大腸桿菌非中斷雜交實驗

1、遺傳學(xué)實驗報告大腸桿菌非中斷雜交實驗一、實驗結(jié)果1、BG各培養(yǎng)基菌落數(shù)生長情況表一：BG各培養(yǎng)基菌落數(shù)生長情況板號陽性陰性不確定陽性菌落數(shù)目重組頻率B28712290.29C3266.5333.50.335D24744260.26E18796210.21F4156.5543.50.435G27714290.29【注】（1）為減少實驗誤差，同一培養(yǎng)基上的菌落數(shù)由三個人各數(shù)一次，最后取平均值得出結(jié)果；（2）陽性菌落數(shù)及重組率計算公式： 陽性菌落數(shù)=陽性+1/2不確定菌落數(shù) 重組頻率=每種選擇培養(yǎng)基上的陽性菌落數(shù)/點種的總菌落數(shù)×100%（3）由上表一可得，將重組頻率從大到小排列，板號順序

2、為FCGBDE。2、BG各培養(yǎng)基中陽性菌落數(shù)與基因重組率對應(yīng)關(guān)系:表二：BG各培養(yǎng)基基因重組結(jié)果對照表培養(yǎng)基板號FCGBDE基因lacadegalargtrphis重組率0.4350.3350.290.290.260.21由表二可以得出arg，ade，trp，his，lac，gal從近到遠的排列順序為： lac-ade-gal-arg-trp his；供體菌上基因從近到遠的順序為lac-ade-gal-trp-arg-his。 經(jīng)試驗確認全部大腸桿菌染色體要將基因全部轉(zhuǎn)入到受體菌內(nèi)需要100min，但由于轉(zhuǎn)移過程中各種條件的影響，接合過程往往不時發(fā)生中中斷，完整染色體進入受體菌的機會很少；而l

3、ac基因距離原點最近，所以最先轉(zhuǎn)入。隨著時間的增長，DNA鏈變長則容易斷裂，舉例原點遠的基因轉(zhuǎn)入受體菌群的難度增加，所以距離原點最遠的his基因基因?qū)氲淖钌?，重組頻率最低。3、由表二數(shù)據(jù)作大腸桿菌連鎖基因圖如下圖所示 圖1：實驗得到的大腸桿菌連鎖基因圖 圖2：大腸桿菌的遺傳圖示實驗所得大腸桿菌基因順序：lac-ade-gal-arg-trp his， 由圖譜所得的基因順序為：lac-purE-gal-trp-his-arg。對比大腸桿菌的基因順序，實驗所得的gal與arg的重組頻率都為0.29，重組頻率相等；而arg基因與his基因順序相反。而通過實驗結(jié)果可以看出兩者之間的陽性菌落數(shù)及基因重

4、組率相差不大，一個陽性菌落數(shù)為26,另一個為21，而實驗中人為因素造成的誤差較大，也有可能在陽性菌落計數(shù)時出現(xiàn)誤差，導(dǎo)致試驗結(jié)果與理論值不符合。由圖可見，前面的基因相對位置都較為符合，而后面的基因因為太遠，這種計算方法不是那么適合，實驗結(jié)果不是很理想。4、周三下午組、全年級以及歷年非中斷雜交實驗結(jié)果：表三：周三下午組全班非中斷雜交實驗結(jié)果 板號組號BCDEFG板號排序一23.5030.5020.259.8346.1325.00FCGBDE二32.5841.5722.1916.8560.3925.28FCBGDE三42.2436.0528.4916.2850.2029.85FBCGDE四29.0

5、032.5026.0021.0043.5029.00FCGBDE五22.0037.0031.0021.8566.0030.00FCGDBE六26.2554.0035.5032.5087.5048.00FCGDEB平均值29.8635.5225.5917.1653.2427.83FCBGDE 由表三可以得出，全班同學(xué)所做的結(jié)果F培養(yǎng)基所代表的的lac基因的重組率最高，是距離遠點最近的基因；C培養(yǎng)基所代表的的ade基因大多也相同；但是各小組B培養(yǎng)基所代表的的arg基因的位置相差較大，而理論上B培養(yǎng)基所代表的的arg基因是距離遠點最遠的基因，我們班實驗結(jié)果與理論值位置相差較大，分析原因可能是B培養(yǎng)基

6、配制出現(xiàn)了問題。 表四：2013級全年級非中斷雜交實驗結(jié)果 板號 班次BCDEFG板號排序周三上午183528284530FCGDEB周三下午303626175328FCBGDE周四上午104645195942FCDGEB周四下午17.0842.1338.2920.2567.6338.29FCDGEBFCGDEB全年級結(jié)果18.6339.6434.2521.1156.4234.62FCGDEB由表四可得，本班同學(xué)與全年級實驗所得的結(jié)果比較可以得出：F培養(yǎng)基所代表的的lac基因是距離遠點最近的基因；C次之；前面的基因相對位置較為符合，而后面的基因因為太遠，所以后面的順序各班不盡相同。 表五：20

7、13級全年級非中斷雜交實驗結(jié)果學(xué)年板號排序?qū)W生年級2010-2011FGCDEB20082011-2012FCDGEB20092012-2013FCDGEB20102013-2014FCGDEB20112014-2015FGCDEB20122015-2016FCGDEB2013理論排序FCGDEB 由表五歷年實驗結(jié)果可以得出，F(xiàn)培養(yǎng)基所代表的的lac基因最先轉(zhuǎn)入到受體菌內(nèi)，而C、D、G板所代表的基因在歷年實驗中所得到的基因順序都不太相同。E所代表的his基因在B所代表的arg基因前轉(zhuǎn)入到受體菌內(nèi)，B所代表的arg基因最后轉(zhuǎn)入到受體菌內(nèi)。但擴大了樣本量后，全年級的實驗結(jié)果與理論值比較符合。 二、實驗討論1、 點菌要注意的是牙簽不要插得太深，否則計數(shù)時會搞不清是牙簽印還是菌落。但是又要保證碰到，不然可能沒有點上。2、一根牙簽要點六塊板，點到后三塊時菌濃度肯定更低了，所以每次點板順序都不相同，而是按照BCDEFG、CDEFGB、DEFGBC、EFGBCD、FGBCDE、GBCDEF的順序輪流點板，盡可能的減少由于點板造成的實驗誤差。3、統(tǒng)計的時候一定要四個人一起，在有疑問的時候才能更好地討