三氯蔗糖成品的檢測(cè)方法

1、物料名稱(chēng)三氯蔗糖測(cè)試項(xiàng)目色澤、組織狀態(tài)、氣味、含量、比旋光、水分、灼燒殘?jiān)?、水解物?相關(guān)物、甲醇、砷、重金屬、鑒別、PH、顆粒度、堆積密度、三苯氧磷、細(xì)菌總數(shù)、霉菌酵母菌、鉛、溶液的顏色和澄清度、口感1色澤、組織狀態(tài)1.1儀器潔凈的白搪瓷托盤(pán)1.2試劑無(wú)1.3實(shí)驗(yàn)步驟取20g樣品置于清潔、干燥的白瓷盤(pán)中，在相同的自然或照明光線下，觀察其色澤和 組織狀態(tài)。1.4注意事項(xiàng)確保使用的取樣簽、取樣袋干凈無(wú)污染，取完樣后立即扎緊袋口。2 氣味2.1儀器留樣瓶2.2試劑2.3實(shí)驗(yàn)步驟三氯蔗糖倒入留樣瓶中，在塑料留樣瓶中嗅其味。2.4注意事項(xiàng)確保使用的取樣簽、取樣袋干凈無(wú)污染，留樣瓶無(wú)污染。3 含量3.1

2、儀器和設(shè)備、電子天平高效液相色譜儀（配備示差折光檢測(cè)器）3.2試劑色譜純乙腈、三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品。3.3實(shí)驗(yàn)步驟參考色譜條件4.6*2505ym?；蚱渌刃V柱。水混合均勻后，用0.45卩m濾膜過(guò)濾，超聲脫氣a）色譜柱：SUPELCOSILTMLC- 18b）流動(dòng)相：將150mL乙腈與850mL 后備用。c）柱溫：30 C。d）流動(dòng)相流速：1.0 mL/min。e）進(jìn)樣量：60 Lf）三氯蔗糖保留時(shí)間：9min左右，為確保獲得所需的保留時(shí)間，必要時(shí)可以調(diào)整流動(dòng) 相的比例。RSD不大于2.0 %。注：系統(tǒng)適用性為重復(fù)注入標(biāo)準(zhǔn)溶液兩次，所得響應(yīng)面積的分析步驟標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：稱(chēng)取 0.1500g 三氯

3、蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品（精確至 0.0001g ），溶于預(yù)先準(zhǔn)確稱(chēng) 取的49.0000g純水中，所得溶液用 0.45卩m濾膜過(guò)濾，濾液備用。試樣液的制備：稱(chēng)取約 0.1500 試樣（精確至 0.0001g ），溶于預(yù)先準(zhǔn)確稱(chēng)取的 49.0000g 純水中，所得溶液用0.45卩m濾膜過(guò)濾，濾液備用。測(cè)定60譏，重復(fù)進(jìn)在 3.3 參考色譜條件下，分別對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣液進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)樣量為 樣一次，計(jì)算出其主峰面積平均值。計(jì)算結(jié)果X1=A U*M S*P/(AS*MU)*100式中：X1 試樣中三氯蔗糖的含量， %; AU 試樣液色譜主峰面積的平均值; MS 稱(chēng)取三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量，g;P 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品的含量，

4、 %; AS 標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜主峰面積的平均值; MU 稱(chēng)取的試樣質(zhì)量， g;實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為準(zhǔn)。3.4 注意事項(xiàng)RSD 不大于 2.0 。a）系統(tǒng)適應(yīng)性為重復(fù)注入標(biāo)準(zhǔn)溶液兩次，所得響應(yīng)面積的b）進(jìn)樣時(shí)不得有氣泡，并且進(jìn)樣速度保持勻穩(wěn)推進(jìn)。4 比旋光°4.1 儀器旋光儀、容量瓶、電子天平4.2 試劑純水50ml 同時(shí)做空白。先 將測(cè)量示數(shù)清零。 然后將待測(cè)樣品注入試管， 同方向放入4.3 實(shí)驗(yàn)步驟精確稱(chēng)取 1 g （精確至 0.0001g ）待測(cè)樣品，用純水溶解，定容至 將裝有空白液的試管放入樣品室， 樣品室，測(cè)量其旋光度。計(jì)算公式：【a =50* a /(2*m)+

5、0.1*(T -20)其中：a所測(cè)得旋光度;m 樣品質(zhì)量T測(cè)定條件下的溫度兩次平行測(cè)定結(jié)果不超過(guò) 0.5% ，取兩次平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為測(cè)定結(jié)果。4.4 注意事項(xiàng)a)b)c)使用前調(diào)試儀器先要開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，預(yù)熱約 30 分鐘；樣品的測(cè)試溫度要控制在室溫20 C± 0.5 C ;從溶解樣品到測(cè)試的整個(gè)過(guò)程時(shí)間要短， 防止樣品因溫度和容積變化帶來(lái)測(cè)試偏差；d） 測(cè)試過(guò)程中試液不能滴漏到儀器上，測(cè)量時(shí)旋光管中的氣泡要趕到球中。5 水分5.1儀器水分測(cè)定儀、注射器、天平5.2試劑無(wú)水甲醇、卡爾費(fèi)休試劑、純水5.3實(shí)驗(yàn)步驟在卡爾費(fèi)休滴定池內(nèi)先注入約20ml左右的無(wú)水甲醇，用卡爾費(fèi)休試劑滴定

6、至終點(diǎn)，然后用10卩l(xiāng)進(jìn)樣針抽取10卩l(xiāng)純水樣，注入滴定池，再用卡爾費(fèi)休試劑滴定，記下讀數(shù)V1,緊接著稱(chēng)取1g左右三氯蔗糖試樣，精準(zhǔn)至 0.0001g，記下讀數(shù)m,注入滴定池，用卡爾費(fèi)休 試劑再次滴定，記下讀數(shù) V2,最后按下式計(jì)算：W=（W1*m*100）*100%其中：V1滴定純水時(shí)消耗的卡爾費(fèi)休試劑的體積，V2滴定試樣時(shí)消耗的卡爾費(fèi)休試劑的體積，mlml5.4m 試樣的質(zhì)量，gw一水精制的水分取兩次平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為測(cè)定結(jié)果。注意事項(xiàng)兩次平行測(cè)定結(jié)果之差值不大于0.03% 。6.1a）確保所使用的試劑在有效期內(nèi);b）稱(chēng)量、計(jì)算必須準(zhǔn)確無(wú)誤。灼燒殘?jiān)鼉x器電子天平、馬弗爐、干燥器6.

7、2試劑試劑硫酸6.3實(shí)驗(yàn)步驟精確稱(chēng)取1.0000g樣品于恒重的坩堝中，放電爐上燒至無(wú)煙，冷卻10分鐘后加1ml硫酸，繼續(xù)燒至無(wú)煙放置于800 C的馬弗爐中，3小時(shí)后取出置于電爐上稍冷卻數(shù)秒鐘，再置于干燥器中冷卻至室溫稱(chēng)量。計(jì)算公式：?=吐空-*100%m其中:m1為坩堝+試樣灼燒前的質(zhì)量，g ; m2為坩堝+試樣灼燒后的質(zhì)量，g ; m為樣品質(zhì)量，6.4注意事項(xiàng)a）稱(chēng)樣量必須精準(zhǔn)；b）加硫酸時(shí)一定要等冷卻10分鐘后才加，以防坩堝爆裂;c）確保使用的坩堝是恒重的，并且一定要放在干燥器中冷卻。7 PH7.1 儀器酸度計(jì)、溫度計(jì)7.2 試劑pH=4.00 ，6.86, 9.18 的緩沖溶液7.3 實(shí)

8、驗(yàn)步驟90ml 的純?cè)儆镁順悠分苽?準(zhǔn)確稱(chēng)取 10g （精準(zhǔn)至 0.0002g ）的樣品于 100ml 小燒杯中，加 水溶解。開(kāi)機(jī)預(yù)熱 30min ，測(cè)量前用 PH=4.00 ，6.86 ，9.18 的緩沖溶液進(jìn)行儀器校準(zhǔn)， 紙擦拭干，將電極插入樣品，按讀數(shù)鍵，當(dāng)出現(xiàn)根號(hào)后，記下讀數(shù)。7.4注意事項(xiàng)a）測(cè)量前一定要開(kāi)機(jī)預(yù)熱，并進(jìn)行 3 點(diǎn)校正；b）使用完電極要放在飽和氯化鉀溶液中。相關(guān)物8.1儀器薄層層析板:涂有 0.2mm8.2 試劑 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品:質(zhì)量分?jǐn)?shù)8.3 實(shí)驗(yàn)步驟展開(kāi)劑的制備:氯化鈉溶液厚度的 C18 烷基修飾的硅膠或其他等效物質(zhì)。> 98.0%、乙腈、硫酸、無(wú)水甲醇、氯化

9、鈉溶液:乙腈=70 : 30 （體積比）50g/L 。甲醇中，顯色劑的制備:配制 15% 硫酸的甲醇溶液（體積分?jǐn)?shù)） 。 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備: 稱(chēng)取 0.5g 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品（精確至 0.001g ），溶解于 5.0mL此為溶液C。吸取0.5mL的溶 液C,用無(wú)水甲醇 定容 至100mL ,此為溶 液D。 試樣液的制備:稱(chēng)取 1.0g 試樣（精確至 0.001g ），溶解于 10.0mL 甲醇中。取溶液C、溶液D和試樣液各5uL,點(diǎn)于薄層層析板底部，將層析板置于盛有展開(kāi)劑 的層析缸中，待展開(kāi)的溶劑前沿移至 15cm 時(shí)后取出薄層層析板，放置，待展開(kāi)劑揮發(fā)干 凈后用顯色劑噴霧，然后于125 C &#

10、177;2 C烘箱中加熱10min。試樣液主色斑的 Rf值應(yīng)與溶液C 主色斑的 Rf 值相同，且試樣液中其他色斑的呈色應(yīng)不深于溶液 D 主色斑的呈色。Rf 值 試樣展開(kāi)后斑點(diǎn)到原點(diǎn)的距離與溶劑前沿到原點(diǎn)的距離的比值。8.4 注意事項(xiàng)a）所有試劑都在有效期內(nèi)；b）手拿薄層層析板時(shí)，不要碰到涂有0.2mm厚度的C18烷基修飾的硅膠的一面；C）在點(diǎn)板時(shí)，戴上口罩，防止薄層層析板被污染；d）展開(kāi)缸內(nèi)一定要干凈無(wú)污染；e）原點(diǎn)不要浸在展開(kāi)劑里9 水解物9.1 儀器和設(shè)備 薄層層析板:涂有 0.25mm 厚度的 Merk 硅膠 60 或其他等效物質(zhì)。9.2 試劑對(duì)氨基苯甲醚、鄰苯二甲酸、甲醇、甘露糖醇、果

11、糖。9.3 實(shí)驗(yàn)步驟顯色劑的制備： 將 1.23g 對(duì)氨基苯甲醚 （有毒害性） 和 1.66 g 鄰苯二甲酸溶于 100 mL 甲醇中。將溶液存放在暗處并冷藏，如果溶液退色則已失效。標(biāo)準(zhǔn)溶液 A 的制備：稱(chēng)取 10g 甘露糖醇（精確至 0.001g ），用水溶解后，移入 100mL 容量瓶中，用水定容至刻度。標(biāo)準(zhǔn)溶液 B 的制備：分別稱(chēng)取 10g 甘露糖醇（精確至 0.001g ）和 0.04g 果糖（精確 至O.OOOIg ）,移入100mL容量瓶中，用水定容至刻度。試樣液的制備：稱(chēng)取 2.5g 試樣（精確至 0.001g ），用 5mL 甲醇溶解后，轉(zhuǎn)移至 10mL 容量瓶中，用甲醇定容至

12、刻度。取標(biāo)準(zhǔn)溶液 A、標(biāo)準(zhǔn)溶液B和試樣液各5iL,分別在同一塊薄層層析板的不同位置進(jìn) 行點(diǎn)樣，將每份溶液分 5 次（每次 1i L） 點(diǎn)于板上， 每次點(diǎn)樣之間要待樣點(diǎn)干燥后再繼續(xù)點(diǎn)， 3 份樣點(diǎn)的面積要基本相同， 點(diǎn)樣完畢后用顯色劑噴霧后于100C ±2C 烘箱中加熱 15min ，加熱后立即在陰暗背下觀察層析板，試樣液的色斑呈色不應(yīng)深于標(biāo)準(zhǔn)溶液B的色斑呈色。9.4 注意事項(xiàng)a）如果標(biāo)準(zhǔn)溶液 A 的點(diǎn)樣點(diǎn)變黑，說(shuō)明層析板加熱時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，需重新制備；10b）對(duì)氨基苯甲醚是有毒物質(zhì)，操作時(shí)注意不要和皮膚接觸；甲醇10.1儀器和設(shè)備氣相色譜儀：配有氫火焰離子化檢測(cè)器。10.2試劑甲醇標(biāo)準(zhǔn)品（

13、色譜純）、色譜純正丙醇、色譜純吡啶。10.3實(shí)驗(yàn)步驟參考色譜條件a）色譜柱：2.1m X4mm （內(nèi)徑）玻璃柱，內(nèi)填充 定相；或其他等效色譜柱。載氣：氮?dú)饣蚝狻Ｖ鶞兀?50 Co0.2mm0.15mm聚苯乙烯型色譜固b)c)d)e)進(jìn)樣口溫度：200 C。檢測(cè)器溫度：250 C。f） 流速：20mL/min 。g）進(jìn)樣量：0.2 jiL2.0。注：系統(tǒng)適用性為重復(fù)注入標(biāo)準(zhǔn)溶液兩次，所得響應(yīng)面積的相對(duì)誤差小于 實(shí)驗(yàn)步驟內(nèi)標(biāo)溶液的制備：準(zhǔn)確吸取1.0mL正丙醇，置于100mL容量瓶中，用吡啶定容至刻度, 搖勻。移取 5mL 該溶液，置于 500mL 容量瓶中，用吡啶定容至刻度，搖勻。標(biāo)準(zhǔn)溶液的制

14、備：準(zhǔn)確吸取2.0mL甲醇，置于100mL容量瓶中，用內(nèi)標(biāo)溶液定容至刻度，搖勻。移取 1.0mL 該溶液，置于 100mL 容量瓶中，用內(nèi)標(biāo)溶液定容至刻度，搖勻。試樣液的制備：稱(chēng)取約 2g試樣（精確至0.001g ）,用內(nèi)標(biāo)溶液溶解，移入 10mL容量瓶 中，用內(nèi)標(biāo)溶液定容至刻度，搖勻。0.2 uL重復(fù)進(jìn)在10.3參考色譜條件下，分別對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣液進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)樣量為 樣一次，計(jì)算出每次進(jìn)樣甲醇峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值。結(jié)果公式：CRU?0.00158?= *100%RS?MU式中：X試樣中甲醇的含量，% ；RU 兩次進(jìn)樣試樣液中甲醇與內(nèi)標(biāo)物（正丙醇）峰面積之比的平均值；0.00158 標(biāo)

15、準(zhǔn)溶液中甲醇的濃度 X甲醇的密度X試樣液的體積（2X10-4 X0.79 X10）RS 兩次進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)溶液中甲醇與內(nèi)標(biāo)物（正丙醇）峰面積之比的平均值；MU稱(chēng)取的試樣質(zhì)量，單位為克（實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為準(zhǔn)。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于算術(shù)平均值的10.4注意事項(xiàng)a）樣品一定要稱(chēng)得精準(zhǔn)；b）所使用的燒杯、進(jìn)樣瓶、 重金屬儀器50mL納氏比色管試劑硝酸、硫酸、6mol/L鹽酸、注射器等一定要干凈無(wú)污染。1111.111.210%。1%硝酸1mol/L鹽酸、6mol/L氨水、1mol/L氨水、PH3.5的乙酸鹽緩沖液、酚酞指示液、飽和硫化氫水、鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液、11.3

16、實(shí)驗(yàn)步驟試劑配制:100mL。6mol/L鹽酸：量取50mL鹽酸，用水稀釋至100mL。1mol/L鹽酸：量取8.3mL鹽酸，用水稀釋至PH3.5的乙酸鹽緩沖液：稱(chēng)取 25.0g乙酸銨溶于 25mL水中，加入 45mL6mol/L 鹽酸, 用稀鹽酸或稀氨水調(diào)節(jié)PH值至3.5，用水稀釋至100mL。酚酞指示液：1%乙醇溶液。飽和硫化氫水：將硫化氫氣體通入不含二氧化碳的水中，至飽和為止（此溶液臨用前制備）。鉛。臨用前用水稀釋至100倍，使鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱(chēng)取 0.1598g高純硝酸鉛，溶于 10mL1% 硝酸中，中定量移入 100mL 容量瓶中，用水稀釋至刻度。此溶液1mL相當(dāng)于1.0mg成1.0mL

17、相當(dāng)于10ug鉛（可以外購(gòu)之）。1%硝酸：取1mL硝酸加水稀釋至 100mL。試樣處理：小火碳化后，加2mL硝酸和5滴550 C灰化完全，冷卻后取出，加滴濃鹽酸浸潤(rùn)殘?jiān)?，并?0mL水，稱(chēng)取試樣5.0g置于坩堝中，加入適量硫酸浸潤(rùn)試樣， 硫酸，小心加熱，直到白色煙霧揮盡，移入高溫中，于 2mL6mol/L鹽酸浸潤(rùn)殘?jiān)?，于水浴上慢慢蒸發(fā)至干。用1于水浴上再次加熱 2min，將溶液移入50mL容量瓶中，如有必要須過(guò)濾，用少量水洗滌坩 堝和濾器，洗滌液一并移入容量瓶中，混勻， 每10mL該溶液相當(dāng)于1.0g試樣。在試樣灰化 同時(shí)，另取一坩堝，按上述方法座試劑空白實(shí)驗(yàn)。A管：吸取含鉛量相當(dāng)于指定種金屬

18、限量的鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液（不低于10ug鉛）于50mL納氏比色管中（如試樣經(jīng)處理，須同時(shí)吸取與試樣液等量的試劑空白液），加水至25mL,混勻，加1滴酚酞指示液，用 6mol/L稀鹽酸或1mol/L稀氨水調(diào)節(jié)pH至中性（酚酞紅色剛褪去）， 加入PH3.5的乙酸鹽緩沖液 5mL混勻，備用。10mL-20mL（或適量）試樣液，加水至B管：取一支與 A管所配套的納氏比色管，加入B 管等量的相同試樣液，再加入與 1% 酚酞指示液，用稀鹽酸或稀氨水 ，加入 pH3.5 的乙酸鹽緩沖液 5mL，25mL混勻，加1滴1%酚酞指示液，用6mol/L稀鹽酸或1mol/L稀氨水調(diào)節(jié)pH至中性（酚 酞紅色剛褪去），加入PH3

19、.5的乙酸鹽緩沖液5mL混勻，備用。C 管：取一支與 A、B 所配套的納氏比色管，加入與 A管等量的鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液，加水至25mL混勻，加1滴（6mol/L或1mol/L）調(diào)節(jié)pH至中性（酚酞紅色剛褪去） 混勻，備用。向各管中加入 10mL 新鮮備制的硫化氫飽和液， 并加水至 50mL 刻度， 混勻， 于暗處放 置5min后，在白色背景下觀察，B管的色度不得深于 A管的色度，C管的色度應(yīng)與 A管的 色度相當(dāng)或深于 A管的色度。11.4 注意事項(xiàng)：a）所有試劑都在有效期內(nèi)；b）所用玻璃儀器都要用 10%-20% 的硝酸浸泡 24h 以上，用自來(lái)水反復(fù)沖洗，最后用 純水沖洗；c）實(shí)驗(yàn)中運(yùn)用的強(qiáng)腐蝕實(shí)際

20、時(shí)，注意安全，做好防護(hù)工作。12 砷12.1 儀器測(cè)砷裝置12.2 試劑5%溴化汞乙醇溶液、溴化汞試紙、硝酸、 1+1 硫酸、 1mol/L 硫酸、鹽酸、 20%氫氧 化鈉溶液、氧化鎂、 15% 硝酸鎂、 15% 碘化鉀、 40% 氯化亞錫、無(wú)砷金屬鋅、酚酞指示液、10% 乙酸鉛、脫脂棉12.3 實(shí)驗(yàn)步驟 試劑配制： 溴化汞試紙：將剪成直徑 2cm 的圓形濾紙片，在 5%溴化汞乙醇溶液中浸泡 1h 以上， 保存于冰箱中，臨用前取出置暗處陰干備用。乙酸鉛棉花：將脫脂棉浸于10%乙酸鉛溶液中， 2h 后取出晾干。40% 氯化亞錫溶液：稱(chēng)取 20g 氯化亞錫，溶于 50mL 鹽酸。500mL 。1+

21、1 硫酸：將 1 體積濃硫酸慢慢加入 1 體積水中，冷卻后使用。 1mol/L 硫酸：量取 28mL 濃硫酸，慢慢加入水中，用水稀釋至 酚酞指示液： 1% 乙醇溶液。砷標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱(chēng)取 0.1320g 于硫酸干燥器中干燥至恒重的三氧化二砷，溶于氫氧化鈉溶液中，溶解后，加入 25mL1mol/L 硫酸，移入 1000mL 容量瓶中，加新煮沸冷 卻的水稀釋至刻度。此溶液 硫酸與 100mL 容量瓶中， 以外購(gòu)之）。試樣的處理： 取 5.0g1.00mL 相當(dāng)于 0.100g 砷。 加新煮沸冷卻的水稀釋至刻度，試樣于瓷坩堝中， 加 10mL15%臨用前取 1.0mL，力口 1.0mL1mol/L此溶液

22、 1.0mL 相當(dāng)于 1.0ug 砷（可硝酸鎂溶液， 加入 1g 氧化鎂溶液，混勻，浸泡 4h ，于低溫或水浴上蒸干，用小火加熱至炭化完全，將坩堝移至高溫爐中，在550 C以下灼燒至灰化完全，冷卻后取出，加適量水濕潤(rùn)灰分，加入酚酞溶液數(shù)滴，再緩緩加入鹽酸（1+1）溶液至酚酞紅色褪去，然后將溶液移入50mL容量瓶中（必要時(shí)過(guò)濾），用少量水洗滌坩堝 3次，洗滌并容量瓶中，加水至刻度，混勻。每10mL試樣液相當(dāng)于1.0g試樣。取相同量的氧化鎂、硝酸鎂、按上述方法做空白試驗(yàn)。吸取一定量的試樣液和砷的限量標(biāo)準(zhǔn)液（含砷 1.0ug 或 2.0ug ），分別置于錐形瓶中， 加 5mL 鹽酸（試樣液中如含硫酸

23、或鹽酸， 則要減去試樣液中所含酸的毫升數(shù)） ，加水至 30mL ， 再加5mL15%碘化鉀溶液，5滴40%氯化亞錫溶液，混勻，室溫放置10min。向上述錐形瓶中，各加入 3g 無(wú)砷金屬鋅，并立即塞上預(yù)先裝有乙酸鉛棉花及溴化汞試 紙的測(cè)砷裝置，于 25C放置1h ,取出砷斑進(jìn)行比較，試樣的砷斑不得深于砷的限量標(biāo)準(zhǔn)的 砷斑。12.4 注意事項(xiàng)：a） 所有試劑都在有效期內(nèi)；b） 所用玻璃儀器都要用 10%-20% 的硝酸浸泡 24h 以上，用自來(lái)水反復(fù)沖洗，最后用 純水沖洗；c）實(shí)驗(yàn)中運(yùn)用的強(qiáng)腐蝕實(shí)際時(shí)，注意安全，做好防護(hù)工作。13 顆粒度13.1 儀器振篩儀、電子天平13.2 試劑無(wú)13.3 實(shí)驗(yàn)

24、步驟稱(chēng)取 10.0g 樣品，根據(jù)樣品的規(guī)格選擇相應(yīng)目數(shù)的篩網(wǎng)， 將樣品倒置篩網(wǎng)上， 蓋好蓋子。 放置振篩儀上，并設(shè)置振篩時(shí)間為 5 分鐘。振完后，根據(jù)樣品規(guī)格分別稱(chēng)量篩網(wǎng)上、篩網(wǎng) 下樣品的質(zhì)量 m。計(jì)算公式：m/10 *100%13.4 注意事項(xiàng) 根據(jù)樣品規(guī)格要求，篩網(wǎng)上、篩網(wǎng)下樣品質(zhì)量不能弄混淆。14 堆積密度14.1 儀器10ml 容量瓶、電子天平14.2 試劑14.3實(shí)驗(yàn)步驟將10ml容量瓶放置天平上，清零，然后將樣品放置稱(chēng)量紙上倒入容量瓶中，力度均勻 地?fù)u晃40-50下，直至樣品到容量瓶刻度線。放置天平稱(chēng)量，記下讀數(shù)計(jì)算公式：m/1014.4注意事項(xiàng)一定要力度均勻慢慢地?fù)u晃。15鑒別在

25、檢測(cè)三氯蔗糖含量試驗(yàn)中，試樣液在液相色譜圖中的主峰保留時(shí)間應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)溶液中三氯蔗糖的保留時(shí)間相同。16三苯氧磷16.1儀器和設(shè)備高效液相色譜儀（配備紫外檢測(cè)器）、天平16.2試劑色譜純乙腈、三苯氧磷標(biāo)準(zhǔn)品。16.3實(shí)驗(yàn)步驟參考色譜條件a）色譜柱：C18反相色譜柱，8mm x 10cm，粒度5卩m。b）流動(dòng)相：將670mL乙腈與330mL水混合均勻后，用0.45卩m濾膜過(guò)濾，超聲脫氣 后備用。C）柱溫：室溫。d）流動(dòng)相流速：1.5 mL/min。e）進(jìn)樣量：25卩L。f）三苯氧磷保留時(shí)間：6min左右，為確保獲得所需的保留時(shí)間，必要時(shí)可以調(diào)整流動(dòng) 相的比例。標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：精確稱(chēng)取 0.1000g

26、三苯氧磷準(zhǔn)品（精確至 0.0001g）,用流動(dòng)性定溶 到10mL的容量瓶中，再?gòu)闹幸迫?1.0mL溶液用流動(dòng)相定溶到100mL容量瓶，再把該溶液稀 釋100倍，所得溶液用0.45卩m濾膜過(guò)濾，濾液備用。試樣液的制備：稱(chēng)取約 0.1000試樣（精確至0.0001g ），記錄下樣品的重量。用流動(dòng)性 定容到10mL的容量瓶中，所得溶液用 0.45卩m濾膜過(guò)濾，濾液備用。25 uL重復(fù)進(jìn)在17.3參考色譜條件下，分別對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣液進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)樣量為 樣一次，計(jì)算出其主峰面積平均值計(jì)算公式：At ?10000?=AS?Wt式中：X三苯氧磷的含量；At 三苯氧磷的峰面積；AS 樣品的峰面積；mg。Wt

27、 樣品的稱(chēng)樣量；16.4注意事項(xiàng)2.0% ;a）系統(tǒng)適應(yīng)性為重復(fù)注入標(biāo)準(zhǔn)溶液兩次，所得相應(yīng)面積的相對(duì)誤差不大于b） 進(jìn)樣時(shí)不得有氣泡，并且進(jìn)樣速度保持勻穩(wěn)推進(jìn)。17 細(xì)菌總數(shù)17.1 儀器 培養(yǎng)箱、電子天平、放大鏡、無(wú)菌均質(zhì)杯、無(wú)菌平皿、無(wú)菌吸管（無(wú)菌移液槍?zhuān)?7.2 試劑磷酸鹽緩沖液、營(yíng)養(yǎng)瓊脂17.3 實(shí)驗(yàn)步驟17.3.1 樣品稀釋與培養(yǎng)稱(chēng)取 10g 樣品置盛有 90ml 磷酸鹽緩沖液的無(wú)菌均質(zhì)杯中，制成1：10 的樣品勻液。吸取 1ml 樣品勻液于無(wú)菌平皿內(nèi)，做平行樣。同時(shí)，分別吸取 1ml 空白稀釋液加入兩 個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。 及時(shí)將15ml-20ml冷卻至46 C的平板計(jì)數(shù)瓊脂培

28、養(yǎng)基傾注平皿， 并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36C ±1 C 培養(yǎng) 48 小時(shí) ±1 小時(shí)。17.3.2 菌落計(jì)數(shù)：可用肉眼觀察， 必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器， 記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。 菌落 計(jì)數(shù)以菌落形成單位（ CFU ）表示。a)b)30CFU選取菌落數(shù)在 30300CFU 之間、無(wú)蔓延菌落生長(zhǎng)的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于 的平板計(jì)錄具體菌落數(shù)，大于 300CFU 的可記錄為多不可計(jì)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng) 采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)， 則不宜采用， 而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為 該稀釋度的菌落數(shù)； 若片狀菌落不到平

29、板的一半， 而其余一半中菌落分布又很均勻， 即 可計(jì)算半個(gè)平板后乘以 2，代表一個(gè)平板菌落數(shù)。當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無(wú)明顯界限的鏈狀生長(zhǎng)時(shí)，則將每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)數(shù)。c）17.3.3 菌落計(jì)數(shù)的計(jì)算方法 平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)， 計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值， 再將平均值乘以相 應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每 g（ml） 樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。17.4 注意事項(xiàng) 若空白對(duì)照上有菌落生長(zhǎng)，則此次檢驗(yàn)結(jié)果無(wú)效。18 霉菌酵母菌18.1 儀器 培養(yǎng)箱、電子天平、放大鏡、無(wú)菌均質(zhì)杯、無(wú)菌平皿、無(wú)菌吸管（無(wú)菌移液槍?zhuān)?8.2 試劑孟加拉紅培養(yǎng)基18.3 實(shí)驗(yàn)步驟18.3.1 樣品稀釋與培養(yǎng)稱(chēng)取 10g 樣品置盛有 90ml 蒸餾水的無(wú)菌均質(zhì)杯中，制成 1:10 的樣品勻液。 吸取 1ml 樣品勻液于無(wú)菌平皿內(nèi)，做平行樣。同時(shí)， 個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。及時(shí)將 15ml-20ml 冷卻至分別吸取1ml 空白稀釋液加入兩轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，46 C的孟加拉紅培養(yǎng)基傾注平皿，并28 C ±1 C培養(yǎng)5d，觀察并記錄。以菌落形可用肉眼觀察， 必要時(shí)用放大鏡， 記錄各稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的霉菌和酵母菌數(shù)。 成單位( CFU )表示。選取菌落數(shù)在 10-150cfu 的平板， 根據(jù)菌