細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)ppt課件

1、 細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)一、培育基1、外周血淋巴細(xì)胞染色體制備培育基配制 新生小牛血清 20% RPMI1640根本培育基 80% 植物血球凝集素PHA) 按闡明配置 2、絨毛、羊水細(xì)胞培育基配置 胎牛血清 20% 1640、HamF10培育基原液 80%二、細(xì)胞培育方法1、人外周血淋巴細(xì)胞染色體制備 1方法 靜脈血0.3/5ml培育基 37培育72小時(shí) 收細(xì)胞前2-3小時(shí)加秋水仙素 制片，染色2特點(diǎn) 取材方便、方法穩(wěn)定、易掌握和推行3意義 檢查該個(gè)體體細(xì)胞核型2、羊水細(xì)胞染色體制備 羊水細(xì)胞主要來(lái)自胎兒皮膚、胃腸道、呼吸道、泌尿生殖道的粘膜上皮。1方法：培育15天左右2特點(diǎn)： 1孕期為16-20周取

2、材，B超監(jiān)測(cè)取材，專人操作。 2培育15天左右 3方法復(fù)雜、設(shè)備較昂貴、勝利率較低。3平安性： 流產(chǎn)率約1%左右4) 意義：檢測(cè)胎兒核型3、絨毛細(xì)胞染色體制備 絨毛為受精卵經(jīng)有絲分裂衍生出來(lái)的胎兒附屬構(gòu)造1方法：直接法 培育法：短期和長(zhǎng)期培育2特點(diǎn)： 1孕8-10周取材，B超檢測(cè)，嚴(yán)厲無(wú)菌，專人操作。 2培育15天左右或直接制片 3直接法較為簡(jiǎn)單，可防止母體污染，但染色體形狀較差，分裂期細(xì)胞少。3平安性： 流產(chǎn)率約2-4%4意義： 檢測(cè)胎兒核型，進(jìn)展早期診斷。4、骨髓細(xì)胞染色體制備技術(shù) 直接法或培育法 意義： 1血液病的染色體異常檢測(cè) 2骨髓細(xì)胞染色體畸變作為遺傳物質(zhì)受損檢測(cè)目的較為靈敏。三、

3、染色體顯帶技術(shù)1、Q顯帶1特點(diǎn)： 熒光染料染色 1、9、16號(hào)染色體著絲粒區(qū)和Y染色體長(zhǎng)臂部分區(qū)域熒光明顯2優(yōu)點(diǎn)：帶紋明晰3) 缺陷: 試劑儀器價(jià)高,帶紋易退色2、G顯帶1特點(diǎn)： 胰酶處置、Giemsa染色、帶紋與Q帶類似2優(yōu)點(diǎn)： 制造方便、費(fèi)用低廉、標(biāo)本易保管3缺陷： 帶紋不及Q顯帶明晰3、C顯帶 著絲粒區(qū)深染 確定著絲粒數(shù)目和位置 1、9、16著絲粒區(qū)深染而大 Y染色體長(zhǎng)臂部分深染四、熒光原位雜交技術(shù)fluorescence in-situ hybridization, FISH 1、根本原理 指利用已進(jìn)展熒光標(biāo)志的探針與細(xì)胞、組織切片上的核酸進(jìn)展雜交，檢測(cè)特異序列的DNA或RNA。 它是

4、在細(xì)胞遺傳學(xué)、分子遺傳學(xué)和免疫學(xué)相結(jié)合的根底上開(kāi)展起來(lái)的一項(xiàng)技術(shù)。2、探針標(biāo)志的方法 直接法進(jìn)展標(biāo)志 間接法進(jìn)展標(biāo)志3、 FISH技術(shù)的特點(diǎn) 操作操作簡(jiǎn)便,探針標(biāo)志后穩(wěn)定,一次標(biāo)志后可運(yùn)用二年. 方法敏感,能迅速得到結(jié)果. 在同一標(biāo)本上,可同時(shí)檢測(cè)幾種不同探針. 不僅可用于分裂期細(xì)胞染色體數(shù)量或構(gòu)造變化的研討,而且還可用于間期細(xì)胞的染色體數(shù)量及基因改動(dòng)的研討. 4、FISH在細(xì)胞遺傳學(xué)中的運(yùn)用1反復(fù)序列的探針衛(wèi)星(satellite)探針 衛(wèi)星DNA探針主要檢測(cè)人染色體的著絲粒 衛(wèi)星DNA位于端著絲粒染色體及各號(hào)染色體的異染色體質(zhì)周圍 經(jīng)典衛(wèi)星DNA(classic-saiellite DNA

5、)位于染色體1、9、15、16和Y染色體長(zhǎng)臂異染色質(zhì)周圍 臨床運(yùn)用： 羊水細(xì)胞可不培育直接篩查21三體Down氏綜 合片18三體Edward綜合征，13體Patau 綜合征，45、XO(Torner氏綜合征)和47XXYKlinfelter綜合征。 2單一序列探針 確定堿基突變、基因缺失、基因定位 3全染色體探針(whole chromosome painting probe,WCP) 又稱染色體涂染探針 確定染色體構(gòu)造畸變 染色體分析技術(shù)一、選擇分散程度較好、形狀規(guī)整的分裂相。 能區(qū)分染色體的大小和著絲粒位置二、對(duì)20-30個(gè)分裂相進(jìn)展染色體計(jì)數(shù)。 對(duì)不同染色體數(shù)目的分裂相進(jìn)展記錄 區(qū)分制片時(shí)染色體喪失還是核型異常三、選擇分裂相進(jìn)展核型分析。 外周血淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)分析20個(gè)分裂相，分析5個(gè)核型，骨髓細(xì)胞分析20個(gè)核型。 染色體數(shù)目異常時(shí)，2個(gè)以上分裂相具有一樣核型視為異常。四、染色體檢測(cè)報(bào)告 報(bào)告單位 姓名、性別、年齡 主要臨床病癥、本人有害有毒射線等接觸史、親屬中流產(chǎn)和遺傳病史 核型圖 結(jié)果、分析者、復(fù)審者、日期小結(jié)小結(jié) 掌握外周血淋巴細(xì)胞、絨毛細(xì)胞、羊水細(xì)掌握外周血淋巴細(xì)胞、絨毛細(xì)胞、羊水細(xì)胞染色體檢查的特點(diǎn)和意義。胞染色體檢查的