蛋白酶產(chǎn)生菌的篩選

1、蛋白酶產(chǎn)生菌的篩選組別：第*組 班級：生 工* 班 組員 ：* 指導(dǎo)老師 ：*、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)從自然界中分離蛋白酶產(chǎn)生菌、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容蛋白酶產(chǎn)生菌的分離三、實(shí)驗(yàn)原理許多細(xì)菌和霉菌產(chǎn)生蛋白酶，細(xì)菌中的芽孢桿菌是最常見的蛋白 酶產(chǎn)生菌。本實(shí)驗(yàn)將土壤樣品懸液加熱處理，殺死非芽孢細(xì)菌及 其他微生物后進(jìn)行劃線分離得到芽孢桿菌，將其接種到奶粉培養(yǎng) 平板并進(jìn)行培養(yǎng)，根據(jù)奶粉平板的水解圈做初篩。將初篩的蛋白 酶產(chǎn)生菌接入產(chǎn)酶培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)，測定蛋白酶的活力，最終得 到產(chǎn)蛋白酶的芽孢桿菌。也可直接將細(xì)菌接種到奶粉培養(yǎng)平板進(jìn) 行培養(yǎng)，分離篩選其他蛋白酶產(chǎn)生菌。四、實(shí)驗(yàn)材料和用具1. 材料：土壤樣品2. 試劑：牛肉膏蛋白

2、胨培養(yǎng)及平板、奶粉培養(yǎng)基平板、 45mL 無菌水（帶玻璃珠）、芽孢染色液、3. 儀器及用具：紫外分光光度計(jì)、顯微鏡、恒溫水浴鍋、搖床、酒精燈、接種針、游標(biāo)卡尺、無菌移液 管、無菌試管、量筒、容量瓶、漏斗、試劑 瓶、漏斗、載玻片、濾紙、擦鏡紙。五、操作步驟（一）配制所需培養(yǎng)基 按照以下配方配制所需的培養(yǎng)基 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基： 牛肉膏 0.5g ，蛋白胨 1g ，NaCl 0.5g ，瓊脂 1.5 2.0g，水 100ml , pH 7.2 配制 200mL奶粉培養(yǎng)基：牛肉膏 0.5g ，蛋白胨 1g， NaCl 0.5g ， 瓊脂 2.0g ，水 100ml ， pH 7.0 7.2 脫脂奶粉

3、 3g ，配制 200mL（二）分離1. 采集土壤樣品，用無菌水植被 1:10 土壤懸液。2. 取1:10 土壤懸液5 mL,注入已滅過菌的試管中，將此試 管放入7580C水浴中熱處理10min以殺死非芽孢細(xì)菌。3. 取加熱處理過的土壤懸液 100200（1 L,涂布接種到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)平板，后將平板倒置，于3032C下培養(yǎng)24 48h.4. 對長出的單菌落進(jìn)行編號,選擇表面干燥、粗糙、不透明 的菌落,挑取少許菌苔涂片,做芽孢染色,判斷是否為芽 孢桿菌。（三）篩選 1、從判定為芽孢桿菌的菌落處,分別挑取少許菌苔,先接種 奶粉斜面培養(yǎng)基，再轉(zhuǎn)接奶粉培養(yǎng)基平板上，3032 C下培養(yǎng) 24 48h

4、。2、選擇水解圈直徑與菌落直徑比值大的菌， 接入牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基30-32 C振蕩培養(yǎng)48小時(shí)，將發(fā)酵液過濾或離心, 取清夜檢測蛋白酶活力進(jìn)行復(fù)篩。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果:相關(guān)圖片：(2) 菌株的分離根據(jù)菌落大小、形狀、表面光澤、隆起程度、透明程度、邊緣性 狀和菌落顏色的差別，最終從培養(yǎng)基上篩選出23個(gè)菌落。(3) 將分離到的菌株分別接種到含脫脂奶粉的培養(yǎng)基上，置于 32C培養(yǎng)60h,于室溫下觀察是否產(chǎn)生細(xì)胞外蛋白酶，分解培養(yǎng) 基中的脫脂牛奶，進(jìn)而產(chǎn)生肉眼可見的水解透明圈。結(jié)果表明，在接種的23株菌落中，共有18株產(chǎn)生胞外蛋白酶分解脫脂牛奶， 形成肉眼可見的透明圈。從中篩選出 9株水解圈與菌落直徑比值 較大的菌株。如下表：菌株編號123456789比值+說明：“+”表示：水解圈與菌落直徑比值約為 3: 1, “ +”表示:水解圈與菌落直徑大于 3：1. 。六、結(jié)果分析在奶粉培養(yǎng)基平板上，蛋白質(zhì)被孢芽桿菌產(chǎn)生的蛋白酶水 解，形成透明圈 （見實(shí)驗(yàn)相關(guān)圖片）。不同種類的微生物產(chǎn)生的蛋 白酶的種類和活力各不相同