液上氣相色譜法測(cè)定尿丙酮的臨床應(yīng)用

1、    液上氣相色譜法測(cè)定尿丙酮的臨床應(yīng)用        脂類代謝是體內(nèi)重要的代謝之一。心肌和骨骼肌能徹底氧化脂肪酸生成H2O和CO2，并提供能量，若肝組織由于缺乏某些酶，即轉(zhuǎn)入病理性失常代謝，常不能將脂肪酸徹底氧化而產(chǎn)生酮體1。酮體是乙酰乙酸、羥基丁酸和丙酮的總稱，三者各占一定比例建立一個(gè)可逆的動(dòng)態(tài)平衡存在于血液和尿液中，臨床上常以酮體為指標(biāo)，診斷某些疾病的發(fā)生，但一般的化學(xué)方法難以檢出，只有嚴(yán)重病理變化時(shí)方可檢出2。為建立一種高靈敏的檢驗(yàn)方法，作為脂類代謝的動(dòng)態(tài)觀察，實(shí)驗(yàn)

2、以預(yù)防為主的治療目的，為此我們建立了液上氣相色譜法測(cè)定尿丙酮的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。 材料與色譜條件1.實(shí)驗(yàn)對(duì)象：收集我院年齡在1821歲，普通膳食的100名(男、女各半)青年學(xué)生晨尿，作為正常對(duì)照組；收集我院附屬醫(yī)院和泰安市中心醫(yī)院糖尿病患者及感冒患者晨尿作為實(shí)驗(yàn)組。2.所用化學(xué)試劑均為分析純。3.氣相色譜條件：GC7A氣相色譜儀(日本島津)，1.6m×3mm玻璃柱，固定液質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%改性聚乙二醇20 000，擔(dān)體為酸洗101白色擔(dān)體(6080目)；氣體流速：N250mLmin，H2=50 mL/min空氣0.3kg/cm2；溫度：氣化室、檢測(cè)器100，柱溫59；檢測(cè)器：FID；靈

3、敏度：102，ATTEN0，MINAO200，SPEED2.5mm/min。方法與結(jié)果1.標(biāo)準(zhǔn)液的配制：準(zhǔn)確配制0.079、0.395、0.790、1.975、3.950、5.925、7.900 mol/L濃度的丙酮液，內(nèi)加0.229 5 mg乙酸乙酯(內(nèi)標(biāo))為標(biāo)準(zhǔn)液。2.線性實(shí)驗(yàn)：各取2mL不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，進(jìn)行液上氣相色譜法測(cè)定。分別以濃度(C.mol/L)為縱座標(biāo)，峰高(h.mm)為橫座標(biāo)作線性回歸，C0.6637H0.0331，r0.9998。3.回收率實(shí)驗(yàn)：取正常尿液并測(cè)定其濃度，在125 mL和250mL尿液中加1.975mg標(biāo)準(zhǔn)品，測(cè)定其濃度并按下式計(jì)算?；厥章?測(cè)定量尿中含量)

4、/(加入量)×100，平均回收率為98.50%。4.精密度實(shí)驗(yàn)：以0.790mol/L濃度標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行重復(fù)測(cè)定10次，測(cè)得平均值(n10，±s)0.7727±0.0260，CV%3.03。5.尿樣的處理：將收集的晨尿裝于250 mL玻璃瓶中，膠塞密封，于37恒溫20min，用10 mL注射器取2mL液上頂空氣體，進(jìn)氣相色譜儀測(cè)定。6.測(cè)定結(jié)果：采用液上氣相色譜法對(duì)正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行尿丙酮的含量測(cè)定，本法5min即可完成一個(gè)尿樣測(cè)定，測(cè)定結(jié)果列于表1。表1健康人與病理性尿樣丙酮含量Tab 1Ketonuria concentration in urine of h

5、ealthy and patientsGroupnKetonuria(±s,mol·L1）Healthy persons 1000.0193±0.0010*Influenzal patients150.8444±0.2540*Diabetic patients300.8189±0.3180*?*P0.01,vs healthy persons 討論1.液上氣相色譜法是近年來發(fā)展起來的一種簡(jiǎn)便、快速的分離分析技術(shù)3。液上氣相色譜分析是利用氣相色譜法來分析密閉體系中液體或固體樣品達(dá)到相平衡時(shí)的氣體成分，改進(jìn)了樣品的處理方式，具有許多優(yōu)點(diǎn)，因此，在食

6、品、環(huán)保、醫(yī)藥、衛(wèi)生等領(lǐng)域中得到了廣泛的應(yīng)用49。尿液中酮體含量極低，而丙酮?jiǎng)t更少，采用化學(xué)方法檢測(cè)則無法實(shí)現(xiàn)，而采用此法測(cè)定尿丙酮，能很好的完成這一任務(wù)。該法樣品處理極簡(jiǎn)便，不需加任何化學(xué)試劑，僅根據(jù)物理相平衡的原理達(dá)到樣品處理的目的，大大提高了檢測(cè)的靈敏度，消除了尿液中其它成分的干擾。由于色譜中無干擾峰，保證了定性、定量的準(zhǔn)確性；峰形對(duì)稱，無拖尾現(xiàn)象，這又保證了測(cè)定結(jié)果的可靠性。2.色譜條件的選擇是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。實(shí)驗(yàn)證明，分析尿丙酮聚乙二醇20 000固定液的性質(zhì)和濃度是影響尿丙酮分析的重要因素，濃度過大，分離度好，但保留時(shí)間增長(zhǎng)，使分析周期變大，造成分析速度慢；若濃度過小，分離度差，分

7、析速度快，但達(dá)不到良好的分離分析結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)將聚乙二醇20 000進(jìn)行改性，采用10%的濃度，達(dá)到了分析速度快，分離效果好的目的。3.由測(cè)定結(jié)果可見，此法可應(yīng)用于醫(yī)學(xué)研究，觀察體內(nèi)代謝產(chǎn)物的動(dòng)態(tài)變化，臨床上也可運(yùn)用此法進(jìn)行檢測(cè)，用于某些疾病的診斷?？傊荷蠚庀嗌V法測(cè)定尿丙酮的含量，樣品處理簡(jiǎn)單，分析速度快，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，是臨床診斷的有利手段。作者單位：孫樹英王晶王洪存泰山醫(yī)學(xué)院(泰安 271000)楊景民荷澤醫(yī)學(xué)?？茖W(xué)校參考文獻(xiàn)1張昌穎主編.生物化學(xué).第2版，北京：人民衛(wèi)生出版社，1985，203204.2李其英主編.實(shí)用臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn).第1版，武漢：湖北人民出版社，1982

8、：124.3施梅兒.頂端空間氣相色譜法.色譜，1987，5：355.4黃業(yè)茹，歐慶瑜.青霉素中殘留有機(jī)溶劑的頂空氣相色譜分析.藥物分析，1987，7：345.5鄧浩博.空心膠囊經(jīng)環(huán)氧乙烷滅菌后殘留量的頂空氣相色譜法測(cè)定.藥學(xué)通報(bào)，1987，22：610.6徐利英.氣相色譜分析強(qiáng)力霉素中乙醇含量.藥物分析，1994，14：35.7Page B D,Charbonneau C F.Headspace gas chromatographic determination of methylene chloride in decaffeinated and coffee with electrolytic detection. J Assoc Off Anal Chem, 1984,67:757.8Koppen.B,Dalgaard L.Headspace gas chromatographic determination of -galactosidase activity using electron capture detection.J Chromatog, 1985,321:385.9Pfaffli P,Svartling N.Assay of methyl me