中藥提取方法-精華版

1、v1.0可編輯可修改A.中草藥有效成分的提取：一溶劑提取法：1 .溶劑提取法的原理：溶劑提取法是根據(jù)中草藥中各種成分在 溶劑中的溶解性質(zhì),選用對(duì)活性成分溶解度大,對(duì)不需要溶出成分溶 解度小的溶劑,而將有效成分從藥材組織內(nèi)溶解出來(lái)的方法. 當(dāng)溶劑 加到中草藥原料需適當(dāng)粉碎中時(shí),溶劑由于擴(kuò)散、滲透作用逐漸 通過(guò)細(xì)胞壁透入到細(xì)胞內(nèi),溶解了可溶性物質(zhì),而造成細(xì)胞內(nèi)外的濃 度差,于是細(xì)胞內(nèi)的濃溶液不斷向外擴(kuò)散, 溶劑又不斷進(jìn)入藥材組織 細(xì)胞中,如此屢次往返,直至細(xì)胞內(nèi)外溶液濃度到達(dá)動(dòng)態(tài)平衡時(shí),將 此飽和溶液濾出,繼續(xù)屢次參加新溶劑,就可以把所需要的成分近于 完全溶出或大部溶出.中草藥成分在溶劑中的溶解度

2、直接與溶劑性質(zhì)有關(guān). 溶劑可分為 水、親本性有機(jī)溶劑及親脂性有機(jī)溶劑,被溶解物質(zhì)也有親水性及親 脂性的不同.有機(jī)化合物分子結(jié)構(gòu)中親水性基團(tuán)多, 其極性大而疏于油；有的 親水性基團(tuán)少,其.極性小而疏于水.這種親水性、親脂性及其程度 的大小,是和化合物的分子結(jié)構(gòu)直接相關(guān).一般來(lái)說(shuō),兩種根本母核 相同的成分,其分子中功能基的極性越大,或極性功能基數(shù)量越多,v1.0可編輯可修改那么整個(gè)分子的極性大,親水性強(qiáng),而親脂性就越弱,其分子非極性部 分越大,或碳鍵越長(zhǎng),那么極性小,親脂性強(qiáng),而親水性就越弱.各類溶劑的性質(zhì),同樣也與其分子結(jié)構(gòu)有關(guān).例如甲醇、乙醇是 親水性比擬強(qiáng)的溶劑,它們的分子比擬小,有羥基存在

3、,與水的結(jié)構(gòu) 很近似,所以能夠和水任意混合.丁醇和戊醇分子中雖都有羥基,保 持和水有相似處,但分子逐漸地加大,與水性質(zhì)也就逐漸疏遠(yuǎn).所以 它們能彼此局部互溶,在它們互溶到達(dá)飽和狀態(tài)之后,丁醇或戊醇都 能與水分層.氯仿、苯和石油醍是炫類或氯炫衍生物,分子中沒有氧, 屬于親脂性強(qiáng)的溶劑.這樣,我們就可以通過(guò)時(shí)中草藥成分結(jié)構(gòu)分析, 去估計(jì)它們的此 類性質(zhì)和選用的溶劑.例如葡萄糖、蔗糖等分子比擬小的多羥基化合 物,具有強(qiáng)親水性,極易溶于水,就是在親水性比擬強(qiáng)的乙醇中也難 于溶解.淀粉雖然羥基數(shù)目多,但分子大大,所以難溶解于水.蛋白 質(zhì)和氨基酸都是酸堿兩性化合物,有一定程度的極性,所以能溶于水, 不溶于

4、或難溶子有機(jī)溶劑.苴類都比其苴元的親水性強(qiáng),特別是皂苴 由于它們的分子中往往結(jié)合有多數(shù)糖分子, 羥基數(shù)目多,能表現(xiàn)出較 強(qiáng)的親水性,而皂苴元那么屬于親脂性強(qiáng)的化合物. 多數(shù)游離的生物堿 是親脂性化合物,與酸結(jié)合成鹽后,能夠離子化,增強(qiáng)了極性,就變 為親水的注質(zhì),這些生物堿可稱為半極性化合物.所以,生物堿的鹽 類易溶于水,不溶或難溶于有機(jī)溶劑；而多數(shù)游離的生物堿不溶或難v1.0可編輯可修改溶于水,易溶于親脂性溶劑,一般以在氯仿中溶解度最大.鞍質(zhì)是多 羥基的化臺(tái)物,為親水性的物質(zhì).油脂、揮發(fā)油、蠟、脂溶性色素都 是強(qiáng)親脂性的成分.總的說(shuō)來(lái),只要中草藥成分的親水性和親脂性與溶劑的此項(xiàng)性質(zhì) 相當(dāng),就會(huì)

5、在其中有較大的溶解度,即所謂“相似相溶的規(guī)律.這 是選擇適當(dāng)溶劑自中草藥中提取所需要成分的依據(jù)之一.2 .溶劑的選擇：運(yùn)用溶劑提取法的關(guān)鍵,是選擇適當(dāng)?shù)娜軇? 溶劑選擇適當(dāng),就可以比擬順利地將需要的成分提取出來(lái). 選擇溶劑 要注意以下三點(diǎn)：溶劑對(duì)有效成分溶解度大,對(duì)雜質(zhì)溶解度??； 溶劑不能與中藥的成分起化學(xué)變化；溶劑要經(jīng)濟(jì)、易得、使用平安 等.常見的提取溶劑可分為以下三類：1水：水是一種強(qiáng)的極性溶劑.中草藥中親水性的成分,如無(wú) 機(jī)鹽、糖類、分子不太大的多糖類、鞍質(zhì)、氨基酸、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸 鹽、生物堿鹽及苴類等都能被水溶出.為了增加某些成分的溶解度, 也常采用酸水及堿水作為提取溶劑. 酸水提取,

6、可使生物堿與酸生成 鹽類而溶出,堿水提取可使有機(jī)酸、黃酮、意釀、內(nèi)酯、香豆素以及 酚類成分溶出.但用水提取易酶解苴類成分,且易霉壞變質(zhì).某些含v1.0可編輯可修改果膠、粘液質(zhì)類成分的中草藥,其水提取液常常很難過(guò)濾.沸水提取 時(shí),中草藥中的淀粉可被糊化,而增加過(guò)濾的困難.故含淀粉量多的 中草藥,不宜磨成細(xì)粉后加水煎煮.中藥傳統(tǒng)用的湯劑,多用中藥飲 片直火煎煮,加溫可以增大中藥成分的溶解度外, 還可能有與其他成 分產(chǎn)生“助溶現(xiàn)象,增加了一些水中溶解度小的、親脂性強(qiáng)的成分 的溶解度.但多數(shù)親脂性成分在沸水中的溶解度是不大的, 既使有助 溶現(xiàn)象存在,也不容易提取完全.如果應(yīng)用大量水煎煮,就會(huì)增加蒸 發(fā)

7、濃縮時(shí)的困難,且會(huì)溶出大量雜質(zhì),給進(jìn)一步別離提純帶來(lái)麻煩.中草藥水提取液中含有皂苴及粘液質(zhì)類成分,在減壓濃縮時(shí),還會(huì)產(chǎn)生大量泡沫,造成濃縮的困難.通?？稍谡魞?chǔ)器上裝置一個(gè)汽一液分 離防濺球加以克服,工業(yè)上那么常用薄膜濃縮裝置.2親水性的有機(jī)溶劑：也就是一般所說(shuō)的與水能混溶的有機(jī)溶 劑,如乙醇酒精、甲醇木精、丙酮等,以乙醇最常用.乙醇的 溶解性能比擬好,對(duì)中草藥細(xì)胞的穿透水平較強(qiáng).親水性的成分除蛋 白質(zhì)、粘液質(zhì)、果膠、淀粉和局部多糖等外,大多能在乙醇中溶解. 難溶于水的親脂性成分,在乙醇中的溶解度也較大.還可以根據(jù)被提 取物質(zhì)的性質(zhì),采用不同濃度的乙醇進(jìn)行提取.用乙醇提取比用水量 較少,提取時(shí)間

8、短,溶解出的水溶性雜質(zhì)也少.乙醇為有機(jī)溶劑,雖 易燃,但毒性小,價(jià)格廉價(jià),來(lái)源方便,有一定設(shè)備即可回收反復(fù)使 用,而且乙醇的提取液不易發(fā)霉變質(zhì).由于這些原因,用乙醇提取的 方法是歷來(lái)最常用的方法之一.甲醇的性質(zhì)和乙醇相似,沸點(diǎn)較低v1.0可編輯可修改64C,但有毒性,使用時(shí)應(yīng)注意.3親脂性的有機(jī)溶劑：也就是一般所說(shuō)的與水不能混溶的有機(jī) 溶劑,如石油醍、苯、氯仿、乙醍、乙酸乙酯、二氯乙烷等.這些溶 劑的選擇性能強(qiáng),不能或不容易提出親水性雜質(zhì).但這類溶劑揮發(fā)性 大,多易燃氯仿除外,一般有毒,價(jià)格較貴,設(shè)備要求較高,且 它們透入植物組織的水平較弱,往往需要長(zhǎng)時(shí)間反復(fù)提取才能提取完 全.如果藥材中含有

9、較多的水分,用這類溶劑就很難浸出其有效成分, 因此,大量提取中草藥原料時(shí),直接應(yīng)用這類溶劑有一定的局限性.3.提取方法：用溶劑提取中草藥成分,、常用浸漬法、滲漉法、 煎煮法、回流提取法及連續(xù)回流提取法等.同時(shí),原料的粉碎度、提 取時(shí)間、提取溫度、設(shè)備條件等因素也都能影響提取效率,必須加以 考慮.1浸漬法：浸漬法系將中草藥粉末或碎塊裝人適當(dāng)?shù)娜萜髦? 參加適宜的溶劑如乙醇、稀醇或水,浸漬藥材以溶出其中成分的 方法.本法比擬簡(jiǎn)單易行,但浸出率較差,且如用水為溶劑,具提取 液易于發(fā)霉變質(zhì)須注意參加適當(dāng)?shù)姆栏瘎?2滲漉法：滲漉法是將中草藥粉末裝在滲漉器中,不斷添加新 溶劑,使其滲透過(guò)藥材,自上而下從滲

10、漉器下部流出浸出液的一種浸v1.0可編輯可修改出方法小當(dāng)溶劑滲進(jìn)藥粉溶出成分比重加大而向下移動(dòng)時(shí),上層的溶液或稀浸液便置換其位置,造成良好的濃度差,使擴(kuò)散能較好地進(jìn)行, 故浸出效果優(yōu)于浸漬法.但應(yīng)限制流速,在滲渡過(guò)程中隨時(shí)自藥面上 補(bǔ)充新溶劑,使藥材中有效成分充分浸出為止. 或當(dāng)滲滴液顏色極淺 或滲涌液的體積相當(dāng)于：原藥材重的 10倍時(shí),便可認(rèn)為根本上已提 取完全.在大量生產(chǎn)中常將收集的稀滲淮液作為另一批新原料的溶劑 之用.3煎煮法：煎煮法是我國(guó)最早使用的傳統(tǒng)的浸出方法.所用容 器一般為陶器、砂罐或銅制、搪瓷器皿,不宜用鐵鍋,以免藥液變色. 直火加熱時(shí)最好時(shí)常攪拌,以免局部藥材受熱太高,容易焦

11、糊.有蒸 汽加熱設(shè)備的藥廠,多采用大反響鍋、大銅鍋、大木桶,或水泥砌的 池子中通入蒸汽加熱.還可將數(shù)個(gè)煎煮器通過(guò)管道互相連接, 進(jìn)行連 續(xù)煎浸.4回流提取法：應(yīng)用有機(jī)溶劑加熱提取,需采用回流加熱裝置, 以免溶劑揮發(fā)損失.小量操作時(shí),可在圓底燒瓶上連接回流冷凝器. 瓶?jī)?nèi)裝藥材約為容量的%,溶劑浸過(guò)藥材外表約12cm在水浴中加熱回流,一般保持沸騰約：小時(shí)小放冷過(guò)濾,再在藥渣中加溶 劑,作第二、三次加熱回流分別約半小時(shí),或至根本提盡有效成分為 止.此法提取效率較冷浸法高,大量生產(chǎn)中多采用連續(xù)提取法.v1.0可編輯可修改5動(dòng)連續(xù)提取法：應(yīng)用揮發(fā)性有機(jī)溶劑提取中草藥有效成分, 不管小型實(shí)驗(yàn)或大型生產(chǎn),均

12、以連續(xù)提取法為好,而且需用溶劑量較 少,提取成分也較完全.實(shí)驗(yàn)室常用脂肪提取器或稱索氏提取器.連 續(xù)提取法,一般需數(shù)小時(shí)才能提取完全.提取成分受熱時(shí)間較長(zhǎng),遇 熱不穩(wěn)定易變化的成分不宜采用此法.二水蒸氣蒸儲(chǔ)法：.水蒸氣蒸儲(chǔ)法,適用于能隨水蒸氣蒸儲(chǔ) 而不被破壞的中草藥成分的提取.此類成分的沸點(diǎn)多在100c以上,與水不相混溶或僅微溶,且在約100c時(shí)存一定的蒸氣壓.當(dāng)與水在 一起加熱時(shí),其蒸氣壓和水的蒸氣壓總和為一個(gè)大氣壓時(shí), 液體就開 始沸騰,水蒸氣將揮發(fā)性物質(zhì)一并帶出.例如中草藥中的揮發(fā)油,某 些小分子生物堿一麻黃堿、蕭堿、檳榔堿,以及某些小分子的酚性物 質(zhì).牡丹酚paeonol等,都可應(yīng)用本

13、法提取.有些揮發(fā)性成分在 水中的溶解度稍大些,常將蒸儲(chǔ)液重新蒸儲(chǔ),在最先蒸儲(chǔ)出的局部, 分出揮發(fā)油層,或在蒸儲(chǔ)液水層經(jīng)鹽析法并用低沸點(diǎn)溶劑將成分提取 出來(lái).例如玫瑰油、原白頭翁素protoanemonin 等的制備多采用 此法.三升華法：固體物質(zhì)受熱直接氣化,遇冷后又凝固為固體化 合物,稱為升華.中草藥中有一些成分具有升華的性質(zhì),故可利用升 華法直接自中草藥中提取出來(lái).例如樟木中升華的樟腦camphor, 在?本草綱目?中已有詳細(xì)的記載,為世界上最早應(yīng)用升華法制取藥v1.0可編輯可修改材有效成分的記述.茶葉中的咖啡堿在 178c以上就能升華而不被分 解.游離羥基慈釀?lì)惓煞?一些香豆素類,有機(jī)酸

14、類成分,有些也具 有升華的性質(zhì).例如七葉內(nèi)酯及苯甲酸等.升華法雖然簡(jiǎn)單易行,但中草藥炭化后,往往產(chǎn)生揮發(fā)性的焦油 狀物,粘附在升華物上,不易精制除去,其次,升華不完全,產(chǎn)率低, 有時(shí)還伴隨有分解現(xiàn)象.B.別離和純化：上述提取法所得到的中草藥提取液或提取物仍然是混合物,需進(jìn)一步除去雜質(zhì),別離并進(jìn)行精制.具體的方法隨各中草藥的性質(zhì)不同 而異,以后將通過(guò)實(shí)例加以表達(dá),此處只作一般原那么性的討論.一溶劑別離法：一般是將上述總提取物,選用三、四種不同 極性的溶劑,由低極性到高極性分步進(jìn)行提取別離.水浸膏或乙醇浸 膏常常為膠伏物,難以均勻分散在低極性溶劑中,故不能提取完全, 可拌人適量惰性填充劑,如硅藻土

15、或纖維粉等,然后低溫或自然枯燥, 粉碎后,再以選用溶劑依次提取,使總提取物中各組成成分,依其在 不同極性溶劑中溶解度的差異而得到別離. 例如粉防己乙醇浸膏,堿 化后可利用乙醍溶出脂溶性生物堿, 再以冷苯處理溶出粉防己堿,與 其結(jié)構(gòu)類似的防己諾林堿比前者少一甲基而有一酚羥基, 不溶于冷苯v1.0可編輯可修改而得以別離.利用中草藥化學(xué)成分,在不同極性溶劑中的溶解度進(jìn)行 別離純化,是最常用的方法.廣而言之,自中草藥提取溶液中參加另一種溶劑, 析出其中某種 或某些成分,或析出其雜質(zhì),也是一種溶劑別離的方法.中草藥的水 提液中常含有樹膠、粘液質(zhì)、蛋白質(zhì)、糊化淀粉等,可以參加一定量 的乙醇,使這些不溶于乙

16、醇的成分自溶液中沉淀析出, 而到達(dá)與其它 成分別離的目的.例如自中草藥提取液中除去這些雜質(zhì), 或自白及水 提取液中獲得白及膠,可采用加乙醇沉淀法；自新鮮括樓根汁中制取 天花粉素,可滴人丙酮使分次沉淀析出.目前,提取多糖及多肽類化 合物,多采用水溶解、濃縮、加乙醇或丙酮析出的方法.此外,也可利用其某些成分能在酸或堿中溶解, 又在加堿或加酸 變更溶液的pH后,成不溶物而析出以到達(dá)別離.例如內(nèi)酯類化合物 不溶于水,但遇堿開環(huán)生成竣酸鹽溶于水,再加酸酸化,又重新形成 內(nèi)酯環(huán)從溶液中析出,從而與其它雜質(zhì)別離；生物堿一般不溶于水, 遇酸生成生物堿鹽而溶于水,再加堿堿化,又重新生成游離生物堿. 這些化合物可

17、以利用與水不相混溶的有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取別離.一般中草藥總提取物用酸水、堿水先后處理,可以分為三局部：溶于酸水的 為堿性成分如生物堿,溶于堿水的為酸性成分如有機(jī)酸,酸、 堿均不溶的為中性成分如苗醇.還可利用不同酸、堿度進(jìn)一步分 離,如酸性化臺(tái)物可以分為強(qiáng)酸性、弱酸性和酷熱酚性三種,它們分v1.0可編輯可修改別溶于碳酸氫鈉、碳酸鈉和氫氧化鈉,借此可進(jìn)行別離.有些總生物 堿,如長(zhǎng)春花生物堿、石蒜生物堿,可利用不同rH值進(jìn)行別離.但有些特殊情況,如酚性生物堿紫董定堿(corydine )在氫氧化鈉溶液 中仍能為乙醍抽出,蝙蝠葛堿(dauricins )在乙醍溶液中能為氫氧 化鈉溶液抽出,而溶于氯仿溶液中

18、那么不能被氫氧化鈉溶液抽出；有些生物堿的鹽類,如四氫掌葉防己堿鹽酸鹽在水溶液中仍能為氯仿抽 出.這些性質(zhì)均有助于各化合物的別離純化.(二)兩相溶劑萃取法：1.萃取法：兩相溶劑提取又簡(jiǎn)稱萃取法,是利用混合物中各成分在兩種互不相溶的溶劑中分配系數(shù)的不同而到達(dá)別離的方法.萃取時(shí)如果各成分在兩相溶劑中分配系數(shù)相差越大,那么別離效率越高、如果在水提取液中的有效成分是親脂性的物質(zhì), 一般多用親脂性有機(jī)溶 劑,如苯、氯仿或乙醍進(jìn)行兩相萃取,如果有效成分是偏于親水性的 物質(zhì),在親脂性溶劑中難溶解,就需要改用弱親脂性的溶劑,例如乙 酸乙酯、丁醇等.還可以在氯仿、乙醍中參加適量乙醇或甲醇以增大 其親水性.提取黃酮

19、類成分時(shí),多用乙酸乙脂和水的兩相萃取.提取 親水性強(qiáng)的皂苴那么多項(xiàng)選擇用正丁醇、異戊醇和水作兩相萃取.不過(guò),一 般有機(jī)溶劑親水性越大,與水作兩相萃取的效果就越不好,由于能使 較多的親水性雜質(zhì)伴隨而出,對(duì)有效成分進(jìn)一步精制影響很大.10v1.0可編輯可修改兩相溶劑萃取在操作中還要注意以下幾點(diǎn):1先用小試管猛烈振搖約1分鐘,觀察萃取后二液層分層現(xiàn)象. 如果容易產(chǎn)生乳化,大量提取時(shí)要防止猛烈振搖,可延長(zhǎng)萃取時(shí)間. 如碰到乳化現(xiàn)象,可將乳化層分出,再用新溶劑萃??；或?qū)⑷榛瘜映?濾,或?qū)⑷榛瘜由陨约訜?；或較長(zhǎng)時(shí)間放置并不時(shí)旋轉(zhuǎn),令其自然分 層.乳化現(xiàn)象較嚴(yán)重時(shí),可以采用二相溶劑逆流連續(xù)萃取裝置.2水提取

20、液的濃度最好在比重1.11. 2之間,過(guò)稀那么溶劑 用量太大,影響操作.3溶劑與水溶液應(yīng)保持一定量的比例,第一次提取時(shí),溶劑要 多一些,一般為水提取液的 1/3 ,以后的用量可以少一些,一般 1/4-1/6 .4 一般萃取34次即可.但親水性較大的成分不易轉(zhuǎn)入有機(jī)溶 劑層時(shí),須增加萃取次數(shù),或改變萃取溶劑.萃取法所用設(shè)備,如為小量萃取,可在分液漏斗中進(jìn)行；如系中 量萃取,可在較大的適當(dāng)?shù)南驴谄恐羞M(jìn)行.在工業(yè)生產(chǎn)中大量萃取, 多在密閉萃取罐內(nèi)進(jìn)行,用攪拌機(jī)攪拌一定時(shí)間,使二液充分混合, 再放置令其分層；有時(shí)將兩相溶液噴霧混含,以增大萃取接觸,提升11v1.0可編輯可修改萃取效率,也可采用二相溶劑

21、逆流連續(xù)萃取裝置.2 .逆流連續(xù)萃取法：是一種連續(xù)的兩相溶劑萃取法.其裝置可 具有一根、數(shù)根或更多的萃取管.管內(nèi)用小瓷圈或小的不銹鋼絲圈填 充,以增加兩相溶劑萃取時(shí)的接觸面. 例如用氯仿從川楝樹皮的水浸 液中萃取川楝素.將氯仿盛于萃取管內(nèi),而比重小于氯仿的水提取濃 縮液貯于高位容器內(nèi),開啟活塞,那么水浸液在高位壓力下流入萃取管, 遇瓷圈撞擊而分散成細(xì)粒,使與氯仿接觸面增大,萃取就比擬完全. 如果一種中草藥的水浸液需要用比水輕的苯、乙酸乙酯等進(jìn)行萃取, 那么需將水提濃縮液裝在萃取管內(nèi),而苯、乙酸乙酯貯于高位容器內(nèi). 萃取是否完全,可取樣品用薄層層析、紙層析及顯色反響或沉淀反響 進(jìn)行檢查.3 .逆

22、流分配法CounterCurrentDistribution , CCD：逆流分 配法又稱逆流分溶法、逆流分布法或反流分布法.逆流分配法與兩相 溶劑逆流萃取法原理一致,但加樣量一定,并不斷在一定容量的兩相 溶劑中,經(jīng)屢次移位萃取分配而到達(dá)混合物的別離. 本法所采用的逆 流分布儀是由假設(shè)干乃至數(shù)百只管子組成.假設(shè)無(wú)此儀器,小量萃取時(shí)可用分液漏斗代替.預(yù)先選擇對(duì)混合物別離效果較好,即分配系數(shù)差異 大的兩種不相混溶的溶劑.并參考分配層析的行為分析推斷和選用溶 劑系統(tǒng),通過(guò)試驗(yàn)測(cè)知要經(jīng)多少次的萃取移位而到達(dá)真正的別離.逆流分配法對(duì)于別離具有非常相似性質(zhì)的混合物,往往可以取得良好的12v1.0可編輯可修

23、改效果.但操作時(shí)間長(zhǎng),萃取管易因機(jī)械振蕩而損壞,消耗溶劑亦多, 應(yīng)用上常受到一定限制.4 .液滴逆流分配法：液滴逆流分配法又稱液滴逆流層析法.為 近年來(lái)在逆流分配法根底上改良的兩相溶劑萃取法.對(duì)溶劑系統(tǒng)的 選擇根本同逆流分配法,但要求能在短時(shí)間內(nèi)別離成兩相,并可生成 有效的液滴.由于移動(dòng)相形成液滴,在細(xì)的分配萃取管中與固定相有 效地接觸、摩擦不斷形成新的外表,促進(jìn)溶質(zhì)在兩相溶劑中的分配, 故其別離效果往往比逆流分配法好. 且不會(huì)產(chǎn)生乳化現(xiàn)象,用氮?dú)鈮?驅(qū)動(dòng)移動(dòng)相,被別離物質(zhì)不會(huì)因遇大氣中氧氣而氧化. 本法必須選用 能生成液滴的溶劑系統(tǒng),且對(duì)高分子化合物的別離效果較差, 處理樣 品量小1克以下,

24、并要有一定設(shè)備.應(yīng)用液滴逆流分配法曾有效 地別離多種微量成分如柴胡皂苴原小集堿型季鏤堿等.液滴逆流分配 法的裝置,近年來(lái)雖不斷在改良,但裝置和操作較繁.目前,對(duì)適用 于逆流分配法進(jìn)行別離的成分,可采用兩相溶劑逆流連續(xù)萃取裝置或 分配柱層析法進(jìn)行.三沉淀法：是在中草藥提取液中參加某些試劑使產(chǎn)生沉淀, 以獲得有效成分或除去雜質(zhì)的方法.1 .鉛鹽沉淀法：鉛鹽沉淀法為別離某些中草藥成分的經(jīng)典方法 之一.由于醋酸鉛及堿式醋酸鉛在水及醇溶液中, 能與多種中草藥成13v1.0可編輯可修改分生成難溶的鉛鹽或絡(luò)鹽沉淀,故可利用這種性質(zhì)使有效成分與雜質(zhì) 別離.中性醋酸鉛可與酸性物質(zhì)或某些酚性物質(zhì)結(jié)合成不溶性鉛鹽.

25、 因此,常用以沉淀有機(jī)酸、氨基酸、蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)、鞍質(zhì)、樹脂、 酸性皂苴、局部黃酮等.可與堿式醋酸鉛產(chǎn)生不溶性鉛鹽或絡(luò)合物的 范圍更廣.通常將中草藥的水或醇提取液先參加醋酸鉛濃溶液,靜置后濾出沉淀,并將沉淀洗液并入濾液,于濾液中加堿式醋酸鉛飽和溶 液至不發(fā)生沉淀為止,這樣就可得到醋酸鉛沉淀物、堿式醋酸鉛沉淀 物及母液三局部.然后將鉛鹽沉淀懸浮于新溶劑中,通以硫化氫氣體,使分解并轉(zhuǎn) 為不溶性硫化鉛而沉淀.含鉛鹽母液亦須先如法脫鉛處理,再濃縮精 制.硫化氫脫鉛比擬徹底,但溶液中可能存有多余的硫化氫,必須先 通人空氣或二氧化碳讓氣泡帶出多余的硫化氫氣體,以免在處理溶液 時(shí)參與化學(xué)反響.新生態(tài)的硫化鉛

26、多為膠體沉淀,能吸咐藥液中的有 效成分,要注意用溶劑處理收回.脫鉛方法,也可用硫酸、磷酸、硫 酸鈉、磷酸鈉等除鉛,但硫酸鉛、磷酸鉛在水中仍有一定的溶解度, 除鉛不徹底.用陽(yáng)離子交換樹脂脫鉛快而徹底,但要注意藥液中某些 有效成分也可能被交換上去,同時(shí)脫鉛樹脂再生也較困難.還應(yīng)注意 脫鉛后溶液酸度增加,有時(shí)需中和后再處理溶液,有時(shí)可用新制備的 氫氧化鉛、氫氧化鋁、氫氧化銅或碳酸鉛、明磯等代替醋酸鉛、堿式 醋酸鉛.例如在黃苓水煎液中參加明磯溶液, 黃苓苴就與鋁鹽絡(luò)合生 成難溶于水的絡(luò)化物而與雜質(zhì)別離,這種絡(luò)化物經(jīng)用水洗凈就可直接14v1.0可編輯可修改供藥用.2 .試劑沉淀法：例如在生物堿鹽的溶液中

27、,參加某些生物堿沉 淀試劑見生物堿性質(zhì)下,那么生物堿生成不溶性復(fù)鹽而析出.水溶 性生物堿難以用萃取法提取分出,常參加雷氏鏤鹽使生成生物堿雷氏 鹽沉淀析出.又如橙皮苴、蘆丁、黃苓苴、甘草皂苴均易溶于堿性溶 液,當(dāng)參加酸后可使之沉淀析出.某些蛋白質(zhì)溶液,可以變更溶液的 pH值利用其在等電點(diǎn)時(shí)溶解度最小的性質(zhì)而使之沉淀析出.止匕外, 還可以用明膠、蛋白溶液沉淀鞍質(zhì)；膽苗醇也常用以沉淀洋地黃皂苴 等.可根據(jù)中草藥有效成分和雜質(zhì)的性質(zhì),適中選用.四鹽析法：鹽析法是在中草藥的水提液中、參加無(wú)機(jī)鹽至一 定濃度,或到達(dá)飽和狀態(tài),可使某些成分在水中的溶解度降消沉淀析 出,而與水溶性大的雜質(zhì)別離.常用作鹽析的無(wú)機(jī)

28、鹽有氯化鈉、硫酸 鈉、硫酸鎂、硫酸鏤等.例如三七的水提取液中加硫酸鎂至飽和狀態(tài), 三七皂苴乙即可沉淀析出,自黃藤中提取掌葉防己堿,自三顆針中提 取小樊堿在生產(chǎn)上都是用氯化鈉或硫酸按鹽析制備. 有些成分如原白 頭翁素、麻黃堿、苦參堿等水溶性較大,在提取時(shí),亦往往先在水提 取液中參加一定量的食鹽,再用有機(jī)溶劑萃取.五透析法：透析法是利用小分子物質(zhì)在溶液中可通過(guò)半透膜, 而大分子物質(zhì)不能通過(guò)半透膜的性質(zhì),到達(dá)別離的方法.例如別離和15v1.0可編輯可修改純化皂苴、蛋白質(zhì)、多肽、多糖等物質(zhì)時(shí),可用透析法以除去無(wú)機(jī)鹽、 單糖、雙糖等雜質(zhì).反之也可將大分子的雜質(zhì)留在半透膜內(nèi),而將小 分子的物質(zhì)通過(guò)半透膜進(jìn)

29、入膜外溶液中, 而加以別離精制：透析是否 成功與透析膜的規(guī)格關(guān)系極大.透析膜的膜孔有大有小,要根據(jù)欲分 離成分的具體情況而選擇.透析膜有動(dòng)物性膜、火棉膠膜、羊皮紙膜硫酸紙膜、蛋白質(zhì)膠膜、玻璃紙膜等.油常多用市售的玻璃紙或 動(dòng)物性半透膜扎成袋狀,外面用尼龍網(wǎng)袋加以保護(hù),小心參加欲透析 的樣品溶液,懸掛在清水容器中.經(jīng)常更換清水使透析膜內(nèi)外溶液的 濃度差加大,必要時(shí)適當(dāng)加熱,并加以攪拌,以利透析速度加快.為 了加快透析速度,還可應(yīng)用電透析法,即在半在半透膜旁邊純?nèi)軇﹥?端放置二個(gè)電極,接通電路,那么透析膜中的帶有正電荷的成分如無(wú) 機(jī)陽(yáng)離子、生物堿等向陰極移動(dòng),而帶負(fù)電共荷的成分如無(wú)機(jī)陰離子、 有機(jī)

30、酸等那么向陽(yáng)極移動(dòng),中性化合物及高分子化合物那么留在透析膜 中.透析是否完全,須取透析膜內(nèi)溶液進(jìn)行定性反響檢查.一般透析膜可以自制：動(dòng)物半透膜如豬、牛的膀胱膜、用水洗凈, 再以乙醍脫脂,即可供用；羊皮紙膜可將濾紙浸入50%的硫酸15 60分鐘,取出鋪在板上,以水沖洗制得.其膜孔大小與硫酸濃度、 浸泡時(shí)間以及用水沖洗速度有關(guān)；火棉膠膜系將火棉膠溶于乙醍及無(wú) 水乙醇,涂在板上,干后放置水中即可供用,具膜孔大小與溶劑種類、16v1.0可編輯可修改溶劑揮發(fā)速度有關(guān),溶劑中參加適量水可使膜孔增大, 參加少量醋酸 可使膜孔縮??；蛋白質(zhì)膠明膠膜可用20%明膠涂于細(xì)布上,陰干后放水中,再加甲醛使膜凝固,沖洗干

31、凈即可供用.近來(lái)商品有透 析膜管成品出售,國(guó)外習(xí)稱“ViskingDialysisTubing ,有各種大小 厚度規(guī)格,可供不同大小分子量的多糖、多肽透析時(shí)選用.六結(jié)晶、重結(jié)晶和分步結(jié)晶法：鑒定中草藥化學(xué)成分,研究 其化學(xué)結(jié)構(gòu),必須首先將中草藥成分制備成單體純品.在常溫下,物 質(zhì)本身性質(zhì)是液體的化臺(tái)物,可分別用分儲(chǔ)法或?qū)游龇ㄟM(jìn)行別離精 制.一般他說(shuō),中草藥化學(xué)成分在常溫下多半是固體的物質(zhì),都具有 結(jié)晶他的通性,可以根據(jù)溶解度的不同用結(jié)晶法來(lái)到達(dá)別離精制的目 的.研究中草藥化學(xué)成分時(shí),一旦獲得結(jié)晶,就能有效地進(jìn)一步精制 成為單體純品.純化臺(tái)物的結(jié)晶有一定的熔點(diǎn)和結(jié)晶學(xué)的特征,有利于鑒定.如果鑒定

32、的物質(zhì)不是單體純品,不但不能得出正確的結(jié)論, 還會(huì)造成工作上的浪費(fèi).因此,求得結(jié)晶并制備成單體純品,就成為 鑒定中草藥成分、研究其分子結(jié)構(gòu)重要的一步.1 .雜質(zhì)的除去：中草藥經(jīng)過(guò)提取別離所得到的成分,大多仍然 含有雜質(zhì),或者是混合成分.有時(shí)即使有少量或微量雜質(zhì)存在,也能 阻礙或延緩結(jié)晶的形成.所以在制備結(jié)晶時(shí),必須注意雜質(zhì)的干擾, 應(yīng)力求盡可能除去.有時(shí)可選用溶劑溶出雜質(zhì),或只溶出所需要的成 分.有時(shí)可用少量活性炭等進(jìn)行脫色處理,以除去有色雜質(zhì).有時(shí)可17v1.0可編輯可修改通過(guò)氧化鋁,硅膠或硅藻土短柱處理后,再進(jìn)行制備結(jié)晶.但應(yīng)用吸 附劑除去雜質(zhì)時(shí),要注意所需要的成分也可能被吸附而損失.此外

33、, 層析法更是別離制備單體純品所常用的有效方法.如果一再處理仍未能使近于純品的成分結(jié)晶化,那么可先制備其晶態(tài)的衍生物,再回收原物,可望得到結(jié)晶.例如游離生物堿可制備各 種生物堿鹽類,羥基化合物可轉(zhuǎn)變成乙酸化物,碳基化臺(tái)物可制備成 苯蹤衍生物結(jié)晶.美登堿在原料中含量少,且反復(fù)別離精制難以得到 結(jié)晶,但制備成3一滇丙基美登堿結(jié)晶后,再經(jīng)水解除去澳丙基,美 登堿就能制備成為結(jié)晶.2 .溶劑的選擇；制備結(jié)晶,要注意選擇合宜的溶劑和應(yīng)用適量 的溶劑.合宜的溶劑,最好是在冷時(shí)對(duì)所需要的成分溶解度較小,而 熱時(shí)溶解度較大.溶劑的沸點(diǎn)亦不宜太高.一般常用甲醇、丙酮、氯 仿、乙醇、乙酸乙醋等.但有些化合物在一般

34、溶劑中不易形成結(jié)晶, 而在某些溶劑中那么易于形成結(jié)晶.例如葛根素、逆沒食子酸 (ellagicacid )在冰醋酸中易形成結(jié)晶,大黃素(emodin)在口比咤 中易于結(jié)晶,萱草毒素(hemerocallin )在、N 一二甲基甲醐胺(DMF 中易得到結(jié)晶,而穿心蓮亞硫酸氫鈉加成物在丙酮一水中較易得到結(jié) 晶.又如蝙蝠葛堿通常為無(wú)定形粉未, 但能和氯仿或乙醍形成為加成 物結(jié)晶.18v1.0可編輯可修改3 .結(jié)晶溶液的制備：制備結(jié)晶的溶液,需要成為過(guò)飽和的溶液. 一般是應(yīng)用適量的溶劑在加溫的情況下,將化合物溶解再放置冷處. 如果在室溫中可以析出結(jié)晶,就不一定放置于冰箱中,以免伴隨結(jié)晶 析出更多的雜質(zhì)

35、.“新生態(tài)的物質(zhì)即新游離的物質(zhì)或無(wú)定形的粉未狀物質(zhì),遠(yuǎn)較 晶體物質(zhì)的溶解度大,易于形成過(guò)飽和溶液.一般經(jīng)過(guò)精制的化合物, 在蒸去溶劑抽松為無(wú)定形粉未時(shí)就是如此,有時(shí)只要參加少量溶劑, 往往立即可以溶解,稍稍放置即能析出結(jié)晶.例如長(zhǎng)春花總?cè)鯄A局部 抽松后參加1. 5倍量的甲醇溶解,放置后很訣析出長(zhǎng)春堿結(jié)晶.又 如蝙蝠葛堿在乙醍中很難溶解,但當(dāng)其鹽的水溶液用氨液堿化,并立 即用乙醍萃取,所得的乙醍溶液,放置后即可析出蝙蝠葛堿的乙醍加 成物結(jié)晶.制備結(jié)晶溶液,除選用單一溶劑外,也常采用混合溶劑.一般是 先將化合物溶于易溶的溶劑中,再在室溫下滴加適量的難溶的溶劑, 直至溶液微呈渾濁,并將此溶液微微加溫

36、,使溶液完全澄清后放置. 例如J一細(xì)辛醍重結(jié)晶時(shí),可先溶于乙醇,再滴加適量水,即可析出 很好的結(jié)晶.又如自虎杖中提取水溶性的虎杖苴時(shí), 在已精制飽和的 水溶液上添加一層乙醍放置,既有利于溶出其共存的脂溶性雜質(zhì), 又 可降低水的極性,促使虎杖俄的結(jié)晶化.自秦皮中提取七葉苴秦皮 甲素,也可運(yùn)用這樣的方法.19v1.0可編輯可修改結(jié)晶過(guò)程中,一般是溶液濃度高,降溫訣,析出結(jié)晶的速度也快 些.但是其結(jié)晶的顆粒較小,雜質(zhì)也可能多些.有時(shí)自溶液中析出的 速度太快,超過(guò)化合物晶核的形成勸分子定向排列的速度, 往往只能 得到無(wú)定形粉未.有時(shí)溶液太濃,粘度大反而不易結(jié)晶化.如果溶液 濃度適當(dāng),溫度慢慢降低,有可

37、能析出結(jié)晶較大而純度較高的結(jié)晶. 有的化合物其結(jié)晶的形成需要較長(zhǎng)的時(shí)間,例如鈴蘭毒苴等,有時(shí)需 放置數(shù)天或更長(zhǎng)的時(shí)間.4 .制備結(jié)晶操作：制備結(jié)晶除應(yīng)注意以上各點(diǎn)外,在放置過(guò)程 中,最好先塞緊瓶塞,防止液面先出現(xiàn)結(jié)晶,而致結(jié)晶純度較低.如 果放置一段時(shí)間后沒有結(jié)晶析出, 可以參加極微量的種晶,即同種化 合物結(jié)晶的微小顆粒.加種晶是誘導(dǎo)晶核形成常用而有效的手段. 一 般他說(shuō),結(jié)晶化過(guò)程是有高度選擇性的,當(dāng)參加同種分子或離子,結(jié) 晶多會(huì)立即長(zhǎng)大.而且溶液中如果是光學(xué)異構(gòu)體的混合物, 還可依種 晶性質(zhì)優(yōu)先析出其同種光學(xué)異構(gòu)體.沒有種晶時(shí),可用玻璃棒蘸過(guò)飽 和溶液一滴,在空氣中任溶劑揮散,再用以磨擦容

38、器內(nèi)壁溶液邊緣處, 以誘導(dǎo)結(jié)晶的形成.如仍無(wú)結(jié)晶析出,可翻開瓶塞任溶液逐步揮散, 慢慢析晶.或另選適當(dāng)溶劑處理,或再精制一次,盡可能除盡雜質(zhì)后 進(jìn)行結(jié)晶操作.5 .重結(jié)晶及分步結(jié)晶：在制備結(jié)晶時(shí),最好在形成一批結(jié)晶后,20v1.0可編輯可修改立即傾出上層溶液,然后再放置以得到第二批結(jié)晶.晶態(tài)物質(zhì)可以用 溶劑溶解再次結(jié)晶精制.這種方法稱為重結(jié)晶法.結(jié)晶經(jīng)重結(jié)晶后所 得各局部母液,再經(jīng)處理又可分別得到第二批、第三批結(jié)晶.這種方 法那么稱為分步結(jié)晶法或分級(jí)結(jié)晶法. 晶態(tài)物質(zhì)在一再結(jié)晶過(guò)程中,結(jié) 晶的析出總是越來(lái)越快,純度也越來(lái)越高.分步結(jié)晶法各局部所得結(jié) 晶,其純度往往有較大的差異,但?？色@得一種以

39、上的結(jié)晶成分,在 未加檢查前不要貿(mào)然混在一起.6 .結(jié)晶純度的判定：化合物的結(jié)晶都有一定的結(jié)晶形狀、色澤、 熔點(diǎn)和熔距,一可以作為鑒定的初步依據(jù).這是非結(jié)晶物質(zhì)所沒有的 物理性質(zhì).化合物結(jié)晶的形狀和熔點(diǎn)往往因所用溶劑不同而有差異.原托品堿在氯仿中形成棱往狀結(jié)晶,熔點(diǎn) 207C;在丙酮中那么形成半 球狀結(jié)晶,熔點(diǎn)203C;在氯仿和丙酮混合溶劑中那么形成以上兩種晶 形的結(jié)晶.又如 N 一氧化苦參堿,在無(wú)水丙酮中得到的結(jié)晶熔點(diǎn) 208C,在稀丙酮含水析出的結(jié)晶為 7780C.所以文獻(xiàn)中常在 化合物的晶形、熔點(diǎn)之后注明所用溶劑.一般單體純化合物結(jié)晶的熔 距較窄,有時(shí)要求在0. 5c左右,如果熔距較長(zhǎng)那

40、么表示化合物不純.但有些例外情況,特別是有些化合物的分解點(diǎn)不易看得清楚. 也 有的化合物熔點(diǎn)一致,熔距較窄,但不是單體.一些立體異構(gòu)體和結(jié) 構(gòu)非常類似的混合物,常有這樣的現(xiàn)象.還有些化合物具有雙熔點(diǎn)的 特性,即在某一溫度已經(jīng)全部融熔,當(dāng)溫度繼續(xù)上升時(shí)又固化,再升21v1.0可編輯可修改溫至一定溫度又熔化或分解.如防己諾林堿在1760c時(shí)熔化,至200c 時(shí)又固化,再在2420c時(shí)分解.中草藥成分經(jīng)過(guò)同一溶劑進(jìn)行三次重 結(jié)晶,其晶形及熔點(diǎn)一致,同時(shí)在薄層層析或紙層層析法經(jīng)數(shù)種不同 展開劑系統(tǒng)檢定,也為一個(gè)斑點(diǎn)者,一般可以認(rèn)為是一個(gè)單體化合物. 但應(yīng)注意,有的化合物在一般層析條件下,雖然只呈現(xiàn)一個(gè)

41、斑點(diǎn),但 并不一定是單體成分.例如鹿含草中主成分為高熊果砍,異高熊果苴 極難用一般方法別離,經(jīng)反復(fù)結(jié)晶后,在紙層及聚醐胺薄層上都只有 一個(gè)斑點(diǎn),易誤認(rèn)為單一成分,但測(cè)其熔點(diǎn)在115125C,熔距很長(zhǎng).經(jīng)制備其甲醍后,再經(jīng)紙層層析檢定,可以出現(xiàn)兩個(gè)斑點(diǎn),異高 熊果苴的比移值大于高熊果苴.又如水菖蒲根莖揮發(fā)油中的口 一細(xì)辛 醍和B一細(xì)辛醍,在一般薄層上均為一個(gè)斑點(diǎn),前者為結(jié)晶,熔點(diǎn) 63C,后者為液體沸點(diǎn)296C,用硝酸銀薄層或氣相層忻很容易區(qū)分. 有時(shí)個(gè)別化合物如氨基酸可能局部地與層析紙或薄層上的微量金 屬離子如Cu、酸或堿形成絡(luò)合物、鹽或分解而產(chǎn)生復(fù)斑.因此, 判定結(jié)晶純度時(shí),要依據(jù)具體情況加

42、以分析.止匕外,高壓液譜、氣相 層析、紫外光譜等,均有助于檢識(shí)結(jié)晶樣品的純度.C.層析法：層析技術(shù)的應(yīng)用與開展,對(duì)于植物各類化學(xué)成分的別離鑒定工作起到重大的推動(dòng)作用.如中藥丹參的化學(xué)成分在 30年代僅從中別離到3種脂溶性色素,分別稱為丹參酮I、n、田.但以后進(jìn)一步的研22v1.0可編輯可修改究,發(fā)現(xiàn)除丹參酮I為純品外,n、田、均為混合結(jié)晶.此后通過(guò)各 種層析方法,迄今已發(fā)現(xiàn)15種單體其中有4種為我國(guó)首次發(fā)現(xiàn). 目前新的層析技術(shù)不斷開展,隨著層析理論和電子學(xué)、光學(xué)、計(jì)算機(jī) 等技術(shù)的應(yīng)用,層析技術(shù)已日趨完善.一.層析法的根本原理：層析過(guò)程是基于樣品組分在互不相溶的兩“相溶劑之間的分配系數(shù) 之差分配

43、層析,組分對(duì)吸附劑吸附水平不同吸附層析,和寓子 交換,分子的大小排阻層析而別離.通常又將一般的以流動(dòng)相為 氣體的稱為氣相層析,流動(dòng)相為液體的稱為液相層析.一、 吸附層析法AdsorptionChromatography 一吸附劑、溶劑與被別離物性質(zhì)的關(guān)系：液一固吸附層析是 運(yùn)用較多的一種方法,特別適用于很多中等分子量的樣品分子量小 于1, 000的低揮發(fā)性樣品的別離,尤其是脂溶性成分一一般不適 用于高分子量樣品如蛋白質(zhì)、多糖或離子型親水住化合物等的別離. 吸附層析的別離效果,決定于吸附劑、溶劑和被別離化合物的性質(zhì)這 三個(gè)因素.1.吸附劑：常用的吸附劑有硅膠、氧化鋁、活性炭、硅酸鎂、23v1.0

44、可編輯可修改聚酰胺、硅藻土等.(1)硅膠：層析用硅膠為一多孔性物質(zhì),分子中具有硅氧烷的 交鏈結(jié)構(gòu),同時(shí)在顆粒外表又有很多硅醇基.硅膠吸附作用的強(qiáng)弱與硅醇基的含量多 少有關(guān).硅醇基能夠通過(guò)氫鍵的形成而吸附水分,因此硅膠的吸附力 隨吸著的水分增加而降低.假設(shè)吸水量超過(guò)17%,吸附力極弱不能用作為吸附劑,但可作為分配層析中的支持劑.對(duì)硅膠的活化,當(dāng)硅膠 加熱至100110c時(shí),硅膠外表因氫鍵所吸附的水分即能被除去. 當(dāng)溫度升高至500c時(shí),硅膠外表的硅醇基也能脫水縮臺(tái)轉(zhuǎn)變?yōu)楣柩?烷鍵,從而喪失了因氫鍵吸附水分的活往,就不再有吸附劑的性質(zhì), 雖用水處理亦不能恢復(fù)其吸附活性.所以硅膠的活化不宜在較高溫度

45、 進(jìn)行(一般在170cC以上即有少量結(jié)合水失去).硅膠是一種酸性吸附劑,適用于中性或酸性成分的層析.同時(shí)硅 膠又是一種弱酸性陽(yáng)離子交換劑,具外表上的硅醇基能釋放弱酸性的 氫離子,當(dāng)遇到較強(qiáng)的堿注化臺(tái)物,那么可因離子交換反響而吸附堿性 化合物.(2)氧化鋁：氧化鋁可能帶有堿性(因其中可混有碳酸鈉等成 分),對(duì)于別離一些堿性中草藥成分,如生物堿類的別離頗為理想.24v1.0可編輯可修改但是堿性氧化鋁不宜用于醛、酮、醋、內(nèi)酯等類型的化合物別離.因 為有時(shí)堿性氧化鋁可與上述成分發(fā)生次級(jí)反響,如異構(gòu)化、氧化、消 除反響等.除去氧化鋁中絢堿性雜質(zhì)可用水洗至中性, 稱為中性氧化 鋁.中性氧化鋁仍屬于堿性吸附

46、劑的范疇,本適用于酸性成分的別離. 用稀硝酸或稀鹽酸處理氧化鋁,不僅可中和氧化鋁中含有的堿性雜 質(zhì),并可使氧化鋁顆粒外表帶有 NOT或CI 一的陰離子,從而具有 離于交換劑的性質(zhì),適合于酸性成分的層析,這種氧化鋁稱為酸性氧 化鋁.供層析用的氧化鋁,用于拄層析的,其粒度要求在 100160 目之間.粒度大子100目,別離效果差：小于160目,溶濃流速大慢, 易使譜帶擴(kuò)散.樣品與氧化鋁的用量比,一般在 1: 2050之間層析 柱的內(nèi)徑與柱長(zhǎng)比例在1: 10-20之向.在用溶劑沖洗柱時(shí),流速不宜過(guò)快,洗脫液的流速一般以每半 1小時(shí)內(nèi)流出液體的毫升數(shù)與所用吸附劑的重量(克)相等為適宜.(3)活性炭：是

47、使用較多的一種非極性吸附劑.一般需要先用 稀鹽酸洗滌,其次用乙醇洗,再以水洗凈,于80c枯燥后即可供層析用.層析用的活性炭,最好選用顆粒活注炭,假設(shè)為活性炭細(xì)粉,那么 需參加適量硅藻土作為助濾劑一并裝柱,以免流速太慢.活性炭主要 且于別離水溶性成分,如氨基酸、糖類及某些苴.活性炭的有為吸附 作用,在水溶液中最強(qiáng),在有機(jī)溶劑中那么較低弱.故水的洗脫水平最 弱,而有機(jī)溶劑那么較強(qiáng).例如以醇-水進(jìn)行洗脫時(shí),那么隨乙醇濃度的25v1.0可編輯可修改遞增而洗脫力增加.活性炭對(duì)芳香族化合物的吸附力大于脂肪族化合 物,對(duì)大分子化合物的吸附力大于小分子化合物. 利用這些吸附性的 差異,可將水溶性芳香族物質(zhì)與脂

48、肪族物質(zhì)分開,單糖與多糖分開, 氨基酸與多肽分開.2 .溶劑：層析過(guò)程中溶劑的選擇,對(duì)組分別離關(guān)系極大.在柱 層析時(shí)所用的溶劑單一劑或混合溶劑習(xí)慣上稱洗脫劑,用于薄層 或紙層析時(shí)常稱展開劑.洗脫劑的選擇,須根據(jù)被別離物質(zhì)與所選用 的吸附劑性質(zhì)這兩者結(jié)合起來(lái)加以考慮在用極性吸附劑進(jìn)行層析時(shí), 當(dāng)被別離物質(zhì)為弱極性物質(zhì),一般選用弱極性溶劑為洗脫劑；被別離 物質(zhì)為強(qiáng)極性成分,那么須選用極性溶劑為洗脫劑.如果對(duì)某一極性物 質(zhì)用吸附性較弱的吸附劑如以硅藻土或滑石粉代替硅膠,那么洗脫劑的極性亦須相應(yīng)降低.在柱層操作時(shí),被別離樣品在加樣時(shí)可采用于法,亦可選一適宜 的溶劑將樣品溶解后參加.溶解樣品的溶劑應(yīng)選擇

49、極性較小的, 以便 被別離的成分可以被吸附.然后漸增大溶劑的極性.這種極性的增大 是一個(gè)十分緩慢的過(guò)程,稱為“梯度洗脫,使吸附在層析柱上的各 個(gè)成分逐個(gè)被洗脫.如果極性增大過(guò)訣梯度太大,就不能獲得滿 意的別離.溶劑的洗脫水平,有時(shí)可以用溶劑的介電常數(shù)£來(lái)表 示.介電常數(shù)高,洗脫水平就大.以上的洗脫順序僅適用于極性吸附 劑,如硅膠、氧化鋁.對(duì)非極性吸附劑,如活性炭,那么正好與上述順26v1.0可編輯可修改序相反,在水或親水住溶劑中所形成的吸附作用, 較在脂溶性溶劑中 為強(qiáng).3 .被別離物質(zhì)的性質(zhì)：被別離的物質(zhì)與吸附劑,洗脫劑共同構(gòu) 成吸附層析中的三個(gè)要素,彼此緊密相連.在指定的吸附劑與

50、洗脫劑 的條件下,各個(gè)成分的別離情況,直接與被別離物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)有 關(guān).對(duì)極性吸附劑而言,成分的極性大,吸附住強(qiáng).當(dāng)然,中草藥成分的整體分子觀是重要的, 例如極性基團(tuán)的數(shù)目 愈多,被吸附的住能就會(huì)更大些,在同系物中碳原子數(shù)目少些,被吸 附也會(huì)強(qiáng)些.總之,只要兩個(gè)成分在結(jié)構(gòu)上存在差異,就有可能別離, 關(guān)鍵在于條件的選擇.要根據(jù)被別離物質(zhì)的性質(zhì),吸附劑的吸附強(qiáng)度, 與溶劑的性質(zhì)這三者的相互關(guān)系來(lái)考慮.首先要考慮被別離物質(zhì)的極 性.如被別離物質(zhì)極性很小為不含氧的菇烯,或雖含氧但非極性基團(tuán), 那么需選用吸附性較強(qiáng)的吸附劑,并用弱極性溶劑如石油醍或苯進(jìn)行洗 脫.但多數(shù)中藥成分的極性較大,那么需要選擇吸

51、附性能較弱的吸附劑一般田IV級(jí).采用的洗脫劑極性應(yīng)由小到大按某一梯度遞增, 或可應(yīng)用薄層層析以判斷被別離物在某種溶劑系統(tǒng)中的別離情況.此外,能否獲得滿意的別離,還與選擇的溶劑梯度有很大關(guān)系.現(xiàn)以實(shí) 例說(shuō)明吸附層析中吸附劑、洗脫劑與樣品極性之間的關(guān)系.如有多組 分的混合物,象植物油脂系由烷炫、烯炫、舀醇酯類、甘油三酸醋和 脂肪酸等組份.當(dāng)以硅膠為吸附劑時(shí),使油脂被吸附后選用一系列混27v1.0可編輯可修改合溶劑進(jìn)行洗脫,油脂中各單一成分即可按其極性大小的不同依次被 洗脫.又如對(duì)于C-27爸體皂苴元類成分,能因其分字中羥基數(shù)目的多 少而獲得別離：將混合皂苴元溶于含有 5%氯仿的苯中,加于氧化鋁 的

52、吸附柱上,采用以下的溶劑進(jìn)行梯度洗脫.如改用吸附性較弱的硅 酸鎂以替代氧化鋁,由于硅酸鎂的吸附性較弱,洗脫劑的極牲需相應(yīng) 降低,亦即采用苯或含5%氯仿的苯,即可將一元羥基皂苴元從吸附 劑上洗脫下來(lái).這一例子說(shuō)明,同樣的中草藥成分在不同的吸附劑中 層析時(shí),需用不同的溶劑才能到達(dá)相同的別離效果,從而說(shuō)明吸附劑、 溶劑和欲別離成分三者的相互關(guān)系.二簿層層析：薄層層析是一種簡(jiǎn)便、快速、微量的層析方法.一般將柱層析用的吸附劑撒布到平面如玻璃片上,形成一薄層進(jìn)行層析時(shí)一即稱薄層層析.其原理與柱層析根本相似.1 .薄層層析的特點(diǎn)：薄層層析在應(yīng)用與操作方面的特點(diǎn)與柱層 析的比擬.2 .吸附劑的選擇：薄層層析用的吸附劑與其選擇原那么和柱層析 相同.主要區(qū)別在于薄層層析要求吸附劑支持劑的粒度更細(xì),一 般應(yīng)小于25