金銀花中綠原酸的提取與分離

1、現(xiàn)代分離技術(shù)實(shí)驗(yàn) 安排一、 實(shí)驗(yàn)說明1、本課程實(shí)驗(yàn)為一次性綜合大實(shí)驗(yàn)，采取分班進(jìn)行，每班實(shí)驗(yàn)必須在連續(xù)兩天內(nèi) 完成，各組的實(shí)驗(yàn)安排均為周六和周日的上午 8 點(diǎn)到晚上的 8點(diǎn)。 每次實(shí)驗(yàn) 1 個(gè)班，每個(gè)實(shí)驗(yàn)由兩個(gè)人共同完成，即兩人一組，每組一套實(shí)驗(yàn)儀 器和一張實(shí)驗(yàn)臺(tái)。每班的班長負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)室的衛(wèi)生和安全。2、課程考核方法采用實(shí)驗(yàn)考察形式進(jìn)行，每人只安排一次實(shí)驗(yàn)機(jī)會(huì)，過期不補(bǔ)，希 望各位同學(xué)能夠按時(shí)參加。若有沖突，學(xué)生之間可相互對(duì)調(diào)。3、進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后，各組同學(xué)首先按照儀器清單檢查儀器的數(shù)量和完好情況。若有 儀器短缺或破損等問題，請(qǐng)?jiān)谏险n后 20 分鐘內(nèi)與實(shí)驗(yàn)室工作人員及時(shí)聯(lián)系， 并要求實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行補(bǔ)充

2、或更換。4、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，各組同學(xué)應(yīng)對(duì)照儀器清單檢查，分別洗凈后交實(shí)驗(yàn)人員驗(yàn)收。如 有損壞或缺少， 應(yīng)按規(guī)定繳納賠償金。 因此，希望同學(xué)們愛惜儀器， 認(rèn)真操作 實(shí)驗(yàn)期間，應(yīng)注意保持實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、地面和水槽的衛(wèi)生，尤其是自己的工作區(qū)域。同時(shí)應(yīng) 注意實(shí)驗(yàn)室的財(cái)產(chǎn)安全和自身安全，不可在實(shí)驗(yàn)室喧嘩吵鬧。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容題 目：金銀花中綠原酸的提取與分離 學(xué)習(xí)內(nèi)容：固體中有效成分的提取（索氏法）技術(shù)；減壓濃縮（旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)）技術(shù)； 硅膠吸附柱層析；硅膠吸附TLC技術(shù)；薄層色譜對(duì)產(chǎn)品純度檢測(cè)金銀花為忍冬科忍冬屬植物忍冬及同屬多種植物的干燥花蕾，它是一種“藥 食同源”的綠色植物，是臨床常用的中藥之一。具有清熱解毒、涼風(fēng)

3、散熱、抗病 毒、保肝利膽的功能，主治癰腫療瘡、喉痹、丹毒、熱血毒痢、風(fēng)熱感冒、瘟病 發(fā)熱、急性支氣管炎、肺炎、腮腺炎、膽道感染、關(guān)節(jié)炎等，能改善放、化療所 致的白細(xì)胞降低，有“中藥中的青霉素”的美譽(yù)。另外，金銀花還被廣泛地應(yīng)用于保健品、化妝品、卷煙、食品等行業(yè)。近代研究一般認(rèn)為金銀花的主要生物活 性有效成分為綠原酸類化合物，并且常以綠原酸含量的高低來評(píng)價(jià)金銀花質(zhì)量的 優(yōu)劣。綠原酸結(jié)構(gòu)式、實(shí)驗(yàn)萬案金銀花粉末75%乙醇，索氏提取回流 4h濾液（粗提液）減壓濃縮,60 C干燥粗提物（浸膏）1:1硅膠拌樣提取物拌樣硅膠柱乙酸乙酯：甲酸：水含綠原酸的洗脫液濃縮至干綠原酸四、方法1、TLC板的制備與活化在

4、干凈的研缽內(nèi)加入約6g硅膠GF254在輕輕研磨的同時(shí)緩慢加入15ml %羧甲基 纖維素鈉水溶液。繼續(xù)研磨約10mi n,當(dāng)體系粘稠度適宜時(shí)，即可進(jìn)行鋪板。用藥匙將適量糊狀物均勻攤在干凈干燥的載玻片上，然后用手拿住薄板的一端在臺(tái)面上輕輕振動(dòng)，直至薄層均勻?yàn)橹?。將鋪好的薄板平放在水平的臺(tái)面上， 涼干。將涼干后的薄板放入預(yù)先恒溫到105110°C的烘箱中活化30min。2、提?。ㄋ魇戏ǎ⒔疸y花制成粗粉，稱取約100g，用75%乙醇采用索氏提取器回流處理4h,其 提取液減壓濃縮、60 C干燥得浸膏。3、分離（1）粗分離取一定量浸膏，按1 : 1加入200-300目硅膠拌樣，晾干。用乙酸乙酯

5、濕法裝柱（柱型 ？ 8.5cmX 53cm硅膠200-300 目）,干法上樣， 柱體依次用乙酸乙酯、乙酸乙酯-甲酸-水（20 ： 1 ：）、乙酸乙酯-甲酸-水（10 : 1 ：）、甲醇洗脫。流速控制在每1/10柱體積即可。分部收集，每管 30ml。（2）粗分離過程中薄層檢測(cè)粗分離過程中對(duì)柱子的洗脫情況隨時(shí)進(jìn)行薄層檢測(cè)，展開劑為乙酸丁酯：甲 酸：水（7 ：） 0從某個(gè)餾分開始有綠原酸出現(xiàn)（入365nm下顯蘭色熒光）至幾乎 看不到蘭色熒光，顯示綠原酸已基本收集完全。結(jié)合顯色劑顯色，將相同流分合 并，共分26個(gè)部分。其流程圖：甲醇具體方法：收集液的薄層預(yù)檢：在對(duì)各收集管進(jìn)行 TLC分析之前，為了節(jié)約

6、薄板，可用毛細(xì)管將各收集管中的液體依次在一塊薄板上并對(duì)各點(diǎn)樣按照相應(yīng)的管號(hào)一次編 號(hào)，等樣點(diǎn)上的溶劑徹底揮發(fā)干后，置于波長365nm的紫外燈下觀察，有明顯斑點(diǎn)的表明其對(duì)應(yīng)接受管中含有化合物，沒有斑點(diǎn)的表明對(duì)應(yīng)管中沒有化合物。然 后再對(duì)有斑點(diǎn)的各管按照下法進(jìn)行 TLC分析。TLC分析：用事先活化好的薄層板對(duì)每管收集液進(jìn)行 TLC分析，點(diǎn)樣數(shù)視板的 大小而定，每兩斑點(diǎn)之間最小間距不少于8mm其中有一個(gè)為綠原酸對(duì)照點(diǎn)（注意： 每個(gè)毛細(xì)管只能用于同一個(gè)樣品；每個(gè)試管的點(diǎn)樣量應(yīng)相同；點(diǎn)樣時(shí)應(yīng)按管號(hào)依 次進(jìn)行；每個(gè)TLC分析的薄層板應(yīng)依次編號(hào)）。等展開劑爬行到板層4/55/6高 度時(shí)，取出薄層板，室溫平放

7、或平放于暖氣片上，讓溶劑揮發(fā)干。然后將薄板置 于波長365nm下，觀察和記錄薄板上斑點(diǎn)的分布情況及其對(duì)應(yīng)的Rf值。TLC分析內(nèi)容如下： 判斷斑點(diǎn)數(shù)的多少。展開后，斑點(diǎn)數(shù)多表明所含化合物越多。只有一個(gè)斑點(diǎn) 者表明對(duì)應(yīng)管中可能含有純化合物。斑點(diǎn)顏色越深表明所含對(duì)應(yīng)化合物的量越多。根據(jù) Rf 值或斑點(diǎn)高度判斷不同管中是否含有相同的化合物。在同一高度具有 相同斑點(diǎn)，表明兩管含有相同的成分。B5和C倍E分經(jīng)TLC僉測(cè)含有大量的綠原酸，兩部分合并（B5C1濃縮至干后得 綠原酸粗品。（3）精制B5和C1部分經(jīng)TLC檢測(cè)含有大量的綠原酸，兩部分合并（B5C1濃縮至干后 得綠原酸粗品，該部分再經(jīng)硅膠柱層析，氯仿 -甲醇梯度洗脫，得一化合物（ E）， 即為綠原酸精品。4、檢測(cè)對(duì)B5C1和E兩部分分別進(jìn)行高效液相色譜分析，檢測(cè)兩部分的綠原酸含量。測(cè)定條件：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各510卩L,注入液相色譜儀，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，SPD-10AV紫外檢測(cè)器，以乙腈磷酸 （13:87）為流動(dòng)相，327nm下檢測(cè)。附：試驗(yàn)主要用品1 材料金銀花（為金銀花花蕾和開放花的混合樣品，經(jīng)烘