生化檢驗中的定標(biāo)

1、定標(biāo)的意義：定標(biāo)就是要找出一個參考點，就是一個K值（或F值）。它是由儀器與試劑共同確定下來。當(dāng)我們測定一個標(biāo)本時， 無論是手工或全自動生化分析儀，測出來的值只是一個 吸光度，這個吸光度對我們沒有什么意義， 我們要把這個吸光度轉(zhuǎn)化成一個濃度或是酶的活性，那就要乘上一個K值，計算出來的結(jié)果對我們就有意義了。K值就是我們通過定標(biāo)找出來的。一般來說測定K值的最低要求是用標(biāo)準(zhǔn)品和試劑空白來測定，經(jīng)過儀器測定出這兩個吸光度，即標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度和試劑空白的吸光度。K=標(biāo)準(zhǔn)濃度/（A標(biāo)準(zhǔn)A試劑空白）PS: A表示吸光度標(biāo)準(zhǔn)液的濃度我們是知道的，這兩個吸光度可以由儀器測出，這樣就得出一個K值。任何標(biāo)本，用其吸光度

2、乘以 K值就得到了其濃度值。因此，K值具有非常決定性的意義，可以決定標(biāo)本的準(zhǔn)確性。K值的決定因素：我們看看K值會受到什么影響呢？第一，標(biāo)準(zhǔn)液的濃度一定要準(zhǔn)確（標(biāo)準(zhǔn)液最好與標(biāo)本一樣是以血清為基質(zhì)的）。第二，標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度與試劑空白的吸光度一定要準(zhǔn)確。吸光度受儀器、試劑的影響， 如果儀器穩(wěn)定，試劑也穩(wěn)定，那 K值就穩(wěn)定。儀器和試劑是影響K值的主要因素。如何確定K值是準(zhǔn)確的？一般我們用質(zhì)控血清來檢查， 最好是兩種水平的質(zhì)控來檢查，如果質(zhì)控結(jié)果很好， 可以說K值是準(zhǔn)確的，用這個 K值計算出來病人的結(jié)果也是準(zhǔn)確的，所以K值非常關(guān)鍵。K值的真面目：K值實際上代表了斜率，截距代表試劑空白，試劑空白每天都在變

3、化，所以K值的穩(wěn)定性由儀器與試劑決定，如果儀器與試劑都十分穩(wěn)定，那K值也很穩(wěn)定。多長時間定一次標(biāo)合適？這要看您試劑的穩(wěn)定性，質(zhì)控結(jié)果不好，有些項目做試劑空白可以解決，有些項目要做兩點定標(biāo)。酶的項目如何確定 K值：一是計算出來的理論 K值；K = （TV X 1000）/（SV X L X £）二是用有酶項目的 定標(biāo)液得出K值（K=標(biāo)準(zhǔn)濃度/（A標(biāo)準(zhǔn)A試劑空白）：目前各公司可 以提供多項目的定標(biāo)液，不僅有底物類的項目，也有酶類的項目。生化檢驗中的各種空白概念時間:2009-5-8 9:54:09點擊:61對所謂“試劑空白""樣本空白""水空白&q

4、uot;"杯空白“等“空白“名詞，有些同行可能感到困惑.特此匯集了 一下各種言論（包括本論 壇高手們發(fā)表的一些意見 ）并結(jié)合自己的理解，總結(jié)如下，希望大家指正和 補充：空白概念區(qū)別要點:*空白二只含*的空白（只含*的吸光度）1、試劑空白：由于生化測試測量的吸光度為相對吸光度，所以從理論上說，所有終點法的測試都需要把試 劑本身的吸光度扣除，試劑本身的吸光度就是試劑空白。測量方法是按照正常測試的試劑和樣本量，把樣本換成蒸餾水來測量。在傳統(tǒng)手工方法中，每次測定都要做至少三個管：測定管、標(biāo)準(zhǔn)管、空白管。其中空白管是試劑加蒸餾水，測出來也就是試劑空白。因為操作環(huán)境、儀器狀態(tài)、試劑穩(wěn)定性等變異，

5、所以要求每 次都要測定試劑空白，稱為實時試劑空白。在全自動分析儀上，大體上是模擬手工操作。但許多全自動分析儀為追求速度，在設(shè)計上采 用一些折中方法來測定試劑空白。以日立全系列生化儀為例。該系列分析儀是做不了實時試劑空白，因為它們?nèi)窍燃尤霕颖竞蠹釉噭?，為了折中，只好在定?biāo)時做一個試劑空白，保存起來， 需要扣除試劑空白時再減這個預(yù)先保存的值。這種做法，對于比較穩(wěn)定的試劑來講，對結(jié)果影響不大。通俗的講，日立的儀器工作流程中首先是將標(biāo)本加入到比色杯中，然后依次加入R1試劑、R2試劑，所以試劑空白在每個測定項目曲線中是無法看到的。但是7170從CALIBRATION 中是可以看到的，S1ABS就是代表

6、試劑空白吸光度，在CALIBRAT I0N 畫面里的下方找到 ReactionMonitor （反應(yīng)監(jiān)察），其中 STD（1）就是代表試劑空白反應(yīng)曲線 .為了減小誤差，日立儀器會連續(xù) 做兩次測定，所以你看到 FIRST和SECOND兩條，計算時是取他們的平均值。做試劑空白目的之一就是觀察試劑是否穩(wěn)定，積極采取措施糾正。 對于日立的這種試劑空白測定很多儀器都采用這種方法，也叫做試劑空白校準(zhǔn)?？偟恼f來，自動生化儀上的試劑空白一般表現(xiàn)為零點吸光度，該吸光度是通過校準(zhǔn)確立的。2、樣本空白：由于溶血、脂血、黃疸等情況，會導(dǎo)致樣本本身的吸光度對測試結(jié)果造成影響。所以對樣本 本身吸光度的測量，即樣本空白，可

7、以去除這方面的影響。測量方法是按照正常測試的試劑和樣本量，把試劑換成蒸餾水或生理鹽水來進(jìn)行測量。自動生化儀上，很難界定樣本空白。消除樣本空白有關(guān)的大約有如下幾點精品a) .在雙試劑測定時，加入試劑1和樣品后的吸光度可一定程度上扣除樣本空白，所以有單試劑不能扣除樣本空白的說法。b) .現(xiàn)在優(yōu)質(zhì)的試劑的抗干擾能力都比較強，比如有些雙試劑，R1加入后先和樣本孵育一段時間，將血紅蛋白、脂肪、膽紅素等反應(yīng)掉，再加入 R2開始測定反應(yīng)。在一定范圍內(nèi)都可以消除樣本空白。c) .現(xiàn)代全自動生化儀大多采用雙波長測定.雙波長測定的原則是根據(jù)干擾組分和待測物質(zhì)吸收光譜的峰形特征，選擇兩個波長和，使干擾組分在這兩個波長處的吸光系數(shù)相等，而使待測物質(zhì)在兩波長處的吸光系數(shù)有顯著差別。以兩波長分別測定分析溶液的吸光度，以兩個吸光度值之差( A)計算。這也可以扣除一部分樣本空白.d) .有些儀器，例如日立系列，有專門的“血清信息”功能的設(shè)置。做法都是單獨占用一個空白通道來計算，這也叫做樣品空白校準(zhǔn)。3、水空