結(jié)腸康灌腸劑質(zhì)量控制的研究①

1、    結(jié)腸康灌腸劑質(zhì)量控制的研究        提要采用薄層層析法對結(jié)腸康灌腸劑中的黃連、當(dāng)歸、白芍進(jìn)行定性鑒別，專屬性良好；用雙波長薄層掃描法測定制劑中鹽酸小檗堿的含量，方法簡便，重現(xiàn)性好，平均回收率為100.48%，RSD為1.51%，認(rèn)為此方法可用于結(jié)腸康灌腸劑的質(zhì)量控制。關(guān)鍵詞結(jié)腸康灌腸劑鹽酸小檗堿薄層層析中國書分類號R943 結(jié)腸康灌腸劑由黃連、當(dāng)歸、白芍、地榆、木香、白頭翁等中藥組方制備而成，臨床用于慢性結(jié)腸炎取得滿意的療效。為控制該制劑的質(zhì)量，對其鑒別與含量測

2、定的方法進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。1材料日本島津CS-930型雙波長薄層掃描儀；微量毛細(xì)管(1 l，2 l，5 l，美國進(jìn)口)。鹽酸小檗堿、芍藥甙(衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所)；硅膠G(青島海洋化工廠)。試劑均為分析純。2鑒別2.1黃連的薄層鑒別取樣品1 ml，加無水乙醇4 ml，作為供試品溶液。黃連對照藥材0.2 g，加無水乙醇10 ml浸泡24 h，濾過，濾液作為對照藥材溶液。取鹽酸小檗堿用無水乙醇制成每1 ml含0.3 mg的溶液，作為對照品溶液。另取空白樣品(不含黃連)，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液，分別吸取上述4種溶液各10 l，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G板上，以正

3、丁醇-冰醋酸-水(712)為展開劑，上行展開，取出，涼干。置于365 nm紫外燈下檢視，供試品色譜中在與對照藥材、對照品色譜相應(yīng)位置上顯相同的黃色熒光斑點(diǎn)，而陰性對照品則無，見1。    1.陰性對照品2.供試品3.黃連藥材對照品4.鹽酸小檗堿1黃連TLC2.2當(dāng)歸的薄層鑒別取樣品10 ml，加乙酸乙酯振搖提取3次，每次20 ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇2 ml溶解，作為供試品溶液。取當(dāng)歸對照藥材3 g，加甲醇40 ml，浸泡1 h，超聲波提取0.5 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)诱麴s水20 ml溶解，同上法制成對照藥材溶液。另取空白樣品(

4、不含當(dāng)歸)，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。分別吸取上述3種溶液各10 l，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G板上，以苯-乙酸乙酯(91)為展開劑，上行展開，取出，晾干。置于365 nm紫外燈下檢視，供試品色譜中在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上顯相同的藍(lán)白色熒光斑點(diǎn)，而陰性對照品則無，見2。    1.陰性對照品2.供試品3.當(dāng)歸對照藥材2當(dāng)歸TLC2.3白芍的薄層鑒別取樣品10 ml，滴加硅鎢酸試劑至無沉淀產(chǎn)生，離心(3 000 r/min)5 min，取上清液用乙醚振搖提取3次，每次10 ml，棄去乙醚液；然后用正丁醇振搖提取3次，每次10

5、ml，合并正丁醇提取液，蒸干，殘?jiān)眉状? ml溶解，作為供試品溶液。取白芍對照藥材3 g，加水30 ml，浸泡1 h，超聲波提取0.5 h，濾過，取濾液同上法制成對照藥材溶液。取芍藥甙用甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對照品溶液，另取空白樣品(不含白芍)，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。分別吸取上述4種溶液各10 l，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G板上，以氯仿-甲醇-乙酸乙酯(841)為展開劑，上行展開，取出，晾干，噴以5%茴香醛的濃硫酸-甲醇(1585)溶液，90 °C烘烤約 5 min。結(jié)果顯示，供試品色譜中在與對照藥材、對照品色譜相應(yīng)位置上顯相同的

6、暗紫色斑點(diǎn)，而陰性對照品則無，見3。    1.陽性對照品2.供試品3.白芍對照藥材4.芍藥甙3白芍TLC譜3含量測定黃連系該制劑中的主藥，故選擇其主要活性成分鹽酸小檗堿作為測定的對象。由上述薄層分析可知，制劑中鹽酸小檗堿在薄層上能與其它成分較好地實(shí)現(xiàn)分離，故用薄層掃描法對其進(jìn)行含量測定。3.1掃描條件反射法鋸齒掃描，S=430 nm，R=500 nm。狹縫5 mm×1.2 mm，SX=3，靈敏度中。3.2線性關(guān)系的考察精密吸取鹽酸小檗堿對照品溶液2，4，6，8，10 l，點(diǎn)樣于同一薄層板上，按“黃連薄層鑒別”項(xiàng)下方法展開，然后掃描測定各斑點(diǎn)的

7、峰面積積分值。以點(diǎn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得一不過原點(diǎn)的直線，其回歸方程為：Y=12 471.70X+534.02，R=0.997 4。上述結(jié)果表明，鹽酸小檗堿含量在0.683.04 g范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。3.3穩(wěn)定性試驗(yàn)以鹽酸小檗堿對照品溶液點(diǎn)樣于薄層板上，依法展開后，每隔30 min掃描測定一次。結(jié)果表明，在2 h內(nèi)鹽酸小檗堿斑點(diǎn)峰面積積分值變化不明顯(RSD=2.1%)，但24 h后則有明顯的下降。3.4精密度試驗(yàn)取鹽酸小檗堿對照品溶液點(diǎn)相同量(5 l)5個(gè)點(diǎn)于同一薄層板上，依法展開，掃描測定，結(jié)果RSD為4.91%。3.5回收率試驗(yàn)精密量取已知含量的樣

8、品0.5 ml，共6份，并分別加入一定量的鹽酸小檗堿對照品溶液，然后照“樣品測定”項(xiàng)下方法操作，測定結(jié)果見表1。表1回收率測定結(jié)果樣品含量( mg)加入量( mg)測得量( mg)回收率(%)<"12-5 (82 bytes)" src="/med/cano/201003/20100319195841820" 17 24>(%)RSD(%)0.1080.060 80.167 998.520.1080.060 80.169 1100.490.1080.091 20.201 4102.41100.481.510.1080.091 20.198 7

9、99.450.1080.121 60.229 599.920.1080.121 60.232 1102.06     3.6樣品測定精密量取樣品1 ml，置于5 ml容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密吸取供試品溶液5 l及對照品溶液2 l、10 l，分別交叉點(diǎn)于同一薄層板上，依法展開，掃描測定，按外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算樣品中鹽酸小檗堿的含量，結(jié)果見表2。 表2樣品測定結(jié)果批號含量測定值( mg/ml)<"12-6 (82 bytes)" src="/med/cano/201003/20100319195

10、841963" 17 24>( mg/ml)RSD(%)9804080.2100.2140.2220.2152.839804110.2040.1940.1920.1973.279804150.2480.2600.2560.2552.409806200.2260.2320.2280.2291.349806250.2090.2130.2180.2132.11     4討論 實(shí)驗(yàn)表明，從樣品的薄層色譜中可檢出黃連、當(dāng)歸、白芍的特征斑點(diǎn)，而相應(yīng)陰性對照品無干擾。因此，用薄層層析法對該制劑中黃連、當(dāng)歸、白芍進(jìn)行定性鑒別是可行的。白芍的薄層鑒別中，滴加硅鎢酸試劑是為了沉淀制劑中黃連所含生物堿類成分，以消除薄層色譜中生物