淡水生物調(diào)查技術(shù)規(guī)范

1、一浮游生物調(diào)查1采樣1.1采樣點(diǎn)布設(shè)1.1.1原則根據(jù)水體面積、形態(tài)、浮游植物的生態(tài)分布特點(diǎn)和調(diào)查的目的等決定采樣點(diǎn)數(shù)量。采樣點(diǎn)應(yīng)有代表性，能反映整個(gè)水體浮游生物的基本情況。采樣點(diǎn)設(shè)置數(shù)量見(jiàn)表1。表1采樣點(diǎn)設(shè)置數(shù)量520水體面積（km2）22520505010010050050057采樣點(diǎn)數(shù)（個(gè)）3357101015152020301.1.2湖泊、水庫(kù)湖泊應(yīng)兼顧在近岸和中部設(shè)點(diǎn)，可根據(jù)湖泊形狀在湖心區(qū)、大的湖灣中心區(qū)、進(jìn)水口和出水口附近、沿岸淺水區(qū)（有水草區(qū)和無(wú)水草區(qū)）分散選設(shè)；水庫(kù)應(yīng)在庫(kù)心區(qū)（河道型水庫(kù)應(yīng)分別在上游、中游、下游的中心區(qū)）及大的庫(kù)灣中心區(qū)、主要進(jìn)水口、出水口附近、主要排污口、入

2、庫(kù)江河匯合處設(shè)點(diǎn)。1.1.3江河在干流上游、中游、下游，主要支流匯合口上游、匯合后與干流充分混合處，主要排污口附近、河口區(qū)等河段設(shè)置采樣斷面。根據(jù)江河寬設(shè)置斷面采樣點(diǎn)，一般小于50m的只在中心區(qū)設(shè)點(diǎn)；50m100m的可在兩岸有明顯水流處設(shè)點(diǎn)；超過(guò)100m的應(yīng)在左、中、右分別設(shè)置采樣點(diǎn)。1.2采樣層次1.2.1浮游植物采樣水深小于3m時(shí)，只在中層采樣；水深3m6m時(shí)，在表層、底層采樣，其中表層水在離水面0.5m處，底層水在離泥面0.5m處；水深6m10m時(shí)，在表層、中層、底層采樣；水深大于10m時(shí)，在表層、5m、10m水深層采樣，10m以下處除特殊需要外一般不采樣。1.2.2浮游動(dòng)物采樣由水體的

3、深度決定，每隔0.5m、1m或2m取一個(gè)水樣加以混合，然后取一部分作為浮游動(dòng)物定量之用。1.3采樣頻次和采樣時(shí)間采集次數(shù)依研究目的而定，采樣次數(shù)可逐月或按季節(jié)進(jìn)行，一般按季節(jié)進(jìn)行。樣品瓶必須貼上標(biāo)簽，標(biāo)明采集時(shí)間、地點(diǎn)。采樣時(shí)間盡量保持一致，一般在上午8：0010：00進(jìn)行。1.4采樣方法1.4.1浮游植物采樣定量樣品在定性采樣之前用采水器采集，每個(gè)采樣點(diǎn)取水樣1L，貧營(yíng)養(yǎng)型水體應(yīng)酌情增加采水量。泥沙多時(shí)需先在容器內(nèi)沉淀后再取樣。分層采樣時(shí)，取各層水樣等量混勻后取水樣1L。大型浮游植物定性樣品用25號(hào)浮游生物網(wǎng)在表層緩慢拖曳采集，注意網(wǎng)口與水面垂直，網(wǎng)口上端不要露出水面。1.4.2浮游動(dòng)物采樣

4、原生動(dòng)物、輪蟲(chóng)和無(wú)節(jié)幼體定量可用浮游植物定量樣品，如單獨(dú)采集取水樣量以1L為宜；定性樣品采集方法同浮游植物。枝角類和橈足類定量樣品應(yīng)在定性采樣之前用采水器采集，每個(gè)采樣點(diǎn)采水樣10L50L，再用25號(hào)浮游生物網(wǎng)過(guò)濾濃縮，過(guò)濾物放入標(biāo)本瓶中，并用濾出水洗過(guò)濾網(wǎng)3次，所得過(guò)濾物也放入上述瓶中；定性樣品用13號(hào)浮游生物網(wǎng)在表層緩慢拖曳采集。注意過(guò)濾網(wǎng)和定性樣品采集網(wǎng)要分開(kāi)使用。2樣品的固定浮游植物樣品立即用魯哥氏液固定，用量為水樣體積的11.5。如樣品需較長(zhǎng)時(shí)間保存，則需加入37%40甲醛溶液，用量為水樣體積的4。原生動(dòng)物和輪蟲(chóng)定性樣品，除留一瓶供活體觀察不固定外，固定方法同浮游植物。枝角類和橈足類

5、定量、定性樣品應(yīng)立即用37%40甲醛溶液固定，用量為水樣體積的5。3水樣的沉淀和濃縮固定后的浮游植物水樣搖勻倒入固定在架子上的1L沉淀器中，2h后將沉淀器輕輕旋轉(zhuǎn)，使沉淀器壁上盡量少附著浮游植物，再靜置24h。充分沉淀后，用虹吸管慢慢吸去上清液。虹吸時(shí)管口要始終低于水面，流速、流量不能太大，沉淀和虹吸過(guò)程不可搖動(dòng)，如攪動(dòng)了底部應(yīng)重新沉淀。吸至澄清液的1/3時(shí)，應(yīng)逐漸減緩流速，至留下含沉淀物的水樣20mL25（或3040）mL，放入30（或50）mL的定量樣品瓶中。用吸出的少量上清液沖洗沉淀器2次3次，一并放入樣品瓶中，定容到30（或50）mL。如樣品的水量超過(guò)30（或50）mL，可靜置24 h

6、后，或到計(jì)數(shù)前再吸去超過(guò)定容刻度的余水量。濃縮后的水量多少要視浮游植物濃度大小而定，正常情況下可用透明度作參考,依透明度確定水樣濃縮體積見(jiàn)表2，濃縮標(biāo)準(zhǔn)以每個(gè)視野里有十幾個(gè)藻類為宜。表2依透明度確定水樣濃縮體積透明度（cm）1L 水樣濃縮后的水量（mL）10030505010010050305050010020301000（不濃縮）201000（稀釋）原生動(dòng)物和輪蟲(chóng)的計(jì)數(shù)可與浮游植物計(jì)數(shù)合用一個(gè)樣品；枝角類和橈足類通常用過(guò)濾法濃縮水樣。4種類鑒定優(yōu)勢(shì)種類應(yīng)鑒定到種，其它種類至少鑒定到屬。種類鑒定除用定性樣品進(jìn)行觀察外，微型浮游植物需吸取定量樣品進(jìn)行觀察，但要在定量觀察后進(jìn)行。5計(jì)數(shù)5.1浮游植

7、物計(jì)數(shù)5.1.1計(jì)數(shù)框行格法計(jì)數(shù)前需先核準(zhǔn)濃縮沉淀后定量瓶中水樣的實(shí)際體積，可加純水使其成30mL、50mL、100mL等整量。然后將定量樣品充分搖勻，迅速吸出0.1mL置于0.1mL計(jì)數(shù)框內(nèi)（面積20mm×20mm）。蓋上蓋玻片后，在高倍鏡下選擇3行5行逐行計(jì)數(shù)，數(shù)量少時(shí)可全片計(jì)數(shù)。1L水樣中的浮游植物個(gè)數(shù)（密度）可用下列公式計(jì)算：N=N0N1V1V0Pn（1）式中：N1L水樣中浮游生物的數(shù)量，個(gè)/L；N0計(jì)數(shù)框總格數(shù)；N1計(jì)數(shù)過(guò)的方格數(shù)；V11L水樣經(jīng)濃縮后的體積，mL；V0計(jì)數(shù)框容積，mL；Pn計(jì)數(shù)的浮游植物個(gè)數(shù)。5.1.2目鏡視野法首先應(yīng)用臺(tái)微尺測(cè)量所用顯微鏡在一定放大倍數(shù)下

8、的視野直徑，計(jì)算出面積。計(jì)數(shù)的視野應(yīng)均勻分布在計(jì)數(shù)框內(nèi)，每片計(jì)數(shù)視野數(shù)可按浮游植物的多少而酌情增減，一般為50個(gè)300個(gè)，依浮游植物數(shù)確定計(jì)算視野數(shù)見(jiàn)表3。表3依浮游植物數(shù)確定計(jì)算視野數(shù)浮游植物平均數(shù)（個(gè)/視野）視野數(shù)（個(gè)）123002520051010010501L水樣中浮游植物的個(gè)數(shù)（密度）可用下列公式計(jì)算：N=CsFsFnVV0Pn（2）式中：N1L水樣中浮游生物的數(shù)量，個(gè)/L；Cs計(jì)算框面積，mm2Fs視野面積，mm2Fn每片計(jì)數(shù)過(guò)的視野數(shù)；V1L水樣經(jīng)濃縮后的體積，mL；V0計(jì)數(shù)框容積，mL；Pn計(jì)數(shù)的浮游植物個(gè)數(shù)。5.2浮游動(dòng)物計(jì)數(shù)5.2.1原生動(dòng)物：吸出0.1mL樣品，置于0.1

9、mL計(jì)數(shù)框內(nèi)，蓋上蓋玻片，在10×20倍顯微鏡下全片計(jì)數(shù)。每瓶樣品計(jì)數(shù)兩片，取其平均值。5.2.2輪蟲(chóng)：吸出1mL樣品，置于1mL計(jì)數(shù)框內(nèi)，在10×10倍顯微鏡下全片計(jì)數(shù)。每瓶樣品計(jì)數(shù)兩片，取其平均值。5.2.3枝角類、橈足類：用5mL計(jì)數(shù)框?qū)悠贩秩舾纱稳坑?jì)數(shù)。如樣品中個(gè)體數(shù)量太多，可將樣品稀釋50mL或100mL，每瓶樣品計(jì)數(shù)兩片，取其平均值。5.2.4無(wú)節(jié)幼體：如樣品中個(gè)體數(shù)量不多，則和枝角類、橈足類一樣全部計(jì)數(shù)；如數(shù)量很多，可把過(guò)濾樣品稀釋，充分搖勻后取其中部分計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)3片5片取其平均值。也可在輪蟲(chóng)樣品中同輪蟲(chóng)一起計(jì)數(shù)。5.2.5計(jì)數(shù)前，充分搖勻樣品，吸出迅速、

10、準(zhǔn)確。蓋上蓋玻片后，計(jì)數(shù)框內(nèi)無(wú)氣泡，無(wú)水樣溢出。5.2.6單位體積浮游動(dòng)物的數(shù)量按下式計(jì)算N=VsnVVa（3）式中:N1L水樣中浮游動(dòng)物的數(shù)量，個(gè)/L；V采樣的體積，L；Vs樣品濃縮后的體積，mL；Va計(jì)數(shù)樣品體積，mL；n計(jì)數(shù)所獲得的個(gè)體數(shù)，個(gè)。5.3注意事項(xiàng)每瓶樣品計(jì)數(shù)兩片取其平均值，每片結(jié)果與平均數(shù)之差不大于±15，否則必須計(jì)數(shù)第三片，直至三片平均數(shù)與相近兩數(shù)之差不超過(guò)均數(shù)的15%為止，這兩個(gè)相近值的平均數(shù)即可視為計(jì)算結(jié)果。浮游植物計(jì)數(shù)單位用細(xì)胞個(gè)數(shù)表示。對(duì)不易用細(xì)胞數(shù)表示的群體或絲狀體，可求出平均細(xì)胞數(shù)。浮游動(dòng)物計(jì)數(shù)單位用個(gè)數(shù)表示。某些個(gè)體一部分在視野中，另一部分在視野外，

11、這時(shí)可規(guī)定只計(jì)數(shù)上半部分或只計(jì)數(shù)下半部分。6生物量的測(cè)定浮游植物的比重接近1，可直接采用體積換算成重量（濕重）。體積的測(cè)定應(yīng)根據(jù)浮游植物的體型，按最近似的幾何形狀測(cè)量必要的長(zhǎng)度、高度、直徑等，每一種類至少隨機(jī)測(cè)定50個(gè)，求出平均值，代入相應(yīng)的求積公式計(jì)算出體積。此平均值乘上1L水中該種藻類的數(shù)量，即得到1L水中這種藻類的生物量，所有藻類生物量的和即為1L水中浮游植物的生物量，單位為mg/L或g/m3。種類形狀不規(guī)則的可分割為幾個(gè)部分，分別按相似圖形公式計(jì)算后相加。量大或體積大的種類，應(yīng)盡量實(shí)測(cè)體積并計(jì)算平均重量。其他種類可參照表D1。微型種類只鑒別到門，按大、中、小三級(jí)的平均質(zhì)量計(jì)算。極小的（

12、5m）為0.0001 mg/104個(gè)；中等的（5m10m）為0.002mg/104個(gè)；較大的（10m20m）為0.005mg/104個(gè)。原生動(dòng)物、輪蟲(chóng)可用體積法求得生物體積，比重取l，再根據(jù)體積換算為重量和生物量。甲殼動(dòng)物可用體長(zhǎng)一體重回歸方程，由體長(zhǎng)求得體重（濕重）。無(wú)節(jié)幼體可按0.003mg濕重/個(gè)計(jì)算。輪蟲(chóng)、枝角類、橈足類及其幼體可用電子天平直接稱重。即先將樣本分門別類，選擇30個(gè)50個(gè)樣本，用濾紙將其表面水分吸干至沒(méi)有水痕，置天平上稱其濕重。個(gè)體較小的增加稱重個(gè)數(shù)。二著生生物調(diào)查只進(jìn)行定性檢查。主要刮取或剝離水中浸沒(méi)物諸如石塊、木樁、樹(shù)枝、水草或硬底泥等表層藻膜、絲狀藻和粘稠狀生長(zhǎng)物，

13、用魯哥試劑固定。室內(nèi)顯微鏡下鑒定種類組成。2.1采樣2.1.1采樣點(diǎn)布設(shè)采樣點(diǎn)數(shù)量依著生生物分布及豐度而定，一般5個(gè)6個(gè)。采樣點(diǎn)布設(shè)在水體的淺水區(qū)、沿岸帶和大型水生植物分布區(qū)等水域，一些受污染等特殊點(diǎn)也需采樣觀察。2.1.2采樣方法水體中有大量大型水生植物分布，則采集整株水草，帶回實(shí)驗(yàn)室。在室內(nèi)從水草根部起，依次刮取植株上的所有著生生物。除此外，水底石塊、木樁、樹(shù)枝等基質(zhì)上的著生生物可用刀片或硬刷刮（刷）到盛有蒸餾水的樣品瓶中，再將基質(zhì)沖洗干凈，沖洗液裝入樣品瓶中?，F(xiàn)場(chǎng)來(lái)不及刮樣時(shí)，可將基質(zhì)帶回室內(nèi)刮取。2.2樣品的處理著生藻類樣品的處理：樣品用魯哥氏液固定，用量為水樣體積的11.5。著生原生

14、動(dòng)物樣品的處理：將樣本連同基質(zhì)分別放入盛有采樣點(diǎn)水樣的廣口瓶?jī)?nèi)，其中一瓶用魯哥氏液固定，另一瓶不加固定液，供活體觀察用。2.3種類鑒定優(yōu)勢(shì)種類須鑒定到種，其他種類至少鑒定到屬。三水體初級(jí)生產(chǎn)力的測(cè)定1 浮游植物葉綠素a的測(cè)定1.1水樣的采集與保存 可根據(jù)工作的需要進(jìn)行分層采樣或混合采樣。湖泊、水庫(kù)采樣500rnl,池塘300m1，采樣量視浮游植物分布量而定，若浮游植物數(shù)量較少，也可采樣1000ml。采樣點(diǎn)及采樣時(shí)間同浮游杭物。水樣采集后應(yīng)放在蔭涼處，避免日光直射。最好立即進(jìn)行測(cè)定的預(yù)處理，如需經(jīng)過(guò)一段時(shí)間( 448h )方可進(jìn)行預(yù)處理，則應(yīng)將水樣保存在低溫( 04)避光處。在每升水樣中加入1

15、%碳酸鎂懸濁液lrnl，以防止酸化引起色素溶解。水樣在冰凍情況下(-20)最長(zhǎng)可保存30d。1.2.儀器設(shè)備分光光度計(jì)。真空泵。離心機(jī)。乙酸纖維濾膜(孔徑0.45m)。抽濾器。組織研磨器或其他細(xì)胞破碎器。碳酸鎂粉末。90%丙酮。1.3試驗(yàn)程序 以離心或過(guò)濾濃縮水樣，在抽濾器上裝好乙酸纖維濾膜。倒入定量體積的水樣進(jìn)行抽濾，抽濾時(shí)負(fù)壓不能過(guò)大(約為50kPa)。水樣抽完后，繼續(xù)抽I2min，以減少濾膜上的水分。如需短期保存12d時(shí)，可放入普通冰箱冷凍，如需長(zhǎng)期保存(30d)，則應(yīng)放入低溫冰箱(-20)保存。取出帶有浮游植物的濾膜，在冰箱內(nèi)低溫干燥68h后放入組織研磨器中，加入少量碳酸鎂粉末及23m1 90%丙酮，充分研磨，提取葉綠素a。用離心機(jī)(30004000r/min)離心10rnin。將上清液倒入5ml或l0ml容量瓶中。再用23ml的90%的丙酮，繼續(xù)研磨提取，離心10min，并將上清液再轉(zhuǎn)入容量瓶中。重復(fù)12次，用9