2019年黑木耳多糖在食品工業(yè)中的應用

1、黑木耳多糖在食品工業(yè)中的應用第一章 研究目的及意義第二章 黑木耳多糖的理化性質(zhì)及功能2.1 黑木耳多糖的化學結構2.2 黑木耳多糖的生理活性2.3 黑木耳多糖的構效關系2.4 黑木耳多糖的分子修飾第三章 黑木耳多糖的提取純化方法3.1 提取方法3.2 純化方法第四章 黑木耳多糖在食品中的應用第五章 分析與討論（全文總結加應用前景分析）第一章研究目的及意義黑木耳多糖作為一種生理活性物質(zhì)，近年來日益受到人們的重視。黑木耳(Auricularia Auricular )又稱木耳、耳子、光木耳，屬真菌門擔子菌 綱的食藥用菌，它是生長在朽木上的一種腐生菌，由菌絲體和子實體兩部分組成。 菌絲體為無色透明，

2、生長在朽木里面；子實體則生長在朽木的表面，為食用部分。 我國是世界上主要的黑木耳生產(chǎn)國， 年產(chǎn)量占世界總產(chǎn)量的90%以上，它在我國 多數(shù)地區(qū)都有生產(chǎn)，這就為黑木耳的開發(fā)應用提供了有利條件。黑木耳脆嫩可口，營養(yǎng)極為豐富，有"素中之葷"的美譽。吳瑞憲【1】對黑 木耳的營養(yǎng)成分作了全面的分析，發(fā)現(xiàn)它富含大量的糖類和蛋白質(zhì)，同時也是一 種鈣和鐵含量較高的食品。大量研究表明，黑木耳作為"生物應答效應物"(Biological Response Modifier，簡稱BRM )具有多種生理功能，而這些重要的 生理功能都是與其多糖組分密切相關的。因此，黑木耳多糖備受人

3、們青睞，對其的研究也已成為近年來分子生物學、醫(yī)藥、食品科學等領域的研究和開發(fā)應用的 熱點。第二章黑木耳多糖的理化性質(zhì)及功能2.1黑木耳多糖的化學結構黑木耳多糖的結構分析包括單糖的組成、連接點類型、單糖與糖苷鍵的構型、 分子量范圍等。M isaki.等從黑木耳子實體中分離得到了 4種多糖：FI A、FI B、FU和FM, 并指出FI A及FU均為酸性雜多糖，二者均由 D-木糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、 D-葡萄糖醛酸組成。F I A的組成摩爾比依次為1.0 : 4.1 ： 1.3： 1.3, FU依次為 1.0 : 2.1 : 1.0 : 0.6。它們的結構是主鏈為 a (1-3)甘露聚糖，在部

4、分甘露糖2, 6位上被D-木糖、D-甘露糖或D-葡萄糖醛酸取代。另外兩種多糖 FI B、FM主 鏈均為禺(1-3) -D-葡聚糖，側鏈與主鏈以 伕(1-6)鍵接而成，二者的區(qū)別 在于側鏈的數(shù)目和類型不同：F I B在主鏈上約有2/3的葡萄糖殘基被單個葡萄 糖基取代，這種多羥基基團的存在使其在水中的溶解度較高，為水溶性。而FM在主鏈上約有3/4的葡萄糖殘基被短鏈葡聚糖殘基取代，其分支度比F I B高，這種復雜的多分支結構使其在水中的溶解性很差，為水不溶性。同時他們測得FU的分子量為50X104，F(xiàn) I B的分子量為140X104。Ukait等用熱水和熱乙醇從黑木耳子實體中分離得到兩種酸性雜多糖:

5、MEA和MHA。并證明了它們均由D-葡萄糖醛酸、D-木糖和D-甘露糖組成，MEA的 組成摩爾比為1.0 : 0.5 : 2.8, MHA為1.0 : 0.6 : 1.0,兩者都含有少量的D-葡聚 糖，MEA和MHA的主鏈均為a (1-3)鍵接的D-甘露吡喃糖，在部分甘露糖 的2位上被3-D-葡萄糖醛酸取代，還有一些 2和6位上被短鏈&D-木糖取代。 他們用沉降法測得 MEA和MHA的分子量分別為30X104, 37X04。以上兩者的結果不盡相同，這可能是由于試驗方法和條件的不同或由于試驗 所選用的黑木耳存在種屬差異。但總的說來，黑木耳多糖所含有的多糖組分主要 有D-木糖、D-甘露糖、D

6、-葡萄糖、D-葡萄糖醛酸。其酸性雜多糖的分子量范圍在30X10450X104之間2.2 黑木耳多糖的生理活性黑木耳是一種常見的大型藥食兩用 真菌， 其主要功能性 成分為多糖,具有降 血脂、抗凝血、抗腫瘤等多種生理 活性。黑木耳多糖具有多種生物活性， 而且不同化學結構和不同構象的黑木耳多糖 組分表現(xiàn)不同的生理活性。 經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)， 黑木耳多糖對細胞免疫和體液免疫功能 具有良好的促進作用，具有抗白細胞降低、抗腫瘤、抗輻射、抗突變、抗炎癥等 細胞保護作用；具有降低血脂、膽固醇、血液粘度，抗血栓形成作用；具有降低 血糖、抗糖尿病以及降低脂褐質(zhì)含量，增強 SOD 活力，減少有害物質(zhì)自由基產(chǎn) 生的功能；同時

7、還能促進核酸、蛋白質(zhì)的生物合成和防治多種老年性疾病。2.3 黑木耳多糖的構效關系對于生物多糖的(1 f3) B D 葡聚糖結構與抗腫瘤活性的關系,很早就有 大量的研究，Misaki發(fā)現(xiàn)水溶性較好的葡聚糖I具有(1 f 3) B D 葡聚糖主 鏈,其中06位上有適當?shù)膯蝹€葡萄糖基分支 ,對腫瘤有較好的抑制作用 ,而葡聚 糖U組分在結構上有較多的葡萄糖短鏈分支，因此水溶性較差，對小鼠腫瘤卻沒有抑制活性 ;若將后者經(jīng)高碘酸鹽氧化 ,硼氫化物還原 ,再用弱酸水解得理 ,可以將 水不溶性的、分支較多的B D葡聚糖組分降解，使之生成一種水溶性較好的經(jīng) 過修飾的多羥基葡聚糖 ,這種多羥基葡聚糖能夠表現(xiàn)了抗腫

8、瘤活性.這里需要指出的是,黑木耳多糖中的葡聚糖成分的抗腫瘤活性不僅與其在水中的溶解度有關 還與其側鏈所連接的基團有密切的關系同樣水溶性較好的 O (羧甲基)一D 葡聚糖的抗腫瘤活性雖然比葡聚糖U有所提高，但是卻比不上經(jīng)過修飾的多羥基葡聚糖的活性高 . 經(jīng)過修飾的多羥基葡聚糖除了能抑制S180 腫瘤 還有抗其他可轉移腫瘤 ( transp lantable tumor) 和一些共生腫瘤 ( syngenictumor) 的活性,例如埃利希癌 .黑木耳多糖中的酸性雜多糖成分雖然沒有明顯的抗腫瘤 活性,但是該組分的提高免疫功能、抗衰老和防治心血管疾病等作用卻很明顯 ,而且毒性低黑木耳酸性雜多糖一般由

9、D木糖、D甘露糖、D葡萄糖和D 葡萄糖醛酸組成 ,其中糖醛酸含量一般占酸性雜多糖的 10% 20% ,它與黑木 耳多糖的分子量變化規(guī)律相同 ,即分子量小的酸性雜多糖中糖醛酸的含量低,溶解度大 . 黑木耳酸性雜多糖具有明顯的提高機體免疫能力的功能 . 其中促進白 細胞數(shù)增加作用同酸性雜多糖的分子量和糖醛酸的含量有關,并且隨著分子量和糖醛酸含量的降低 ,升白細胞效果大 . 該多糖的抗凝血的作用也很明顯 ,抗凝血活 性隨多糖分子量和糖醛酸的含量降低而增大 . 用超聲波輻射處理黑木耳的酸性 雜多糖 ,制備一系列預定分子質(zhì)量的黑木耳酸性雜多糖 .經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)用超聲波處 理后的酸性雜多糖分子所發(fā)生的降解是不

10、可逆的 ,也不存在分子間締合現(xiàn)象 .超 聲輻射未引起糖醛羧基的破壞 ,因而保證糖醛酸的含量維持不變 , 從而可保證超 聲輻射后其生理活性也不會喪失 ., 也可按重沉淀分級法對酸性雜多糖分級 . 以 制備特定分子量的酸性雜多糖組分 .2.4 黑木耳多糖的分子修飾黑木耳(Auricularia auricula (L. ex Hook.) Underwood)隸屬于真菌門、 擔子菌綱、木耳目、木耳科、木耳屬，是著名藥食兼用真菌，其主要活性成分 黑木耳多糖具有抗腫瘤、抗血栓、抗衰老、降血糖、降血脂、調(diào)節(jié)免疫等功能。 本文以黑木耳多糖為對象，系統(tǒng)地研究了其分級方法以及分子修飾(硫酸酯化、 超聲波輻射降

11、解與過渡金屬離子的相互作用) 方法，通過對黑木耳多糖及其分子 修飾多糖功能(抗氧化、抗腫瘤、抗凝血)研究，并探索其在膜材料上的應用， 為黑木耳多糖、 修飾多糖在醫(yī)藥、 保健品、食品及膜材料等方面的應用奠定基礎。 得到以下主要結果： 1、用陽離子表面活性劑十六烷基三甲基溴化銨( CTAB ) 對黑木耳多糖進行分級，得到黑木耳中性多糖和酸性多糖( AAP )兩部分，其中 酸性多糖含量占 80.33，中性多糖占 18.67。用乙醇將黑木耳多糖分為 AAP1 、 AAP2 、 AAP3 三部分。 2、確定了黑木耳多糖的最佳硫酸酯化工藝：氯磺酸與 吡啶體積比5:1;多糖溶液與酯化試劑的體積 2:1:酯化

12、溫度為50C，酯化反應 時間為1.5h。FTIR光譜顯示硫酸基與AAP形成硫酸酯化合物。并制備了取代度 分別為 0.32、 0.64、 1 .0的三個黑木耳多糖硫酸酯 AAP-S1、 AAP-S2、 AAP-S3。 3、 黑木耳多糖(AAP )對ZnSO4 7H2O中Zn (U)的螫合能力最強，其最佳螯合 工藝為：Zn (U)的初始濃度為3mg/mL、pH值為4.0、黑木耳多糖與Zn (H) 的比值為4:1、螯合6h。制備了黑木耳多糖(AAP )與5種過渡金屬離子(Fe2+、 Co2+、Ni2+、Cu2+、Zn2+)的螯合物。4、黑木耳多糖經(jīng)超聲波輻射降解后，隨時 間的增加，黏度逐步降低、溶解

13、性增加，葡萄糖醛酸含量基本保持不變。黑木耳 多糖經(jīng)超聲波輻射20min、40min、60min后，制備了三種多糖AAP-US1、AAP-US2、 AAP-US3 5、硫酸酯化黑木耳多糖對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌有不同程度的抑 制，抑制作用可達1620h。對黑曲霉的抱子萌發(fā)也有一定的抑制現(xiàn)象。AAP-S有直接清除氧自由基及提高機體抗氧化的功能。 在生物體內(nèi)可以通過顯著地提高 SOD、 GSHPX、 T-AOC 的活力，降低 MDA 的含量，提高機體非特異性免疫器 官胸腺、脾臟的重量等作用，達到清除自由基的功能。 硫酸酯化黑木耳多糖 對腫瘤細胞表現(xiàn)出顯著的抑制功能， 并表現(xiàn)出量效關系， 對癌細胞的

14、最大抑制率 出現(xiàn)在72h，可達49.6%?？鼓钚源嬖诹啃шP系，并隨硫酸化取代度的增加， 抗凝血活性逐漸增強。 6、超聲波改性黑木耳多糖對除羥自由基、 超氧離子自由 基均有一定的清除作用; 對小鼠的生長無明顯不良影響， 并可以顯著地促進胸腺 和脾臟的生長；可以不同程度地提高小鼠血清 T-AOC的能力、升高SOD、GSH-PX 的活力、降低 MDA 含量。其抗氧化能力呈量效關系，即隨劑量的增加，抗氧化 能力逐漸提高。第三章黑木耳多糖的提取純化方法3.1 提取方法3.1.1 熱水浸提法熱水浸提法是一種國內(nèi)外常用的用于提取真菌類多糖成分的傳統(tǒng)方法。 陳艷 秋【 2】等采用熱水浸提法對黑木耳子實體水

15、溶性多糖的提取工藝進行了深入研 究,并得出如下結論：黑木耳子實體干粉與水之比為1:50,在90C水浴中抽提3.5h, 提取液用70%乙醇醇析,在此工藝條件下多糖得率最高。 之后, 林敏等【3】同樣采 用此法提取黑木耳中的水溶性多糖 , 探索熱水提取黑木耳多糖的最佳工藝條件 , 得出了與陳艷秋等人相近的結果。此法所需提取劑蒸餾水經(jīng)濟易得 , 但是需經(jīng)多 次浸提, 得率仍然很低 ,而且費時費料。3.1.2 稀堿浸提法包?；ā?】等采用黑木耳粉用不同的提取劑（蒸餾水和1mol/LNaOH溶液）在 其它條件相同的情況下對黑木耳進行提取時發(fā)現(xiàn) , 后者的多糖含量比前者高出近 3倍, 且能節(jié)省時間和減少原

16、材料及試劑的消耗。雖然堿處理使多糖含量增加,但寡糖含量則相對減少 , 且提取后液體需要中和 , 程序繁瑣【 5】。3.1.3 酸浸提法黑木耳置0.3mol/LHCI溶液中,于50C加熱1.5 h,其他步驟同“熱水浸提法” 得黑木耳多糖 8.4g, 收率為16.8% 。3.1.4 酶解提取法近年來, 一些學者致力于酶法提取食藥用真菌多糖的研究 , 所謂酶法即采用 酶與熱水浸提法相結合的方法 , 酶多采用一定量的果膠酶、 纖維素酶及中性蛋白 酶, 此法具有條件溫和、 雜質(zhì)易除和得率高等優(yōu)點。 主要的方法有 : 單一酶法、 復 合酶法和分別酶法。姜紅等【 6】研究了纖維素酶和果膠酶各自分別作用提取黑

17、木耳多糖的最佳 工藝條件 , 發(fā)現(xiàn)在兩種酶反應體系中 , 最適工藝參數(shù)較為接近 , 為黑木耳雙酶水 解提供了依據(jù)。張立娟等【 7】通過單因素和正交試驗研究了細胞破壁酶 （ 纖維 素酶、果膠酶和木瓜蛋白酶 ） 在黑木耳多糖提取中的最佳作用條件 , 他們先加入 復合酶（纖維素酶與果膠酶 ）作用,再加入蛋白酶反應。結果發(fā)現(xiàn)采用此法提取率 高達16.83%,提取時間縮短到140min,較以往的熱水浸提法和堿法提取具有明顯 的優(yōu)點。3.1.5 超聲波提取法隨著現(xiàn)代科學技術的發(fā)展 , 超聲波技術已經(jīng)應用于天然植物及真菌活性成分 的研究。研究表明 , 利用超聲波產(chǎn)生的高頻振蕩、 高加速度和強烈的 “空化效應

18、” 及攪拌作用 , 可加速有效生物活性成分進入溶劑 , 從而提高提取率 , 縮短提取時 間、節(jié)約溶劑、并可在低溫下提取 , 有利于有效成分的保護。此法在黑木耳多糖 的提取中也得到了很好的應用。唐娟等【 8】采用超聲波協(xié)同纖維素酶法提取黑 木耳多糖 ,確定了此法的最佳工藝條件 , 發(fā)現(xiàn)由于作用溫度低 , 所得到的多糖顏色 淺 , 因此有利于多糖產(chǎn)品的進一步精致。3.1.6 微波輔助提取法利用微波強化固液浸取過程是一種頗具發(fā)展?jié)摿Φ男滦洼o助提取技術。 它具 有設備簡單、適用范圍廣、提取率高、節(jié)省溶劑、節(jié)省時間、節(jié)能、不產(chǎn)生噪音 和污染等眾多優(yōu)點【 9】。樊黎生等【 10】將常規(guī)水提法和近年來出現(xiàn)的

19、先進萃取技術 : 微波提取、超 臨界萃取、超聲波萃取用于提取黑木耳多糖 , 進行了對比試驗 , 發(fā)現(xiàn)微波輔助萃取 法提取黑木耳多糖的平均得率為 13.26%,比常規(guī)水提法的得率提高約 51%,而時間 也縮短了將近 5/7 。超臨界流體萃取法雖然在得率 (16.82%) 上稍高于微波輔助萃 取法,但設備復雜,需要高壓力容器 ,投資成本較高。而超聲波萃取雖然所需時間 (0.5h)大大縮短,又無需加熱(2C)且得率(15.43%)也接近于微波輔助提取法, 但目前僅處于小規(guī)模試驗階段 , 工程設備放大問題有待解決。所以綜合看來微波 輔助萃取技術具有明顯的優(yōu)勢。3.1.7 超臨界流體萃取超臨界流體萃取(

20、supercritical fluids extraction， SCFE 是20世紀 90年代發(fā)展起來的一項新型提取技術，利用超臨界流體( supercritical fluids ， SCF為萃取劑，從液體或固體中萃取目標組分。用純 CO提取糖及苷類化合物的 產(chǎn)率低,這是因為這類化合物分子量較大、 羥基多、極性大,如加入攜帶劑和加大 壓力則可提高產(chǎn)率【 11】。3.2 黑木耳多糖的純化純化是將多糖混合物分離為單一的多糖的過程，純化的方法主要有以下幾 種。3.2.1 沉淀法包括分部沉淀法、 鹽析法、 金屬絡合物法和季銨鹽沉淀法。 如安絡小皮傘粗 多糖的純化方式， 將黑木耳粗多糖水溶液加斐林試

21、劑， 同時使溶液達到不同的乙 醇濃度，可得多個多糖。3.2.2 凝膠柱色譜法【 12】選葡聚糖凝膠 (Sepharase) 作吸附劑，以不同濃度的鹽溶液和緩沖液作洗脫 劑，使各種多糖得以分離純化。日本學者用Sepharose6B、Sephacryls-200 和S-500、DEAE-Tayopearl650M等色譜柱對黑木耳粗多糖進行反復分離純化，并經(jīng) 透析和Sephadex-G10處理，最后分出7種均一性多糖。3.3.3 纖維素陰離子交換劑柱色譜法【 12】最常見的交換劑為DEAE纖維素（硼酸型或堿型）洗脫劑可用不同濃度的堿溶 液、硼砂溶液、鹽溶液等。此法目前最為常用，它一方面可純化多糖，另

22、一方面 還適于分離各種酸性多糖、中性多糖和粘多糖。黑木耳粗多糖加水溶解，透析， 然后進行DEAE纖維素柱色譜，以02mol/LNaCI水溶液梯度洗脫，再以 SephadexG-10（柱色譜精制，得兩種均一性多糖。黑木耳總多糖加水溶解，Ba（OH 沉淀，沉淀物除盡Bf，再將沉淀物上DEAE纖維素（堿型）色譜柱，依次用水、不 同濃度的NaHCOI液及0.05mol/L的NaO溶液洗脫，得四種單一多糖。3.3.4 有機溶劑浸提法【 13】:稱取干燥后的黑木耳50g,經(jīng)石油醚300mL于60 C回流脫脂2h。倒去石油醚, 剩余物烘干溶劑后用80聽醇300mL浸泡3h,于80C加熱1h,過濾。將固體物用

23、 蒸餾水1500mL浸泡過夜,然后于90C水中溫浸提取1h,再用蒸餾水500mL于 90C 重復溫浸提取30min。過濾,合并濾液,減壓濃縮至150mL用氯仿萃取3次,以除 去蛋白質(zhì)。過濾后 , 濾液加入 95%乙醇使乙醇含量達 80%,靜置過夜 , 多糖沉淀 , 過 濾。濾餅依次用無水乙醇、丙酮、乙醚 4次洗滌,干燥,即得黑木耳多糖 9.2g, 收 率為 18.4%。3.2.5 膜分離膜分離技術（membrane separation technology ， MST是項新興的高效分 離技術，分離過程以選擇透過性膜作為分離介質(zhì)， 通過在膜兩側施加某種推動力 （如壓力差、化學位差、電位差等），

24、使原料液中組分選擇性通過膜。以壓力差 為推動力的膜分離過程包括微濾、超濾、納濾、反滲透，根據(jù)篩分原理使某些組 分選擇性透過，實現(xiàn)提純和濃縮【 14】。目前應用較多的是超濾和微濾技術。3.2.5.1 超濾超濾20 （ultra filtration ，UF 的孔徑范圍為1nm100nm 截留相對分 子質(zhì)量為 103106。溶解的鹽和水會通過超濾膜 ,分子量在1000以上的物質(zhì)則被截 留,故可從水和其它液體中分離出很小的膠體和大分子。超濾膜的另一特點是由 于受滲透壓的阻礙作用小，所以在相當?shù)偷膲毫Σ睿?.04MPa0.70MPa下，仍具 有高流通率。超濾膜技術【 12】廣泛應用于各類多糖的分離、濃

25、縮、純化等研究 中，包括中藥藥源多糖如黑木耳多糖、大黃多糖、六味地黃湯多糖、黃芪多糖、 紫芝多糖、人參多糖，海洋活性多糖如鯊魚軟骨粘多糖、褶紋冠蚌多糖、紫菜多 糖、褐藻糖膠、卡拉膠，酵多糖如蜜環(huán)菌菌索多糖、PS-9415發(fā)酵液多糖、冬蟲夏草多糖，食用植物多糖如茶多糖、香菇多糖、金針菇多糖、蘆薈多糖、枸杞多 糖等。采用超濾膜技術處理多糖具有收率高、 不易破壞多糖的生物活性、 能耗低 等特點，適于工業(yè)化生產(chǎn)。3.2.5.2 微濾微濾（micro filtration, MF膜通常截留粒徑大于0.05卩m的微粒，多采用對稱微孔膜，膜的孔徑范圍為0.1卩m-5卩m操作壓差范圍為0.05 MPa0.2

26、MPa微濾【15】能有效去除比膜孔大的微粒和微生物，具有能耗低、無二次污 染、分離效率高等特點， 在多糖提取中可用于多糖液體的澄清和多糖精制。 純化 除采用上述方法外，還有超過濾法、制備性區(qū)域電泳、活性碳柱色譜等等。另據(jù) 報道，國外多采用LKBi色譜系統(tǒng)，用比旋度、示差折射及紫外檢測多糖，各組 分的峰位自動記錄，分離效果高且方便。第四章 黑木耳多糖在食品中的應用4.1 調(diào)節(jié)免疫功能陳瓊華等認為， 黑木耳多糖可明顯增加脾臟重量， 即脾臟指數(shù)比對照組增加 了 0.43 倍，但對胸腺影響不大。章靈華等人報道，小鼠腹腔注射黑木耳多糖后 體液免疫和細胞免疫有明顯增加。 張才擎等人研究認為， 黑木耳多糖對

27、大鼠紅細 胞凝集作用影響不大， 但可明顯增強小白鼠巨噬細胞吞噬功能。 給小鼠皮下注射， 測定吞噬雞紅細胞數(shù)，吞噬指數(shù)比對照組增加 1.17 倍，吞噬百分數(shù)比對照組增 加 0.38 倍。4.2 降血脂高血脂癥是指血液中一種或多種物質(zhì)成分異常增高的病癥 , 它能直接導致 動脈粥樣硬化、冠狀動脈粥樣硬化等心臟病 , 而后者的死亡率較高 , 因此積極治 療高血脂癥具有十分重要的意義。吳憲瑞【 1】等人經(jīng)對昆明種小鼠實驗 , 發(fā)現(xiàn) 黑木耳多糖可使進食高脂肪膽固醇飼料小鼠的 TC （總膽固醇 ）、 FVCC （游離膽固 醇）、 CnE （膽固醇脂） 、 TG （甘油三脂） 、 BLP （B 脂蛋白） 含量

28、明顯降低。4.3 降血糖吳憲瑞【 1】等人用黑木耳多糖給正常小鼠注射 , 可產(chǎn)生隨劑量加大而增強 的降血糖作用 , 能明顯增強小鼠胰島素分泌功能 ; 能明顯降低四氧嘧啶糖尿病 小鼠血糖 ; 能明顯減少四氧嘧啶糖尿病小鼠飲水量。4.4 抗血栓申建和【16】等人經(jīng)對家兔實驗，發(fā)現(xiàn)黑木耳多糖（AA）可明顯延長特異性血 栓及纖維蛋白血栓的形成時間 , 縮短血栓長度 , 減輕血栓濕重和干重 , 減少血小板 數(shù), 降低血小板粘附率和血液粘度 , 并可明顯縮短豚鼠有球血蛋白的溶解時間 , 降 低血漿蛋白含量 , 升高纖溶酶活性。4.5 抗腫瘤齊德生等用1820g昆明系小白鼠研究水溶性、堿溶性、堿不溶性三種黑

29、木 耳多糖對移植性肉瘤 -180 抗腫瘤活性。結果表明，水溶性黑木耳多糖注射劑量 50mg/kg和200mg/kg對肉瘤-180抑制率分別為44°%89%堿溶性黑木耳多搪注射 劑量200mg/kg對肉瘤-180抑制率為31%堿溶性黑木耳多糖注射劑量50mg/kg及堿 不溶性黑木耳多搪注射劑量分別為10mg/kg、30mg/kg,對肉瘤-180均無明顯抑制 作用。所以，水溶性黑木耳多糖是一種很有前途癌癥輔助治療藥物。4.6 抗衰老作用【 17 】研究表明, 黑木耳多糖有明顯延緩衰老作用, 它可提高機體免疫功能, 對機 體損傷有保護作用, 可延長平均壽命, 被認為是較理想的抗衰老保健品。

30、 吳憲瑞 等人報道,將剛羽化尚未交配果蠅成蟲置于 0.4%濃度黑木耳多糖培養(yǎng)基中飼養(yǎng), 40d后逐個試驗其飛翔能力，與對照組比較，結果表明，黑木耳多糖能增加果蠅 飛翔能力；以黑木耳多糖0.1%濃度培養(yǎng)羽化10h內(nèi)雄性果蠅成蟲，其壽命延長為 對照組1.26倍，說明其具有延緩衰老作用。 周慧萍等用一個月齡小鼠， 雌雄各半， 30d連續(xù)腹腔注射黑木耳多糖液l00mg/kg，小鼠心肌組織脂褐質(zhì)含量明顯下降， 下降率為 25% 30%。脂褐質(zhì)是人和動物老化代謝產(chǎn)物， 是衰老的重要指標， 它隨 著年齡增長而增加，故降低脂褐質(zhì)含量，有利于延緩衰老。4.7 對動物運動機能的影響史亞麗等隨機將雄性昆明種小鼠 4

31、0只分為對照組和多糖組， 每組 20只。多 糖組灌胃黑木耳粗多糖2.5mg/(kg d)，對照組灌胃生理鹽水0.2ml/d，連續(xù)灌 胃20d，考察黑木耳粗多糖對小鼠耐缺氧時間、力竭游泳時間等多項生理指標的 影響。結果顯示， 多糖組的耐缺氧時間顯著長于對照組， 但兩組力竭游泳時間差 異不顯著。多糖組小鼠的血紅蛋白、 肝糖原水平顯著高于對照組。 而血乳酸及血 尿氮水平顯著低于對照組。 這表明黑木耳粗多糖能明顯提高小鼠耐缺氧時間和血 紅蛋白水平，降低定量負荷后血乳酸及血尿氮水平，明顯地提高了運動能力。 第五章 分析與討論(全文總結加應用前景分析)討論5.1 多糖提取方法比較傳統(tǒng)黑木耳多糖提取采用水體

32、系 , 木耳細胞粗大 ,壁厚,多糖難以從胞內(nèi)擴散 出來,需 要多次浸提 ,操作時間長 ,收率低。酸浸提法和堿浸提法容易使部分多糖發(fā)生水解 , 破壞多糖的活性結構、減少多糖得率酶法提取具有效率高、反應條件溫和、雜質(zhì)易除、提高得率、工藝簡便和省 時等許多優(yōu)點。 但是酶的價格較高 ,對實驗條件要求較高， 為使酶發(fā)揮最大作用， 需先通過實驗確定通過最適溫度、pH及最適作用時間等。能否將其用于工業(yè)化的 多糖提取中， 還需綜合考慮酶的濃度、 底物的濃度、 抵制劑和激動劑等對提取物 有何影響。常用的提取方法大多采用不同溫度的水、 稀堿溶液提取， 這些方法不能很好 的破除細胞壁，而導致多糖收得率較低?，F(xiàn)階段最

33、為常用的破壁方法就是酶法， 它能很有效的分解細胞壁， 結果大大提高了多糖的收得率。 多糖在酸性或堿性條 件下提取，會引起糖苷鍵的斷裂， 破壞多糖的立體結構及活性。 利用稀酸提取時， 時間宜短，溫度不宜超過50C近年來發(fā)展起來的新技術超聲波提取法也是一種較理想的提取多糖的方 法，與常規(guī)提取法相比 , 超聲提取時間短、收率高、無需加熱。5.2 多糖分離過程有關問題5.2.1 去蛋白方法的比較因為傳統(tǒng)的Sevag法不能很好的去除黑木耳粗多糖中的蛋白質(zhì)、 膠質(zhì)、色素 等。現(xiàn)可將蛋白質(zhì)物質(zhì)先用蛋白水解酶水解（如胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白 酶、鏈酶蛋白酶等）,使樣品中蛋白質(zhì)部分水解后,再用Sevag法效

34、果更好。從去 蛋白的效果來看,完全用Sevag法去蛋白處理,起碼要重復進行8次,才能基本去 除蛋白。2次去蛋白后含糖78.4%,8次去蛋白后含糖97.3%。如果用Sevag法結合酶 法,酶處理后再經(jīng)3次Sevag法處理,在氯仿和水的界面就未見沉淀，可見用Sevag 結合酶法去蛋白效率可提高 68%,且節(jié)省了大量的試劑和時間 ,從最后得到的產(chǎn)物 中含糖量來看 , 兩種處理后含糖都可達到 90%以上。所以本是一種較為有效可行 的方法。5.2.2 脫色處理注意點黑木耳多糖可能因含有酚類化合物 , 在空氣中提取或干燥時顏色加深 , 可用 雙氧水脫色。在用HO脫色處理后,一定要透析至無HO檢出,否則在柱

35、層析操作中 殘余的HQ對葡聚糖凝膠有破壞作用。HQ檢出用高錳酸鉀法。一般情況下,盡量 避免用活性炭處理 , 因活性炭會吸附多糖 , 造成多糖損失。另外 , 醇洗及醚洗過 程中 , 減壓抽干時用薄膜覆蓋樣品 , 減少空氣接觸 , 也能防止顏色加深。4 展望目前，對多糖的研究已經(jīng)成為分子生物學、藥物學和食品科學中不可缺少 的一部分。 在我國， 對食藥用真菌多糖的開發(fā)利用尤為引起人們的關注。 真菌多 糖在一定劑量時可治療疾病，少劑量時可以強身健體預防疾病。所以黑木耳多糖 作為食藥用真菌多糖中的一種，不僅可以作為藥物進行研究，還可作為功能性食 品添加劑和保健品進行開發(fā)。黑木耳多糖同其它的食藥用真菌多糖

36、一樣，其研究的熱點主要集中在：多 糖高產(chǎn)菌株的篩選和選育；優(yōu)化多糖的提取方法；通過研究多糖活性與結構的關 系來有效改造天然多糖，使之增強原有活性；深層發(fā)酵生產(chǎn)多糖工藝的優(yōu)化；多 糖藥理機制及多糖藥品臨床應用的有效性和安全性研究等。綜上所述，隨著對黑木耳多糖研究的不斷深入，利用黑木耳多糖開發(fā)的功 能性食品添加劑、保健品或藥品的市場前景為人們所看好。 為研究出有利于人民 身體健康的、經(jīng)濟效益高的黑木耳多糖的深加工產(chǎn)品， 需要廣大的生物學家、食 品科學家和醫(yī)學家的共同努力，來帶動整個多糖研究的快速發(fā)展。前景分析目前，對多糖的研究已經(jīng)成為分子生物學、藥物學和食品科學中不可缺少 的一部分。在我國，對食藥用真菌多糖的開發(fā)利用尤為引起人們的關注。真菌多糖在一定劑量時可治療疾病，