鐵心甘草醇提物對(duì)小鼠離體子宮平滑肌的舒張作用及其機(jī)制探討

1、鐵心甘草醇提物對(duì)小鼠離體子宮平滑肌的舒張作用及其機(jī)制探討    作者：杜娟 周東仙 王英華 余建強(qiáng) 【摘要】 目的 觀察鐵心甘草醇提物對(duì)小鼠離體子宮平滑肌收縮運(yùn)動(dòng)的影響及作用機(jī)制。方法 雌性未孕小鼠，己烯雌酚致敏后，制備離體子宮標(biāo)本，觀察鐵心甘草醇提物對(duì)離體子宮平滑肌的作用，以及加入鹽酸苯海拉明、甲磺酸酚妥拉                     

2、;             作者：杜娟 周東仙 王英華 余建強(qiáng) 【摘要】  目的 觀察鐵心甘草醇提物對(duì)小鼠離體子宮平滑肌收縮運(yùn)動(dòng)的影響及作用機(jī)制。方法 雌性未孕小鼠，己烯雌酚致敏后，制備離體子宮標(biāo)本，觀察鐵心甘草醇提物對(duì)離體子宮平滑肌的作用，以及加入鹽酸苯海拉明、甲磺酸酚妥拉明、鹽酸維拉帕米、吲哚美辛對(duì)鐵心甘草作用的影響。結(jié)果 鐵心甘草醇提物(0.4、0.6、0.8g/L)可顯著抑制未孕小鼠離體子宮平滑肌的自發(fā)性收縮活動(dòng)。鹽酸維拉帕米和吲哚美辛對(duì)鐵心甘草舒

3、張小鼠離體子宮平滑肌的作用具有顯著性影響。甲磺酸酚妥拉明可增加鐵心甘草的作用時(shí)間，但不能增加鐵心甘草的作用強(qiáng)度。鹽酸苯海拉明對(duì)鐵心甘草抑制子宮平滑肌的作用無(wú)顯著性影響。結(jié)論 鐵心甘草醇提物具有松弛小鼠離體子宮平滑肌的作用，該作用可能與受體、抑制細(xì)胞內(nèi)鈣庫(kù)釋放及抑制前列腺素的合成和釋放有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  鐵心甘草醇提物 小鼠 子宮平滑肌 機(jī)制鐵心甘草為豆科植物甘草的根和根莖心部部分，質(zhì)地堅(jiān)硬呈紫黑色，產(chǎn)于西北各省區(qū)，我區(qū)主產(chǎn)于鹽池、靈武等縣。微苦、甘、平。功能和中緩急、理氣止痛。民間用于治療急性腸炎、胃炎、嘔吐、腹瀉及婦女痛經(jīng)等1。侯玲玲、趙自強(qiáng)等研究顯示，此藥用于治療痛經(jīng)具有良好的

4、臨床療效2。本研究觀察鐵心甘草醇提物對(duì)小鼠子宮平滑肌的作用并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步的探討。1  材料與方法 1.1  動(dòng)物  昆明種小鼠60只，雌性，未孕，體重2530g。由寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2  儀器  Biolap 420E+生物信號(hào)采集系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)，F(xiàn)T-100 生物張力傳感器(成都泰盟科技有限公司)，超級(jí)恒溫水浴(KAYAGAKI IRIKA KOGYO CO.LTD.)。1.3  藥品及制備  鐵心甘草醇提物(寧夏藥檢所王英華提供)，己烯雌酚注射液(天津金耀氨基酸有限公司，批

5、號(hào)：12020536)，鹽酸苯海拉明注射液(天津市和平制藥廠，批號(hào)：800712)，甲磺酸酚妥拉明注射液(上海旭東海普藥業(yè)有限公司，批號(hào)：31020589)，鹽酸維拉帕米注射液(上海禾豐制藥有限公司，批號(hào)：31021343)，吲哚美辛(上海第十七制藥廠，批號(hào)：840303)。吲哚美辛于50g/L的NaOH溶液中溶解后，以10mol/L鹽酸滴定至pH為7.4。4種藥品分別制備為2×10-6 mol/L、2×10-6 mol/L、2×10-7 mol/L、2×10-5 mol/L終濃度的溶液。1.4  實(shí)驗(yàn)方法  實(shí)驗(yàn)前3d，按 0.02

6、5mg/10g 體重給小鼠腹腔注射己烯雌酚，隔天1次，共2次，以提高子宮對(duì)藥物的敏感性。用頸椎脫臼法將小鼠處死，剪開(kāi)腹腔，揭起腸管及網(wǎng)膜，可見(jiàn)淡粉色的索狀子宮，左右各一。輕輕分離，然后結(jié)扎兩側(cè)子宮遠(yuǎn)近端，剪斷底部，取出子宮置于含5mL Kreb's液的恒溫浴槽內(nèi)，將子宮一端固定在玻璃掛鉤上，另一端與張力傳感器相連，張力調(diào)到0.5g。恒溫浴槽內(nèi)的溫度保持(37±0.5)，并不斷通入95氧氣5二氧化碳的混合氣體，6070個(gè)氣泡/min。    將子宮標(biāo)本隨機(jī)分為三組：正常對(duì)照組、鐵心甘草組及受體拮抗劑+鐵心甘草組。各組待子宮的自發(fā)活動(dòng)平穩(wěn)30min后

7、，記錄給藥前正常的子宮收縮曲線10min，然后各組分別加入不同的藥物。子宮平穩(wěn)的自發(fā)活動(dòng)(即不加入任何藥物)為正常對(duì)照組，累計(jì)加入鐵心甘草醇提物(以下簡(jiǎn)稱鐵心甘草)100 g/L 10L使其終濃度(指溶于浴槽中5mL溶液后的濃度)分別為0.2、0.4、0.6、0.8 g/L，為鐵心甘草組。受體拮抗劑+鐵心甘草組即：子宮的自發(fā)活動(dòng)平穩(wěn)后分別加入鹽酸苯海拉明、甲磺酸酚妥拉明、鹽酸維拉帕米、吲哚美辛5min后，再加入鐵心甘草(0.6 g/L)。用 Biolap 420E+生物信號(hào)采集系統(tǒng)記錄子宮平滑肌收縮運(yùn)動(dòng)，各組分別觀察和記錄給藥前后5min內(nèi)的子宮平滑肌收縮的頻率、幅度和收縮間隔的持續(xù)時(shí)間，進(jìn)行

8、比較。1.5  統(tǒng)計(jì)學(xué)方法  數(shù)據(jù)以(±s)表示，使用SPSS 10.0軟件進(jìn)行方差分析，以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2  結(jié)果2.1  鐵心甘草對(duì)小鼠離體子宮平滑肌收縮活動(dòng)的影響    與正常對(duì)照組相比，鐵心甘草隨劑量增加可逐漸減弱子宮平滑肌自發(fā)收縮運(yùn)動(dòng)，收縮波的頻率減慢，振幅減小，收縮波間隔的持續(xù)時(shí)間增加，見(jiàn)表1。表1  鐵心甘草對(duì)小鼠離體子宮平滑肌收縮活動(dòng)的影響（略）*與對(duì)照組比較*P0.052.2  使用拮抗劑后鐵心甘草對(duì)小鼠離體子宮平滑肌作用的影響   

9、0;  鹽酸維拉帕米和吲哚美辛均可增強(qiáng)鐵心甘草抑制子宮平滑肌的作用，表現(xiàn)為子宮平滑肌的收縮頻率減小、收縮振幅降低及收縮波間隔的持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)，其與鐵心甘草組相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；受體阻斷劑甲磺酸酚妥拉明可延長(zhǎng)子宮平滑肌收縮間隔的持續(xù)時(shí)間，而對(duì)收縮頻率和收縮振幅均無(wú)顯著性影響；H1受體阻斷劑鹽酸苯海拉明，可減弱鐵心甘草對(duì)子宮平滑肌的作用，表現(xiàn)為收縮振幅增大，且收縮頻率和收縮波間隔的持續(xù)時(shí)間與鐵心甘草組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表2。表2  使用拮抗劑后鐵心甘草對(duì)小鼠離體子宮平滑肌作用的影響（略）與鐵心甘草組比較*P0.05；與正常對(duì)照組比較P0.05(責(zé)任編輯：admin)&

10、#160;                3 討論 原發(fā)性痛經(jīng)是由于各種原因?qū)е伦訉m肌肉不規(guī)則痙攣性收縮而引起，目前醫(yī)學(xué)界對(duì)其發(fā)病機(jī)制還不完全清楚，但普遍認(rèn)為痛經(jīng)的發(fā)生與體內(nèi)前列腺素F2(p rostaglandinF2，PGF2)、縮宮素(催產(chǎn)素，oxytocin)、血            3  討論 &

11、#160;  原發(fā)性痛經(jīng)是由于各種原因?qū)е伦訉m肌肉不規(guī)則痙攣性收縮而引起，目前醫(yī)學(xué)界對(duì)其發(fā)病機(jī)制還不完全清楚，但普遍認(rèn)為痛經(jīng)的發(fā)生與體內(nèi)前列腺素F2(p rostaglandinF2，PGF2)、縮宮素(催產(chǎn)素，oxytocin)、血管加壓素等過(guò)高引起子宮過(guò)度收縮有關(guān)7-8。痛經(jīng)患者普遍伴隨子宮過(guò)度收縮、宮內(nèi)壓升高、子宮局部缺血和血流不暢，以及由此所引起的下腹部疼痛等癥狀。鐵心甘草具有緩急、止痛之功。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，鐵心甘草對(duì)動(dòng)物離體和在體的子宮平滑肌均具有明顯的舒張作用，并能對(duì)抗催產(chǎn)素和MPGF2引起的子宮劇烈收縮1-2。實(shí)踐證明，鐵心甘草對(duì)痛經(jīng)及痛經(jīng)伴發(fā)的胃腸道反應(yīng)有可靠的治療作用

12、2。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，鐵心甘草醇提物可抑制小鼠離體子宮平滑肌的自發(fā)收縮活動(dòng)。加入受體阻斷劑甲磺酸酚妥拉明后，子宮平滑肌收縮間隔的持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)，且與鐵心甘草組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但其收縮頻率和收縮振幅與鐵心甘草組相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此，提示為甲磺酸酚妥拉明可增加鐵心甘草作用的時(shí)間，但不能增加鐵心甘草的作用強(qiáng)度，其作用機(jī)制也可能與受體有關(guān)。在加入前列腺素合成酶抑制劑吲哚美辛后，鐵心甘草的抑制作用與鐵心甘草組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示鐵心甘草的抑制作用可能也與前列腺素的合成與釋放有關(guān)。在使用L型電壓依從性Ca2通道(L-VDCC)阻斷劑鹽酸維拉帕米后，與鐵心甘草組相比，鐵心甘草舒張子宮平滑肌的作用亦

13、具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示鐵心甘草的抑制作用也可能與抑制細(xì)胞內(nèi)鈣庫(kù)釋放有關(guān)。有報(bào)道9，細(xì)胞外Ca2主要通過(guò)L-VDCC進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，該通道常隨動(dòng)作電位的發(fā)生而開(kāi)放。L-VDCC是平滑肌興奮收縮耦聯(lián)的重要部分，胞漿內(nèi)游離Ca2濃度是肌肉收縮蛋白活動(dòng)的決定性調(diào)節(jié)劑5。加入H1受體阻斷劑鹽酸苯海拉明后，離體子宮平滑肌收縮的振幅加大，并且其收縮頻率和收縮波間隔的持續(xù)時(shí)間與鐵心甘草組相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示鐵心甘草的抑制作用與H1受體無(wú)關(guān)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，鐵心甘草醇提物抑制小鼠子宮平滑肌收縮運(yùn)動(dòng)的作用可能與受體及通道L-VDCC使平滑肌細(xì)胞內(nèi)Ca2濃度降低有關(guān)，也與前列腺素的合成與釋放有關(guān)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】

14、0; 1 趙自強(qiáng)，高保京，韓生銀，等.鐵心甘草對(duì)大鼠離體子宮的作用研究J.寧夏醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1996，18(1)：20-23.2 趙自強(qiáng)，牛陽(yáng)，韓生銀，等.鐵心甘草治療痛經(jīng)藥理作用的實(shí)驗(yàn)研究J.中國(guó)中醫(yī)藥科技，1995，2(6)：26-27.3 李志強(qiáng)，馬力揚(yáng)，徐敬東，等.香附對(duì)未孕大鼠離體子宮肌收縮的影響J.西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2007，28(4)：399-400.4 徐敬東，王文，秦曉民.遠(yuǎn)志增強(qiáng)未孕大鼠子宮平滑肌運(yùn)動(dòng)的機(jī)制研究J.中國(guó)中藥雜志，2005，30(4)：295-297.5 徐敬東，王文，楊惠霞，等.延胡索對(duì)未孕大鼠離體子宮平滑肌運(yùn)動(dòng)的抑制作用J.中國(guó)組織工程研究與臨床康

15、復(fù)，2007，11(21)：4178-4181.6 趙丁，詹文紅，李連懷，等.生化湯提取物對(duì)正常未孕、雌激素預(yù)處理及產(chǎn)后小鼠離體子宮平滑肌收縮功能的影響J.中國(guó)中藥雜志，2006，31(3)：2437 Lundstrêm V，Gréen K.Endogenous levels of prosta2 glandin F2alpha and itsmain metabolites in plasma and endometrium of normal and dysmenorrheic womenJ.Am J Obstet Gynecol，1978，130(6)：640-646

16、.8 AkerlundM.Involvement of oxytocin and vasop ressin in the pathophysiology of preterm labor and primary dys2 menorrheaJ.Prog Brain Res，2002，139(4)：359-365.9 Zhenyu C，Qinghuiqi，LixinL，et al.Effects of emodin on Ca2+ signal transduction of smooth muscle cells in multiple organ dysfunction syndromeJ.

17、J Surg Res，2006，131(1)：80-85.(責(zé)任編輯：admin)                 3 討論 原發(fā)性痛經(jīng)是由于各種原因?qū)е伦訉m肌肉不規(guī)則痙攣性收縮而引起，目前醫(yī)學(xué)界對(duì)其發(fā)病機(jī)制還不完全清楚，但普遍認(rèn)為痛經(jīng)的發(fā)生與體內(nèi)前列腺素F2(p rostaglandinF2，PGF2)、縮宮素(催產(chǎn)素，oxytocin)、血        

18、;    3  討論    原發(fā)性痛經(jīng)是由于各種原因?qū)е伦訉m肌肉不規(guī)則痙攣性收縮而引起，目前醫(yī)學(xué)界對(duì)其發(fā)病機(jī)制還不完全清楚，但普遍認(rèn)為痛經(jīng)的發(fā)生與體內(nèi)前列腺素F2(p rostaglandinF2，PGF2)、縮宮素(催產(chǎn)素，oxytocin)、血管加壓素等過(guò)高引起子宮過(guò)度收縮有關(guān)7-8。痛經(jīng)患者普遍伴隨子宮過(guò)度收縮、宮內(nèi)壓升高、子宮局部缺血和血流不暢，以及由此所引起的下腹部疼痛等癥狀。鐵心甘草具有緩急、止痛之功。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，鐵心甘草對(duì)動(dòng)物離體和在體的子宮平滑肌均具有明顯的舒張作用，并能對(duì)抗催產(chǎn)素和MPGF2引起

19、的子宮劇烈收縮1-2。實(shí)踐證明，鐵心甘草對(duì)痛經(jīng)及痛經(jīng)伴發(fā)的胃腸道反應(yīng)有可靠的治療作用2。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，鐵心甘草醇提物可抑制小鼠離體子宮平滑肌的自發(fā)收縮活動(dòng)。加入受體阻斷劑甲磺酸酚妥拉明后，子宮平滑肌收縮間隔的持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)，且與鐵心甘草組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但其收縮頻率和收縮振幅與鐵心甘草組相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此，提示為甲磺酸酚妥拉明可增加鐵心甘草作用的時(shí)間，但不能增加鐵心甘草的作用強(qiáng)度，其作用機(jī)制也可能與受體有關(guān)。在加入前列腺素合成酶抑制劑吲哚美辛后，鐵心甘草的抑制作用與鐵心甘草組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示鐵心甘草的抑制作用可能也與前列腺素的合成與釋放有關(guān)。在使用L型電壓依從性Ca2通道(

20、L-VDCC)阻斷劑鹽酸維拉帕米后，與鐵心甘草組相比，鐵心甘草舒張子宮平滑肌的作用亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示鐵心甘草的抑制作用也可能與抑制細(xì)胞內(nèi)鈣庫(kù)釋放有關(guān)。有報(bào)道9，細(xì)胞外Ca2主要通過(guò)L-VDCC進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，該通道常隨動(dòng)作電位的發(fā)生而開(kāi)放。L-VDCC是平滑肌興奮收縮耦聯(lián)的重要部分，胞漿內(nèi)游離Ca2濃度是肌肉收縮蛋白活動(dòng)的決定性調(diào)節(jié)劑5。加入H1受體阻斷劑鹽酸苯海拉明后，離體子宮平滑肌收縮的振幅加大，并且其收縮頻率和收縮波間隔的持續(xù)時(shí)間與鐵心甘草組相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示鐵心甘草的抑制作用與H1受體無(wú)關(guān)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，鐵心甘草醇提物抑制小鼠子宮平滑肌收縮運(yùn)動(dòng)的作用可能與受體及通道L-VDCC

21、使平滑肌細(xì)胞內(nèi)Ca2濃度降低有關(guān)，也與前列腺素的合成與釋放有關(guān)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 趙自強(qiáng)，高保京，韓生銀，等.鐵心甘草對(duì)大鼠離體子宮的作用研究J.寧夏醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1996，18(1)：20-23.2 趙自強(qiáng)，牛陽(yáng)，韓生銀，等.鐵心甘草治療痛經(jīng)藥理作用的實(shí)驗(yàn)研究J.中國(guó)中醫(yī)藥科技，1995，2(6)：26-27.3 李志強(qiáng)，馬力揚(yáng)，徐敬東，等.香附對(duì)未孕大鼠離體子宮肌收縮的影響J.西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2007，28(4)：399-400.4 徐敬東，王文，秦曉民.遠(yuǎn)志增強(qiáng)未孕大鼠子宮平滑肌運(yùn)動(dòng)的機(jī)制研究J.中國(guó)中藥雜志，2005，30(4)：295-297.5 徐敬東，王文，楊惠霞，等.延胡索對(duì)未孕大鼠離體子宮平滑肌運(yùn)動(dòng)的抑制作用J.中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2007，1