燈盞花總黃酮與微量元素含量分析及其藥效機理的研究

1、燈盞花總黃酮與微量元素含量分析及其藥效機理的研究                             作者：董順福 韓麗琴 劉建華 趙文秀 董宏博【摘要】  目的研究中藥燈盞花中總黃酮及微量元素的含量，為心腦血管疾病的機理提供的依據(jù)。方法采用醇提法提取燈盞花中總黃酮，紫外分光光度法測定藥物中總黃酮的含量，

2、測定吸收波長為=510 nm；采用HNO3-HClO4濕法消化，原子吸收分光光度法測定鉀、鈣、鈉、鎂、鐵、銅、鋅、錳、鎳9種微量元素的含量。結果測定結果顯示，燈盞花中含有豐富的微量元素和黃酮類化合物，微量元素含量較高的是鐵、銅、錳元素。結論 實驗結果為研究中藥燈盞花中黃酮類化合物與微量元素在治療心腦血管疾病中的作用機制，為臨床合理應用和開發(fā)中藥燈盞花提供了有用的數(shù)據(jù)。 【關鍵詞】  燈盞花 總黃酮 微量元素Abstract:ObjectiveClinical studies indicated that the flavone and trace elements play a be

3、neficial role to maintaining the cardio-cerebral vascular system functions. The contents of flavone and trace elements in Erigeron Breviscapus（Vant）Hand.-Mazz  were determined to study the basis of the effect that the flavone and trace elements in Chinese herbal medicines with cardio-cerebral v

4、ascular diseases . MethodsThe flavone in Erigeron Breviscapus（Vant）Hand.-Mazz was extracted by alcohol and the content of flavone was determined at the wavelength of 510nm by ultraviolet spectrophotometry. The contents of nine trace elements and constant elements in Erigeron Breviscapus（Vant）Hand.-M

5、azz, including potassium, calcium,sodium, magnesium,iron,copper,zinc, manganese and nickel were determined by flame atomic absorption spectrophotometry, the sample was treated with HNO3-HClO4.ResultsThe results showed that there were comparatively rich trace elements and flavone, among which are com

6、paratively high iron,copper and manganese in Erigeron Breviscapus（Vant）Hand.-Mazz . ConclusionIt provided useful data for discussing the basis of effect the content of flavone and the trace elements cure for cardio-cerebral vascular diseases in Erigeron Breviscapus（Vant）Hand.-Mazz and for using Erig

7、eron Breviscapus（Vant）Hand.-Mazz in clinical studies.Key words:Erigeron Breviscapus（Vant）Hand.-Mazz；   Flavone；  Trace element     燈盞花又名燈盞細辛，是菊科植物短葶飛蓬Erigeron breviscapus（Vant）Hand.-Mazz的植物，含有黃酮、吡喃酮、倍半萜等五十多種化學成分1，具有活血舒筋、止痛消積等功效，臨床上廣泛用于治療腦梗塞、缺血性心臟病等心腦血管疾病，其有效成分之一為總黃

8、酮2。研究表明，微量元素與人體的生物功能具有密切的關系3，為研究中藥燈盞花中微量元素和總黃酮的含量與治療心腦血管疾病的關系，本實驗采用紫外分光光度法測定了中藥燈盞花中總黃酮的含量，用原子吸收分光光度法測定了K，Ca，Na，Mg，F(xiàn)e，Cu，Zn，Mn，Ni等9種微量元素的含量。對微量元素和總黃酮與治療心腦血管疾病的關系進行了系統(tǒng)的分析研究。1  微量元素含量的測定1.1  材料與試劑藥品：燈盞花（云南）。試劑：K，Ca，Na，Mg，F(xiàn)e，Cu，Zn，Ni均為國家標準溶液（NCS），濃度為1.000 g·L-1（國家鋼鐵材料測試中心）；Mn標準儲備液濃度為500 m

9、g·L-1（環(huán)境檢測總站）。使用液濃度：K，Na，Ca，Mg均為100 mg·L-1；Fe，Cu，Zn，Ni均為50 mg·L-1；Mn為20 mg·L-1。HNO3，HClO4均為優(yōu)級純。去離子高純水，R>106。儀器：HC-9006型原子吸收分光光度計，附80586機及FAAS軟件處理系統(tǒng)；儀器工作條件見表1。表1  儀器工作條件（略）1.2  樣品處理隨機取干燥樣品100 g，研碎，充分混勻，準確稱取1.0000 g，平行稱取3份，于50 ml錐形瓶中，加濃HNO310 ml，密封過夜，次日加濃HNO310 ml，HClO

10、45 ml，置電熱板上緩慢加熱消化，至溶液呈無色透明，近干為止。冷卻后，用4%HNO3稀釋轉移至25 ml容量瓶中，定容至刻度，混勻備用。1.3  含量測定選定儀器最佳工作條件，火焰原子分光光度法吸收法分別測定樣品溶液中Cu，Zn，Mn，Ni的含量，測定K，Ca，Na，Mg，F(xiàn)e時需將樣品稀釋10倍后再行測定。K，Na，Ca，Mg的測定，加10%的La(NO3)3抗干擾。表2  各元素回歸方程和相關系數(shù)（略）    各元素標準系列工作液：K 0.00，1.00，5.00，10.00，15.00，20.00 mg·L-1；Ca 

11、; 0.00，1.00，2.00，4.00，6.00，8.00 mg·L-1；Na  0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 mg·L-1；Mg  0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00 mg·L-1；Fe  0.00，0.50，1.00，2.00，4.00，6.00 mg·L-1；Cu 0.00，0.10，0.20，0.30，0.40，0.50 mg·L-1；Zn  0.00，0.50，1.00，2.00，4.00，6.00 mg·L-1；Mn 

12、; 0.00，0.10，0.20，0.40，0.80，1.60 mg·L-1；Ni  0.00，0.10，0.20，0.30，0.40，0.50 mg·L-1。         在本工作范圍內(nèi)，各元素線形關系良好。表2顯示各元素回歸方程和相關系數(shù)。中藥燈盞花中K，Ca，Na，Mg，F(xiàn)e，Cu，Zn，Mn，Ni 9種元素含量測定結果見表3 。表3  樣品中K，Ca，Na，Mg，F(xiàn)e，Cu，Zn，Mn，Ni 9種元素含量測定結果(略)2  總黃酮含量的測定2.1 

13、60; 乙醇提取燈盞花中總黃酮準確稱取中草藥燈盞花10.0 g于索氏提取器中，120 ml乙醚回流4h，至無色，換成70%乙醇提取10 h，過濾，減壓濃縮至20 ml左右，等體積石油醚萃取，用70%乙醇定容至100 ml，在200400 nm波長范圍內(nèi)紫外掃描，最大吸收波長為262.50 nm。2.2  標準曲線繪制準確稱取干燥至恒重的蘆丁標準品（F20060930，國藥集團化學試劑有限公司）0.076 0 g，用30%乙醇溶解后，轉移至250 ml容量瓶中，30%乙醇定容，搖勻備用。溶液濃度為0.3040 mg·ml-1。準確轉移上述蘆丁溶液 0.00，0.40，0.80

14、，1.20，1.60，2.00 ml于25 ml錐形瓶中，加30%乙醇至12.5 ml，加入0.8 ml 5%NaNO2溶液，放置5 min，加0.8 ml 5%Al(NO3)3溶液，放置6 min，加5 ml 4%NaOH溶液，30%乙醇稀釋至刻線，放置10 min，紫外分光光度計于510 nm處測定吸收度，繪制標準曲線?；貧w方程：A=9.250C+0.001相關系數(shù)：r=1.0002.3   燈盞花中總黃酮的測定準確量取提取液0.4 ml于25 ml錐形瓶中，加30%乙醇至12.5 ml，加入0.8 ml 5% NaNO2溶液，放置5 min，加0.8 ml 5%Al(

15、NO3)3溶液，放置6 min，加5 ml 4%NaOH溶液，30%乙醇稀釋至刻線，放置10 min，于波長510 nm處測定吸收度A=0.841?？傸S酮的含量測定結果為(56.870 7±3.765 1)mg/g 。1         3  討論測定結果顯示，中藥燈盞花中總黃酮含量較高（5.69%），微量元素含量豐富，微量元素含量較高的是鐵、銅、錳元素，尤其是鐵元素的含量高過一般中草藥十多倍。中藥燈盞花通常生長在海拔1 2003 500 m的中山、亞高山開闊山坡草地上，適合光照充足、氣溫不高、

16、空氣濕度大的環(huán)境，其生長環(huán)境有利于其對微量元素的吸收及總黃酮的合成。臨床研究表明，燈盞花有利于心腦血管疾病的，是中藥開發(fā)的重要的中草藥。燈盞花中總黃酮被認為是中藥燈盞花的有效成分，能使SOD活性升高，提高機體抗氧化能力及對NO的降解，明顯擴張微細血管，降低血管阻力，增加腦血流量，改善微循環(huán)，清除自由基，對減輕和防止繼發(fā)性腦損傷，促進腦神經(jīng)細胞功能恢復有明顯的作用。燈盞花對抑制血小板聚集活性和纖溶性方面作用均明顯，其擴張血管、降低血管阻力、減輕心肌耗氧量作用確切，對冠心病，心絞痛患者的療效明顯，同時對血黏度、血漿黏度、血小板聚集率都有一定的改善作用。燈盞花對多種疾病的治療具有明顯的作用，其藥物中

17、含有較高的總黃酮和豐富的微量元素與治療相關疾病具有一定的功效關系。中藥是一個包括有機成分、微量元素成分的復雜體系，具有多效性和平衡調(diào)節(jié)性，中醫(yī)治療疾病是從整體的機體平衡、環(huán)境影響和藥物的整體作用出發(fā)，調(diào)整機體的動態(tài)平衡來實現(xiàn)治療的，中藥的微量元素是中藥生長和治療的重要物質基礎。研究表明，元素鉀有利于中藥燈盞花根部的生長3，4，實驗結果分析燈盞花中鉀的含量是很高的，達到27.351 mg/g，這和藥物的生長是一致的。微量元素作為藥物中有機成分的中心原子，有利于藥物有效成分的合成和作用，微量元素的研究有助于研究中草藥的生長規(guī)律、藥物的鑒別和質量控制。    臨床微量元

18、素學研究證明，鉀、鈉、鈣在體內(nèi)維持細胞的內(nèi)外滲透平衡，維持神經(jīng)細胞膜的生物興奮性，傳遞信息。鎂具有抗心率失常作用，對急性缺血缺氧引起的嚴重室性快速心律失常有明顯的效果5；錳參與人體氧化還原、磷酸化過程，是堿性磷酸酶等多種酶的激活劑，可以改善動脈硬化患者的脂類代謝，是超氧化物歧化酶（SOD）的重要組成部分，在清除超氧化物，增強機體免疫功能方面具有重要的影響，可以有效清除體內(nèi)自由基，具有傳導信息、調(diào)控腦、中樞神經(jīng)、保護細胞膜的結構與功能,與有機藥效成分具有很好的協(xié)同作用6；鎳對冠狀動脈和冠脈血流量有一定的影響。冠狀動脈在心肌缺血、缺氧條件下對鎳敏感性增加，鎳擴張冠狀動脈收縮，減少心肌缺氧反應；銅是血紅蛋白的活化劑，體內(nèi)銅缺乏會引起心肌細胞氧化代謝紊亂，誘發(fā)動脈硬化，銅元素可以防止動脈壁的彈力纖維膠原降解，保護血管壁內(nèi)膜的完整性，阻止動脈粥樣硬化的發(fā)生和。研究表明，心腦血管疾病的患者體內(nèi)元素銅、鎂元素的含量較正常人低，且多伴有銅/鋅比值降低，藥物中豐富的銅元素，可以有效提高患者體內(nèi)銅/鋅比值，緩解心腦血管疾病患者發(fā)病的危險，這與臨床微量元素學相一致；鐵協(xié)同作用可以促進銅的吸收，與機體能量代謝密切相關。本實驗采用原子吸收分光光度法測定了中藥燈盞花中K，Ca，Na