基因工程原理練習(xí)題及其答案

1、基因工程原理練習(xí)題及其答案、填空題1. 基因工程是年代發(fā)展起來的遺傳學(xué)的一個分支學(xué)科。2. 基因工程的兩個基本特點是：(1)，(2)。3. 基因克隆中三個基本要點是： ; 和。4. 通過比較用不同組合的限制性內(nèi)切核酸酶處理某一特定基因區(qū)域所得到的不同大小的片段，可以構(gòu)建顯示該區(qū)域各限制性內(nèi)切核酸酶切點相互位置的。5. 限制性內(nèi)切核酸酶是按屬名和種名相結(jié)合的原則命名的，第一個大寫字母取自 第二、三兩個字母取自 ，第四個字母則用 表示。6. 部分酶切可采取的措施有：(1) 等。7. 第一個分離的限制性內(nèi)切核酸酶是 ;而第一個用于構(gòu)建重組體的限制性內(nèi)切核酸酶是。&限制性內(nèi)切核酸酶 BsuRI

2、和HaeM的來源不同，但識別的序列都是 ,它們屬于9. DNA聚合酶I的Klenow大片段是用 切割DNA聚合酶I得到的分子量為76kDa的大片段，具有兩種酶活性：; 的活性。10. 為了防止 DNA的自身環(huán)化，可用 去雙鏈 DNA。11. EGTA是離子螯合劑。12. 測序酶是修飾了的 T7 DNA聚合酶，它只有 酶的活性，而沒有 酶的活性。13 .切口移位(nick translation)法標(biāo)記 DNA 的基本原理在于利用 的和的作用。14. 欲將某一具有突出單鏈末端的雙鏈DNA分子轉(zhuǎn)變成平末端的雙鏈形式，通?？刹捎没?。15. 反轉(zhuǎn)錄酶除了催化 DNA的合成外，還具有 的作用，可以將 D

3、NA-RNA雜種雙鏈中的 水解掉。16 . 基因工程中有 3種主要類型的載體： 、17 .就克隆一個基因(DNA片段)來說，最簡單的質(zhì)粒載體也必需包括三個部分: 、。另外，一個理想的質(zhì)粒載體必須具有 低分子量。18. 一個帶有質(zhì)粒的細(xì)菌在有 EB的培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時間后，一部分細(xì)胞中已測不出質(zhì)粒，這種現(xiàn)象叫。19. pBR322是一種改造型的質(zhì)粒， 它的復(fù)制子來源于 ，它的四環(huán)素抗性基因來自于，它的氨芐青霉素抗性基因來自于 。20 . YAC的最大容載能力是，BAC載體的最大容載能力21. pSCI01是一種復(fù)制的質(zhì)粒。22. pUCl8質(zhì)粒是目前使用較為廣泛的載體。pUC系列的載體是通過 和

4、兩種質(zhì)粒改造而來。它的復(fù)制子來自 , Amp23 .24.25.26.噬菌體之所以被選為基因工程載體，主要有兩方面的原因;二是抗性基因則是來自。野生型的M13不適合用作基因工程載體，主要原因是 和。黏粒(cosmid)是質(zhì)粒一噬菌體雜合載體，它的復(fù)制子來自 、COS位點序列來自 ，最大的克隆片段達(dá)到 。野生型的噬菌體DNA不宜作為基因工程載體，原因是：(1)(2) (3) 27 .噬菌粒是由質(zhì)粒和噬菌體DNA共同構(gòu)成的，其中來自質(zhì)粒的主要結(jié)構(gòu)是，而來自噬菌體的主要結(jié)構(gòu)是DNA片段后，總的長度應(yīng)在噬菌體基EDTA和檸檬酸鈉等，其目的是 28. 噬菌體載體由于受到包裝的限制，插入外源因組的的范圍內(nèi)

5、。29. 在分離DNA時要使用金屬離子螯合劑，如30. 用乙醇沉淀DNA時，通常要在 DNA溶液中加人單價的陽離子，如NaCI和NaAc ,其目的是。31. 引物在基因工程中至少有4個方面的用途： . . 。32. Clark發(fā)現(xiàn)用Taq DNA聚合酶得到的PCR反應(yīng)產(chǎn)物不是平末端，而是有一個突出堿基末端的雙鏈 DNA分子。根據(jù)這一發(fā)現(xiàn)設(shè)計了克隆PCR產(chǎn)物的。33. 在cDNA的合成中要用到 S1核酸酶，其作用是切除在 34. 乙醇沉淀 DNA的原理是。35. 假定克隆一個編碼某種蛋白質(zhì)的基因，必須考慮其表達(dá)的三個基本條件：(3) 。36. 受體細(xì)胞的感受態(tài)是 。37. DNA重組連接的方法大

6、致分為四種：(2)(3) (4)。38. 將含有外源基因組一個酶切片段的質(zhì)粒稱之為含有一個 ，各種此類質(zhì)粒的集合體稱之為構(gòu)建了一個 。39將含有一個 mRNA的DNA拷貝的克隆稱作一個 ，源于同一批 RNA制備物的克隆群則構(gòu)建了一個 。40. 只要知道基因組中某一特定區(qū)域的部分核苷酸組成，用 可以將這段DNA 進(jìn)行百萬倍的擴(kuò)增。41. 人工感受態(tài)的大腸桿菌細(xì)胞在溫度為 時吸附DNA, 時攝人DNA。42. 目前，在重組體的篩選中，已經(jīng)發(fā)展了許多構(gòu)思巧妙、具有極高準(zhǔn)確性的篩選方法。大致可以分為：等。43. PCR擴(kuò)增篩選重組體是比較簡便的篩選方法，它適合于 。44. 核酸雜交探針可分為兩大類：D

7、NA探針和 RNA探針。其中DNA探針又分為 探針禾廿探針。45. 如果用限制性內(nèi)切核酸酶切割雙鏈DNA產(chǎn)生5'突出的黏性末端，則可以用 進(jìn)行3'末端標(biāo)記。如果用限制性內(nèi)切核酸酶切割DNA產(chǎn)生的是3'突出的黏性末端， 可以用進(jìn)行 3' 末端標(biāo)記。46. 單鏈DNA探針的標(biāo)記可以采用下列方法：(1)。47. 根據(jù)Northern雜交的結(jié)果可以說明： 。48. 差示雜交(differential hybridization) 技術(shù)需要 。49. RNA分子經(jīng)凝膠電泳后按大小不同分開，然后被轉(zhuǎn)移到一張硝酸纖維素膜(尼龍膜)上，同一放射 DNA 探針雜交的技術(shù)稱 。50

8、. 在技術(shù)中，DNA限制性片段經(jīng)凝膠電泳分離后，被轉(zhuǎn)移到硝酸纖維 素膜(或尼龍膜)上，然后與放射性的 DNA探針雜交。51. 可用T4 DNA聚合酶進(jìn)行平末端的 DNA標(biāo)記，因為這種酶具有 和的活性。52. 根據(jù)外源片段提供的遺傳表型篩選重組體，必需考慮三種因素：(1)(2) (3)。53. Northern印跡和Southern印跡有兩點根本的區(qū)別：54. 放射免疫篩選的原理基于以下三點：(2) (3)。答案1. 702. (1)分子水平上的操作；(2)細(xì)胞水平上的表達(dá)3. 克隆基因的類型；受體的選擇；載體的選擇4. 限制性酶切圖譜5. 屬名的第一個字母；種名的前兩個字母；株名6.(1)減少

9、酶量；(2)縮短反應(yīng)時間；(3)增大反應(yīng)體積7.EcoK ； EcoRI8.GGCC;異源同工酶9.枯草桿菌蛋白酶；(1)5'-3'合成酶的活性；(2)3'-5'外切核酸酶10.堿性磷酸酶；5 '端的磷酸基團(tuán)11.Ca2+12.5'-3 '合成；3'-5'外切13.DNA聚合酶1: 5'一 3'外切核酸酶；5'一- 3'合成酶14.S1核酸酶切割；DNA聚合酶補平15.核酸水解酶H ； RNA16.質(zhì)粒DNA ;病毒DNA ;質(zhì)粒和病毒 DNA雜合體17.復(fù)制區(qū)：含有復(fù)制起點；選擇標(biāo)記：主要

10、是抗性基因；克隆位點：便于外源DNA的插入18.質(zhì)粒消除(或治愈)19,pMBl ；pSCI01 ； pSF2124（R 質(zhì)粒）20.1OOOkb； 300kb21.嚴(yán)緊22.pBR322 和 M13 ； pMBl ;轉(zhuǎn)座子23.它在細(xì)菌中能夠大量繁殖，這樣有利于外源DNA的擴(kuò)增；對某些噬菌體(如噬菌)的遺傳結(jié)構(gòu)和功能研究得比較清楚，其大腸桿菌宿主系統(tǒng)的遺傳也研究得比較詳盡24. 沒有合適的限制性內(nèi)切核酸酶識別位點；選擇標(biāo)記25. 質(zhì)粒；噬菌體； 4526. (1)分子量大，(2)酶的多切點，(3)無選擇標(biāo)記27. 復(fù)制區(qū)；IG區(qū)28. 75%105%29. 螯合Mg2+離子，抑制核酸酶的活性

11、30. 中和DNA分子的負(fù)電荷，增加 DNA分子間的凝聚力31. (1)合成探針；合成cDNA ; (3)用于PCR反應(yīng)；進(jìn)行序列分析32. T載體33. 第二鏈合成時形成的發(fā)夾環(huán)？34. 乙醇使DNA分子脫水35. (1)保持正確的可讀框(2)能夠使其轉(zhuǎn)錄的啟動子(3)具有翻譯的起始和終止信號36. 接受外源DNA的生理狀態(tài)37. (1)黏性末端連接；(2)平末端連接；(3)同聚物接尾連接；(4)接頭連接法38. 基因組DNA克?。?基因組DNA文庫39. cDNA克?。籧DNA文庫40. 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)41. 0 C； 42 C42. (1)遺傳學(xué)方法；物理篩選法；核酸雜交法；表

12、達(dá)產(chǎn)物分析法43. 插入外源片段的種類較多，大小又極為相似的重組體的篩選44. 基因組 DNA ； cDNA45. Klenow酶填補的方法；T4DNA聚合酶46. 用M13噬菌體載體合成單鏈 DNA探針；從mRNA反轉(zhuǎn)錄合成單鏈cDNA探針；(3) 用不對稱PCR合成單鏈DNA探針47外源基因是否進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄48兩種不同的細(xì)胞群體能夠表達(dá)不同的基因，即在一個群體中能夠表達(dá)一些基因，而 在另一個細(xì)胞群體中不能表達(dá)這些基因49. Northern 印跡50. Southern 印跡51. 5'3'合成酶；3'外切核酸酶52. (1)克隆的是完整的基因；(2)使用的是表達(dá)載體

13、；(3)不含內(nèi)含子53. (1)印跡的對象不同：Northern是RNA , Southern是DNA ； (2)電泳條件不同，前者是變性條件，后者是非變性條件54. (1)抗體能夠被吸附到固體支持物上；(2)同一個抗原可以同幾種抗體結(jié)合；(3)抗體能夠被標(biāo)記二、選擇題(單選或多選)1. 因研究重組DNA技術(shù)而獲得諾貝爾獎的科學(xué)家是()(a) A . Kornberg (b)W . Gilbert (c)P. Berg (d)B . McClintock2. 第一個作為重組DNA載體的質(zhì)粒是()(a) pBR322 (b)ColEl (c)pSCI01 (d)pUCI83. 關(guān)于宿主控制的限制

14、修飾現(xiàn)象的本質(zhì)，下列描述中只有()不太恰當(dāng)。(a) 由作用于同一 DNA序列的兩種酶構(gòu)成(b) 這一系統(tǒng)中的核酸酶都是n類限制性內(nèi)切核酸酶(c) 這一系統(tǒng)中的修飾酶主要是通過甲基化作用對DNA進(jìn)行修飾(d) 不同的宿主系統(tǒng)具有不同的限制-修飾系統(tǒng)4. n型限制性內(nèi)切核酸酶：()(a) 有內(nèi)切核酸酶和甲基化酶活性且經(jīng)常識別回文序列(b) 僅有內(nèi)切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一種酶提供(c) 限制性識別非甲基化的核苷酸序列(d)有外切核酸酶和甲基化酶活性(e) 僅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一種酶提供5. 下面有關(guān)限制酶的敘述哪些是正確的?()(a) 限制酶是外切酶而不是內(nèi)切酶(b) 限

15、制酶在特異序列(識別位點)對DNA進(jìn)行切割(c) 同一種限制酶切割 DNA時留下的末端序列總是相同的(d) 一些限制酶在識別位點內(nèi)稍有不同的點切割雙鏈DNA，產(chǎn)生黏末端(e) 一些限制酶在識別位點內(nèi)相同的位置切割雙鏈DNA，產(chǎn)生平末端6. 第一個被分離的n類酶是：()(a) EcoK(b)Hind 川 (c)Hind n (d)EcoB7. 在下列進(jìn)行 DNA部分酶切的條件中，控制那一項最好?()(a )反應(yīng)時間(b)酶量(c)反應(yīng)體積(d)酶反應(yīng)的溫度&在下列試劑中，那一種可以螯合Ca2+離子?()(a) EDTA(b)檸檬酸鈉(c)SDS (d)EGTA9. 在下列工具酶中，那一種

16、可以被 EGTA抑制活性?()(a) S1單鏈核酸酶(b)末端轉(zhuǎn)移酶(c)堿性磷酸酶(d)Bal 31核酸酶10. 限制性內(nèi)切核酸酶可以特異性地識別：()(a) 雙鏈DNA的特定堿基對 (b)雙鏈DNA的特定堿基序列(c)特定的三聯(lián)密碼(d)以上都正確11. 下列關(guān)于限制性內(nèi)切核酸酶的表示方法中，正確一項的是 ()。(a) Sau3A I (b)E . coRI (c)hind III(d)Sau 3A112. 限制性內(nèi)切核酸酶的星號活性是指：()13.14.15.16.17.18.19.20.21.22.23.24.25.26.27.28.29.(a) 在非常規(guī)條件下，識別和切割序列發(fā)生變化

17、的活性。(b)活性大大提高(c)切割速度大大加快(d)識別序列與原來的完全不同下面哪一種不是產(chǎn)生星號活性的主要原因?()(a)甘油含量過高(b)反應(yīng)體系中含有有機溶劑(c)含有非Mg2+的二價陽離子(d)酶切反應(yīng)時酶濃度過低關(guān)于宿主控制的限制修飾現(xiàn)象的本質(zhì)，下列描述中只有()不太恰當(dāng)(a) 由作用于同一 DNA序列的兩種酶構(gòu)成(b) 這一系統(tǒng)中的核酸酶都是n類限制性內(nèi)切核酸酶(c) 這一系統(tǒng)中的修飾酶主要是通過甲基化作用對DNA進(jìn)行修飾(d) 不同的宿主系統(tǒng)具有不同的限制-修飾系統(tǒng)在長模板鏈的指導(dǎo)下引物延伸合成長的DNA互補鏈時應(yīng)選用()(a)T4DNA 聚合酶(b)Klenow 酶.(c)大

18、腸桿菌DNA聚合酶I (d)T7DNA聚合酶末端轉(zhuǎn)移酶是合成酶類，()(a) 作用時不需要模板(b) 在Ca2+的存在下，可以在突出的3，末端延長DNA鏈(c) 在Ca2+的存在下，可以在隱蔽的3，末端延長DNA鏈(d) 上述說法有兩種是正確的在基因工程中，可用堿性磷酸酶()(a)防止DNA的自身環(huán)化(b)同多核苷酸激酶一起進(jìn)行 DNA的5,末端標(biāo)記(c) 制備突出的3,末端(d)上述說法都正確下列酶中，除()外都具有磷酸酶的活性(a)入核酸外切酶(b)外切酶川(c)單核苷酸激酶(d)堿性磷酸酶下列哪一種酶作用時需要引物？()(a)限制酶(b)末端轉(zhuǎn)移酶(c)反轉(zhuǎn)錄酶(d)DNA連接酶S1核酸

19、酶的功能是()(a)切割雙鏈的DNA (b)切割單鏈的RNA (c)切割發(fā)夾環(huán)(d)以上有兩項是正確的Klenow酶與DNA聚合酶相比，前者喪失了 ()的活性。(a)5, -3，合成酶，(b)3 , -5，外切酶(c)5, -3，外切酶 (d)轉(zhuǎn)移酶下面關(guān)于松弛型質(zhì)粒(relaxed plasmid)性質(zhì)的描述中，()是不正確的(a) 質(zhì)粒的復(fù)制只受本身的遺傳結(jié)構(gòu)的控制，而不受染色體復(fù)制機制的制約，因而有較多的拷貝數(shù)(b) 可以在氯霉素作用下進(jìn)行擴(kuò)增(c)通常帶有抗藥性標(biāo)記(d) 同嚴(yán)緊型質(zhì)粒融合后，雜合質(zhì)粒優(yōu)先使用松弛型質(zhì)粒的復(fù)制子基因工程中所用的質(zhì)粒載體大多是改造過的，真正的天然質(zhì)粒載體很

20、少，在下列載體中只有()被視為用作基因工程載體的天然質(zhì)粒載體(a)pBR322 (b)pSCIO1(c)pUBIIO (d)pUCI8下列哪種克隆載體對外源DNA的容載量最大?()(a)質(zhì)粒(b)黏粒(c)酵母人工染色體(YAC) (d) 噬菌體(e) cDNA表達(dá)載體松弛型質(zhì)粒： ()(a)在寄主細(xì)胞中拷貝數(shù)較多(b)可用氯霉素擴(kuò)增(c) 一般沒有選擇標(biāo)記(d)上述、(b)兩項正確Col El是惟一用作基因工程載體的自然質(zhì)粒，這種質(zhì)粒：()(a)是松弛復(fù)制型(b)具有，四環(huán)素抗性(c)能被氯霉素擴(kuò)增(d)能產(chǎn)生腸桿菌素同一種質(zhì)粒 DNA，以三種不同的形式存在，電泳時，它們的遷移速率是：()(

21、a)OCDNA>SCDNA>LDNA(b)SCDNA>LDNA>OCDNA(c)LDNA>OCDNA>SCDNA(d)SCDNA>OCDNA>LDNApBR322是一種改造型的質(zhì)粒，含有兩個抗性基因，其中四環(huán)素抗性基因來自：()(a)ColEl (b)Ri 質(zhì)粒(c)pSCI01 (d)pUCl8關(guān)于穿梭質(zhì)粒載體，下面哪一種說法最正確?()(a) 在不同的宿主中具有不同的復(fù)制機制(b) 在不同的宿主細(xì)胞中使用不同的復(fù)制起點(c) 在不同的宿主細(xì)胞中使用不同的復(fù)制酶(d) 在不同的宿主細(xì)胞中具有不同的復(fù)制速率30能夠用來克隆 32kb 以下大小的外

22、源片段的質(zhì)粒載體是 ()(a)charomid (b)plasmid (C)cosmid (d)phagemid 31第一個作為重組 DNA 載體的質(zhì)粒是 ()(a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl832. Ti 質(zhì)粒：()(a)可從農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)到植物細(xì)胞中(b)作為雙鏈DNA被轉(zhuǎn)移(c)在植物中導(dǎo)致腫瘤(d)介導(dǎo)冠癭堿的合成，作為細(xì)菌的營養(yǎng)物和植物的生長激素(e) 需要細(xì)菌的vir基因幫助轉(zhuǎn)移(f)在植物細(xì)胞中作為染色體外質(zhì)粒33. 黏粒(cosmid)是一種人工建造的載體，()(a)它具有COS位點，因而可進(jìn)行體外包裝(b)它具有質(zhì)粒DNA的復(fù)制特性(c)進(jìn)入

23、受體細(xì)胞后，可引起裂解反應(yīng)(d)進(jìn)入受體細(xì)胞后，可引起溶源化反應(yīng)34. 有兩種確定核酸中核苷酸序列的方法：化學(xué)序列分析法(Maxam-Glbert) 和酶學(xué)序列分析法(Sa nger)。酶學(xué)測序法的基本原理/優(yōu)點是：()(a) 堿基與特殊染料間不同的相互作用(b) 一個合成引物的延伸和DNA修復(fù)合成的可靠終止(c) 限制性位點與DNA末端標(biāo)記的相關(guān)性(d) 可同時對DNA雙螺旋的兩條鏈進(jìn)行測序(e) 反應(yīng)是DNA特異的，RNA不會帶來干擾。這樣既減少純化步驟，也節(jié)約了開支。35. 關(guān)于 cDNA 的最正確的說法是： ()(a)同mRNA互補的單鏈 DNA (b)同mRNA互補的雙鏈 DNA(c

24、)以mRNA為模板合成的雙鏈 DNA(d)以上都正確36. 用堿法分離質(zhì)粒 DNA 時，染色體 DNA 之所以可以被除去，是因為： ()(a)染色體DNA斷成了碎片(b)染色體DNA分子量大，而不能釋放(c)染色體變性后來不及復(fù)性(d)染色體未同蛋白質(zhì)分開而沉淀37. 關(guān)于堿解法分離質(zhì)粒DNA，下面哪一種說法不正確?()(a)溶液I的作用是懸浮菌體(b)溶液H的作用是使 DNA變性(c) 溶液川的作用是使 DNA復(fù)性(d) 質(zhì)粒DNA分子小，所以沒有變性，染色體變性后不能復(fù)性38. Clark 做了一個有趣的實驗，發(fā)現(xiàn) TaqDNA 聚合酶可以不需要模板，在雙鏈 DNA 的末端加一個堿基，主要

25、是加 () .(a)dGTP (b)dATP (c)dCTP (d)dTTP39. 根據(jù)構(gòu)建方法的不同，基因文庫分為基因組文庫、cDNA 文庫等。在下列文庫中，()屬 cDNA 文庫(a) YAC 文庫 (b) MAC 文庫 (c) 扣減文庫 (d) BAC 文庫40. 下面關(guān)于多克隆位點 (multiple clone site,MCS) 的描述，不正確的句是 ()(a)僅位于質(zhì)粒載體中(b)具有多種酶的識別序列(c)不同酶的識別序列可以有重疊(d)般是人工合成后添加到載體中41. 在 cDNA 技術(shù)中，所形成的發(fā)夾環(huán)可用 ()(a)限制性內(nèi)切核酸酶切除(b)用31外切核酸酶切除(c)用S1

26、核酸酶切除 (d)用51外切核酸酶切除42. 在 DNA 的酶切反應(yīng)系統(tǒng)中，通常： ()(a)用SSC緩沖液 (b)加入Mg2+作輔助因子(c)加入BSA等保護(hù)劑(d)上述說法中，有兩項是正確的43. 黏性末端連接法，不僅操作方便，而且 ()(a)產(chǎn)生新切點(b)易于回收外源片段(c)載體不易環(huán)化(d)影響外源基因的表達(dá)44. 在下列表型中，()是基因工程上理想的受體菌表型(a)r+m+rec*(b)r-m-rec-(C)r-m-rec+(d)r+m+rec-45關(guān)于 DNA 接頭在基因工程中的作用，下列說法中哪一項不正確 ?( )(a)給外源DNA添加適當(dāng)?shù)那悬c(b)人工構(gòu)建載體(c)調(diào)整外

27、源基因的可讀框(d)增加調(diào)控元件46 cDNA 文庫包括該種生物的 ()(a)某些蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因(b)所有蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因(c)所有結(jié)構(gòu)基因(d)內(nèi)含子和調(diào)控區(qū)47下列關(guān)于建立 cDNA 文庫的敘述中，哪一項是錯誤的 ?()(a) 從特定組織或細(xì)胞中提取DNA或RNA(b) 用反轉(zhuǎn)錄酶合成mRNA的對應(yīng)單鏈DNA(c) 以新合成的單鏈DNA為模板合成雙鏈DNA(d) 新合成的雙鏈 DNA甲基化48下列對黏性末端連接法的評價中，哪一項是不正確的? ()(a)操作方便(b)易于回收片段(c)易于定向重組(d)載體易于自身環(huán)化，降低重組率49關(guān)于感受態(tài)細(xì)胞性質(zhì)的描述，下面哪一種說法不正確?()(功

28、具有可誘導(dǎo)性(b)具有可轉(zhuǎn)移性(c)細(xì)菌生長的任何時期都可以出現(xiàn)(d)不同細(xì)菌出現(xiàn)感受態(tài)的比例是不同的50下面關(guān)于用 T4 多核苷酸激酶標(biāo)記 5' 端制備探針的描述中 ()是不正確的。DNA(a)既能標(biāo)記DNA，又能標(biāo)記RNA(b)既能標(biāo)記雙鏈DNA又能標(biāo)記單鏈(c) 只能標(biāo)記突出的5'端不能標(biāo)記其他類型末端(d) DNA 或 RNA 必須有 5'-OH 的存在51. Southem印跡的DNA探針()雜交。(a)只與完全相同的片段(b)可與任何含有相同序列的DNA片段(c) 可與任何含有互補序列的DNA片段.(d) 可與用某些限制性內(nèi)切核酸酶切成的DNA片段(e)以上

29、都是52 用下列方法進(jìn)行重組體的篩選，只有()說明外源基因進(jìn)行了表達(dá)。(a)Southem 印跡雜交(b)Northem 印跡雜交(c)Western印跡(d)原位菌落雜交53下列哪一個不是 Southern 印跡法的步驟 ?()(a)用限制酶消化DNADNA與載體的連接(c)用凝膠電泳分離 DNA片段(d)DNA片段轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上(e) 用一個標(biāo)記的探針與膜雜交54 報告基因 ()(a) 以其易于分析的編碼序列代替感興趣基因的編碼序列(b) 以其易于分析的啟動子區(qū)代替感興趣基因的啟動子區(qū)(c) 能用于檢測啟動子的活性(d)能用于確定啟動子何時何處有活性55 在利用 lacZ 失活的顯色

30、反應(yīng)篩選法中， IPTG 的作用是 ()(a)誘導(dǎo)宿主的a肽的合成(b)誘導(dǎo)宿主的3肽的合成(c)作為酶的作用底物(d)作為顯色反應(yīng)的指示劑56. 切口移位是指在 ()作用下，使 ()帶上放射性標(biāo)記。(a)DNA 聚合酶 I， RNA (b)DNA 聚合酶 I， DNA(c)DNA聚合酶川，RNA (d)DNA 聚合酶川，DNA57用于核酸分子雜交的探針可以是放射性標(biāo)記的()(a)DNA (b)RNA (c)抗體58 Southern 印跡是用 DNA 探針檢測(a)用 RNA探針檢測DNA片段(c)用DNA探針檢測RNA片段59用免疫化學(xué)法篩選重組體的原理是(a)根據(jù)外源基因的表達(dá)(c)根據(jù)

31、 mRNA同DNA的雜交(d) 抗原DNA 片段，而 Northern 印跡則是： ()(b) 用RNA探針檢測RNA片段(d)用DNA探針檢測蛋白質(zhì)片段( )(b)根據(jù)載體基因的表達(dá)(d)根據(jù)DNA同DNA的雜交60隨機引物標(biāo)記探針，下列各項中哪一項是不正確的?()(a)雙鏈DNA、單鏈DNA、RNA都是可以標(biāo)記的(b)不需要用Dnase I預(yù)處理(c) 反應(yīng)時可用Klenow酶(d)反應(yīng)時可用DNA聚合酶161. 在切口移位標(biāo)記 DNA探針時只能使用()(a)Klenow酶(b)DNA聚合酶I(c)DNA聚合酶n(d)DNA聚合酶川62. 要對一雙鏈的 DNA分子進(jìn)行31末端標(biāo)記，可用()

32、(a)Klenow 酶(b)DNA 聚合酶 I(c)T4DNA 聚合酶(d)T7DNA 聚合酶答案1. c； 2. c； 3. b; 4. b 5. b, C, d, e； 6. c； 7. b; 8. d; 9. d; 10. B; 11. d;12. a；13.d；14. b15. d；16. c； 17. a,b；18.a； 19.c； 20. d； 21. c；22.C；23. b；24.C； 25. d；26. a, C, d； 27. b； 28. c；29. b； 30. a；31. c；32.a,c,d,e,33.a,b,c；34. b；35. c； 36.c；37. d；38

33、.b；39. c； 40.a；41. c；42.a,b,c；43.b；44. b；45. d；46. a； 47. a；48.c；49. c；50.b； 51.c；52.c；53.b；54.a,c,d； 55.a；56. b； 57. a, b；58.c；59. a；60.d； 61.b；62.c；三、簡答題1. 說明Sanger DNA測序法的原理。2. 某學(xué)生在用EcoRI切割外源DNA片段時，出現(xiàn)了星號活性，請分析可能的原因？3. 在序列5'-CGAACATATGGAGT-3'中含有一個6bp的n類限制性內(nèi)切核酸酶的識別序列， 該位點的序列可能是什么 ？4. 下面幾種序列

34、中你認(rèn)為哪一個(哪些)最有可能是n類酶的識別序列：GAATCG, AAATTT , GATATC, ACGGCA?為什么？5. 當(dāng)兩種限制性內(nèi)切核酸酶的作用條件不同時，若要進(jìn)行雙酶切，應(yīng)采取什么措施？為什么？6. 為什么反轉(zhuǎn)錄酶在聚合反應(yīng)中會出錯？7. 什么是測序酶(sequenaseTM)?& 什么是 S1核酸酶作圖(S1 nuclease mapping)?9 YAC載體具有什么樣的功能性DNA序列？為什么在克隆大片段時，YAC具有優(yōu)越性？10. 列舉質(zhì)粒載體必須具備的4個基本特性。11. 什么叫穿梭載體？12. 如何將野生型的噬菌體改造成為一個理想的載體？13. PCR的基本原理

35、是什么？用PCR擴(kuò)增某一基因，必須預(yù)先得到什么樣的信息？14. cDNA克隆與基因組克隆有何不同 ？15. 怎樣將一個平末端 DNA片段插入到EcoR I限制位點中去？16. 簡述以黏粒為載體構(gòu)建基因文庫的原理。17. 酵母人工染色體要在酵母細(xì)胞中穩(wěn)定存在，必須有哪些基本的結(jié)構(gòu)？18. 何謂YAC?主要特性是什么？19. Muller的PCR反應(yīng)同大腸桿菌體內(nèi)的 DNA復(fù)制有哪些不同？你認(rèn)為根本的差別在哪里?20. 欲將一真核生物的結(jié)構(gòu)基因克隆后轉(zhuǎn)移到原核生物(如E. coli)中進(jìn)行表達(dá)，克隆時應(yīng) 注意哪些問題？21. 假定你分離到一個 E. coli的Thy-突變體，并推測有可能是ThyA

36、基因突變。請設(shè)計 一個方案用PCR從染色體DNA擴(kuò)增突變的ThyA基因，測定突變的序列。(注：E. coli 野生型的ThyA基因的序列是已知的)22. 你在做Southern印跡分析，并且剛完成了凝膠電泳這一步。根據(jù)方案，下面一步驟 是用NaOH溶液浸泡凝膠，使 DNA變性為單鏈。為了節(jié)省時間，你略過了這一步， 直接將DNA從凝膠轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜上。然后用標(biāo)記探針雜交，最后發(fā)現(xiàn)放射自 顯影片是空白。錯在哪里 ？23. 切口移位(nick translation)標(biāo)記探針的主要步驟有哪些？24. 用EcoRI和Hind川分別切割同一來源的染色體DNA，并進(jìn)行克隆，在前者的克隆 中篩選到 A 基

37、因，但在后者的克隆中未篩選到 A 基因，請說明原因。25. 什么是 Western 印跡 ?它與 Southern 印跡有什么不同 ?26. 用一限制性內(nèi)切核酸酶切割Lac+ Tet+的質(zhì)粒載體，已知該酶識別的是4個堿基序列，并產(chǎn)生有兩個堿基突出的單鏈末端，該酶在 lac 基因內(nèi)有切割位點，并在第二個氨基 酸密碼子內(nèi)，該位點可以被任何氨基酸所取代而不影響酶活性。用該酶切割后，用DNA 聚合酶將單鏈末端補齊為雙鏈的平末端，然后重新連接成環(huán)，轉(zhuǎn)化Lac- Tets受體菌，篩選 Tetr轉(zhuǎn)化子，問：Lac的基因型是什么？并說明原因。27. 在基因工程中，為了在細(xì)菌細(xì)胞中表達(dá)真核生物的基因產(chǎn)物，為什么

38、通常要用cDNA 而不用基因組 DNA? 為什么要在 cDNA 前加上細(xì)菌的啟動子 ?答案1. 答：Sanger DNA 測序法是建立在兩個基本原理之上： (1)核酸是依賴于模板在聚合酶的 作用下由 5'端向 3'端聚合 (DNA 聚合酶參與了細(xì)菌修復(fù) DNA 合成過程 )；(2)可延 伸的引物必須能提供游離的 3'羥基末端，雙脫氧核苷酸由于缺少游離的 3'羥基末 端，因此會終止聚合反應(yīng)的進(jìn)行。如果分別用 4種雙脫氧核苷酸終止反應(yīng)，則會獲 得 4 組長度不同的 DNA 片段。通過比較所有 DNA 片段的長度可以得知核苷酸的 序列。2. 答： 鹽離子濃度不對，溫度

39、不對，甘油濃度過高。3. 答：回文序列是： 5'-CATATG-3 ，4. 答：GATATC；AAATTT ，因為它們是回文序列。5. 答： 注意星活性，先低鹽，后高鹽；先低溫酶，后高溫酶；并且可以直接在換酶前將第一 種酶失活，再加第二種酶，否則，易產(chǎn)生星活性?；蚴褂猛ㄓ镁彌_液。6. 答：由于反轉(zhuǎn)錄酶缺少在 E. coli DNA 聚合酶中起校正作用的 3'-5'外切核酸酶活性，所以聚 合反應(yīng)往往會出錯，在高濃度的 dNTP 和 Mg2+ 下，每 500 個堿基中可能有一個錯配。7. 答：所謂測序酶即是修飾了的 T7 DNA 聚合酶，是采用缺失的方法，從外切核酸酶結(jié)構(gòu)域

40、中 除去 28個氨基酸， 這樣使 T7 DNA 聚合酶完全失去了 3'-5'的外切核酸酶活性， 只有 5'-3' 聚合酶的活性，而且聚合能力提高了39倍，測序時常用此酶。8. 答：S1 核酸酶作圖是一種對 RNA 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的末端和剪接位點進(jìn)行作圖的方法。9. 答：YAC 帶有天然染色體所有的功能元件，包括一個著絲粒，一個DNA 復(fù)制起點，兩個端粒。YAC能夠容納長達(dá)幾百 kb的外源DNA，這是質(zhì)粒和黏粒辦不到的。大片段的插入 更有可能包含完整的基因，在染色體步移中每次允許更大的步移距離，同時能夠減少完 整基因組文庫所需的克隆數(shù)目。10. 答：(1) 獨立復(fù)制；(

41、2)有選擇標(biāo)記；(3)有獨特的酶切位點；(4)能轉(zhuǎn)化但不擴(kuò)散。11. 答： 含有細(xì)菌質(zhì)粒和克隆的真核生物 DNA 片段的雜種質(zhì)粒，有兩個復(fù)制起點和既能在細(xì)菌 又能在真核細(xì)胞中進(jìn)行選擇的選擇標(biāo)記， 所以， 很容易從一宿主轉(zhuǎn)到另一個宿主 (來回穿 梭)。12. 答：(1) 削減分子量 ( 除去非必需區(qū)和整合區(qū) )； (2)削減酶切位點；(3)添加選擇標(biāo)記；(4) 引入終止突變13. 答:(1) DNA半保留復(fù)制的原理，在體外進(jìn)行DNA的變性、復(fù)性和引物延伸。(2) 至少要預(yù)先知道足夠合成一對引物的靶DNA序列。14答:基因組克隆包含所有不在 cDNA中出現(xiàn)的內(nèi)含子。15答:化學(xué)合成一些長為10bp

42、含有EcoRI識別位點的短的 DNA片段，然后與待克隆片段兩端 連接起來，如果用 EcoRI切割這種連接片段，就會產(chǎn)生 EcoRI的單鏈末端。這種片段就 可以插入到任何 EcoRI的限制性內(nèi)切酶位點中。16.答:(1) COS位點可以自身環(huán)化；(2)可以利用COS位點包裝，噬菌體顆粒；可以感染寄主細(xì)胞；利用質(zhì)粒復(fù)制子復(fù)制，不整合、不裂解。17答：(1) 著絲粒；端粒； (3)ARS序列。18. 答:(1) 含有來自其他生物 DNA的酵母人工染色體，叫 YAC ；(2) 主要特性是可以克隆較大的外源片段。19. 答:PCR用雙引物，體內(nèi)復(fù)制用單引物。20. 答：應(yīng)注意的問題有：啟動子、密碼子、剪

43、接、分泌。21. 答:為了擴(kuò)增突變體的thyA基因，先設(shè)計一對引物，其中一個引物的序列與thyA基因的5'端相同，另一個引物同該基因的3'端互補。在引物的 5'端加上合適H類限制性內(nèi)切核酸酶的識別序列，以便于后來的克隆。將染色體DNA同引物混合后，進(jìn)行 PCR擴(kuò)增。然后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，純化擴(kuò)增片段，可以直接測序或克隆到合適的載體再測序。22. 答:如果你的雜交探針是雙鏈的，可能因為在加人雜交混合物之前忘記將探針變性而得到空白的放射自顯影結(jié)果。23. 答:(1) DNasel 造成切口；(2) DNA聚合酶III的5'、3'外切核酸酶進(jìn)行切割；(3)

44、DNA聚合酶川的5'、3 '合成酶進(jìn)行修補；在修補過程中，隨著切口 (nick)的移動，將放射性的底物摻人到雙鏈DNA中。24. 答：原因是：Hind川的切點在 A基因內(nèi)。25答:Western印跡是將蛋白質(zhì)經(jīng)電泳分離后從凝膠中轉(zhuǎn)移到固相支持物上，然后用特異性的抗 體進(jìn)行檢測。它與Southern的不同在于探針的性質(zhì)不同，在Western印跡中使用的探針是抗體(蛋白質(zhì))。26.答:基因型是lac-.原因是在該密碼子中插入了兩個堿基，造成了移碼突變，所以Lac的基因是缺陷的。27答:這是因為細(xì)菌沒有內(nèi)含子剪接系統(tǒng)，并且不能識別真核生物的啟動子之故。四、問答題：1. 說明限制性內(nèi)切

45、核酸酶的命名原則要點。2. 什么是限制性內(nèi)切核酸酶的星號活性？受哪些因素影向？3. 影響DNA連接酶催化連接反應(yīng)的因素有哪些？4. 什么是Klenow酶？有哪些活性？在基因工程中有什么作用 ？5 細(xì)菌堿性磷酸酯酶和小牛腸堿性磷酸酯酶有什么不同？在基因工程中有什么用途 ？6. 入外切核酸酶(lambda exo nuclease)基本活性是什么？在基因工程中有什么應(yīng)用？7. Mn2+、Mg2+對Dnase l(deoxyribonuclease ?)的活性有什么影響 ？Dnase I在基因工程中有什么作用？&質(zhì)粒如何維持在細(xì)胞中的穩(wěn)定？9由于基因工程是人為改變遺傳信息的操作，因此必須注意

46、被操作基因的安全，進(jìn)行 嚴(yán)格的監(jiān)控，質(zhì)粒載體的安全性是十分重要的。請問質(zhì)粒載體的安全條件包括哪幾 個方面？10. 為什么野生型的，噬菌體DNA不宜作為基因工程載體 ？11. 什么是藍(lán)白斑篩選法？12. 藍(lán)白斑篩選法為什么也會有假陽性？13. M13系列載體具有哪些優(yōu)缺點？14. 黏粒載體具有哪些特點與不足？15. 輔助噬菌體 DNA和相應(yīng)的噬菌粒是如何協(xié)同工作的？16. 如果知道某一基因的功能及其相應(yīng)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列組成，可以通過何種方法 克隆該基因？17. 什么是基因文庫？18. 什么是基因組文庫(genomic library)?構(gòu)建基因組文庫，涉及哪些基本過程？它同遺傳學(xué)上的基因庫有

47、什么不同？19. 什么是cDNA文庫(complementDNAlibrary)?同基因組文庫有何差別 ？20. 黏性末端連接法是最常用的連接方法，具有許多優(yōu)點，但是也有一些不足，請指出 這些不足之處。21. 什么是同聚物加尾連接法(homopolymer tails joining)?用何種方法加尾？具有哪些優(yōu) 缺點？22. 何謂接頭連接法 (1i nker ligatio n)?23. 什么是同裂酶？為什么說用同裂酶進(jìn)行體外重組效率最高？24. 為了大量獲得許多用于生化鑒定的產(chǎn)物，你想將擬南芥中的一個序列已知、編碼單體酶蛋白的基因在單細(xì)胞微生物中表達(dá)，你如何確保最終能得到產(chǎn)物？25. 某一

48、質(zhì)粒載體具有Tetr和Kanr的表型，在Kan抗性基因內(nèi)有一 Bgl I的切點。現(xiàn)用Bgl I切割該載體進(jìn)行基因克隆，問：(1)轉(zhuǎn)化后涂皿時應(yīng)加什么樣的抗生素?(2)培養(yǎng)后長出的菌落具有什么樣的抗性基因型?(3)如何利用抗性變化篩選到含有插入片段的重組體?26. 以pBR322 DNA作為載體，從四環(huán)素抗性基因區(qū)克隆外源DNA時，可采用環(huán)絲氨酸富集法篩選重組體，說明其基本原理和基本操作過程。27. 放射性抗體檢測法(radioactive antibody test)的基本原理是什么 ？28. 什么是隨機引物(random primer)?如何標(biāo)記DNA?29. 什么是印跡(blotting)

49、雜交？30. 什么是原位菌落雜交 (colony hybridization)?31. 說明Southern雜交的原理和方法。32. Northern印跡與Southern印跡有什么不同？33. 建立了一個基因文庫后，如何鑒定一個攜帶目的基因的克??？答案:1. 答：限制性內(nèi)切核酸酶采用三字母的命名原則，即屬名+種名+株名的各一個首字母，再加上序號?；驹瓌t：3-4個字母組成，方式是：屬名+種名+株名+序號；首字母：取屬名的第一個字母，且斜體大寫；第二字母：取種名的第一個字母，斜體小寫；第三字母：(1)取種名的第二個字母，斜體小寫；若種名有詞頭，且已命名過限制酶，則取詞頭后的第一字母代替。第四字

50、母：若有株名，株名則作為第四字母，是否大小寫，根據(jù)原來的情況而定,但用正體。 順序號： 若在同一菌株中分離了幾種限制酶，則按先后順序冠以I 、n、川、 等，用正體。2 答：n類限制酶雖然識別和切割的序列都具有特異性，但是這種特異性受特定條件的限 制，即在一定環(huán)境條件下表現(xiàn)出來的特異性。條件的改變，限制酶的特異性就會松 動，識別的序列和切割都有一些改變，改變后的活性通常稱第二活性，而將這種因 條件的改變會出現(xiàn)第二活性的酶的右上角加一個星號表示，因此第二活性又稱為星 活性。概括起來，誘發(fā)星活性的因素有如下幾種：高甘油含量(>5 %, v/ v)；限制性內(nèi)切核酸酶用量過高(>100U /

51、 ugDNA) ; (3)低離子強度(<25 mmol / L);高pH(8 . 0 以上)；(5)含有有機溶劑，如 DMSO，乙醇等；有非Mg2+的二價陽離子存在(如 Mn2+ , Cu2+ , C02+, Zn2+等)。3. 答：影響 DNA 連接酶催化連接反應(yīng)的因素有很多，但溫度對連接反應(yīng)的影響較大。黏性末端鏈通常以12° C 一 15° C最好，這種溫度有利于末端退火和連接酶的活性穩(wěn)定。溫 度高了難以進(jìn)行末端退火， 低于上述溫度會降低連接酶的活性。 平末端連接以室溫為宜， 因為平末端連接不存在 DNA的退火問題，但是溫度高于30C，連接酶特別不夠穩(wěn)定。平末端連

52、接時連接酶的濃度要比黏性末端連接時高 10-100 倍。 DNA 中有殘存的 tRNA 不會抑制DNA連接酶的活性，但是，如果NaCl的濃度高于150mmol / L ,則對連接反 應(yīng)有強的抑制作用。另外反應(yīng)體系中有 NH4+ 離子的存在， 對 E. coli DNA 連接酶具有激活作用。 E. coli DNA 連接酶需要 NAD+ 作輔助因子，而 T4 DNA 連接酶需要 ATP。4. 答：Klenow酶是1974年Klenow用枯草桿菌蛋白酶水解 DNA聚合酶I，得到兩個片段，其 中大片段的分子量為 75kDa ,它具有5'-3'聚合酶和3'-5'外切核酸

53、酶的活性， 小片段具有 5'-3'外切核酸酶活性。由于大片段失去了 DNA 聚合酶 I 中會降解 5'引物的 5'-3'外切核 酸酶的活性，所以在基因工程中更有用。Klenow 酶主要有下列用途：(1) 修復(fù)反應(yīng)，制備平末端可用 Klenow 酶修復(fù)限制性內(nèi)切核酸酶或其他方法產(chǎn)生的5'或 3'突出末端，制備平末端，這樣可以使原來具有不相容的黏性末端的 DNA 片段通過平末端重組。如在反應(yīng)系統(tǒng)中 加入放射性同位素標(biāo)記的脫氧核苷酸， 用這種末端填補的方法可以制備 3'末端標(biāo)記的探 針。用 Klenow 酶修復(fù) 5'突出末端的反

54、應(yīng)主要是利用了Klenow 酶的 DNA 聚合酶活性，是填補反應(yīng)；而修復(fù) 3'突出末端則是用 Klenow 酶的 3'-5'外切核酸酶的活性，是切割反應(yīng)。用 Klenow 酶的切割反應(yīng)來修復(fù) 3'突出末端是不理想的，改用T4DNA 聚合酶或其他的酶是更好的選擇。(2) 標(biāo)記 DNA3' 突出末端 (protruding end)該反應(yīng)分兩步進(jìn)行：先用 3'-5'的外切核酸酶活性除去 3'突出末端，產(chǎn)生 3'隱含末端，然 后在高濃度的標(biāo)記底物 ( -32p-dNTP) 存在下，使降解 (3'-5')作用與聚合

55、 (5'-3')作用達(dá)到平 衡。這種反應(yīng)也叫交換或取代反應(yīng)(exchange/ replacement reaction)。不過這一反應(yīng)用T4DNA 聚合酶的效果更好，因它的 3'-5'外切核酸酶活性較強。(3) 其他的一些用途：包括用雙脫氧末端終止法進(jìn)行DNA 序列分析、用于 cDNA 第二鏈的合成、 在定點突變中用于合成第二鏈、 用引物延伸法 (primer extension) 制備單鏈 DNA 探針等。5. 答：主要差別是：CIP68 ° C時失活，而BAP68 ° C穩(wěn)定，且耐酚抽提。應(yīng)用：(1) dsDNA 的 5'端脫磷酸，防止 DNA 的自身連接。但是用 CIP 處理后，最好將 CIP 除去 后，再進(jìn)行連接反應(yīng)。(2) DNA 和 RNA 脫磷酸，