標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的有關(guān)資料

1、申報(bào)材料15 標(biāo)準(zhǔn)草案及起草說明，并提供相關(guān)的藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的有關(guān)資料標(biāo)準(zhǔn)草案及起草說明，并提供相關(guān)的藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的有關(guān)資料一、藥品標(biāo)準(zhǔn)草案（一）、原料藥標(biāo)準(zhǔn)太子神悅膠囊原料藥Taizishenyue jiaonang yuanliaoyao【處方】 太子參1800g 葛根1200g 淫羊藿600g【制法】 以上三味，其中太子參加水煎煮三次，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度約為1.19，加入乙醇至終濃度為80%，靜置24小時(shí)，沉淀加水溶解至密度為1.065 (20)，再加入乙醇至終濃度為70%，靜置至不再析出沉淀。取沉淀，加入乙醇洗滌，干燥，粉碎，過60目篩即得太子參總多糖。其余葛根和淫羊藿加

2、入80%乙醇回流提取3次，合并提取液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度約為1.04(20)。取上清通過大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，洗脫液棄去。再用80%乙醇洗脫，洗脫液濃縮至浸膏狀，干燥，粉碎，過60目篩即得葛根淫羊藿總黃酮?！拘誀睢勘酒诽訁⒍嗵菫榈S琶霸采；氣微香，味微苦。 本品葛根淫羊藿總黃酮為土黃色粉末；氣微香，味微苦?！捐b別】(1)取本品太子參總多糖粉末20mg，加蒸餾水1ml熱溶，濾道，作為供試品溶液。另取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品3mg，加蒸餾水1ml溶解，作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液。再取太子參水提取物l0mg，加蒸餾水1ml溶解，濾過，作為對(duì)照藥材。照薄層色譜法（中國藥典2000年版一部附錄VI B）試驗(yàn)，吸取

3、上述溶液適量，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以75%異丙醇-乙醇(9：1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以苯胺二苯胺磷酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下檢視。供試品色譜中，在與葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，不顯示相同顏色的斑點(diǎn)。(2)取本品葛根淫羊藿總黃酮粉末20mg，加80%乙醇1ml溶解，作為供試品溶液。另取葛根素對(duì)照品適量，加甲醇制成每Iml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。再取葛根對(duì)照藥材0.8g，加甲醇l0ml，溫浸2小時(shí)，濾過，濾液蒸干，加甲醇1ml溶解，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2000年版一部附錄VI B）試驗(yàn)，吸取上述溶液及陰性對(duì)照溶液適量，分別點(diǎn)于同一

4、硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(7：2.5：0.25)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈( 365nm)下檢視。供試品色譜中，分別在與葛根素對(duì)照品及葛根對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。(3)取本品葛根淫羊藿總黃酮粉末20mg，加80%乙醇1ml溶解，作為供試品溶液。另取淫羊藿苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。再取淫羊藿對(duì)照藥材0.5g，加70%乙醇10ml，溫浸2小時(shí)，濾液蒸干，加甲醇1ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2000年版一部附錄VI B）試驗(yàn)，吸取上述溶液及陰性對(duì)照溶液適量，分別點(diǎn)子同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-

5、水(7：2.5：0.25)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，分別在與淫羊藿苷對(duì)照品及淫羊藿對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)?！緳z查】水分照水分測定法（中國藥典2000年版一部附錄IX H第一法）測定，太子參總多糖不得過7.0%，總黃酮不得過5.0%?！竞繙y定】(1)太子參總多糖苯酚試液的配制：稱取苯酚99.8g，鋁片0.lg，碳酸氫鈉0.05g，進(jìn)行蒸餾，收集182餾分l0g，加入蒸餾水190ml，即得。（注：該試液配制后，冷藏，一月內(nèi)有效）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：稱105干燥恒重的葡萄糖98.4mg，用蒸餾水配置成l00m

6、l溶液。精密吸出l0ml，用蒸餾水稀釋到l00ml待用。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2、0.4、0.6、0.8、l.0ml，分別置l0ml具塞試管中，依次加入蒸餾水使最終體積為2.0ml，另取2.0ml燕餾水作空白對(duì)照。各管加入l.0ml苯酚試液，搖勻，迅速滴加濃硫酸各5ml，搖勻后放置5min，置沸水浴中加熱15min（要求準(zhǔn)確記時(shí)），取出至冷水中冷卻l0min。于紫外分光光度計(jì)490nm處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。樣品的測定：取本品太子參總多糖粉末，精密稱定15mg，置l00ml量瓶中，加入蒸餾水溶解至刻度，搖勻。再精密吸取0.5ml，置

7、l0ml具塞試管中。照標(biāo)準(zhǔn)曲線制各項(xiàng)下的方法，測定吸收度，根據(jù)回歸方程計(jì)算供試品溶液中多糖的含量。本品按干燥品計(jì)算，總多糖含量以葡萄糖(C6H12O6) 計(jì)，不得少于50%。(2)葛根淫羊藿總黃酮對(duì)照品溶液的制備：精密稱取葛根素對(duì)照品適量，加乙醇制成1ml中含葛根素0.lmg的溶液。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密吸取葛根素對(duì)照溶液0.2、0.4、0.6、0.8、l.0ml，分別置于l0ml量瓶中，用無水乙醇溶解至刻度，搖勻。以無水乙醇作為空白，在紫外分光光度計(jì)250nm處測定吸收度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。樣品的測定：取本品葛根淫羊藿總黃酮粉末l0mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加入80%乙醇溶解

8、至刻度，搖勻。再精密吸取1ml，置25ml量瓶中，加80%乙醇稀釋至刻度，搖勻。照標(biāo)準(zhǔn)曲線制各項(xiàng)下的方法，測定吸收度，根據(jù)回歸方程計(jì)算供試品溶液中總黃酮的含量，即得。 本品按干燥品計(jì)算，總黃酮含量以葛根素（C21H20O9）計(jì)，不得少于50%。 (3)葛根素照高效液相色譜法（中國藥典2000年版一部附錄VI D）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑。乙腈-0. 5%磷酸水(10:90)為流動(dòng)相；檢測波長為250nm;柱溫45。理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。對(duì)照品溶液的制備 精密稱取葛根素對(duì)照品適量，加乙醇制成每1ml含80ug的葛根素溶液。供試品溶液的制備

9、取葛根淫羊藿總黃酮粉末約34mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加80%乙醇，超聲5分鐘，定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液備用。測定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5 l，分別注入液相色譜儀，測定。本品按干燥品計(jì)算，含葛根以葛根素（C21H20O9）計(jì)，不得少16.4%。（4） 淫羊藿苷 照高效液相色譜法（中國藥典2000年版一部附錄VI D）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑。乙腈-水(27：73)為流動(dòng)相；檢測波長為270nm;柱溫30。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。對(duì)照品溶液的制備 精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品適量，加甲醇制成濃度為0. 154mg/m

10、l的淫羊藿苷溶液。供試品溶液的制備 取葛根淫羊藿總黃酮粉末66mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加入80%乙醇超聲5分鐘，定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液備用。測定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 l，注入液相色譜儀，測定。 本品按干燥品計(jì)算，含淫羊藿以淫羊藿苷（C33H40O15）計(jì)，不得少于1.7%?！举A藏】密封，置干燥處。（二）、藥品標(biāo)準(zhǔn)太子神悅膠囊Taizishenyue Jiaonang【處方】太子參1800g 葛根1200g 淫羊藿600g【制法】 取處方量下的太子參多糖原料藥和葛根淫羊藿總黃酮原料藥，混勻，加入淫羊藿粉（過60目篩），使其占每粒膠囊總重量的20%，裝入0號(hào)膠

11、囊，制粒，即得?！拘誀睢勘酒窞槟z囊劑，內(nèi)容物為淡黃綠色粉末：氣微香，味微苦。【鑒別】(1)取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物40mg，加蒸餾水1ml濾過，作為供試品溶液。另取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品3mg，加蒸餾水1ml溶解，作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液。再取太子參水提取物l0mg，加蒸餾水1ml溶解，濾過，作為對(duì)照藥材。照薄層色譜法（中國藥典2000年版一部附錄VIB）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液及陰性溶液適量，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以75%異丙醇乙醇(9：1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以苯胺二苯胺磷酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下檢視。供試品色譜中，在與葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照藥材及陰性樣品色譜相應(yīng)的位置上，不顯示相同顏

12、色的斑點(diǎn)。(2)取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物40mg，加80%乙醇1ml溶解，濾過，作為供試品溶液。另取葛根素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液作為對(duì)照品溶液。再取葛根對(duì)照藥材0.8g，加甲醇10ml，溫浸2小時(shí)，濾過，濾液蒸干，加甲醇1ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2000年版一部附錄viB）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液及陰性對(duì)照溶液適量，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(7：2.5: 0.25)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，分別在與葛根素對(duì)照品及葛根對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。(3)取本品裝量差

13、異項(xiàng)下的內(nèi)容物40mg，加80%乙醇1ml，熱溶，濾過，作為供試品溶液。另取淫羊藿苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。再取淫羊藿對(duì)照藥材0.5g，加70%乙醇l0ml，溫浸2小時(shí)，濾過，濾液蒸干，加甲醇1ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2000年版一部附錄VI B）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液及陰性對(duì)照溶液適量，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(7：2.5：0.25)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，分別在與淫羊藿苷對(duì)照品及淫羊藿對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。【

14、檢查】應(yīng)符合膠囊劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定（中國藥典2000年版一部附錄IL）?！竞繙y定】(1)總多糖苯酚試液的配制：稱取苯酚99.8g，鋁片0.lg，碳酸氫鈉0.05g，進(jìn)行蒸餾，收集182餾分l0g，加入蒸餾水190ml，即得。（注：該試液配制后冷藏，一月內(nèi)有效）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：稱105干燥恒重的葡萄糖98.4mg，用蒸餾水配置成100l溶液。精密吸取l0ml，用蒸餾水稀釋到l00ml待用。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2、0.4、,0.6、0.8、l.0ml，分別置l0ml具塞試管中，依次加入蒸餾水使最終體積為2.0ml，另取2.0ml蒸餾水作空白對(duì)照。各管加入l.0ml苯酚試液，搖勻

15、，迅速滴加濃硫酸各5ml，搖勻后放置5min，置沸水浴中加熱15min（要求準(zhǔn)確記時(shí)），取出至冷水中冷卻l0min。于紫外分光光度計(jì)490nm處測定吸收度，并吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。樣品的測定：取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物40mg，精密稱定，置l00ml量瓶中，各加入蒸餾水溶解至刻度，搖勻。再精密吸取0.5ml，置l0ml具塞試管中。照標(biāo)準(zhǔn)曲線制各項(xiàng)下的方法，測定吸收度，根據(jù)回歸方程計(jì)算供試品溶液中多糖的含量，即得。 本品按干燥品計(jì)算 ，每粒含總多糖以葡萄糖（C6H12O6）計(jì)，不得少于89.6mg。(2)總黃酮對(duì)照品溶液的制備 精密稱定葛根素對(duì)照品適量，加乙醇制

16、得1ml含0.1mg葛根素的溶液。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取葛根素對(duì)照溶液0.2、0.4，0.6、0.8、l.0ml，分別置于10ml量瓶中，加無水乙醇制成相應(yīng)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，以無水乙醇作為空白，在紫外分光光度計(jì)，250nm處測定吸收度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品的測定：取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物50mg，精密稱定，置50ml容量瓶中，各加入80%乙醇溶解至刻度，搖勻。再精密吸取1ml，置25ml量瓶中，加80%乙醇稀釋至刻度，搖勻。測定方法同標(biāo)準(zhǔn)曲線。照標(biāo)準(zhǔn)曲線制各項(xiàng)下的方法，測定吸收度，根據(jù)回歸方程計(jì)算供試品溶液中總黃酮的含量，即得。本品按干燥品計(jì)算，每粒含總黃酮以葛根素（C21H20O9）計(jì)，不得少

17、48.7mg。(3)葛根素 照高效液相色譜法（中國藥典2000年版一部附錄VI D）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑：乙腈-0.5%磷酸水(10:90)為流動(dòng)相；檢測波長為250nm：柱溫45。理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。對(duì)照品溶液的制備 精密稱取葛根素對(duì)照品適量，加乙醇制成每1ml含80g葛根素的溶液。供試品溶液的制備 取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物62mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加80%乙醇，超聲30分鐘，定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液備用。測定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5 l，分別注入液相色譜儀，測定，即得。本品按干燥品計(jì)算，每粒含葛

18、根以葛根素(C21H20O9)計(jì)，不得少于17.3mg。(4)淫羊藿苷照高效液相色譜法（中國藥典2000年版一部附錄VI D）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑：乙腈-水(27：73)為流動(dòng)相：檢測波長270nm;柱溫30。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于l000。對(duì)照品溶液的制備 精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品適量，加甲醇配制成濃度為0. 154mg/ml的淫羊藿苷溶液。供試品溶液的制備 取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物114mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加80%乙醇，超聲30分鐘，定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液備用。測定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 l，注入液相

19、色譜儀，測定。本品按干燥品計(jì)算，每粒含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)計(jì)，不得少于1.9mg。 【功能與主治】益氣養(yǎng)陰，補(bǔ)益心脾。情緒低落，多思善慮，言語動(dòng)作減少，郁郁寡歡。心悸膽怯，少寐多夢(mèng)健忘，頭暈神疲，食少倦怠乏力，目光遲滯，或心煩，或腹脹便溏，舌質(zhì)淡或紅，苔白，脈細(xì)弱的氣陰不足、心脾兩虛證?！居梅ㄓ昧俊棵看?粒，每天2次?！疽?guī)格】每粒380mg【貯藏】密封，置干燥處。二、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的起草說明 根據(jù)研究結(jié)果，按照藥品注冊(cè)管理辦法的有關(guān)規(guī)定及中華人民共和圈藥典的有關(guān)要求，起草了太子神悅膠囊原料藥、太子神悅膠囊及藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。（一）、原料藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的起草說明【名稱、漢語拼音】太子神悅膠

20、囊原料藥Taizishenyue Jiaonang Yuanliaoyao本品由太子參、葛根、淫羊藿三味藥組成，經(jīng)提取、精制、干燥粉碎而制成。【處方】 太子參1800g 葛根1200g 淫羊藿600g【制法】 取太子參藥材（按處方比例），加入8倍量水（相當(dāng)于生藥重量），于90溫浸提取3次，每次3小時(shí)，提取液用8層紗布過濾，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度約為1.19。加入乙醇至終濃度為80%，靜置過夜，傾去上清。沉淀加水溶解至密度約為1.065，再加入乙醇至醇的終濃度為70%，靜置至不再析出沉淀。加入乙醇洗滌沉淀，真空干燥( 50，0. 08MPa)至水分達(dá)標(biāo)，粉碎，過60目篩，即得太子參總多糖原

21、料藥。 另取葛裉和淫羊藿藥材（按處方比例），加入12倍量（相當(dāng)于生藥重量）的80%乙醇，回流提取3次，每次l小時(shí)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度約為1.04相當(dāng)于每1ml溶液含0.5g生藥）。取上清，通過大孔吸附樹脂柱，先用4倍干樹脂重量的水洗脫雜質(zhì)，水液棄去。再用8倍干樹脂重量的80%乙醇解吸黃酮，洗脫液減壓回收，濃縮至浸膏狀，真空干燥( 60，0.08Mpa)至水分達(dá)標(biāo)，粉碎過60目篩，即得葛根淫羊藿總黃酮原料藥?！拘誀睢勘酒诽訁⒖偠嗵菫榈S色粉末：氣微香，味 本品葛根淫羊藿總黃酮為土黃色粉末；氣微香，味微苦。【鑒別】(1) 系處方中太子參總多糖的鑒別。本品太子參用水提取、乙醇沉淀的方法得

22、到總多糖，但多糖用薄層色譜法檢出比較困難，而一般的多糖制劑則以不含單糖作為檢測標(biāo)準(zhǔn)。所以參照文獻(xiàn)中糖的薄層層析方法，建立了正文所述的方法。取本品太子參總多糖粉末20mg，加蒸餾水1ml溶解，濾過，作為供試品溶液。另取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品3mg，加蒸餾水1ml溶解，作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液。再取太子參水提取物l0mg，加蒸餾水1ml溶解，濾過，作為對(duì)照藥材。照薄層色譜法（中國藥典2000年版一部附錄VI B）試驗(yàn)，用微量進(jìn)樣器吸取上述浴液各1l，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以75%異丙醇-乙醇(9：1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以苯胺二苯胺磷酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下檢視。供試品色譜中，在與葡萄糖標(biāo)

23、準(zhǔn)品、對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，不顯示相同顏色的斑點(diǎn)，證明總多糖提取物中不含有單糖。三批樣品的薄層色譜圖如圖15-l所示。(2) 為處方中葛根藥材的鑒別，葛根素為葛根中主要成分之一，所以選用葛根素為對(duì)照品。參照中國藥典2000年版一部273頁收載的藥材葛根的薄層鑒別方法，通過與對(duì)照品、對(duì)照藥材及陰性對(duì)照藥材比較，三批樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖15-2所示。供試品色譜中，在與對(duì)照品及對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，分別顯相同顏色的亮藍(lán)色熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照在與對(duì)照品色譜的相應(yīng)位置上無斑點(diǎn)。該法層析斑點(diǎn)清晰，重現(xiàn)性好，且方法簡便易行。(3) 為處方中淫羊藿藥材的鑒別，淫羊藿苷為淫羊藿中的主要成分，所以選用淫羊藿苷

24、為對(duì)照品。參照中國藥典2000年版一部267頁收載的藥材淫羊藿的薄層鑒別方法，通過與對(duì)照品、對(duì)照藥材及陰性對(duì)照藥材比較，三批樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖15-3所示。供試品色譜中，在與對(duì)照品及對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，分別顯相同顏色的黃色熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照在與對(duì)照品色譜的相應(yīng)位置上無斑點(diǎn)。該法層析斑點(diǎn)清晰，重現(xiàn)性好，且方法簡便易行?！緳z查】 水分測定 根據(jù)中國藥典2000年版有關(guān)規(guī)定，采用烘干法測定其含水量，試驗(yàn)結(jié)果見表15 -1和表15-2。表15 -1 太子參總多糖水分測定結(jié)果批號(hào)每批平均失重率（%）平均失重率（%）0205013.860205023.623.790205033.89表15 -2 葛

25、根淫羊藿總黃酮水分測定結(jié)果批號(hào)每批平均失重率（%）平均失重率（%）0205041.740205051.781.810205061.91【含量測定】 本品由三味藥太子參、葛根和淫羊藿組成，太子參總多糖和葛根淫羊藿總黃酮分別為本品的有效成分，因此含量測定包括太子參總多糖、葛根淫羊藿總黃酮、葛根素和淫羊藿苷四項(xiàng)內(nèi)容。1、太子參總多糖以葡萄糖計(jì)的含量測定儀器與試藥儀器：TU-1800紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司） 萬分之一和十萬分之AE240雙量程分析天平（梅特勒一托利多上海儀器有 限公司）試劑及試藥：苯酚、硫酸、葡萄糖均為分析純（北京化學(xué)試劑公司）檢測波長：490nm苯酚試液的配制：

26、稱取苯酚99.8g，鋁片0.lg，碳酸氫鈉0.05g，進(jìn)行蒸餾，收集182餾分10g，加入蒸餾水190ml，即得。（注：該試液配制后，冷藏，一月內(nèi)有效）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：稱105干燥恒重的葡萄糖98.4mg，用蒸餾水配置成l00ml溶液。精密吸出l0ml，用蒸餾水稀釋到l00ml待用。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2、0.4、0.6、0.8、l.0ml，分別置l0ml具塞試管中，依次加入蒸餾水使最終體積為2.0ml，另取2.0ml蒸餾水作空白對(duì)照。各管加入l.0ml苯酚試液，搖勻，迅速滴加濃硫酸各5ml，搖勻后放置5min，置沸水浴中加熱15min（要求準(zhǔn)確記時(shí)），取出至冷水中冷卻l0mi

27、n。于紫外分光光度計(jì)490nm處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。供試品溶液的制備 取本品太子參總多糖粉末15mg，精密稱定，置l00ml量瓶中，各加入蒸餾水溶解至刻度，搖勻，作為供試品溶液。樣品的測定：取本品太子參總多糖粉末，精密稱定15mg，置l00ml量瓶中，加入蒸餾水溶解至刻度，搖勻。再精密吸取0.5ml，置l0ml具塞試管申。照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，測定吸收度，根據(jù)回歸方程計(jì)算供試品溶液中多糖的含量。方法學(xué)考察(1) 吸收波長的選擇 處方中含有太子參多糖，按正文樣品的制備方法進(jìn)行操作獲得供試品溶液。分別吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液，供試品溶液和陰性供試品

28、溶液，按證文總多糖含量測定項(xiàng)下的方法顯色后，于可見光范圍進(jìn)行掃描，吸收光譜見圖15-4，測得標(biāo)準(zhǔn)品和供試品的最大吸收波長為490nm，陰性供試品在測定波長處無明顯最大吸收。說明在波長490nm處黃酮對(duì)多糖的含量測定無干擾。(2) 線性關(guān)系的考察 精密吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案含量測定項(xiàng)下的方法，測定吸收度，以葡萄糖的濃度為橫坐標(biāo)，吸收度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖15-5，吸收度值的測定結(jié)果見表15 -3。表15 -3 葡萄糖線性關(guān)系考察表對(duì)照品濃度（g/ml）吸收度2.46000.14204.92000.32807.38000.50009.84000.677012.3000.8260

29、回歸方程 C=14.5584A+0.14949 相關(guān)系數(shù)r=0. 9994結(jié)果表明葡萄糖在2. 460012. 300g/ml范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。(3) 穩(wěn)定性試驗(yàn)取 同一供試品溶液，72小時(shí)內(nèi)測定吸收度，結(jié)果見表15 -4，結(jié)果顯示72小時(shí)內(nèi)無明顯變化，方法穩(wěn)定。表15 -4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果時(shí)間（小時(shí)）02468244872吸收度0.3780.3720.3720.3740.3800.3780.3840.376平均值0.377RSD (%)1.097(4) 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別連續(xù)測定吸收度5次見表15 -5，結(jié)果表明方法精密度較好。表15 -5 精密度試驗(yàn)結(jié)果稱樣量（mg

30、）吸收度平均值RSD（%）0.3780.37715.60.3780.3770.2370.3760.378(5) 重現(xiàn)性試驗(yàn) 精密稱取同一批供試品樣品5份，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測定方法進(jìn)行測定，測得總多糖的含量(%)見表15 -6，結(jié)果表明方法重現(xiàn)性較好。表15 -6 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果 稱樣量（mg）吸收度含量（%）平均值RSD（%）15.60.38358.7215.60.37857.9815.60.38358.7258.720.82015.60.38759.3215.60.38458.87(6) 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的同批供試品藥樣品5份，加入定量的葡萄糖，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測定項(xiàng)下供試品溶液

31、制備和含量測定方法制備供試品溶液，進(jìn)行含量測定，計(jì)算，總多糖的加樣回收率結(jié)果見表15 -7，結(jié)果說明本法回收率好，方法可行。表15 -7加樣回收率試驗(yàn)樣品稱樣量（mg）樣品加入量（mg）對(duì)照品加入量（mg）實(shí)測值（mg）回收率（%）平均值（%）RSD（%）15.00.022040.027730.0507103.4015.10.022190.027730.0510103.7815.10.022190.027730.0502101.06100.882.7415.40.022630.027730.049797.6415.40.022630.027730.050098.55(7) 樣品測定 取3批供試

32、品，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測定項(xiàng)下供試品溶液制備和含量測定方法制備供試品溶液，進(jìn)行含量測定，結(jié)果見表15 -8。表15 -8 三批樣品中總多糖的測定結(jié)果批號(hào)每批總多糖平均值（%）02050161.1902050258.3002050359.01(8) 制定限量原料藥中總多糖含量不得低于50%。2、葛根淫羊藿總黃酮以葛根素計(jì)的含量測定儀器與試藥儀器：TU-1800紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司） 萬分之一和十萬分之-AE240雙量程分析天平（梅特勒-托利多上海儀器有限公司）試藥：甲醇分析純（韋斯實(shí)驗(yàn)用品有限公司）葛根素對(duì)照品：中國藥品生物制品鑒定所提供（批號(hào)：752 -200108）檢測波

33、長：200nm對(duì)照品溶液的制備 精稱葛根素對(duì)照品2.5mg，置25ml容量瓶中，甲醇定容，搖勻，即得1ml中含葛根素0.lmg的溶液。供試品溶液的制備 取本品l0mg，精密稱定后，置50ml量瓶中，加80%乙醇至刻度，搖勻。再精密吸取1ml，置25ml容量瓶中，加80%乙醇稀釋至刻度。測定法 分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液，置于比色皿中，以80%乙醇為空白對(duì)照液，250nm下測定吸收度，計(jì)算葛根素的含量，即得。方法學(xué)考察(1) 吸收波長的選擇 處方中含有葛根異黃酮和淫羊藿黃酮，葛根素的紫外最大吸收波長為250nm，而淫羊藿苷的紫外最大吸收波長為270nm。分別吸取樣品溶液，葛根素對(duì)照品溶液，淫羊

34、藿苷對(duì)照品溶液及葛根素加上淫羊藿苷的對(duì)照品溶液，于紫外光范圍進(jìn)行掃描，得到紫外吸收光譜，見圖15-6，測得樣品的最大吸收波長與葛根素相同，因此選用250nm為測定樣品中總黃酮的吸收波長。 按正文樣品的制備方法進(jìn)行操作獲得供試品溶液。分別吸取葛根素對(duì)照品溶液，供試品溶液和陰性供試品溶液，按正文總黃酮含量測定項(xiàng)下的方法，于紫外光范圍進(jìn)行掃描，吸收光譜見圖15-7，測得標(biāo)準(zhǔn)品和供試品的最大吸收波長為250nm，陰性供試品在測定波長處無明顯最大吸收。說明在波長250nm處多糖對(duì)黃酮的含量測定無干擾。(2) 線性關(guān)系的考察 精密吸取葛根素對(duì)照品溶液按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案含量測定方法，測定吸收度，以葛根素的濃度為

35、橫坐標(biāo)，吸收度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖15-8，吸收度值的測定結(jié)果見表15 -9。表15 -9 葛根素對(duì)照品線性關(guān)系考察對(duì)照品量（g/ml）吸收度2.06400.14704.12800.28006.19200.41508.25600.548010.32000.6830回歸方程C=15. 1952A-0.08994 相關(guān)系數(shù)r=0. 99988結(jié)果表明葛根素在2. 06410. 32g/ml濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。(3) 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一對(duì)照品溶液，在72小時(shí)內(nèi)測定吸收度，結(jié)果見表15-10，可知樣品在72小時(shí)內(nèi)無明顯變化，方法穩(wěn)定。表15 -10 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果時(shí)間（小時(shí)）0246

36、8244872吸收度0.3650.3640.3640.3650.3650.3640.3650.365平均值0.365RSD (%)0.142(4) 精密度試驗(yàn) 取同一批供試品溶液，分別連續(xù)測定吸收度5次見表15 -11，結(jié)果表明方法精密度較好。表15 -11 精密度試驗(yàn)結(jié)果稱樣量（mg）吸收度平均值RSD（%）0.3650.36410.40.3650.3650.1230.3650.365(5) 重現(xiàn)性試驗(yàn) 精密稱取同一批供試品樣品5份，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測定方法進(jìn)行測定，測得總黃酮的含量(%)見表15 - 12，結(jié)果表明方法重現(xiàn)性較好。表15 12 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果稱樣量（mg）吸收度含量（%）平均

37、值RSD（%）10.30.35965.1110.40.36465.4010.40.36565.5865.630.64610.30.36365.8510.30.36566.22(6) 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的同批原料藥樣品5份，加入定量的葛根素對(duì)照品，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測定項(xiàng)下供試品溶液制各和含量測定方法制備供試品溶液，進(jìn)行含量測定，計(jì)算，總黃酮的加樣回收率結(jié)果見表15 -13，結(jié)果說明本法回收率好，方法可行。表15 -13 加樣回收率試驗(yàn)樣品稱樣量（mg）樣品加入量（mg）對(duì)照品加入量（mg）實(shí)測值（mg）回收率（%）平均值（%）RSD（%）10.40.064800.0610.12651

38、01.1910.70.066670.0610.1277100.0010.80.067290.0610.1284100.2299.671.4810.30.064180.0610.123597.2310.30.064180.0610.125099.72(7) 樣品測定 取3批原料藥，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測定項(xiàng)下供試品溶液制備和含量測定方法制備供試品溶液，進(jìn)行含量測定，結(jié)果見表15 -14。表15 -14 三批樣品中總黃酮的測定結(jié)果批號(hào)每批總黃酮平均值（%）02050459.6302050560.3002050660.29(8) 制定限量 確定原料藥中總黃酮含量不得低于50%。3、葛根素的含量測定儀器與試

39、藥儀器：高效液相色譜儀（Waters 515泵，996 PDA檢測器） 萬分之一和十萬分之一AE240雙量程分析天平（梅特勒-托利多上海儀器有限公司）試藥：乙腈 色譜純( J.T Baker A Division of mallinckroor Baker,lnc) 磷酸（純度85%，分析純，北京化工廠生產(chǎn)） 二次重蒸水（自制）葛根素對(duì)照品 中國藥品生物制品鑒定所提供（批號(hào)：752 -200108）。經(jīng)高效液相色譜歸一化法測定純度為99. 80%，見圖15-9。色譜條件色譜柱：Hypersil ODS柱，（150×4.6mm i.d.5m中國科學(xué)院大連化學(xué)物理所）預(yù)柱：ODS柱(l0

40、mm x 4.6mm i.d.5m) 柱溫：45流動(dòng)相：乙腈-0.5%磷酸水(10:90) 流速：1ml/min檢測波長：250nm 迸樣量：5l理論塔板數(shù)：不得低于2500對(duì)照品洛液的制備 精密稱取葛根素對(duì)照品l0mg，置25ml容量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，濃度為400g/ml。精密吸取2ml，置l0ml容量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻制成每1ml含80g的葛根素溶液。供試品溶液的制備 按原料藥按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案含量測定方法項(xiàng)下的方法制備，超聲即可完全溶解，所以沒有對(duì)其提取制備方法進(jìn)行方法學(xué)考察。陰性溶液的制備 按處方取太子參和淫羊藿藥材8g，置l00ml量瓶中，加入80%乙醇，超聲30分鐘，定容

41、，搖勻，濾過，取續(xù)濾液備用。測定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5l，注入液相色譜儀，測定。方法學(xué)考察(1) 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 根據(jù)上述儀器條件得到葛根素對(duì)照品、供試品色譜圖，見圖15-9，15-10。其理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)算，n>2500，拖尾因子T=l. 00，樣品中葛根素峰與相近峰達(dá)到基線分離，分離度R>1.50，樣品中葛根素峰為單一化合物，見圖15-10。(2) 測定波長的選擇 經(jīng)紫外掃描，葛根素對(duì)照品和原料藥在250nm處均有最大吸收，所以選定250nm作為檢測波長。(3) 流動(dòng)相的選擇 本實(shí)驗(yàn)選擇了如下流動(dòng)相進(jìn)行比較，以乙腈-0.5%磷酸水( 10：90)，柱溫4

42、5峰形、分離度及理論板數(shù)最好，見圖15-11，15-12，15-13。A：甲醇-水(25:75)，柱溫30B：甲醇- 0.5%磷酸(20：80)，柱溫30C：乙腈- 0.5%磷酸(10:90)，柱溫45(4) 陰性組分的測定 分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照液各5l，進(jìn)行測定，對(duì)照品葛根素的保留時(shí)間與供試品色譜中葛根素的保留時(shí)間一致，而陰性對(duì)照液色譜中未出現(xiàn)葛根素峰，說明總黃酮原料藥中其它組分不干擾葛根素的測定，見圖15-14。(5) 線性關(guān)系考察 分別精密量取濃度為20、40、60、80、100、120g/ml葛根素對(duì)照品溶液l0l，按測定方法依次進(jìn)樣，測定峰面積。以葛根素的濃度為橫坐

43、標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖15-15，測定結(jié)果見表15 -15。表15-15 葛根素對(duì)照品線性關(guān)系考察結(jié)果樣品號(hào)123456對(duì)照品濃度g/ml20.040.060.080.0100.0120.0峰面積77418215526722312580311142538956234712524得線性方程Y=39177X-13628 相關(guān)系數(shù)r2=0. 9999線形范圍：20. 0120. 0 g/ml(6) 穩(wěn)定性試驗(yàn)對(duì)照品穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取濃度為80. 0g/ml葛根素對(duì)照品溶液，精密吸取5l進(jìn)樣，分別在1、2、3、24、48、72小時(shí)測定其葛根素峰面積，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明葛根素在72個(gè)時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，測定

44、結(jié)果見表15-16。表15 -16 葛根素穩(wěn)定性考察結(jié)果l時(shí)間（小時(shí)）峰面積平均峰面積RSD（%）11529977215349063153943215470401.66241598084481533516721546326 原料藥穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取葛根淫羊藿總黃酮粉末34mg，置l00ml容量瓶中，加80%乙醇，超聲5分鐘，定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液。精密吸取5l進(jìn)樣，分別在1、2、3、24、48、72小時(shí)測定葛根素峰面積，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明葛根素在72小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，測定結(jié)果見表15-17。表15 -17 葛根素穩(wěn)定性考察結(jié)果2時(shí)間（小時(shí)）峰面積平均峰面積RSD（%）1149535521537559315

45、4052415308121.14241536307481535947721539180(7) 精密度試驗(yàn)對(duì)照品精密度實(shí)驗(yàn)：取濃度為80. 0g/ml葛根素對(duì)照品溶液，精密吸取5l進(jìn)樣，測定峰面積，6次測定結(jié)果見表15-18。表15-18 葛根素精密度考察結(jié)果1次數(shù)峰面積平均峰面積RSD（%）1 1529977215019973151561215253880.9241534906515304046 1539432 原料藥精密度實(shí)驗(yàn)：取葛根淫羊藿總黃酮粉末30mg，置l00ml容量瓶中，加80%乙醇，超聲5分鐘，定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液。精密吸取5l進(jìn)樣，測定峰面積，6次測定結(jié)果見表15-19。

46、表15-19 葛根素精密度考察結(jié)果2次數(shù)峰面積平均峰面積RSD（%）1132671721348350313 7110713512351.14413438595135688461360490 結(jié)果表明，儀器精密度較高，可靠性強(qiáng)，方法可行。(8) 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)供試品，5份，各34mg，精密稱定，分別置l00ml容量瓶中，加80%乙醇，超聲5分鐘，定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液。精密吸取5l進(jìn)樣，5次測定結(jié)果見表15-20。表15 -20 葛根素重現(xiàn)性考察結(jié)果稱樣量（mg）Area含量%平均含量%RSD %隨行對(duì)照品1549393134.01147365922.37234.0314275692

47、1.66334.08144306221.8621.951.19434.03144343421.90534.09145104221.98(9) 如樣回收率試驗(yàn) 精密稱取葛根淫羊藿總黃酮粉末16. 0mg，同一批號(hào)(平均含量21. 95%)，5份，分別置于l00ml量瓶中，各加9.6ml濃度為400.0g/ml對(duì)照品，加80%乙醇，超聲5分鐘，定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液。精密吸取5l進(jìn)樣，見表15 - 21。表15 - 21 葛根素回收率試驗(yàn)結(jié)果NO.稱樣量mg樣品峰面積測出量C添加量B樣品含量A回收率平均回收率%RSD%116.2914393687.3553.843.57698.41216.62

48、14631187.4763.843.64899.69316.8414525947.4223.843.69697.0399.271.73416.1314569807.4453.843.541101.67516.3214493497.4063.843.58299.57(10) 樣品測定 取三批原料藥粉末34mg，精密稱定，置l00ml容量瓶中,加80%乙醇，超聲5分鐘，定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液。精密吸取5l進(jìn)樣，測定結(jié)果見表15-22。表15 -22 三批樣品葛根素測定結(jié)果批號(hào)稱樣量mg峰面積含量%平均含量%RSD%隨行對(duì)照品156596134.67151145222.2702050434.97

49、154050122.5022.300.8534.56149694722.1334.79147777921.7002050534.94150756722.0421.642.0234.82144318721.1734.11148707922.2702050634.91152566922.3322.141.2534.76148488521.82(11) 藥材中葛根素的轉(zhuǎn)移率表15 -23 藥材中葛根素的轉(zhuǎn)移率批號(hào)藥材用量kg收率%原料藥kg理論值kg實(shí)際值kg轉(zhuǎn)移率%031201-2187.111.280.360.25671.11031202-2187.061.270.360.25470.56031

50、203-2187.281.310.360.26272.78平均值187.151.290.360.25771.48注：葛根素理論值(g)=葛根藥材用量(kg) ×葛根藥材中葛根素含量(%) 葛根素實(shí)際值(g)=所得原料藥(kg) ×每批原料藥中葛根素含量(%) 轉(zhuǎn)移率(%)=葛根素實(shí)際含量(g)葛根素理論值(g) ×100%(12) 限量制定：根據(jù)中試結(jié)果，本品含葛根素按干燥品計(jì)算不得少于16. 4%。4、淫羊藿苷的含量測定儀器與試藥儀器：高效液相色譜儀（Waters 515泵，996 PDA檢測器） 萬分之一和十萬分之-AE240雙量程分析天平（梅特勒-托利多上海

51、儀器有限公司）試藥：乙腈 色譜純( J.T Baker A Division of mallinckroor Baker,lnc)二次重蒸水（自制）對(duì)照品：淫羊藿苷對(duì)照品由中國藥品生物制品鑒定所提供(批號(hào)：0737 -9910)，經(jīng)高效液相色譜歸一化法測定純度為98. 78%，見圖15-16。色譜條件色譜柱：Hypersil ODS柱，（150×4.6mm i.d.5m中國科學(xué)院大連化學(xué)物理所）預(yù)柱：ODS柱(l0mm ×4.6mm i.d.5m) 柱溫：30流動(dòng)相：乙腈-水(27:73) 流速：1rnl/min檢測波長：270nm 進(jìn)樣量：10l理論塔板數(shù)：不得低于1500對(duì)照品溶液的制備 精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品7. 7mg，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻配制成濃度為0. 77mg/ml的溶液，精密吸取1ml，置5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，配制成濃度為0. 154mg/ml的淫羊藿苷溶液。供試品溶液的制備 按原料藥按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案含量測定方泫項(xiàng)下的方法制備，超 聲即可完全溶解