槐米中蘆丁及槲皮素的提取分離及鑒定

1、槐米中蘆丁及槲皮素的提取分離及鑒定作者:日期:槐米中蘆丁及槲皮素的提取分離及鑒定槐米為豆科植物槐（Sophora japonica L .）的未開放花蕾。味苦性涼、具清熱涼血、止血之功。常用于治療多種出血癥：腸風(fēng)便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。槐米常炒炭應(yīng)用?；泵椎闹饕瘜W(xué)成分為蘆丁，其含量可達(dá)1216%，其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。蘆丁具有Vitp樣作用，可降低毛細(xì)血管脆性和調(diào)節(jié)通透性。臨床上用作毛細(xì)血管脆性引起的出血癥，常作為高血壓癥的輔助治療藥。目的要求1 通過蘆丁的提取與精制掌握堿酸法提取黃酮類化合物的原理及操作。2掌握槲皮素的制備原理

2、及操作。3. 熟悉紫外光譜在黃酮結(jié)構(gòu)鑒定中的應(yīng)用4通過蘆丁的結(jié)構(gòu)檢識，了解苷類結(jié)構(gòu)研究的一般程序和方法。實(shí)驗原理蘆?。?rutin ）： G7H0O6 3H2O,淺黃色針狀結(jié)晶，mp174- 178C （含三分子水）；188C（無水物）。難溶于冷水（1 : 800010000）,可溶于熱水（1: 180200）,熱甲醇（1: 10）, 冷甲醇（1: 100）,熱乙醇（1: 60）,冷乙醇（1: 650）;難溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、 乙酸乙酯、丙酮等，易溶于堿液。槲皮素（quercetin ） : G5H10O 2fO,黃色結(jié)晶，mp313314C（ 2 分子結(jié)晶水），316 C （無水物）

3、。能溶于冷乙醇（1: 290）,易溶于沸乙醇（1: 23）,可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰 醋酸、吡啶、丙酮等；難溶于水、苯、石油醚等溶劑。H0蘆丁為黃酮苷，分子中具有酚羥基，顯酸性，可溶于稀堿液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性質(zhì)進(jìn)行提取分離。利用蘆丁易溶熱水、熱乙醇，較難溶于冷水、冷乙醇的性質(zhì)選擇重結(jié)晶方法進(jìn)行精制。 蘆丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此進(jìn)行制備槲皮素。通過紙色譜及紫外光譜進(jìn)行黃酮及糖的鑒定。實(shí)驗內(nèi)容一、蘆丁的提取分離及精制方法槐米粗粉（50g）置1000ml燒杯中，加入500ml飽和石灰水，加熱，并維持pH89煮沸20分鐘，趁熱用脫脂棉濾過濾液藥渣用300ml飽和石灰

4、水煮沸10分鐘，維持pH89 趁熱濾過濾液藥渣（X）合并I在60C70C下用濃 HCI調(diào)pH至45靜置，抽濾沉淀低溫（80C）干燥，稱重。按 1: 200的比例加水,和加熱使溶解，趁熱濾過濾液靜置，抽濾，減壓干燥，計算收率If蘆丁精制品10方法利用蘆丁在冷熱溶劑中的溶解度不同進(jìn)行提取分離。槐米粗粉沸水煮沸510分鐘，反復(fù)2次趁熱濾過水提取液藥渣放冷沉淀析出（粗蘆?。崴亟Y(jié)晶或乙醇重結(jié)晶*蘆丁結(jié)晶、槲皮素的制備稱取精品蘆丁 1g置250ml燒瓶中加 2%HSQ200ml加熱回流1小時放冷，靜置，抽濾酸性濾液沉淀中和水洗兩次，干燥乙醇重結(jié)晶中性濾液稱重，計算收率濃縮黃色細(xì)針狀結(jié)晶濃縮液（槲皮素）

5、（供糖的PC鑒定）三、檢識反應(yīng)”1. 蘆丁的定性反應(yīng)取蘆丁適量，加乙醇使溶解，分成三份供下述試驗用：(1) 鹽酸鎂粉試驗：取樣品液適量，加2滴濃HCI、再酌加少許鎂粉，即產(chǎn)生劇烈的反應(yīng)，并逐漸出現(xiàn)紅色至深紅色。(2) 鋯-枸試驗：取樣品液適量，然后加 2 %ZrOCI2的甲醇溶液，注意觀察顏色變化，再 加入2%枸椽酸的甲醇溶液，并詳細(xì)記錄顏色變化。(3) a -萘酚-濃硫酸反應(yīng)：取樣品液適量，加等體積的 I0 %a -萘酚乙醇溶液，搖勻， 沿管壁緩加濃硫酸，注意觀察兩液界面的顏色。2. 蘆丁的UV(1) 鑒定試劑的配制 甲醇鈉溶液：取 0.25g金屬鈉，切碎，小心加入色譜甲醇10ml中，此液置

6、于玻璃瓶中，用橡皮塞密封。 三氯化鋁溶液：取 1g無水三氯化鋁，小心加入色譜甲醇20ml中，放置24小時后全部溶解即得。 醋酸鈉：用無水粉末醋酸鈉。硼酸飽和溶液：取無水硼酸，加入適量色譜甲醇、制成飽和溶液。(上述貯備液可放置六個月)(2) 蘆丁溶液的配制精密稱取蘆丁純品0.5g，用甲醇適量溶解至 50ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。(3) 光譜的測定 甲醇光譜：取樣品液置石英杯中，至200500nm內(nèi)進(jìn)行掃描，重復(fù)一次，觀察紫外光譜。 甲醇鈉光譜：取樣品液置石英杯中，加入甲醇鈉溶液3滴后，立即測定，放置5分鐘后再測一次。 三氯化鋁光譜，在盛有樣品液的石英杯中，加入三氯化鋁6滴，放置1分鐘后進(jìn)行

7、測定。測定后加入 3滴鹽酸溶液(鹽酸：水=1:1)再進(jìn)行測定。 醋酸鈉光譜：取樣品液約 3ml，加入過量的無水醋酸鈉固體，搖勻(杯底剩有約 2mg的醋酸鈉)，加入醋酸鈉后兩分鐘內(nèi)測定，5分鐘到10分鐘后再測定一次。3. 蘆丁及槲皮素的色譜支持劑：中速層析濾液（5 X 20cm展開劑：正丁醇-醋酸-水（4: 1: 5）上層樣品：自制槲皮素的乙醇溶液自制蘆丁的乙醇溶液對照品：槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品的乙醇溶液蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的乙醇溶液顯色劑：三氯化鋁乙醇溶液噴霧4. 糖的紙色譜檢識支持劑：中速層析濾紙（5 X 20cm）樣品：取水解后的濾液 10ml，水浴加熱，且在攪拌下加適量碳酸鋇細(xì)粉至PH中性，過濾，取濾液并濃縮至2mI左右，放冷后，供紙色譜點(diǎn)樣用。對照品：1 %葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品醇溶液及 1%鼠李糖標(biāo)準(zhǔn)品醇溶液展開劑：正丁醇-醋酸-水（4: 1: 5）上層顯色劑：噴以鄰苯二甲酸苯胺溶液，105 C烘烤5分鐘至斑點(diǎn)顯色清晰。實(shí)驗說明及注意事項1用石灰水調(diào)節(jié)蘆丁提取溶液的 PH既可以達(dá)到堿提取蘆丁的目的，還可以除去槐米 中含有的大量粘液質(zhì)。但鈣離子濃度及 pH值均不宜過高，否則多余的鈣能與蘆丁形成螯合 物沉淀，同時黃酮母核在強(qiáng)堿性條件下易被破壞。2.用HCI調(diào)PH時，應(yīng)注意PH不要過低，因為 PH過低（PH2以下）會使蘆丁形成钅羊鹽 而使已形成的沉淀重新溶解，同時黃酮母核也會在強(qiáng)堿性條件下被破壞，導(dǎo)致