(dòng)過度等，可采用靜脈給藥或麻醉動(dòng)物進(jìn)行研究。當(dāng)研究用于評價(jià)延遲心室復(fù)極化程度與原藥及代謝產(chǎn)物濃度關(guān)系時(shí)，可采用持續(xù)靜脈滴注的方式控制藥物暴露水平。監(jiān)測受試物及其代謝產(chǎn)物的暴露量有助于解釋藥物的量效關(guān)系或劑量或濃度-反應(yīng)，也為設(shè)計(jì)可能追加的試驗(yàn)提供信息。4.對照體外離子通道和動(dòng)作電位時(shí)程試驗(yàn)中應(yīng)采用次最大有效濃度（即藥物對通道的抑制率達(dá)70%80%時(shí)的濃度）的陽性對照藥說明試驗(yàn)系統(tǒng)的反應(yīng)性，并且應(yīng)用于每項(xiàng)試驗(yàn)。整體試驗(yàn)研究中使用陽性對照藥則是為了驗(yàn)證試驗(yàn)系統(tǒng)的敏感性，但不必在每一項(xiàng)試驗(yàn)中都使用陽性對照藥。如受試物在化學(xué)結(jié)構(gòu)/藥理分類上屬于與延長人體QT間期或促心律失常有關(guān)的藥物時(shí)

8、，在體內(nèi)外研究中應(yīng)與現(xiàn)有同類藥物比作用強(qiáng)度。5.給藥途徑整體動(dòng)物試驗(yàn)，首先應(yīng)考慮與臨床擬用途徑一致，可以考慮充分暴露的給藥途徑。對于在動(dòng)物試驗(yàn)中難以實(shí)施的特殊的臨床給藥途徑，可根據(jù)受試物的特點(diǎn)選擇，并說明理由。6.觀察時(shí)間結(jié)合受試物的藥效學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)特性、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、臨床試驗(yàn)方案等因素選擇觀察時(shí)間點(diǎn)和持續(xù)時(shí)間。（二） 主要研究內(nèi)容1.主要研究1.1采用離體動(dòng)物或人心肌細(xì)胞、培養(yǎng)心肌細(xì)胞系或克隆的人離子通道的異種表達(dá)體系測定離子流。1.2測定清醒或麻醉動(dòng)物的ECG參數(shù)。1.3在離體心臟標(biāo)本進(jìn)行動(dòng)作電位參數(shù)測定，或在麻醉動(dòng)物中進(jìn)行能體現(xiàn)動(dòng)作電位時(shí)程的特異性電生理參數(shù)檢測。1.4在離體心臟標(biāo)本或動(dòng)物

9、進(jìn)行致心律失常作用測定。可先進(jìn)行1.1、1.2研究，再進(jìn)行1.3、1.4研究。綜上所述，可采用體內(nèi)外方法從4個(gè)不同方面對受試物的QT間期作用進(jìn)行研究，并且相互之間有互補(bǔ)作用。2.追加研究當(dāng)非臨床研究的結(jié)果不一致，和/或臨床研究結(jié)果與非臨床研究結(jié)果不一致時(shí)，可通過回顧性評價(jià)和追加研究進(jìn)行分析。此種情況下，追加的研究結(jié)果可能成為綜合風(fēng)險(xiǎn)評估的重要組成部分。追加的研究是為了更深入地了解或提供更多的關(guān)于受試物潛在的延遲人心室復(fù)極化和延長QT間期的作用。這些研究可以提供更多有關(guān)作用強(qiáng)度、作用機(jī)制、劑量反應(yīng)曲線的斜率或最大反應(yīng)幅度的信息。追加的研究可以針對某一特殊問題設(shè)計(jì)試驗(yàn)，因此各種體外或體內(nèi)的研究設(shè)計(jì)

10、都可應(yīng)用。在選擇和設(shè)計(jì)追加研究中，以下內(nèi)容需與已有的非臨床和臨床信息一并考慮：·用離體心臟測量記錄動(dòng)作電位以評價(jià)心室肌復(fù)極化；·在麻醉動(dòng)物用一些能反映動(dòng)作電位時(shí)程的特殊電生理參數(shù)；·動(dòng)物的種類和性別的選擇；·用代謝誘導(dǎo)劑或抑制劑；·用目前已知陽性對照物或參比物；·未研究的對其他通道的抑制作用；·多時(shí)間點(diǎn)測定電生理參數(shù)；·在清醒動(dòng)物難以解釋的作用，如受試物對心率、自主神經(jīng)緊張的影響，或受試物的毒性，如震顫、抽搐或嘔吐；·如藥物有蓄積、臨床長期使用，需考慮多次給藥的觀察。四、結(jié)果分析與評價(jià)綜合風(fēng)險(xiǎn)評估應(yīng)該是基

11、于科學(xué)的、對受試物個(gè)性化的考慮。這種綜合風(fēng)險(xiǎn)性評估有益于臨床研究設(shè)計(jì)和其結(jié)果的分析。應(yīng)結(jié)合藥效學(xué)、毒理學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)以及其他研究資料進(jìn)行綜合評價(jià)，為藥物應(yīng)用于人體的安全性提出建議。風(fēng)險(xiǎn)評估應(yīng)考慮受試物是否在化學(xué)結(jié)構(gòu)或藥理分類上屬于可延長人QT間期作用的藥物，如某些抗精神病類藥物、組胺H1受體拮抗劑、氟喹諾酮類等。這可能會(huì)影響參比物的選擇并會(huì)納入綜合風(fēng)險(xiǎn)評估中。對QT間期影響的非臨床研究策略如下圖整體QT分析化學(xué)/藥理分類整體QT分析體外IKr及多種離體外IKr及多種離子通道等研究追加研究綜合風(fēng)險(xiǎn)性評估相關(guān)非臨床/臨床研究信息風(fēng)險(xiǎn)評估五、參考文獻(xiàn)1.ICH, ICH Guidance for I

12、ndustry ICH S7A：Safety Pharmacology Studies for Human Pharmaceuticals, 2001. 2.ICH, ICH Guidance for Industry ICH S7B：Safety Pharmacology Studies for assessing the potential for delayed ventricular repolarization （QT interval prolongation）by Human Pharmaceuticals, 2005. 3.Liu T, Brown BS, Wu Y, Antz

13、elevitch C, Kowey PR, Yan GX.Blinded validation of the isolated arterially perfused rabbit ventricular wedge in preclinical assessment of drug-induced proarrhythmias, Heart Rhythm 2006; 3: 948-956. 六、附錄試驗(yàn)方法（一）體外試驗(yàn)評價(jià)藥物對離子電流的影響，主要包括IKr和其他幾種參與心肌電活動(dòng)的重要離子通道。體外IKr試驗(yàn)是采用原代心肌細(xì)胞或表達(dá)IKr通道蛋白（如由hERG編碼的蛋白）的細(xì)胞系評價(jià)藥物

14、對離子電流的影響。相關(guān)研究方法見參考文獻(xiàn)。檢測中獲得IC50的基本參數(shù)項(xiàng)目列于表2。表1 致心律失常作用試驗(yàn)檢測的心肌離子通道通道種類陽性對照（參考）參考文獻(xiàn)Cav1.2 (L-type)尼非地平(Nifedipine)Shen J et al Comparison of L-type calcium channel blockade by nifedipine and/or cadmium in guinea pig ventricular myocytes JPET, 2000；294:56270 Zahradnk I, Minarovic, I and Zahradnkova A Inh

15、ibition of the cardiac L-typec calcium channel currentby antidepressant drugs JPET,2008；324:97784 hERG西沙必利(Cisapride)或特非那定(Terfenadine)Helliwell R, Recording hERG potassium currents and assessing the effects of compounds using the whole-cell patch-clamp technique Jonathan D Lippiat (ed ), Methods in

16、 Molecular Biology, Potassium Channels, 2008；491: 27995 Kamiya K et al Molecular determinants of hERG channel block by terfenadine and cisapride J Pharmacol Sci,2008；108:301-7 Gintant GA et al Utility of hERG assays as surrogate markers of delayed cardiac repolarization and QT safety ToxicolPathol,

17、2006；34:81-90 Kv1.54-氨基吡啶(4-Aminopyridine，4-AP)De Biasi M et al Open channel block of human heart hKv1 5 by the beta-subunit hKv beta 1 2 Am J Physiol 1997 272: H2932-41 Lagrutta A et al Novel, potent inhibitors of human Kv1 5 K+ channels and ultrarapidly activating delayed rectifier potassium curre

18、nt JPET,2006;317:1054-63 Kv4.3氟卡尼(又名哌氟酰胺，F(xiàn)lecainide)或4-APRadicke S et al Effects of MiRP1 and DPP6 -subunits on the blockade induced by flecainide of KV4 3/KchIP2 channels Br J Pharmacol 2008, 154: 77486 Fischer F et al Inhibition of cardiac Kv1 5 and Kv4 3 potassium channels by the class Ia anti-ar

19、rhythmic ajmaline: mode of action Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol, 2013, online, Jul KvLQT1/minK二乙酰醇293B (Chromanol-293B)Yang WP et al KvLQT1, a voltage-gated potassium channel responsible forhuman cardiac arrhythmias PNAS, 1997; 94:4017- 4021 Seebohm G et al Molecular determinants of KCNQ1 chan

20、nel block by a benzodiazepine Mol Pharmacol, 2003, 64:70-7 Nav1.5利多卡因(Lidocaine)Wu L et al Role of late sodium current in modulating the proarrhythmic and antiarrhythmic effects of quinidine Heart Rhythm, 2008；5: 1726-34 McNulty, MM andHanck ,DA State-dependent mibefradil block of Na+ channels Mol P

21、harmacol, 2004； 66:1652-61 Kir2.1鋇(Barium)或氯喹(Chloroquine)Rodriguez-Menchaca AA et al , The molecular basis of chloroquine block of the inward rectifier Kir2 1 channel PNAS, 2008；105:1364-8 Schram G et al Barium block of Kir2 and human cardiac inward rectifier currents:evidence for subunit-heteromer

22、ic contribution to native currents Cardiovasc Res, 2003, 59: 328-38 觀察記錄上述所有離子通道的相關(guān)試驗(yàn)建議在GLP實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行表2 檢測阻斷離子通道IC50所需的參數(shù)項(xiàng)目參數(shù)項(xiàng)目IC50試驗(yàn)平臺(tái)手動(dòng)膜片鉗記錄系統(tǒng)所需濃度4種每一濃度下重復(fù)試驗(yàn)例數(shù)n=3陽性對照n=2溶媒對照1個(gè)濃度，n=3檢測溫度室溫 (RT)或生理性溫度 (PT)濃度范圍通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定試驗(yàn)方案和報(bào)告GLP格式累積曲線+分析樣品收集+PDF格式的電子文檔+（二）整體研究整體QT研究主要是測定心室復(fù)極參數(shù)，如QT間期。該試驗(yàn)可在安全藥理學(xué)研究中同時(shí)進(jìn)行，這樣可減少

23、動(dòng)物和其他資源的使用。QT間期和心率是相反的、非線性的關(guān)系，且二者之間的關(guān)系在不同的種屬和動(dòng)物甚至同一種屬之間都不相同。因此心率改變會(huì)影響QT間期，這會(huì)干擾對受試物影響心室復(fù)極化和QT間期的評價(jià)。故在QT間期分析時(shí)，應(yīng)采用心率校正QT間期（QTc）來進(jìn)行，常用的有Bazett和Fridericia法；心率校正公式的選擇須根據(jù)試驗(yàn)系統(tǒng)得來的數(shù)據(jù)加以判斷，如果給藥組和對照組心率差異較大，可能校正公式對于評價(jià)QT間期延長風(fēng)險(xiǎn)是無效的，此時(shí)可改用心臟起搏器來獲得固定的心率。對QT/RR（心電圖中R波與R波的距離）關(guān)系進(jìn)行分析可能更合適，包括用公式對個(gè)體動(dòng)物QT間期數(shù)據(jù)進(jìn)行校正。在犬或猴等大動(dòng)物記錄EC

24、G，是安全性評價(jià)的基本組成。藥物引起QT間期顯著延長將使致命性心律失常TdP發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加，因而ECG的QT間期被作為預(yù)測新化合物引起TdP的重要風(fēng)險(xiǎn)因素。鑒于犬、猴和小型豬等大動(dòng)物在心肌離子通道構(gòu)成和功能方面與人類具有高度相似性，通常用于整體QT分析研究中。整體QT分析試驗(yàn)可在麻醉和清醒動(dòng)物進(jìn)行，具體方法參見表3所列文獻(xiàn)。表3 整體QT研究試驗(yàn)常用動(dòng)物動(dòng)物參考文獻(xiàn)試驗(yàn)參數(shù)麻醉動(dòng)物犬Ollerstam, A et al Comparison of the QT interval response during sinus andpaced rhythm in conscious and a

25、nesthetized beagle dogs J PharmacolToxicol Methods, 2007;56: 131-44 Chiba K, et al In vivo experimental approach for the risk assessment of fluoroquinolone antibacterial agents-induced long QT syndrome Eur J Pharmacol, 2004;486:189-200 ECG相關(guān)參數(shù), 包括（形態(tài)、心率、節(jié)律、P波電壓、R波電壓、T波電壓、PR間期、RR間期、 QRS時(shí)間、QT間期、QTc間期）

26、猴Ishizaka T et al Evaluation of drug-induced QT prolongation in a halothane-anesthetized monkey model: effects of sotalol J PharmacolToxicol Methods, 2009;59:86-93 豬Authier S et al Cardiovascular and respiratory safety pharmacology in Göttingenminipigs: Pharmacological characterization Jpharmac

27、olToxicol Methods, 2011;64:53-9 遙測動(dòng)物犬Batey AJ, Doe PA A method for QT correction based on beat-to-beat analysis of the QT/RR interval relationship in conscious telemetred beagle dogs J PharmacolToxicol Methods,2002;48: 11-9 Fossa AA Assessing QT prolongation in conscious dogs: validation of a beat-t

28、o-beat method PharmacolTher, 2008;118:231-8 猴Ando K et al QT PRODACT: In vivo QT assay with a consciousmonkey for assessment of the potential for drug-induced Qtinterval prolongation J Pharmacol Sci,2005;99: 487-500 Haushalter TM et al The cardiovascular and pharmacokineticprofile of dofetilide in c

29、onscious telemetered beagle dogs andcynomolgus monkeys Br J Pharmacology,2008;154: 1457-64 豬Stubhan et al Evaluation of cardiovascular and ECG parameters in the normal, freely moving GöttingenMinipig J Pharmacol Toxicological Methods,2008, 57: 20211 KanoM et al QT PRODACT: Usabilityof miniature

30、 pigs in safety pharmacology studies: Assessment for drug-inducedQT interval prolongation J Pharmacol Sci,2005, 99:50111 麻醉動(dòng)物犬Takahara A et al Effects of mexiletine on the canine model of sparfloxacin-induced long QT syndrome Eur J Pharmacol,2003,476:115-22 Chiba K et al Proarrhythmic effects of flu

31、oroquinolone antibacterial agents: in vivo effects as physiologic substrate for Torsades ToxicolApplPharmacol, 2000, 169:8-16 Kimura K et al Hemodynamic and electrophysiological effects of mitemcinal (GM-611), a novel prokinetic agent derived from erythromycin in a halothane-anesthetized canine mode

32、l J ToxicolSci, 2007,32:231-9 血流動(dòng)力學(xué)檢測，包括MAP、SBP、 DBP、HR、 ECG、單相動(dòng)作電位(MAP)等注：Göttingen minipigs:哥根廷小型豬。上述整體QT研究相關(guān)試驗(yàn)建議在GLP實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行（三）追加的研究藥物對心肌動(dòng)作電位（Action potential，AP）的影響：心臟的正常功能依賴于心肌細(xì)胞動(dòng)作電位的產(chǎn)生和傳導(dǎo)。藥物引起細(xì)胞膜離子通道表達(dá)或功能異常是其導(dǎo)致心律失常的重要病理生理基礎(chǔ)。因此，在離體心臟標(biāo)本進(jìn)行動(dòng)作電位參數(shù)測定，是ICH 推薦的QT間期延長藥物安全性評價(jià)體系中的重要組成之一。常用于動(dòng)作電位參數(shù)測定的動(dòng)物離

33、體心臟標(biāo)本及試驗(yàn)方法見表4，試驗(yàn)中重要的參數(shù)項(xiàng)目見表5。表4 記錄心肌AP的離體心肌標(biāo)本動(dòng)物標(biāo)本參考文獻(xiàn)犬蒲肯野纖維Terrar, DA et al Comparison of guinea-pig ventricular myocytes and dog Purkinje fibres for in vitro assessment of drug-induced delayed repolarization J Pharmacol Toxicol Methods, 2007; 56: 171-85 Lightbown ID et al Towards automation of a val

34、uable preclinical cardiac safety pharmacology assay: Evaluation of the effects of cardiac ion channel blockers on cardiac repolarisation in vitro J Pharmacol Toxicol Methods, 2007;56:194-202 Limberis JT et al The effects of plasma proteins on delayed repolarization in vitro with cisapride, risperido

35、ne, and D, L-sotalol J Pharmacol Toxicol Methods, 2007; 56:11-7 兔蒲肯野纖維Himmel HM Suitability of commonly used excipients for electrophysiological in-vitrosafety pharmacology assessment of effects on hERG potassiumcurrent and on rabbit Purkinje fiber action potential J Pharmacol Toxicol Methods, 2007;

36、 56: 145-58 Ducroq J et al Action potential experiments complete hERG assay and QT-interval measurements in cardiac preclinical studies J Pharmacol Toxicol Methods, 2007; 159-70 豚鼠心室肌細(xì)胞Hagiwara T et al A comparative study of the fluoroquinolone antibacterial agents on the action potential duration i

37、n guinea pig ventricular myocardia Jpn J Pharmacol, 2001; 87: 23134Shuba LM et al Action potentials, contraction, and membrane currents in guinea pig ventricular preparations treated with the antispasmodic agent terodiline JPET, 1999; 290:1417-26 豚鼠心室乳頭肌Hayashi S et al QT PRODACT: a multi-site study

38、 of in vitro action potential assays on 21 compounds in isolated guinea-pig papillary muscles J PharmacolSci,2005; 99:423-37 Langendorff離體心臟Milberg P et al Proarrhythmia as a class effect of quinolones: increased dispersion of repolarization and triangulation of action potential predict torsades de

39、pointes J Cardiovasc Electrophysiol, 2007; 18:647-54 Clements-Jewery H et al Actions of flecainide on susceptibility to phase-2 ventricular arrhythmias during infarct evolution in rat isolated perfused hearts British J Pharmacol, 2006; 147: 46875 ChengHC and Incardona J Models of torsades de pointes

40、: effects of FPL64176, DPI201106, dofetilide, and chromanol 293B in isolated rabbit and guinea pig hearts J Pharmacol Toxicol Methods, 2009; 60: 174-84 冠狀動(dòng)脈灌注兔左心室肌楔形標(biāo)本ChenX et al Use of arterially perfused rabbit ventricular wedge inpredicting arrhythmogenic potentials of drugs J Pharmacol Toxicol M

41、ethods, 2006;54: 261-72 Liu T, Brown BS, Wu Y, Antzelevitch C, Kowey PR, Yan GX.Blinded validation of the isolated arterially perfused rabbit ventricular wedge in preclinical assessment of drug-induced proarrhythmias Heart Rhythm 2006; 3: 948-956 上述研究相關(guān)試驗(yàn)建議最大可能執(zhí)行GLP表5 心肌動(dòng)作電位試驗(yàn)中的重要參數(shù)項(xiàng)目三濃度檢測參數(shù)項(xiàng)目測試測試濃度

42、數(shù)3檢測每一個(gè)受試物所需的蒲肯野纖維數(shù)或心肌細(xì)胞數(shù)4用于對照品的蒲肯野纖維數(shù)或心肌細(xì)胞數(shù)4累積曲線+在生理溫度 (37º±1º C) 下進(jìn)行試驗(yàn)+統(tǒng)計(jì)學(xué)分析+如果系GLP實(shí)驗(yàn)室，收集樣本的分析+報(bào)告+如果是GLP實(shí)驗(yàn)室，要求有質(zhì)量保證部門(Quality Assurence Unit, QAU)的檢查，包括同步、數(shù)據(jù)和報(bào)告的檢查+可參考的文獻(xiàn)1. De Clerck F et al, In vivo measurement of QT prolongation, dispersion and arrhythmogenesis: application to the preclinical cardiovascular safety pharmacology of a new chemical entity, FundamClinPharmacol, 2002;16:125-40. 2. Sanguinetti