人輸血傳播病毒辛型肝炎病毒TTV酶聯(lián)免疫分析

1、人輸血傳播病毒/辛型肝炎病毒(TTV)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒利用說明書本試劑僅供研究利用目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關液體樣本中人輸血傳播病毒/辛型肝炎病毒(TTV)含量。 實驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人輸血傳播病毒/辛型肝炎病毒(TTV)水平。用純化的人輸血傳播病毒/辛型肝炎病毒(TTV)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗 的微孔中依次加入輸血傳播病毒 /辛型肝炎病毒(TTV),再與HRP標記的輸血傳播病毒/辛型 肝炎病毒(TTV)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，通過完全洗滌后加底物 TMB顯 色。TMB在HRPi的催化下轉化成藍色，并在酸

2、的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和 樣品中的輸血傳播病毒/辛型肝炎病毒(TTV)呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光 度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中人輸血傳播病毒/辛型肝炎病毒(TTV)濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2 片(48)2 片(96)密封袋1個1個酶標包被板1X481X962-8C保存標準品XI瓶XI瓶2-8C保存標準品稀釋液XI瓶XI瓶2-8C保存酶標試劑3 ml xi 瓶6 ml xi 瓶2-8C保存樣品稀釋液3 ml xi 瓶6 ml xi 瓶2-8C保存顯色劑A液3 ml xi 瓶6 ml xi 瓶2-8C保存顯色

3、劑B液3 ml xi 瓶6 ml xi 瓶2-8C保存終止液3ml x 1 瓶6mlxi 瓶2-8C保存濃縮洗滌液(20ml X 20 倍)X 1 瓶(20ml x 30 倍)x 1 瓶2-8C保存樣本處置及要求：1 .血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心20 分鐘左右（ 2000-3000 轉/分）。認真搜集上清，保留進程中如顯現(xiàn)沉淀，應再次離心。2 .血漿：應依照標本的要求選擇EDTA者檸檬酸鈉或肝素彳為抗凝劑，混合 10-20分鐘后，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉/ 分）。認真搜集上清，保留進程中如有沉淀形成，應該再次離心。3 . 尿液：用無菌管搜集，離心20

4、分鐘左右（ 2000-3000 轉/ 分）。認真搜集上清，保留進程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參如實行。4 . 細胞培育上清：檢測分泌性的成份時， 用無菌管搜集。 離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉/ 分） 。 認真搜集上清。 檢測細胞內的成份時，用 PBS（） 稀釋細胞懸液， 細胞濃度達到 100 萬/ml 左右。 通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。 離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉/ 分）。認真搜集上清。保留進程中如有沉淀形成，應再次離心。5 .組織標本：切割標本后，稱取重量。加入必然量的PBG。用液氮迅速冷凍保留備用。標本融化后仍然維持2

5、-8 C的溫度。加入必然量的 PBS（）,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右 （ 2000-3000 轉/ 分） 。 認真搜集上清。 分裝后一份待檢測， 其余冷凍備用。操作步驟：1 . 標準品的稀釋與加樣： 在酶標包被板上設標準品孔 10 孔， 在第一、 第二孔中別離加標準品100膜，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液 50小，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100d l別離加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔別離加標準品稀釋液50小，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50小 棄掉， 再各取50小 別離加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中別離加標準品稀釋液50ul,混勻；混勻

6、后從第五、第六孔中各取50以別離加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中別離加標準品稀釋液50膜，混勻后從第七、第八孔中別離取50屋加到第九、第十孔中，再在第九第十孔別離加標準品稀釋液50小，混勻后從第九第十孔中各取50以棄掉。2 . 加樣：別離設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40小，然后再加待測樣品10"（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡可能不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3 . 溫育：用封板膜封板后置37溫育 30 分鐘。4 . 配液：將 30（ 48T 的 20 倍）倍濃縮洗滌液

7、用蒸餾水30（ 48T 的 20 倍）倍稀釋后備用。5 . 洗滌：警惕揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復5 次，拍干。6 .加酶：每孔加入酶標試劑50小，空白孔除外。7 . 溫育：操作同3 。8 . 洗滌：操作同5 。9 .顯色：每孔先加入顯色劑A50d l ,再加入顯色劑B50d l ,輕輕震蕩混勻，37c避光顯色15分鐘.10 .終止：每孔加終止液50小，終止反映（現(xiàn)在藍色立轉黃色）。11 .測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后 15 分鐘之內進行。注意事項：12 試劑盒從冷藏環(huán)境中掏出應在室溫平穩(wěn)15-

8、30 分鐘后方可利用， 酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保留。13 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不阻礙結果。14 各步加樣均應利用加樣器， 并常常校對其準確性，以幸免實驗誤差。一次加樣時刻最好操縱在 5 分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦利用排槍加樣。15 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量太高（樣本OD 值大于標準品孔第一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋必然倍數(shù)（ n 倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（X nX5）。16 封板膜只限一次性利用，以幸免交叉污染。17 底物請避光保留。18 嚴格依照說明書的操作進行，實驗結果判定必需以酶標儀讀數(shù)為準.19 所有樣品，洗滌液和各類廢棄物都應按傳染物處置。20 本試劑不同批號組分不得混用。21 . 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。計算：以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在座標紙上繪出標準曲線，依照樣品的