藥物的質(zhì)量研究(綜合整理)-20130329

1、藥物的質(zhì)量研究（專業(yè)知識）2013.3.29前言：以下內(nèi)容的參考依據(jù)：1、中國藥典2005、2010年版二部附錄XIXA 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則2、化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則3、化學(xué)藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的規(guī)范化過程技術(shù)指導(dǎo)原則4、審評中心電子刊物5、以前的工作經(jīng)驗(yàn)積累等。部分知識點(diǎn)、考察面尚在不斷完善中，我們要注意及時關(guān)注國家局政策動態(tài)，學(xué)習(xí)新知識，提高研發(fā)技術(shù)能力。質(zhì)量研究的一般內(nèi)容1.性狀 2.鑒別3.檢查4、含量測定1 性狀性狀項(xiàng)下有很多內(nèi)容，外觀、色澤、臭、味、結(jié)晶性、引濕性等。性狀描述要準(zhǔn)確，注意對顏色的描述，不能模棱兩可。比如某藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定“本品為白色或類白色粉

2、末或結(jié)晶性粉末”，結(jié)果應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況寫為下面幾種情況：（1）本品為白色粉末；（2）本品為類白色粉末；（3）本品為白色結(jié)晶性粉末；（4）本品為類白色結(jié)晶性粉末。不能直接寫為：本品為白色或類白色粉末或結(jié)晶性粉末。2 鑒別 常用的方法有化學(xué)反應(yīng)法、色譜法和光譜法等。注意要考察專屬性。2.1 化學(xué)反應(yīng)法：主要原理是選擇官能團(tuán)專屬的化學(xué)反應(yīng)進(jìn)行鑒別。包括顯色反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、鹽類的離子反應(yīng)等。2.2 色譜法：主要包括氣相（GC）、液相（HPLC）、薄層（TLC）等。2.3 光譜法：紅外吸收光譜法（IR）和紫外-可見吸收光譜法（UV）。 3 檢查檢查項(xiàng)下內(nèi)容比較多。原料藥主要包括一般雜質(zhì)（氯化物、硫酸鹽、重

3、金屬、砷鹽、熾灼殘?jiān)龋?、有關(guān)物質(zhì)、殘留溶劑、晶型、溶液的澄清度與顏色、干燥失重或水分、比旋光度、異構(gòu)體等。制劑需進(jìn)行的檢查項(xiàng)目，除應(yīng)符合相應(yīng)的制劑通則中的共性規(guī)定外，還應(yīng)根據(jù)其特性、工藝及穩(wěn)定性考察結(jié)果，制訂其他的檢查項(xiàng)目。如口服片劑、膠囊劑一般還應(yīng)進(jìn)行溶出度、有關(guān)物質(zhì)等檢查；緩控釋制劑、腸溶制劑、透皮吸收制劑等應(yīng)進(jìn)行釋放度檢查；小劑量制劑（主藥含量低）應(yīng)進(jìn)行含量均勻度檢查；注射劑應(yīng)進(jìn)行pH值、溶液的顏色、不溶性微粒、可見異物、細(xì)菌內(nèi)毒素或熱原、無菌、有關(guān)物質(zhì)等檢查，注射用粉末還應(yīng)檢查干燥失重或水分等。注：含量均勻度檢查，2010版藥典有新規(guī)定，更加嚴(yán)格：除另有規(guī)定外，片劑、硬膠囊劑或注射用

4、無菌粉末，每片（個）標(biāo)示量不大于25mg 或主藥含量不大于每片（個）重量25%者；內(nèi)容物非均一溶液的軟膠囊、單劑量包裝的口服混懸液、透皮貼劑、吸入劑和栓劑，均應(yīng)檢查含量均勻度。3.1 有關(guān)物質(zhì)分已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)。未知雜質(zhì)的限度檢查，一般情況下采用不加校正因子的主成分自身對照法來進(jìn)行。對照溶液一般選擇1%濃度，有時也會選擇2%、5%等濃度，對雜質(zhì)限度要求低的則可能選擇更低濃度，如0.1%、0.2%、0.5%等，以實(shí)際品種而定。對于已知雜質(zhì)的定量檢查，要像含量測定一樣進(jìn)行詳細(xì)的方法學(xué)驗(yàn)證（后面詳細(xì)介紹）。下面介紹一下HPLC法研究的一般流程。3.1.1 色譜條件的確定先進(jìn)行波譜掃描，確定檢測波長

5、。已有國家標(biāo)準(zhǔn)的藥品，應(yīng)先以標(biāo)準(zhǔn)上的方法進(jìn)行試驗(yàn)，如試驗(yàn)不出，可參考其他文獻(xiàn)進(jìn)行流動相選擇試驗(yàn)（通常主峰保留時間610min最佳）。應(yīng)注明所用色譜柱、流速、柱溫、進(jìn)樣體積等信息。3.1.2 耐用性典型的變動因素包括：液相色譜法中流動相的組成、流速和pH值、不同廠牌或不同批號的同類型色譜柱、柱溫等。一般：流動相比例變化±5%、pH變化±0.2、柱溫變化±5、檢測波長變化±5nm、流速相對值變化±20%以及三根不同色譜柱進(jìn)行測定。經(jīng)試驗(yàn)，應(yīng)說明小的變動能否符合系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求，以確保方法有效。3.1.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)有的項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)中未明確說明溶液

6、的制備，則直接用供試品溶液；有的項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了系統(tǒng)適用性溶液的配制，比如各種條件下的破壞溶液，比如主藥與其他物質(zhì)（包括雜質(zhì)與非雜質(zhì)）的混合溶液，考察指標(biāo)有分離度、理論板數(shù)、拖尾因子、保留時間、相對保留時間等。除另有規(guī)定外，分離度不得小于1.5；峰高法定量時，拖尾因子應(yīng)在0.951.05，峰面積法測定時，拖尾因子無明確規(guī)定，若拖尾嚴(yán)重，將影響峰面積的積分，應(yīng)以線性關(guān)系合格為判定依據(jù)。主峰的理論板數(shù)應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。3.1.4 專屬性試驗(yàn)（1） 空白溶劑（2） 空白輔料（制劑）（3） 破壞試驗(yàn)試驗(yàn)內(nèi)容：未破壞樣品、酸破壞、堿破壞、高溫破壞、光照破壞、氧化破壞。制劑應(yīng)同時做空白輔料的破壞試驗(yàn)，

7、保證輔料不影響主峰的測定。試驗(yàn)時間應(yīng)長一些，比如標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定至主成分峰保留時間的3倍，我們試驗(yàn)應(yīng)至少作到4倍。結(jié)論應(yīng)說明本品主峰與各種破壞條件下產(chǎn)生的降解產(chǎn)物峰分離完全，本法專屬性良好。然后說明樣品及破壞后的樣品在分鐘之后無明顯雜質(zhì)峰出現(xiàn)，色譜圖記錄時間設(shè)定為主成分峰保留時間的倍。破壞程度：一般要求主峰降解520%，10%左右是比較理想的。應(yīng)考察主峰純度及物料平衡情況（建議列表說明）。關(guān)于這一點(diǎn)，下列情況可能會被發(fā)補(bǔ)：（1）如果藥物在有的破壞條件下都不降解，會被要求加劇破壞條件，如果仍不降解，要求提供合理的解釋。（2）如果降解程度過大，會被要求采用緩和的破壞條件重復(fù)實(shí)驗(yàn)。（3）如果主峰明顯降解，檢

8、測到的雜質(zhì)卻很低，說明檢測方法不合適，會被要求建立專屬性強(qiáng)的方法。3.1.5 檢測限試驗(yàn)取對照品適量，用溶劑作一系列稀釋，按擬定的色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。以信噪比約為3:1或2:1時的進(jìn)樣量為檢測限。3.1.6 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)；一般做0、2、4、6、8h下的溶液穩(wěn)定性（或更長時間）。按各品種項(xiàng)下規(guī)定，取0h下的自身對照溶液作為所有時間點(diǎn)的對照溶液，若不穩(wěn)定，可做2h內(nèi)的溶液穩(wěn)定性（常溫或低溫，以實(shí)際情況而定）?？山邮艿臉?biāo)準(zhǔn)為：主成分的含量變化的絕對值應(yīng)不大于2.0%，雜質(zhì)含量的變化在±0.1%以內(nèi)，并不得出現(xiàn)新的大于報告限度的雜質(zhì)。溶液不穩(wěn)定的，須注明“臨用新制”。何為"

9、報告限度"？化學(xué)藥物雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則中有定義，報告限度（Reporting Threshold）：超出此限度的雜質(zhì)均應(yīng)在檢測報告中報告，并應(yīng)報告具體的檢測數(shù)據(jù)。原料藥的雜質(zhì)限度最大日劑量：2.0g，0.05%最大日劑量：2.0g，0.03%制劑的雜質(zhì)限度最大日劑量：1.0g，0.1%最大日劑量：1.0g，0.05%3.1.7 有關(guān)物質(zhì)檢查方法的確定研究試驗(yàn)完成之后，確定方法，按藥典要求規(guī)范用語。供試品溶液如不穩(wěn)定，應(yīng)注明“立即精密量取供試品溶液l注入色譜儀”。3.1.8 三批樣品有關(guān)物質(zhì)檢查按確定的方法對三批樣品進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查。采用列表形式對自制品和市售品的雜質(zhì)種類和含量進(jìn)行

10、比較，必要時采用多種檢測手段，如DAD、LC-MS等技術(shù)手段逐個進(jìn)行對比，對自制品與市售品所有雜質(zhì)進(jìn)行種類和含量的比較和分析。 關(guān)于有關(guān)物質(zhì)的“進(jìn)樣精密度”試驗(yàn)：有人取供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣來考察，個人認(rèn)為此法非常不合理，因?yàn)椤斑M(jìn)樣精密度”考察的是連續(xù)進(jìn)樣時，色譜系統(tǒng)響應(yīng)值的重復(fù)性能，若供試品溶液不穩(wěn)定，高濃度的供試品溶液在連續(xù)進(jìn)樣時，主峰有降解，雜質(zhì)峰面積增加很明顯，無法判定結(jié)果。 個人認(rèn)為以下方法比較合理：如果有關(guān)物質(zhì)檢查和含量測定的色譜條件相同，做含量方法學(xué)的時候已用對照品溶液或供試品溶液驗(yàn)證過進(jìn)樣精密度，可說明色譜系統(tǒng)的重復(fù)性能良好，故有關(guān)物質(zhì)的進(jìn)樣精密度可不做。如果有關(guān)物質(zhì)檢查和含量測定

11、的色譜條件不同，或者不管相同不相同，認(rèn)為有關(guān)物質(zhì)進(jìn)樣精密度均需考察，則應(yīng)取對照溶液連續(xù)進(jìn)樣56次，規(guī)定RSD值的限度（此RSD值限度的要求與雜質(zhì)含量的大小相關(guān)）（此法在USP、BP、JP標(biāo)準(zhǔn)中經(jīng)常見到，可做參考）。上面是有關(guān)物質(zhì)檢查的一般流程，雜質(zhì)定量測定的方法學(xué)研究見以下內(nèi)容。1.準(zhǔn)確度該指標(biāo)主要是通過回收率來反映。驗(yàn)證時一般要求根據(jù)有關(guān)物質(zhì)的定量限與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中該雜質(zhì)的限度分別配制三個濃度的供試品溶液各三份（例如某雜質(zhì)的限度為0.2%，則可分別配制該雜質(zhì)濃度為0.1%、0.2%和0.3%的雜質(zhì)溶液），分別測定其含量，將實(shí)測值與理論值比較，計(jì)算回收率，并計(jì)算9個回收率數(shù)據(jù)的相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）

12、。 可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：各濃度下的平均回收率均應(yīng)在80%-120%之間，如雜質(zhì)的濃度為定量限，則該濃度下的平均回收率可放寬至70%-130%，相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于10%。備注：一般要求做到平均回收率均在90%-110%之間，RSD不大于5%。2.線性線性一般通過線性回歸方程的形式來表示。具體的驗(yàn)證方法為： 在定量限至一定的濃度范圍內(nèi)配制57份濃度不同的供試液，分別測定該雜質(zhì)峰的面積，計(jì)算相應(yīng)的含量。以含量為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸分析。 可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：回歸線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.990，Y軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的25%以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于10%。3.進(jìn)

13、樣精密度：取一定濃度的對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5針，雜質(zhì)峰面積RSD值不大于2.0%。4. 精密度1）重復(fù)性配制6份供試品溶液，由一個分析人員在盡可能相同的條件下進(jìn)行測試，所得6份供試液含量的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于15%。（一般要求做到10%以內(nèi)）2）中間精密度配制6份供試品溶液，分別由兩個分析人員使用不同的儀器與試劑進(jìn)行測試，所得12個含量數(shù)據(jù)的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于20%（一般要求做到10%以內(nèi)）。5.專屬性已知雜質(zhì)須先定位，然后可向樣品中加入一定量的雜質(zhì)，考察雜質(zhì)之間是否可以完全分離。其他內(nèi)容基本同未知雜質(zhì)檢查一樣，做空白試驗(yàn)、破壞試驗(yàn)。可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：空白對照應(yīng)無干擾，該雜質(zhì)峰與其它峰須基線分離，

14、除另有規(guī)定外，分離度不得小于1.5。5.定量限雜質(zhì)峰與噪音峰信號的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于10。6.耐用性（同前）7.溶液穩(wěn)定性一般情況下，供試品溶液作8小時內(nèi)的溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)。8. 雜質(zhì)對照品儲備液溶液穩(wěn)定性有的雜質(zhì)對照品非常昂貴，我們想多次使用，那么可以作更長時間的溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)，比如低溫冷藏狀態(tài)下放置7天，于1、2、3、5、7天考察?？山邮艿臉?biāo)準(zhǔn)為：除另有規(guī)定外，雜質(zhì)峰保留時間的RSD值不大于2.0%，峰面積RSD值不大于2.0%，可說明對照品儲備液穩(wěn)定。有關(guān)物質(zhì)的數(shù)據(jù)要求如雜質(zhì)含量小于1.0%，則報告的數(shù)據(jù)應(yīng)精確到小數(shù)點(diǎn)后第二位；如雜質(zhì)含量大于1.0%，則報告的數(shù)據(jù)可精確到小數(shù)點(diǎn)后第一位。因很

15、多雜質(zhì)對照品從中檢所買不到，經(jīng)常需要購買進(jìn)口對照品，成本比較高，故我們可以先用進(jìn)口對照品進(jìn)行方法學(xué)研究，然后以主成分為參照采用相對保留時間定位，采用加校正因子的主成分自身對照法進(jìn)行已知雜質(zhì)的測定，所需研究內(nèi)容如下：1、 校正因子f：在這里定義為某雜質(zhì)R與所選定的基準(zhǔn)物質(zhì)S的絕對定量校正因子（即單位峰面積所代表的物質(zhì)的量）之比。即相對校正因子（f）= ，W為重量，故這里的相對校正因子也稱為相對重量校正因子，通常簡稱為校正因子。公式中帶入濃度來表示，則校正因子f As 待測組分的峰面積（有時也用峰高）；AR 雜質(zhì)對照品的峰面積； cS 待測組分的濃度； cR 雜質(zhì)對照品的濃度。實(shí)際操作：精密稱（量

16、）取雜質(zhì)對照品和待測成分對照品各適量，配制成一定濃度的混合溶液（雜質(zhì)對照品濃度應(yīng)與所控限度相符，待測成分對照品應(yīng)與所用自身對照溶液濃度相符），記錄色譜圖，按上述公式進(jìn)行校正因子的計(jì)算。要求：分別配制3份溶液，求f平均值，RSD值不大于2.0%。2、相對響應(yīng)因子F：國外藥典習(xí)慣用相對響應(yīng)因子法來計(jì)算，與中國藥典上所說的校正因子f互為倒數(shù)關(guān)系，在這里定義為某雜質(zhì)R與所選定的基準(zhǔn)物質(zhì)S，單位量下在檢測器中產(chǎn)生的響應(yīng)值之比（一般以峰面積或峰高計(jì)）。F = ，各符號含義、操作要求同上。3、供試品測定取供試品溶液和自身對照溶液，分別進(jìn)樣，測量供試品溶液色譜圖上雜質(zhì)的峰面積，分別乘以相應(yīng)的校正因子（或者除以

17、相應(yīng)的響應(yīng)因子）后與對照溶液主成分的峰面積比較，依法計(jì)算各雜質(zhì)含量。3.2 溶出度參考上海藥檢所謝沐風(fēng)老師的關(guān)于溶出度研究的一系列文獻(xiàn)進(jìn)行研究。溶出度研究試驗(yàn)主要包括以下內(nèi)容：（1）溶出介質(zhì)的選擇，（2） 溶出介質(zhì)體積的選擇，（3）溶出方法（轉(zhuǎn)籃法與槳法）的選擇，（4）轉(zhuǎn)速的選擇，（5）溶出度測定方法的驗(yàn)證，（6） 溶出度均一性試驗(yàn)（批內(nèi)），（7）重現(xiàn)性試驗(yàn)（批間）等。下面詳細(xì)介紹試驗(yàn)內(nèi)容。3.2.1 溶出介質(zhì)的選擇：建議采用多條溶出曲線對產(chǎn)品的內(nèi)在品質(zhì)進(jìn)行評價。選取原則建議如下： 【普通制劑】 (1) 酸性藥物制劑 pH值分別為1.0或1.2、5.56.5、6.87.5和水； (2) 中性或

18、堿性藥物/包衣制劑 pH值分別為1.0或1.2、3.05.0、6.8和水； (3) 難溶性藥物制劑 pH值分別為1.0或1.2、4.04.5、6.8和水； (4) 腸溶制劑 pH值分別為1.0或1.2、6.0、6.8和水； 【調(diào)釋制劑】 pH值分別為1.0或1.2、3.05.0、6.87.5和水。3.2.2 溶出介質(zhì)體積的選擇：需滿足漏槽條件（溶出介質(zhì)體積應(yīng)大于藥物全部溶解所需體積的3倍）。一般一個劑量單位以溶劑900ml或1000ml為最普遍，規(guī)格較小時也可使用常用體積的1/23/4。小杯法常用體積為100250ml。 3.2.3 溶出方法的選擇：一般情況下，片劑多選擇槳法，轉(zhuǎn)籃法多用于膠囊

19、劑或漂浮的制劑，某些特殊制劑選用小杯法。3.2.4 轉(zhuǎn)速的選擇：轉(zhuǎn)籃法以100轉(zhuǎn)/分為主；槳法以50轉(zhuǎn)/分為主。一般認(rèn)為槳法50轉(zhuǎn)/分相當(dāng)于轉(zhuǎn)籃法100轉(zhuǎn)/分。轉(zhuǎn)速的設(shè)置與具體品種有關(guān)，通常，藥物制劑的溶出速度隨著轉(zhuǎn)速的增加而增大。轉(zhuǎn)速過快，可能會導(dǎo)致對不同制劑溶出行為的區(qū)分能力差，所以不推薦選擇過高轉(zhuǎn)速。轉(zhuǎn)速的選擇應(yīng)以能區(qū)分不同處方和生產(chǎn)工藝的產(chǎn)品為宜， 如確實(shí)需要選擇高轉(zhuǎn)速，應(yīng)進(jìn)行充分的驗(yàn)證。3.2.5 溶出度測定方法的驗(yàn)證：方法學(xué)驗(yàn)證內(nèi)容與含量測定基本相同，應(yīng)進(jìn)行專屬性試驗(yàn)（輔料、膠囊殼的干擾試驗(yàn)）、線性試驗(yàn)、回收率試驗(yàn)、溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)等。應(yīng)該注意的是，在方法學(xué)驗(yàn)證中，試驗(yàn)所用的溶媒應(yīng)為

20、溶出介質(zhì)，即應(yīng)考查輔料、膠囊殼在溶出介質(zhì)中的干擾，藥物在溶出介質(zhì)中的線性、回收率及穩(wěn)定性等。3.2.6 取樣點(diǎn)和限度的確定：通過溶出度均一性試驗(yàn)（ 考察同一批樣品的溶出曲線）和重現(xiàn)性試驗(yàn)（ 考察至少3批樣品的溶出曲線），確定合理的溶出度測定取樣點(diǎn)和限度。為避免多次取樣造成的誤差，測定溶出曲線時取樣點(diǎn)不宜過多，通常為56個點(diǎn)，小規(guī)格的制劑因采用100250 ml溶出介質(zhì)，所以溶出曲線一般可選34個時間點(diǎn)。限度應(yīng)綜合考慮溶出曲線拐點(diǎn)和一般性要求。膠囊殼的干擾試驗(yàn)經(jīng)常被忽視。參照中國藥典2010年版二部附錄X C溶出度測定法：如膠囊殼對分析有干擾，應(yīng)取不少于6粒膠囊，盡可能完全的除盡內(nèi)容物，置同一個

21、溶出杯內(nèi)，按該品種項(xiàng)下規(guī)定的分析方法測定每個空膠囊的空白值，作必要的校正。如校正值大于標(biāo)示量的25%，試驗(yàn)無效。如校正值不大于標(biāo)示量的2%，可忽略不計(jì)。實(shí)際操作方法可進(jìn)行改進(jìn)，先取空白輔料適量（含囊殼），配制成空白溶液，依法測定，若干擾小于2%，可忽略；若干擾25%，可考慮在限度上適當(dāng)提高，超過5%以上則測定方法不可取，應(yīng)重新選擇溶出度測定方法。在溶出度研究資料中，另一個被忽視的問題是濾膜吸附情況的考察（濾膜孔徑不大于0.8m）。在溶出度研究時，一定要考察試驗(yàn)所用濾膜對主成分是否有吸附， 中國藥典溶出度測定法對微孔濾膜的規(guī)定為“濾孔應(yīng)不大于0.8m，并使用惰性材料制成的濾器，以免吸附活性成分或

22、干擾分析測定”。工作中常用濾膜有水系和有機(jī)系兩種，濾膜孔徑0.45m、0.80m。判定吸附與否的方法可采用：(1)取溶出液過濾，舍去不同體積的初濾液后測定，觀察響應(yīng)值的變化，了解被測藥物與濾膜的吸附情況。(2)取樣后，一部分不過濾，直接采用高速離心，取上清液測定。另一部分采用過濾法，取所得的續(xù)濾液測定，考察兩者間測定數(shù)據(jù)的差異。(3)取對照品溶液，經(jīng)濾膜過濾后，與原溶液進(jìn)行比較，觀察測定前后數(shù)據(jù)的變化。一般認(rèn)為吸附量在2.0%以下時可忽略不計(jì)，超過2.0%建議或在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明確注明濾膜規(guī)格或?yàn)V膜預(yù)處理方法（如煮沸1.5 h）、增加初濾液量（常規(guī)為5ml）或規(guī)定樣品高速離心后取上清液測定。另外在

23、溶出度研究中還應(yīng)注意溶出度試驗(yàn)儀的校正、溶出介質(zhì)的脫氣等，保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，以全面正確和客觀地反映藥物的溶出情況。幾點(diǎn)說明：（1）溶出度測定的方法學(xué)驗(yàn)證：記住所用溶媒應(yīng)為溶出介質(zhì)。如果是紫外法測定，供試品溶液吸光度在0.30.7之間，線性范圍可作至0.20.8之間。回收率試驗(yàn)一般按供試品溶液濃度的50%、限度和100%配制。（2）根據(jù)實(shí)際需要，可在溶出介質(zhì)中添加表面活性劑，但應(yīng)對添加劑種類與濃度進(jìn)行評價。濃度研究應(yīng)從0.01%（w/v）起點(diǎn)、按照1、2、5級別逐步增加，不建議采用3.0%以上的濃度。禁止使用有機(jī)溶劑！當(dāng)體內(nèi)生物利用度優(yōu)良，必須放寬體外溶出度試驗(yàn)參數(shù)時，可通過加大表面活性劑濃

24、度的方式得以實(shí)現(xiàn)（表面活性劑的配制，用煮沸法）。（3）難溶性藥物，如難以采用溶出介質(zhì)直接溶解對照品，可先加少量有機(jī)溶劑（如甲醇或乙醇）溶解后，再加溶出介質(zhì)稀釋的辦法，建議最終溶液中有機(jī)相比例不超過2%。（4）試驗(yàn)前先進(jìn)行原料藥在各pH值溶出介質(zhì)中的穩(wěn)定性考察（建議先測原料藥在不同介質(zhì)中的溶解度），以確保試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確測定。（5）溶出均一性試驗(yàn)：考察同一批樣品的溶出曲線（1批，6片，每片畫一條曲線，共6條曲線）。（6）溶出重現(xiàn)性試驗(yàn)：考察至少3批樣品的溶出曲線（3批，每批6片，6片同一取樣點(diǎn)取平均值，不同取樣點(diǎn)畫一條曲線，共3條曲線）（7）溶出曲線相似性的判定：相似因子法f2（詳見謝沐風(fēng)撰寫的文

25、獻(xiàn)資料）。4 含量測定介紹一下HPLC法含量測定試驗(yàn)及方法學(xué)可接受的標(biāo)準(zhǔn)。4.1 色譜條件的確定與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)如果和有關(guān)物質(zhì)檢查色譜條件一致，則注明“色譜條件同有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下相應(yīng)內(nèi)容”；如果色譜條件不一致，則同有關(guān)物質(zhì)檢查一樣作流動相篩選等試驗(yàn)。4.2 線性試驗(yàn)取對照品適量，先配制一高濃度儲備液，然后稀釋至一定濃度（比如：設(shè)計(jì)為取1、3、5、8、10ml至某量瓶，中間濃度為100%供試品濃度），以濃度C為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，按最小二乘法進(jìn)行線性回歸?？山邮艿臉?biāo)準(zhǔn)為：回歸線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.999，Y軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的2.0%以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。標(biāo)

26、準(zhǔn)曲線附在本項(xiàng)試驗(yàn)內(nèi)容中。4.3 進(jìn)樣精密度試驗(yàn)進(jìn)樣精密度應(yīng)屬高效液相色譜法中的系統(tǒng)適用性項(xiàng)下的要求見藥典附錄V D ，2.（3）重復(fù)性，原文要求如下：用于評價連續(xù)進(jìn)樣中，色譜系統(tǒng)響應(yīng)值的重復(fù)性能。采用外標(biāo)法時，通常取各品種項(xiàng)下的對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，除另有規(guī)定外，其峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%；采用內(nèi)標(biāo)法時，通常配制相當(dāng)于80%、100%和120%的對照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液，配成3種不同濃度的溶液，分別至少進(jìn)樣2次，計(jì)算平均校正因子，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。我們的做法：外標(biāo)法，一般可取“線性試驗(yàn)”項(xiàng)下中間濃度的對照品溶液或單配一個對照品溶液或供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5

27、次，求峰面積A的RSD值；內(nèi)標(biāo)法，按上述要求計(jì)算平均校正因子。可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：RSD2.0%。4.4 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)如果色譜條件同有關(guān)物質(zhì)，則含量的溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)可不作，溶液穩(wěn)定性同有關(guān)物質(zhì)溶液穩(wěn)定性結(jié)論。如果色譜條件同有關(guān)物質(zhì)不一樣，則取供試品在0、2、4、6、8h進(jìn)樣，求主峰面積的RSD值；如果不穩(wěn)定，作2h內(nèi)溶液穩(wěn)定性（常溫或低溫）?？山邮艿臉?biāo)準(zhǔn)為：RSD2.0%。溶液不穩(wěn)定的，須注明“臨用新制”。4.5 回收率試驗(yàn)按供試品濃度的80%、100%和120%稱取對照品適量（每個濃度作3份），按處方量100%加入輔料，按擬定的含量測定方法測定其含量，將實(shí)測值與理論值比較，計(jì)算回收率?？山邮艿臉?biāo)準(zhǔn)為：各濃度下的平均回收率均應(yīng)在98.0%102.0%之間，9個回收率數(shù)據(jù)的RSD2.0%。另：可以用原料藥代替對照品，但前提是必須先對原料藥進(jìn)行標(biāo)定。4.6 重復(fù)性試驗(yàn)配制6份相同濃度的供試品溶液，按擬定的含量測定方法進(jìn)行含量測定?？山邮艿臉?biāo)準(zhǔn)為：6份樣品含量的RSD2.0%。4.7 中間精密度試驗(yàn)配制6份相同濃度的供試品溶液，由不同分析人員、在不同時間、用不同儀器進(jìn)行含量測定?？山邮艿臉?biāo)準(zhǔn)為：與重復(fù)性