人參皂苷常規(guī)水提取法和新提取方法的比較研究_張春紅

1、T h e D e t e r m i n a t i o n o f C o n t e n t s o f 8G i n s e n o s i d e s i n E x t r a c t i o n o f P a n a x g i n s e n g b y H P L CC A OJ u n -l i n g 1,2,L I Z u -l u n 2,F uQ i a n g 2,Y A ND a n 2,L I A OQ i n g -w e n 3,X I A OX i a o -h e1(1.I n s t i t u t e o f C h i n e s eM e d

2、 i c i n e ,302H o s p i t a l o f P L A ,B e i j i n g 100039,C h i n a ;2.C o l l e g eo f P h a r m a c y ,C h e n g d uU n i v e r s i t yo f T C M,C h e n g o l u 610075,C h i n a ;3.C o l l e g eo f P h a r m a c y ,H u n a n U n i v e r s i t y o f T C M ,C h a n g s h a 410004,C h i n a A b

3、s t r a c t O b j e c t i v e :T o e s t a b l i s ha m e t h o d t o d e t e r m i n e t h e c o n t e n t s o f 8g i n s e n o s i d e s i ne x t r a c t i o no f P a n a x g i n s e n g b y H P L C .M e t h o d s :T h e s a m p l e w a s a n a l y z e do n a n O D S c h r o m a t o g r a m c o l

4、u m n (K r o m a s i l 250m m×4.6m m ,5m ,w i t hm o b i l e p h a s e o f a c e t o -n i t r i l e -w a t e r (g r a d i e n t e l u t i o n a t f l o wr a t e 1.0m l /m i n a n dd e t e c t i o n a t w a v e l e n g t h o f 203n m .R e s u l t s :R S Do f s t a b i l i t y ,p r e c i s i o na

5、 n d r e c u r r e n c y w a s 0.55%2.26%,0.85%1.93%a n d 0.97%2.72%r e s p e c t i v e l y .C o n c l u s i o n :T h i s m e t h o dc a n b e g o o df o r t h e c o n t e n t d e t e r m i n a t i o n o f g i n s e n o s i d e .K e yw o r d s H P L C ;G i n s e n o s i d e ;C o n t e n t d e t e r

6、m i n a t i o n人參皂苷常規(guī)水提取法和新提取方法的比較研究張春紅,張連學(xué)*,李向高,劉雙利,劉桓宇,趙向南(吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院,吉林長春130118摘要為尋找新的人參皂苷提取方法,提高人參皂苷的提取率和純度,簡化操作,本文以人參總皂苷、人參皂苷-R b 1、-R b 2、-R c 、-R d 、-R e 、-R g 1等9種主要單體皂苷收率為指標(biāo),利用大孔吸附樹脂法除去雜質(zhì),高效液相色譜法進行含量測定,比較了超聲堿水提取法和超聲常規(guī)水提取法的優(yōu)劣。結(jié)果表明堿水提取法在總皂苷和各單體皂苷收率上均比常規(guī)水提法有明顯提高,經(jīng)t 檢驗證明二者之間有極顯著的差異(P <0.001

7、。從總皂苷收率和各單體皂苷收率綜合考慮,超聲堿水提取法總皂苷收率高,純度大,各主要單體皂苷含量高,操作簡單方便,適合工業(yè)化生產(chǎn)。關(guān)鍵詞人參皂苷;提取;新方法中圖分類號:R 284.1文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A 文章編號:1001-4454(200610-1040-03基金項目:國家自然科學(xué)基金項目(N O .30370159作者簡介:張春紅(1975-,女,在讀博士,主要研究方向:中藥活性成分。*通訊作者:張連學(xué),男,博士,教授,博士生導(dǎo)師,研究方向:中藥G A P 規(guī)范化種植及中藥活性成分的研究。T e l :(04314533087,E m a i l :z l x b o o k s e a 163

8、.c o m 。人參為五加科植物人參P a n a x g i n s e n gC .A .M e y 的干燥根。其主要活性成分為人參皂苷(g i n s e n o s i d e ,目前為止已分得的單體皂苷有40多種,其中主要為人參皂苷R a 1、R a 2、R a 3、R b 1、R b 2、R b 3、R c 、R d 、R e 、R f 、R g 1、R g 2、R g 3、R h 1等。人參須根中人參皂苷以R b 1、Rc 、Rd 和Re 居多,含量約占8%左右。人參總皂苷提取方法較多,如浸漬法、回流提取法、超聲波提取法、超臨界萃取法和微波法等1,其中超聲波法提取時間短、收率高、

9、溫度低,是目前應(yīng)用較廣泛的方法。提取所用溶劑有水、甲醇、乙醇和正丁醇等,目前多以甲醇、乙醇為主2,但甲醇對各種物質(zhì)都有較高的溶解度,使得提取液中雜質(zhì)較多,特別是脂溶性色素較多,導(dǎo)致所制備的總皂苷純度低,外觀顏色深,而且甲醇和乙醇等中等級性的溶劑對丙二酰基系列的人參皂苷(極性較大的提取率較低,用兩者作溶劑,因會損失一部分皂苷(丙二?；愒碥斩箍傇碥债a(chǎn)率降低。用水作溶劑,丙二酰基類皂苷可以充分提取,但水溶性雜質(zhì)較多,而且難于過濾,易發(fā)霉變質(zhì)。為了解決以上問題,本文嘗試用超聲堿水提取法來提取人參皂苷,并將其與超聲常規(guī)水提法進行比較。結(jié)果表明,超聲堿水提取法提取效率高,總皂苷純度好,主要單體皂苷收率

10、高,而且操作簡便省時,不易發(fā)霉變質(zhì),更適合于工業(yè)化生產(chǎn)。1材料、試劑與儀器1.1材料與試劑人參須根由撫順第一參廠提供,并經(jīng)鄭友蘭教授鑒定;人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品R b 1、R b 2、R b 3、R c 、R d 、R e 、R f 、R g 1、R g 2購于吉林省藥品檢驗所。試劑主要有甲醇、正丁醇、無水乙醇、95%乙醇、冰醋酸、乙酸乙酯、氯仿等均為分析純,薄層層析硅膠G (化學(xué)純由青島海洋化工有限公司制造,大孔吸附樹脂(苯乙烯型共聚體由天津市海光化工有限公司生產(chǎn)。1.2儀器H P L C 色譜儀(日本島津,天孚牌電子計數(shù)天平(500g /0.001g ,310g /0.01由金羊天平儀器公司生產(chǎn),

11、超聲波清洗器(K Q -250B 由昆山儀器廠出品,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器R E -52A 由上海亞榮生化儀器廠生產(chǎn),電子恒溫水浴鍋由天津市泰斯特儀器有限公司生產(chǎn)。3、4:稱取人參須根粗粉50g 加規(guī)定量水浸泡過夜,常溫超聲提取3次(溶劑量依次為:500m l 、400m l 、300m l ,超聲時間每次303.8228(r =0.99995;人參皂苷-R g 2:Y =4753785從表1、表2結(jié)果可以看出:(1從粗總皂苷收率上比較,常規(guī)水提取法(9.23%與堿水提法(9.51%兩者無顯著性差異(P>0.05;從精制總皂苷收率看,堿水提法(7.99%大高于常規(guī)水提取法(6.08%,有極顯著差異(

12、P <0.001。(2從單體皂苷收率角度看,與常規(guī)水提法相比,堿水提取法有大幅度的提高,經(jīng)t 檢驗證明有極顯著差異,其中人參皂苷-R b 1、-R b 2、-R c 、-R d 、-R e 、-R g 1增幅較大,均約為2%以上。綜上可以看出堿水提取法均優(yōu)于常規(guī)水提取法。表1不同提取方法精制總皂苷中各單體皂苷含量的比較( x ±s ,n=3皂苷種類提取方法常規(guī)水提法(%堿水提法(%g i n s e n o s i d e -R b 17.78±0.2561.00±0.0461.10±0.039*注:與常規(guī)水提法比較,*P <0.05,*P

13、<0.01,*P <0.001表2不同提取法人參總皂苷收率的比較( x ±s ,n=3提取方法取樣量(g 粗總皂苷收率(%精制總皂苷收率堿水提法509.51±0.0837.99±0.116*注:與常規(guī)水提法比較,*P <0.05,*P <0.01,*P <0.0014討論堿水提取法優(yōu)于常規(guī)水提法是由于人參須根中含有大量丙二?；盗械娜藚⒃碥?丙二?；藚⒃碥?R b1、-R b2、-R b3、-R e等,其在弱堿性環(huán)境中能脫去?；?使其變成相應(yīng)的人參皂苷,極性變小,易被大孔樹脂吸附(丙二?；惾藚⒃碥諛O性過大不易被大孔樹脂吸附,常常被

14、當(dāng)作水溶性雜質(zhì)而除去,使人參皂苷提取率大大增加。常規(guī)水提法提取人參皂苷時過濾十分困難是由于人參中粘多糖與濾紙纖維形成一種膜狀物質(zhì)阻礙了提取液的抽濾。堿水提取法提取人參皂苷時,人參中粘性多糖的葡萄糖醛酸基與水溶液中氫氧化鈣生成鈣鹽沉淀,不能通過濾紙,使過濾速度加快,同時也減少了濾液中的水溶性雜質(zhì)。常規(guī)水提取法提取人參皂苷時,提取液非常容易發(fā)霉變質(zhì),堿水提取法提取液為堿性,不易發(fā)霉變質(zhì)。參考文獻(xiàn)1張晶,陳全成,鄭毅男,等.不同提取方法對人參皂苷提取率的影響.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2003,25(1:71-72.2周國明,謝玉瓊,吳正中,等.正交實驗法提取人參皂苷工藝研究.中國藥房,2002,13(1:

15、18-19.3蔡雄,劉中秋,王培訓(xùn),等.大孔吸附樹脂富集純化人參總皂苷工藝.中成藥,2001,23(9:631-634.4張春紅,張崇禧,鄭友蘭,等.浸漬法提取人參皂苷最佳工藝的研究.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2001,25(1:73-74,78.(2006-03-29收稿三種鬼臼毒素類化合物的鑒定朱培芳,張洪彬,趙靜峰(云南大學(xué)化學(xué)科學(xué)與工程學(xué)院,云南昆明650091摘要目的:三種鬼臼毒素類化合物鬼臼毒素、苦鬼臼毒素和異鬼臼苦酮在液相色譜上很容易混淆,甚至誤認(rèn),為此進行了一系列的實驗,使這三種化合物在不同的色譜條件下可以彼此分離,用于鬼臼類植物桃兒七化學(xué)成分判定。方法:高效液相色譜法。結(jié)論:鬼臼毒素

16、、苦鬼臼毒素和異鬼臼苦酮在液相色譜上可以互相分離,實驗用鬼臼類植物桃兒七中含有該三種化學(xué)成分。關(guān)鍵詞鬼臼毒素;苦鬼臼毒素;異鬼臼苦酮;桃兒七;高效液相色譜中圖分類號:R284.1文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A文章編號:1001-4454(200610-1042-04鬼臼毒素(p o d o p h y l l o t o x i n,C22H22O8屬于木脂體類(l i g n a n s,主要存在于小檗科多年生草本類群鬼臼亞科八角蓮屬(D y s o s m aW o o d s o n、桃兒七屬(S i n o p o d o p h y l l u m Y i n g、山荷葉屬(D i p h y l

17、l e i a M i c h x及足葉草屬(P o d o p h y l l u m植物中。這些植物由于都具有盾狀著生的葉,莖中具有多數(shù)散生微管束,花不具蜜腺,漿果含鬼臼毒素等一些共同特征而被看作一個自然而相對獨立的類群,習(xí)慣上稱為鬼臼類植物1。鬼臼類植物是一類含有顯著生物活性,具有悠久應(yīng)用歷史的藥用植物。我國漢代的神農(nóng)本草經(jīng)中就有鬼臼的記述。歷來主要用于蛇咬傷、癰癤腫毒、跌打損傷、風(fēng)濕筋骨痛及氣管炎等癥2、3。國外的美洲桃兒七P o d o p h y l l u m p e t a t u m 在民間亦供藥用;早在1880年,P o d w y s s o t z k i i就從美洲桃兒七的樹脂中分出結(jié)晶性成分鬼臼毒素。K i n g和S u l l i v a n報道鬼臼毒素具有秋水仙堿樣作用之后,引起人們的普遍關(guān)注,并導(dǎo)致了一系列的醫(yī)學(xué)、生物學(xué)和化學(xué)的研究,證明了鬼臼毒素的抗癌活性4。我們對鬼臼毒素類化合物進行了高效液相色譜檢測5。實驗過程中我們發(fā)現(xiàn),在對鬼臼類植物桃兒七的化學(xué)成分做鑒定時,一定的色譜條件下,鬼臼毒素(p o d o