藥物中陰離子的定量分析

1、藥物中陰離子的定量分析藥物中陰離子的定量分析摘要：本文采用兩種陰離子交換柱和抑制電導(dǎo)檢測(cè)法來(lái)分析藥物中的常見(jiàn)陰離子。選擇兩種口服藥物作為代表：一種咳嗽藥，一種感冒藥。其組分包含糖醇、乙二醇和糖類,可以用lonPac.ICE-AS1,CarboPac.MA1,和CarboPacPA10色譜柱用電化學(xué)檢測(cè)器分析。比較了lonPacAS14和AS11色譜柱對(duì)藥物中陰離子的選擇性。AS14填料采用高度交聯(lián)的基核，表面有陰離子交換層。關(guān)鍵詞：陰離子交換柱；抑制電導(dǎo)檢測(cè)法；口服藥；AS14填料美國(guó)食品藥品安全局(FDA)和其他國(guó)家的法規(guī)制定機(jī)構(gòu)都要求對(duì)藥物組分進(jìn)行檢測(cè),以檢驗(yàn)其均一性、藥效、質(zhì)量及純度等，

2、并且越來(lái)越注意其活性和非活性成分。既能夠檢測(cè)生色成分又能夠檢測(cè)非生色成分的分析技術(shù)是非常有價(jià)值的。其中，非生色成分中有很多是離子型的，不能用吸光度法檢測(cè)，但可以用抑制電導(dǎo)法檢測(cè)。抑制電導(dǎo)是一種有效的檢測(cè)技術(shù)，線性范圍寬，檢測(cè)限低。抑制器可以降低淋洗液的背景電導(dǎo)，并有效提高分析物的檢測(cè)電導(dǎo)。本文使用兩種陰離子交換柱和抑制電導(dǎo)檢測(cè)法來(lái)分析藥物中的常見(jiàn)陰離子。選擇兩種口服藥物作為代表：一種咳嗽藥，一種感冒藥。其組分包含糖醇、乙二醇和糖類,可以用lonPac.ICE-AS1,CarboPac.MA1,和CarboPacPA10色譜柱用電化學(xué)檢測(cè)器分析。本文比較了lonPacAS14和ASU色譜柱對(duì)藥物

3、中陰離子的選擇性。AS14填料采用高度交聯(lián)的基核，表面有陰離子交換層。陰離子交換層可以與烷基季胺鹽結(jié)合，對(duì)憎水基團(tuán)具有選擇性。而AS11填料是在聚乙基苯乙烯表面結(jié)合烷基季胺鹽。另外一個(gè)不同點(diǎn)是AS14色譜柱適用于等度淋洗條件，而AS11可以用氫氧化物梯度淋洗。兩種色譜柱都可以使用有機(jī)溶劑淋洗液，以減少某些有機(jī)陰離子與固定相的二級(jí)反應(yīng)。AS11色譜柱的檢測(cè)限、線性、選擇性、準(zhǔn)確度以及精密度已有報(bào)道。1實(shí)驗(yàn)部分1.1 儀器DionexDX-500系統(tǒng)，包括GP40梯度泵（含排氣）；CD20電導(dǎo)檢測(cè)器或ED40電化學(xué)檢測(cè)器;LC30或LC25恒溫箱或LC20；AS3500自動(dòng)進(jìn)樣器；PeakNet色

4、譜工作站；碳酸鈉，Sodiumcarbonate,0.5M（DionexP/N37162）碳酸氫鈉,0.5M(DionexP/N37163)氫氧化50% (w/w) (FisherScientific,P/NSS254-500)去離子水,18 M Q -cm或者以上（建議事先檢測(cè)）糖精(鄰磺酰苯甲酰亞胺)，(Sodiumsalt;SigmaChemicalCo.,P/NS-1002)1.2 色譜條件體系1：色譜柱：IonPacAS14分析柱(P/N46124),IonPacAG14保護(hù)柱(P/N46134)淋洗液：3.5mM碳酸鈉+0.8mM碳酸氫鈉流速：1.2mL/min進(jìn)樣體積：10PL檢

5、測(cè)模式：抑制電導(dǎo)ASRS”期望背景值：1511s期望操作反壓：12.4MPa(1800psi)體系2：色譜柱：lonPacASll分析柱(P/N44076),lonPacAG11保護(hù)柱(P/N44078),ATC-1Anion捕獲柱(P/N37151)淋洗液：氫氧化鈉梯度淋洗時(shí)間/min：0-2.52.5-66181825濃度/mM：0.50.5-55380.5流速：2ml/min進(jìn)樣量：10U1檢測(cè)模式：抑制電導(dǎo)ASRS,自循環(huán)模式期望背景值:0.5 U S期望操作反壓：12.4MPa(1800psi)1.3 樣品制備將粘稠的樣品用水稀釋10倍（w/w）,多效感冒藥稀釋100倍。表中的黑體成

6、份可以用陰離子交換柱和抑制電導(dǎo)檢測(cè)，其余的可以用CarboPac柱分離并電化學(xué)檢測(cè)。需要測(cè)試稀釋用的水中痕量陰離子的含量;需要測(cè)試樣品容器中的殘留陰離子。一般塑料制品比玻璃制品殘留陰離子低。用純水清洗可以減少殘留。圖1陰離子的分離Peaks: 1 Fluoride ? Ac Atal a 3 Chloride 4. Bromide 5. Nih ale 6 Benzoate 7 Su I (ale 8 Phosphate 9 Citrate202000220 Q 1 1 1 I H 19 OColumn:louPacAG11,AS110.5rnMSodiumhydroxide,holdfor2

7、.5mm:0.5mMto5mMSodiumhydroxidein3.5min:5irMIo3£mMSodiumhydroxidein12minFlowRate:2niL/rninInj.Volume：10pLDetection：suppressedconductivityAbRS,AutoSuppiessiofirecyclemodeTIIIIIIlli02468101214161820Minutesi2"4圖2分離有機(jī)物和無(wú)機(jī)離子2結(jié)論與討論圖1是氟離子、醋酸根、氯離子、硝酸根、磷酸根、硫酸根的分離色譜圖，使用lonPacAS14柱，3.5mM碳酸鈉/0.8mM碳酸氫鹽淋

8、洗。這種等度淋洗條件不需要平衡柱子，因而縮短了運(yùn)行時(shí)間并提高了工作量，可以在14分鐘內(nèi)分析完。檸檬酸鹽、苯甲酸鹽和鄰磺酰苯甲酰亞胺不用這種方法淋洗。使用lonPacASll柱，氫氧化鈉梯度淋洗,分離無(wú)機(jī)離子、醋酸鹽、檸檬酸鹽、苯甲酸鹽和鄰磺酰苯甲酰亞胺（見(jiàn)圖2）,盡管梯度淋洗增加了時(shí)間，但是有機(jī)物和無(wú)機(jī)陰離子的分離度很好；如果調(diào)節(jié)淋洗液強(qiáng)度，即使縮短了分離時(shí)間，但是犧牲了氟離子和醋酸根之間的分離度。鄰磺酰苯甲酰亞胺一次進(jìn)樣超過(guò)lOOOng時(shí)會(huì)大大縮短保留時(shí)間，從而產(chǎn)生與檸檬酸鹽的共淋洗，此時(shí)，二者的濃度在10UL進(jìn)樣時(shí)都要調(diào)至100mg/L以下。鄰磺酰苯甲酰亞胺峰會(huì)拖尾,可以在淋洗液中加入有機(jī)溶劑（例如，10%乙盾）。加入乙晴會(huì)改變柱子的選擇性，降低峰面積，增大噪音。已經(jīng)使用lonPacAS14和AS11柱和抑制電導(dǎo)分析了很多的藥物（包括固體和液體樣品）如鼻子和口腔的抑制劑，收斂劑，抗酸劑，灌腸過(guò)敏糖漿等。其中的已知陰離子互相沒(méi)有干擾。劑，安眠藥,鎮(zhèn)痛藥,清潔洗劑，抗組胺劑,3結(jié)論使用lonPacASll柱，抑制電導(dǎo)可以分析藥品中的有機(jī)物和無(wú)機(jī)陰離子，例如氟離子、氯離子、濱離子、硫酸根、硝酸根、磷酸根，以及苯甲酸根、山梨酸酯、檸檬酸鹽、和鄰磺酰苯甲酰亞胺等。而IonPacAS14柱適用于分離般的陰離子，不適合分離有機(jī)物（醋酸鹽除外）。lo